中国麻疹野病毒基因型快速诊断方法的建立

研究建立了一种适用于中国现流行麻疹野病毒基因型的基因型别筛查、定型的分析方法,即逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP).首先对RT-PCR方法的敏感性和特异性进行了实验证明,对11株麻疹病毒提取核糖核酸(RNA),逆转录套式PCR扩增后全部出现阳性特异条带.在同样的反应条件下,扩增6种不同基因型麻疹病毒9株,同时又扩增其它非麻疹病毒.结果9株6种基因型麻疹病毒RT-PCR均呈现阳性条带,说明本研究采用的RT-PCR方法敏感.而非麻疹病毒RT-PCR结果为阴性,均未见阳性条带,说明该RT-PCR方法特异.根据H1和H2基因型麻疹病毒分别被不同的限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ切割成不同大小的基因片段,建立RFLP快速基因定型方法.之后,对建立的RFLP方法的特异性和敏感性进行了实验证明.利用该方法对吉林省连续两年分离到的9株麻疹野病毒[已经过中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室脱氧核糖核酸(DNA)序列分析证实为H1基因型]进行验证,结果均为H1基因型麻疹病毒,证实该PCR-RFLP结果与序列分析结果一致,也说明该方法敏感.同时,又对7种不同基因型麻疹病毒应用PCR-RFLP方法进行实验,结果只有H1和H2基因型麻疹病毒被限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ分别切成2个不同大小的基因片段,其它基因型麻疹病毒由于无SalⅠ和BamHⅠ酶的切位点,所以未被切开,说明所建立的PCR-RFLP方法特异,只针对中国流行的麻疹病毒基因型.研究证明,RFLP是一种快速、简便又经济实用的麻疹病毒基因定型筛查方法.     

四川省麻疹野病毒的分离和鉴定

目的　了解四川省麻疹病毒分子生物学特征 ,确定现阶段四川省流行的麻疹野病毒的基因型别。方法　用绒猴淋巴母细胞 (B95a )从一疑似麻疹散发患者的标本中分离麻疹病毒 ,通过逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR )和其序列测定方法鉴定是否为麻疹病毒。结果　四川省分离的这株毒株确定为麻疹野病毒H1基因型。结论　分离出麻疹野病毒属于H1基因型 ,和中国的本土优势流行株相同     

2006年长春市儿童野生型麻疹病毒基因序列分析

目的:研究吉林省长春市0~12周岁儿童野生型麻疹病毒的基因型别及核蛋白(N)基因序列特征,探讨控制麻疹发生的措施。方法:采用Vero/SLAM细胞分离培养麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从分离的麻疹病毒中扩增核蛋白(N)基因羧基端450个核苷酸片段(bp)并进行核苷酸测序分析,对基因库中麻疹病毒的22个代表株基因序列的同源性进行比较。结果:分离得到9株野生型麻疹病毒,N基因与H1基因型代表株相比同源性为98.3%。结论:吉林省长春市麻疹流行株属于H1基因型。     

2005年吉林省野型麻疹病毒的基因特征分析

目的了解吉林省麻疹病毒流行株的基因型别,探讨控制麻疹发生的措施。方法在2005年1—12月采集吉林省麻疹暴发和散发病人的咽喉拭子和尿液标本共72份,用CDW150细胞分离到麻疹病毒9株。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）从麻疹病毒中扩增出核蛋白（N）基因羧基端450个核苷酸片段,进行核苷酸序列分析和基因分型。结果9株麻疹病毒均属H。基因型,其中Hla7株,Hlb2株,H1a和H1b在450个核苷酸片段中的差异为2．0％～3．5％。结论H1基因型是吉林省麻疹病毒的优势流行株,是导致2005年吉林省麻疹局部暴发和散发的主要病原体。     

