血卟啉单甲醚光动力学疗法对体外培养的人角质形成细胞增殖的影响

目的：观察人角质形成细胞株Hacat对血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether，HMME）的吸收特性及HMME-PDT对角质形成细胞增殖的影响，为HMME-PDT用于临床银屑病的治疗提供初步的实验依据。     

钙在血卟啉单甲醚-光动力学疗法处理后HeLa细胞中的变化及作用

目的 了解钙离子在血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)处理后HeLa细胞中的变化和作用。方法 Fura-2／AM孵育荧光分光光度计检测细胞质游离钙浓度[Ca^2 】i的变化，MTT法分析PDT及钙离子对HeLa细胞存活率的影响，Western印迹法分析HMME-PDT后HeLa细胞的肌浆／内质网钙泵(SERCA2)蛋白的降解情况。结果 HMME-PDT处理后即刻HeLa细胞内【Ca^2 】i就开始增高，且与PDT剂量成正相关用，BAPTA／AM拮抗【Ca^2 】i的升高可增加HeLa细胞的存活率。同时HMME-PDT可引起SERCA2蛋白的降解。结论 HMME-PDT处理后HeLa细胞内【Ca^2 】i可迅速增高，【Ca^2 】i，升高可能与SERCA2蛋白的降解相关，并可促进HeLa细胞的死亡。     

血卟啉单甲醚-光动力学疗法对兔移植静脉再狭窄的抑制作用

目的探讨局部灌注血卟啉单甲醚(HMME)结合血管外激光照射的方法对移植静脉吻合口处内膜增生的抑制作用。方法采用兔颈外静脉颈总动脉移植模型，将实验动物随机分为光动力学治疗组、单纯激光照射组、单纯光敏剂灌注组、空白对照组，每组4只兔。光动力学治疗组局部应用血卟啉单甲醚HMME(15／μg／ml)溶液充盈在移植静脉段，再以532nm波长半导体激光器在吻合口(每只兔2处吻合口)附近进行血管外照射5min，功率密度100mW／cm^2，能量密度30J／cm^2；单纯激光照射组以生理盐水充盈移植静脉段，再用激光照射；单纯光敏剂灌注组仅用HMME(15μg／ml)溶液充盈移植静脉段5min；空白对照组应用生理盐水充盈移植静脉段5min.术后第4周于各实验组移植静脉的动静脉连接都及其两侧0.5cm处的动脉端、静脉端取材，常规石蜡包埋切片HE染色，组织病理观察，采用IMAGE-Pro Plus生物医学图像分析系统，观察不同处理组内膜增生程度的差异。     

血卟啉单甲醚-光动力学疗法对鼠黑素瘤细胞杀伤的实验研究

目的:探讨应用国产光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)对鼠皮肤黑素瘤B16F10细胞株行光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)的效应和机制。材料与方法:采用HMME作光敏剂,对B16F10细胞用633nm波长的He-Ne激光机作光源(功率密度5mW/cm2),以不同浓度的HMME经不同光剂量照射后,MTT法测定PDT     

血卟啉单甲醚在血管内皮细胞和角质形成细胞的亚细胞定位及光动力治疗作用点

目的探讨血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）在血管内皮细胞系ECV304和角质形成细胞系HaCaT的亚细胞定位及光动力疗法的作用点。方法 HMME与ECV304和HaCaT分别孵育1和18 h,选择特异性细胞器荧光探针分别标记线粒体、核膜、细胞膜和过氧化物酶体,应用共聚焦显微镜观察孵育1和18 h时HMME与细胞器的结合率;HMME与ECV304和HaCaT分别孵育20 h,细胞器荧光探针选择同前,给予532 nm连续激光照射,分别在照光前后采集上述细胞器中HMME的荧光强度,比较照光前后HMME的漂白率。结果 HMME与细胞器的结合率结果示,ECV304孵育1 h时线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体HMME的结合率分别为1.18±0.18、0.72±0.21、0.95±0.24、0.68±0.15,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.35±0.13、0.83±0.11、0.73±0.13、0.91±0.15;HaCaT1 h组孵育1 h时上述4种细胞器HMME的结合率分别为1.09±0.12、0.66±0.20、0.92±0.24、0.77±0.16,孵育18 h时上述4种细胞器HMME的结合率1.13±0.13、0.86±0.12、0.72±0.14、1.1±0.20。HMME在线粒体、核膜、细胞膜、过氧化物酶体的漂白率结果显示,ECV304分别为（18.22±3.53）%、（10.77±2.06）%、（7.44±1.06）%、（8.56±3.51）%,HaCaT分别为（11.90±1.46）%、（5.02±1.48）%、（3.82±0.54）%、（8.90±2.30）%。结论 ECV304中HMME主要定位于线粒体,HaCaT定位于的线粒体和过氧化物酶体;ECV304光动力疗法的主要作用点可能为线粒体,而HaCaT的主要作用点为线粒体和过氧化物酶体。     

线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用

目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用。方法膜联蛋白(annexin)V-PI双染法检测HMME-PDT处理后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率。Rh123染色法检测PDT后2h内HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψm)变化。Western杂交法检测PDT后6h内细胞质内细胞色素C(CytC)的含量变化。结果HMME-PDT后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为11.48%±3.42%和17.68%±1.05%。PDT后2h内△Ψm无显著改变。PDT后即刻(0h)细胞质内未检测到CytC,而在PDT后2、4和6h均可检测到CytC,且含量有增高的趋势。结论线粒体内的CytC转位于细胞质,是HMME-PDT导致HeLa细胞凋亡的机制之一。     

血卟啉单甲醚-光动力学疗法治疗角膜新生血管的实验研究

目的：观察血卟啉单甲醚行光动力学疗法（photodynamic treatment，PDT）治疗角膜新生血管的疗效。材料与方法：碱烧伤有色兔角膜制作角膜新生血管模型。静脉注射血卟啉单甲醚5mg／kg，不同的能量密度（7．6～152．8J／cm^2）的氩绿激光照射角膜新生血管根部，不注射血卟啉单甲醚仅行同等能量密度的激光照射作为对照组，行角膜新生血管造影观察新生血管封闭情况。     

血卟啉单甲醚光动力学疗法对小鼠接触性超敏反应的抑制效应

目的 探讨血卟啉单甲醚光动力学疗法(hematoporphyrin monomethyl ether mediated photodynamic therapy,HMME-PDT)对小鼠接触性超敏反应(contact hypersensitivity,CHS)的影响.方法 雌性BALB/c小鼠按功率密度分为50和100mW/cm2两个实验组,同时设置单纯照光组、单纯光敏剂组、空白对照组以及DNFB组.PDT处理后3 d,各实验组分别以2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱发小鼠右耳变应性接触性皮炎,以游标卡尺测量发敏前后右耳的厚度差;对于功率密度为50 mW/cm2组,进一步观察了PDT处理前4 d或PDT处理后1、3和12 d,DNFB发敏前后小鼠右耳的厚度差,并对PDT后3 d组行组织学检查,以目镜网格测微尺计算浸润炎症细胞数量.结果 处理前4d预先以DNFB致敏,PDT对CHS无抑制作用(P＞0.05).反之,PDT照射后1、3或12 d再以DNFB致敏,则PDT能对CHS产生显著抑制作用(P＜0.01),其抑制率分别为58%,63%,47%.且无论是以50mW/cm2还是以100mW/cm2功率密度的激光照射,这种抑制作用均存在.未经任何干预,DNFB致敏组致敏右耳浸润的单核细胞和中性粒细胞的数量增加,而经PDT处理后,浸润的炎性细胞明显减少,二者之间存在显著性差异(P＜0.01).结论 HMME-PDT能对正常小鼠接触性超敏反应产生明显抑制作用,并有短暂持续效应.     