麻疹野病毒H1基因型在中国流行的分析

为确定现阶段中国流行的麻疹野病毒本土基因型别 ,在 1995～ 2 0 0 2年用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞 )从河南、山东、安徽、上海等 19个省 (自治区、直辖市 ,下同 )的麻疹爆发和散发病人的咽喉拭子或尿液标本中分离到麻疹病毒 15 6株。用逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)从 15 6株麻疹病毒中扩增出核蛋白 (N)基因碳末端 4 5 0个核苷酸片段。通过对扩增产物的核苷酸序列测定和分析证明 ,15 4株为麻疹病毒H1基因型 ;2株属于A基因型 ,为沪191疫苗株。由此证实 ,H1基因型已在中国广泛流行 ,为中国麻疹病毒的优势基因型。H1是麻疹病毒型内变异最大的基因型。这 15 4株H1基因型麻疹病毒 ,除外Shanxi0 0 - 6和Hunan95 - 2 3株 ,可进一步划分为H1a和H1b两个亚组。H1a的 4 5 0个核苷酸和H1b的差异在 2 0 0 %～ 4 0 0 %。H1基因型的 4 5 0个核苷酸和A基因型代表株Edmonston的基因差异在 6 0 0 %～ 7 33% ;与H2基因型代表株China94 - 1的基因差异在 5 11%～7 5 6 % ;与其它 17个基因型代表株的最大差异在 11 5 6 %。在中国开展麻疹病毒监测和建立麻疹病毒毒株库及基因数据库 ,对加速麻疹控制及未来消除麻疹都十分必要。     

2006～2009年广西麻疹野病毒基因型分析

目的了解2006~2009年广西麻疹野病毒基因特征,为控制和消除麻疹提供依据。方法采集2006~2009年广西麻疹患者的咽拭子标本33份,用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a)分离到麻疹病毒13株,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从分离到的麻疹病毒株中扩增出核蛋白基因羧基末端450个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和基因分型。结果 13株麻疹病毒均属H1基因型H1a亚型。结论 2006~2009年广西流行的麻疹野病毒基因型均为H1基因型,H1a为流行优势株。     

2006年吉林省野生型麻疹病毒分离鉴定及核蛋白基因序列分析

目的：研究吉林省麻疹病毒的基因型别及核蛋白（N）基因序列特征,探讨控制麻疹发生的措施.方法：采用B95a和Vero/SLAM细胞分离培养麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法从分离的麻疹病毒中扩增核蛋白（N）基因羧基端450个核苷酸（bp）片段,进行核苷酸测序分析并与基因库GenBank中麻疹病毒的各代表株基因序列的同源性比较.结果：分离到8株麻疹病毒,N基因与H1基因型代表株[1]相比同源性为98.8%.结论：吉林省麻疹流行株属于H1基因型.     

海南省1999～2004年流行麻疹野病毒的基因型分析

目的为了确定海南省流行的麻疹野病毒基因型别,从分子水平揭示麻疹的流行病学特点,为控制麻疹策略的制定提供本底资料。方法采用B95a细胞从麻疹爆发和散发病人咽拭子标本中分离麻疹病毒,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行基因分型并测序。结果在57份疑似麻疹病例的咽拭子标本中,分离到14株麻疹病毒,经测序全部为H1基因型。结论引起海南省1999~2004年麻疹爆发和散发的病原为麻疹病毒H1基因型,尚未发现有其它基因型传入引起的麻疹病例。     

深圳地区麻疹病毒核蛋白N基因序列分析

目的探讨深圳市麻疹病毒的基因型别和特征.方法采用B95a细胞分离培养麻疹病毒,通过RT-PCR方法扩增麻疹病毒核蛋白N基因C末端450bp片段并测序,分析和基因库Genebank中麻疹病毒的各基因型代表株序列的同源性.结果分离到1株麻疹病毒,与H1基因型代表株相比同源性为98.4%.结论深圳市麻疹流行株属于H1基因型.     

麻疹野病毒的分离鉴定及病毒分离的影响因素

目的确定吉林省近年流行的麻疹病毒基因型,分析麻疹野病毒分离的影响因素,为防控措施的制定及做好麻疹病原学检测提供参考依据。方法利用Vero／Slam细胞对114份麻疹咽喉拭子标本进行麻疹病毒分离,用逆转录一聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析方法扩增麻疹病毒核酸并进行基因型鉴定;统计分析不同采样时问、不同咽试子保存液对麻疹病毒分离的影响。结果114份麻疹咽喉拭子标本中分离到麻疹病毒31株,经鉴定均为H1基因型,出疹2d内的标本分离率较高,为38．09％。2％DMEM维持液作为咽拭子保存液的病毒分离成功率为30．69％。0．9％生理盐水作为保存液的病毒分离率为0。结论H1基因型麻疹病毒为吉林省近年流行的主要优势基因型,麻疹病毒的成功分离取决于采样时间、好的标本质量以及正确标本保存液。     