光动力治癌新药血卟啉单甲醚（HMME）的研究

本文报道了一种单体卟啉血卟啉单甲醚的合成及其光敏化力、人癌细胞光灭活作用、动物移植瘤光动力疗效和有关的临床前药理毒理学研究资料。实验结果表明,与临床应用的混合卟啉制剂血卟啉衍生物(HpD)相比,HMME具有光敏化力强、肿瘤选择性摄入率高、光动力效应强、毒性低、无致突变和致畸胎作用等优点,是一种较理想的光动力治癌新药。     

不同活性氧成分在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用

目的探讨不同活性氧成分在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞死亡中的作用。方法将接种人宫颈癌HeLa细胞的培养皿随机分成单纯HMME-PDT组、HMME-PDT加叠氮钠(单线态氧淬灭剂)与HMME-PDT加甘露醇(羟自由基淬灭剂)组。以功率密度为15mW/cm2,能量密度为5.4J/cm2、波长为510.6mm的激光照射。用膜联蛋白(annexin)V-碘化丙啶(PI)双染法检测激光照射后第6和24h三组中HeLa细胞的凋亡率和坏死率。结果PDT后第6小时,单纯HMME-PDT组和HMME-PDT加入叠氮钠组的坏死率17.68%±1.05%和4.15%±2.19%(P=0.0006),单纯HMME-PDT组和HMME-PDT加D-甘露醇组的HeLa细胞凋亡率分别为11.48%±3.42%和3.19%±1.01%(P=0.0158)。PDT后第24小时,单纯HMME-PDT组的HeLa细胞凋亡率和坏死率分别为48.51%±2.85%和19.26%±1.57%,加入叠氮钠组为40.45%±3.56%和13.12%±2.75%,加入D-甘露醇组为39.43%±4.37%和21.00%±4.31%。结论HMME-PDT产生的单线态氧以导致HeLa细胞坏死为主,而羟自由基则以导致细胞凋亡为主。     

光动力学疗法抑制体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrinmonomethylether,HMME)介导的光动力学疗法(photodynamictherapy,PDT)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用及其影响因素。方法用MTT比色法观察HMME对体外培养人初发、复发翼状胬肉成纤维细胞(以下简称为初发、复发细胞)增殖的影响(毒性作用);用MTT法测定不同的光敏剂孵育浓度(0、2.5、5.0、10、20和40μg/ml)、孵育时间(0、5、10、20、30和60min)和激光能量密度(0.62和2.835J/cm2)条件下行PDT对初发、复发细胞增殖的影响;用免疫组化法检测PDT对初发、复发细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果初发、复发细胞分别在浓度≤20、40μg/ml的HMME中孵育60min对细胞无明显毒性。高剂量(2.835J/cm2)照光条件下,HMME孵育浓度分别≥2.5、10μg/ml的初发、复发细胞PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P<0.05),经40μg/ml的HMME孵育1h后用高剂量He-Ne激光照射初发、复发细胞增殖的抑制率分别为61.1%、57.6%;HMME孵育时间≥5min的PDT实验组和对照组相比差异有显著意义(P<0.01)。PDT对初发、复发细胞的PCNA表达具有明显的抑制作用。结论PDT对体外培养的初发、复发翼状胬肉成纤维细胞增殖有抑制作用。照光前光敏剂浓度越高、孵育时间越长,照光剂量越大,PDT效应越强。     

光动力疗法治疗银屑病的研究进展

光动力疗法（photodynamic therapy,PDT）是建立在光敏剂基础上的治疗方法。当用特定波长的光照射,产生大量的活性氧物质,从而造成细胞的损伤和死亡,以达到治疗目的。早期PDT在皮肤科主要用于肿瘤的治疗并取得疗效,新近研究者应用PDT治疗银屑病,也取得一定疗效。然而尚需大量的比较性研究以及PDT治疗方案的优化以确定PDT在银屑病治疗中的地位。     