江苏省现阶段麻疹流行株H1基因型

目的监测现阶段在江苏省流行的麻疹野病毒及其基因型别.方法 2003年5月分别在医院门诊疑似麻疹病人和疑似麻疹爆发点的病人中采集了咽拭子,接种EB病毒转化的绒猴淋巴母细胞(B95a细胞),获得3株麻疹野病毒,同时进行了血球凝集(HA)试验、血球吸附试验.结果该3株病毒均无HA和血球吸附活性,逆转录-聚合酶链反应和其产物的基因序列分析提示,这3株病毒属于麻疹野病毒第8基因组H1基因型.结论此次为江苏省首次分离到麻疹野病毒,并证实在江苏省流行的麻疹野病毒基因型与国内流行优势基因型相同.     

山东省麻疹实验室网络的建立及运转

目的评价麻疹实验室网络的运转情况,探讨实验室监测在加速控制麻疹中的作用。方法对山东省1999~2003年麻疹实验室网络的各项监测指标进行分析。结果在检测的6 104份血清标本中,麻疹IgM抗体阳性2 355份,阳性率35.58%;风疹IgM抗体阳性1 832份,阳性率30.01%。实验室检测指标中,血清标本及时采集率、及时送检率、实验室结果及时反馈率等均达到较高水平,特别是实验室结果及时反馈率>98%。省疾病预防控制中心(CDC)麻疹实验室从送检的336份咽拭子标本中,分离到麻疹野病毒23株,风疹野病毒9株,经中国CDC病毒病预防控制所国家麻疹实验室基因序列测定和分析,麻疹野病毒均为H1基因型,表明H1基因型为山东省流行的优势毒株。结论山东省已建立了省、市级CDC麻疹/风疹快速鉴别诊断和病原学监测实验室网络,并且运转良好。     

陕西省麻疹野病毒的分离及基因分型

目的了解陕西省麻疹病毒流行株的基因型别,探讨控制麻疹策略。方法在2000~2003年采集陕西省麻疹爆发和散发病人的咽喉拭子标本56份,用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a)分离到麻疹病毒15株。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从7株麻疹病毒中扩增出核蛋白(N)基因羧基端450个核苷酸片段,进行核苷酸序列测定和基因分型。结果7株麻疹病毒均属H1基因型,其中H1a4株,H1b3株,H1a和H1b在450个核苷酸片段中的差异为2%~4%。结论H1a和H1b在陕西省隔年流行,流行优势株的变化可能受本土病毒变异和邻省输入病毒的双重影响。     

江西省麻疹实验室网络的建立和运转情况分析

目的　评价江西省麻疹实验室网络在加速控制麻疹阶段中的作用。方法　对江西省 1 999年、2 0 0 1～ 2 0 0 3年麻疹实验室网络监测结果进行了分析 ,共检测了 1 2 0 8份疑似麻疹血清标本。结果　 83 4份麻疹流行区的血清中 ,麻疹IgM抗体阳性 5 1 0份 ,分属 6 1起流行 ;3 74份麻疹IgM抗体阴性血清中 ,风疹IgM抗体阳性 1 97份 ,分属 2 6起风疹流行。麻疹、风疹IgM抗体检出率与病例出疹后采血时间密切相关 ,以出疹后 4～ 1 4d检出率最高( 6 2 . 4 5 %,71. 0 4 %)。麻疹、风疹流行人群中以学龄前儿童、中小学生为主 ,是省内发病的重点人群。江西省 2 0 0 3年采集 3份咽拭子 ,并用B95a细胞首次成功地分离到 2株麻疹野病毒 ,经核酸序列分析鉴定均为H1 基因型。结论　为进一步加强实验室麻疹病毒学与血清学的监测 ,应通过对麻疹实验室网络的职能考核 ,不断提高实验室血清学诊断的工作质量 ,为加速控制麻疹监测提供科学依据     