光敏剂PSD-007对人骨肉瘤MG-63细胞体外光动力作用的实验观察

目的观察PSD-007对人骨肉瘤MG-63细胞的光动力效应。方法以人骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,测定以PSD-007作为光敏剂,630 nm波长激光为光源,不同能量密度激光的PDT处理后MG-63细胞的OD492值,并绘制MG-63细胞PDT后的存活率曲线,光镜下观察PDT后MG-63细胞形态的变化。结果 PSD-007浓度为2μg/ml,激光能量密度为6 J/cm2时,PDT处理后MG-63细胞存活率明显降低,仅为48.09%。PDT后MG-63细胞形态发生明显的变化,部分细胞坏死。结论 PSD-007对人骨肉瘤MG-63细胞具有明显的抑制作用。     

光动力学疗法在难治性良性皮肤病中的应用进展

光动力学疗法（photodynamie therapy，PDT）是通过局部或系统给予光敏剂后以特定波长激光照射从而对靶组织产生选择性的光敏化作用，其特殊的作用机制使其具有美容效果好、可重复应用而无耐药性等优点。最初PDT在皮肤科主要用于肿瘤的治疗，新近研究者尝试将PDT拓展到某些难治性良性皮肤病，如病毒疣、真菌感染、慢性炎症性疾病的治疗，并取得初步疗效，为上述皮肤病的治疗提供了新的思路。然而，目前还尚需大量的比较性研究以及PDT治疗方案的优化以确定PDT在上述疾病治疗中的地位。     

不同光照剂量的光动力疗法对小鼠肝癌移植瘤增殖及局部免疫细胞的影响

目的探讨不同光照剂量的光动力疗法（PDT）对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤作用及局部免疫效应。方法 69只ICR小鼠皮下接种Heps肝癌细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为对照组、光照低剂量PDT组（能量密度135 J/cm2）和光照高剂量PDT组（能量密度215～225 J/cm2）。治疗后定期测量各组肿瘤体积,计算抑瘤率。观察HE染色的瘤组织病理学改变,免疫组化法检测肿瘤组织的CD8＋细胞毒性T淋巴细胞（CD8＋CTLs）。结果 （1）光照低剂量PDT组和光照高剂量PDT组抑瘤率分别为73.9%、96.3%;光照高剂量PDT组的抑瘤效果显著高于光照低剂量PDT组（P〈0.01）。（2）PDT后2、24和72 h肿瘤组织先后出现肿瘤细胞空泡样变性、广泛核固缩及凝固性坏死;肿瘤中微血管淤血扩张、出血和管壁破坏,上述病理改变光照高剂量PDT组更为显著。（3）治疗后72 h光照低剂量PDT组和光照高剂量PDT组肿瘤中CD8＋CTLs数量均明显高于对照组（P〈0.01,P〈0.05）;而光照低剂量PDT组肿瘤中CD8＋CTLs数量又显著高于光照高剂量PDT组（P〈0.05）。结论光照高剂量PDT组的抑瘤效果显著高于光照低能剂量PDT组;PDT可引起细胞毒性T淋巴细胞在肿瘤局部浸润增加,光照低剂量PDT组对肿瘤局部CD8＋CTLs的免疫增强效应优于光照高剂量PDT组。     

不可切除胆管癌PDT治疗的进展

胆管癌是一种少见的原发性胆道恶性肿瘤,预后较差,根治性切除仅适用于少部份早期确诊的患者,大部份失去手术机会的患者采取胆道引流的姑息治疗方式治疗。胆道缓解引流是一种采用经皮或内镜插入的内镜置管术,可减轻患者骚痒、胆管炎和疼痛等症状,提高患者生活质量,但是仅有少量文献报道胆道缓解引流可提高胆管癌患者的生存时间。光动力疗法（photodynamic therapy,PDT）是一种相对新的、局部的、微创的姑息治疗方法,PDT是通过能聚集在增生组织（或肿瘤）中的光敏剂分子,是治疗不可手术切除胆管癌的标准的辅助治疗方式。     