福建省2株麻疹病毒的分离与鉴定

[目的] 了解福建省目前流行的麻疹野病毒的型别与抗原性。[方法]细胞培养分离病毒;PT-PCR扩增病毒N基因碳末端450个核苷酸,并对其产物测定基因序列以定型;细胞中和试验进行抗原性分析。[结果]B95a细胞分离到了2株麻疹野病毒,Vero细胞未分离到,表明B95a细胞敏感性较高;分离到的病毒经PT-PCR及基因序列测定证实为麻疹野病毒H1基因型(中国流行的优势株);分离的野病毒株与疫苗株同时进行血清中和试验显示：目前使用的疫苗产生的抗体对流行的野病毒仍具有中和作用,但中和滴度低于疫苗株。[结论]在保证生物安全的前提下,B95a细胞是目前分离麻疹病毒的首选细胞;新变异来的麻疹H1基因型也在我省流行,且目前使用的疫苗所产生的抗体,在体外中和野毒株的滴度低于疫苗株。     

四川省2003～2005年麻疹野病毒分离株基因特征分析

目的了解四川省2003~2005年流行的麻疹野病毒分离株基因特征,为控制、消除麻疹提供科学依据。方法用B95a、Vero/Slam细胞从疑似麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从分离到的22株麻疹病毒中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析。结果四川省2003~2005年从6个市(自治州,下同)分离的22株麻疹野病毒全部为H1基因型,除2株为H1b基因亚型外,其余均为H1a基因亚型。22株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.2%~100.0%,氨基酸同源性为95.3%~100.0%。四川省11株麻疹病毒代表株与中国S191疫苗株的核苷酸同源性为90.0%~92.5%,氨基酸同源性为86.7%~91.6%。结论四川省2003~2005年流行的麻疹野病毒以H1a为绝对优势基因亚型,H1b为弱势基因亚型,未发现H1c基因亚型。其中以H1a基因亚型为主的病毒株引起的多个传播链造成四川省各市的麻疹流行。     

西安市麻疹流行病原毒株和疫苗免疫因素研究

目的 确定引起西安市麻疹流行的病原毒株，探讨相关的疫苗免疫因素。方法 采集麻疹病人咽拭子标本分离病毒，用酚-氯仿抽提法提取病毒悬液中的RNA，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增N基因碳末端的450个核苷酸（bp）片段，对扩增产物进行序列测定和基因分型。用微量中和试验测定麻疹病人急性期和恢复期血清中和麻疹疫苗株和野毒株的中和抗体水平。结果 采集咽拭子标本13份，分离出麻疹病毒8株，分离率61．54％；8株麻疹病毒均为H1基因型H1a亚型。结论 H1基因型H1a亚型是引起西安市本次麻疹流行的病原病毒。此次麻疹流行不排除疫苗保护性下降因素和麻疹疫苗免疫工作中存在无效接种而造成的免疫空白。     

2005年山东省流动人口成人麻疹暴发的病毒基因特征分析

[目的]确定麻疹病毒株的来源、传播途径及变异情况,探讨流动人口和成人麻疹发病的特点。[方法]2005年在山东省邹平县麻疹暴发疫区采集病人血清和咽拭子标本,进行血清学、病原学和分子流行病学特征检测。[结果]从6例病人咽拭子标本分离4个病毒流行株．均为H1基因型．3株属于H1a．1株属于H1b。4株之间核苷酸、氨基酸同源性为95．80％～100．00％、97．30％～100．00％,分成2个亚支、2个亚型,与H2基因型参考株中国疫苗株S191之间存在较大的遗传差异（8．60％）．与山东省2005年另外7株病毒株的基因型别分布相似。3株H1a病毒株又分为2个小分支．1株与2005年另外2株H1b病毒株（枣庄市、泰安市）的亲缘关系最近,与2000年的3株H1b病毒株（淄博市）亲缘关系较远．不属于同一祖先传播链病毒株。[结论]2005年邹平县成人麻疹暴发是由H1a、H1b两个亚型病毒株引起．以本地流行优势基因亚型H1a为主,H1b亚型为外来输入并在山东省少数市地传播。