光动力学治疗外眼黑色素瘤的远期效应

应用血卟啉衍生物和激光辐照治疗外眼黑色素瘤7例、痣恶性变5例。辐照前48小时静脉滴注或局部注射HpD光敏剂,先用氩离子激光点状光斑接触照射清除可见瘤组织,后用红色激光点状光斑扫描式辐照30分钟,以杀伤残存瘤细胞。结果12例完全消退,随访最长者6年,最短者2年未见复发。激光联合辐照以接触照射使瘤组织立刻凝固、炭化、汽化,再对创面行扫描式光动力辐照以杀伤残存瘤细胞,可发挥协同作用,提高疗效。     

光动力作用对大鼠肠系膜微循环的影响

目的 观察不同浓度的光敏剂血啉甲醚(HMME)、竹红菌乙素(HB)所介导的光动力作用对大鼠肠系膜微循环的动态影响，了解光敏剂种类和浓度与微循环损伤程度之间的关系。方法 采用显微数码相机录像和IMAGE PRO图像处理系统，对52只Wistar大鼠肠系膜微循环在光动力作用过程中的改变进行实时观测并记录，通过对微血管红细胞流柱宽度、血流速度、血流状态3种指标反映微循环的动态变化。结果 光动力作用过程中、微血管内皮细胞肿胀、红细胞聚集、白细胞贴壁翻滚、附壁血栓形成，造成管腔狭窄、红细胞流径减小，并最终导致血流停滞，管腔闭塞。随光敏剂给药剂量的增加，微循环损伤出现时间提前，损伤程度加重。HMME的剂量为2．5、5、10、15和20mg／kg时，光动力作用后，红细胞流柱宽度百分比分别减少到照光前的51％、29%、19％、0%、0％，血流流速下降，分别为粒线流、粒流、粒摆流、停滞、停滞；HB的剂量为2、4、6和8mg／kg时，光动力作用后，红细胞流柱宽度百分比分别减少到照光前的88％、67％、14％、0％，血流流速分别下降为线粒流、粒流、粒摆流、停滞。血啉甲醚和竹红菌乙素所介导的光动力效应对微循环的损伤过程无明显差别，较小剂量的HB(8mg／kg)即能引起与较大剂量HMME(15mg／kg)相当的损伤效应。结论光动力作用对微循环的效应是复杂的动态过程，而内皮细胞的损伤是其重要环节，并可能引发微循环系统的进一步损伤过程。在光照剂量一定的情况下，该效应对微循环的作用强度与光敏剂给药剂量之间呈正相关关系。两种光敏剂所介导的光动力效应对微循环的作用机制基本一致，而竹红菌乙素所介导的光动力效应比血啉甲醚强。     

单纯激光和光动力学疗法对鸡冠血管的作用

目的进一步阐明毛细血管瘤的光动力学疗法治疗的机制。方法莱亨鸡48只,随机分成6组:A组空白对照组;B、C组单纯激光组,激光能量密度B组为10J/cm2,C组为15J/cm2;D组光敏剂组静脉注射HMME10mg/kg;E、F组为PDT组,静脉注射HMME10mg/kg,10min后照光,能量密度E组为10J/cm2,F组为15J/cm2。实验后即刻,7、14和21d,观察鸡冠的病理变化,毛细血管减少率。结果鸡冠内血管经不同能量密度的激光单纯治疗及经不同激光能量密度的光动力学疗法处理后,光动力处理组鸡冠血管数目明显减少[B组减少(48·6±5·1)%,C组减少(57·6±8·2)%],剩余血管管腔减小,光动力学治疗组疗效优于单纯激光治疗组[E组减少(61·3±16·9)%,F组减少(8·6±10·5)%]。治疗后3周术区纤维组织形成,未见明显血管增生。结论光动力学疗法处理鸡冠毛细血管的效果确切,光动力学疗法效果优于单纯激光治疗。