两色金鸡菊黄酮提取物对高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤维化的影响及相关机制研究

目的:探讨两色金鸡菊黄酮取物对高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜纤维化的影响及其作用机制。方法:通过高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞建立体外糖尿病肾病细胞模型,使用不同浓度的两色金鸡菊黄酮提取物进行干预,采用CCK-8细胞增殖实验结合细胞形态学观察确定黄酮提取物的使用浓度后将细胞共分为5组,分别为正常对照组、模型组及两色金鸡菊黄酮提取物25、50、100μg/mL组,采用Western blot法检测纤维化因子纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并通过检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、信号分子Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4、NADPH氧化酶4(Nox4)蛋白研究两色金鸡菊黄酮提取物的抗纤维化机制。结果:两色金鸡菊黄酮提取物能显著抑制高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞中纤维化因子的表达。结论:两色金鸡菊黄酮提取物能抑制高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜的纤维化,其作用机制可能与调节TGF-β_1/Smads/Nox4信号通路有关。     

大黄素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及IL-6的影响

目的:观察大黄素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及系膜细胞分泌IL-6的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞的增殖及ELISA法检测系膜细胞中IL-6的含量,观察大黄素对其的影响。结果:大黄素可明显抑制大鼠系膜细胞的增殖及降低系膜细胞对IL-6的分泌,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:提示大黄素可明显抑制肾小球系膜细胞增生,减少细胞外基质的生成,从而减轻与延缓肾小球硬化,其机制可能与减少肾小球系膜细胞分泌IL-6有关。     

葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：探讨葛根素对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分空白对照组和葛根素组。葛根素组采用MTT法,观察12h、24h、48h和72h后GMcs的增殖水平。结果：随着葛根素浓度的提高及作用时间的延长,GMCs细胞的生长抑制率呈现上升趋势。结论：葛根素能抑制GMCs增殖,并与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。     

益肾降脂方对慢性肾功能衰竭大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察益肾降脂方对大鼠肾小球系膜细胞(Glomerularmesanialcell,GMC)增殖的影响。方法采用灌胃法给予实验性慢性肾功能衰竭(Chronicrenalfailure,CRF)大鼠益肾降脂方汤剂,观察其对大鼠血清GMC增殖的影响。结果与灌服生理盐水的对照组大鼠相比,益肾降脂方治疗组能明显抑制系膜细胞增殖(P<0.01),且优于至灵胶囊治疗组(P<0.01)。结论该方可能是通过抑制GMC的增殖起到治疗慢性肾功能衰竭的作用。     

水蛭对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：探讨中药水蛭对大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）增殖的影响。方法：采用MTT比色法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果：水蛭对HBZY-1增殖有明显抑制作用，可阻止HBZY-1由G0／G1期进入S期，无诱导HBZY-1凋亡作用。结论：水蛭有效抑制HBZY-1增殖可能是其治疗肾脏疾病的机制之一。     

肾康注射液对肾小球系膜细胞增殖的影响

为了探讨中药肾康注射液（ＳＫ）对肾小球系膜细胞增殖的影响,笔者采用人的肾小球系膜细胞进行体外培养,用氚标记的胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法观察其增殖情况。结果：不同肾康注射液剂量组＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率无明显低于对照组,提示肾康注射液可明显抑制人肾小球系膜细胞增殖。     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：观察三七总皂苷（total Panax Notoginseng Saponins,tPNS）对体外培养的SD大鼠肾小球系膜细胞（Mesangial cells,MCs）增殖以及细胞周期的影响,以探讨tPNS在防治肾小球炎症和硬化中的作用及可能机理。方法：分离培养SD大鼠MCs,分为5组（n=8）：空白对照组、血清刺激组、3个不同浓度（100,200,400μg/mL）的tPNS干预组。分别采用MTT法、细胞毒检测及流式细胞术观察大鼠MCs增殖及细胞周期的变化。结果：tPNS呈量效依赖抑制MCs增殖;降低S＋G2/M期细胞比例,且对MCs均无明显细胞毒性。结果：三七总皂苷通过减少DNA合成期（S期）细胞数量,抑制大鼠MCs增殖,而非依赖于诱导细胞凋亡和细胞毒性。     

中药复方对大鼠肾小球系膜细胞增殖影响的实验研究

1实验材料中药材:中药人参(Radix Ginseng)、黄芪(Radix Astra-gali)、大黄(Radixet Rhizoma Rhei)、水蛭(Hirudo)均购自大连市医药采购供应站,由辽宁省药品检验所鉴定。细胞:大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供。试剂:MEM细胞干粉培养基Gibco;新生牛血清(FCS),鼎国生物;胰蛋白酶(1∶250);乙二胺四乙酸二钠(EDTA);二甲基亚砜(DMSO);L-谷氨酰胺西宝生物;噻唑蓝(MTT)Amresco;其余试剂均为分析纯或生化纯试剂。主要仪器:HEAL FORCE HF-1200超净工作台,上海力申科学仪器有限公司;CK30-12PHP倒…     

何首乌提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的治疗作用及对NF-κB表达的影响

目的:探讨何首乌提取物对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠的治疗作用及对肾组织中核转录因子κB(NF-κB表达的影响。方法:将40只Wistar大鼠按体质量随机分为对照组、模型组、何首乌提取物组、洛汀新组4组,每组10只。除对照组外,其余各组进行单侧肾脏切除,连续多次注射OX7抗体诱导MsPGN大鼠模型,何首乌提取物组与洛丁新组于注射抗体4周后分别灌胃何首乌提取物和洛丁新治疗,对照组和模型组给予同等体积的生理盐水灌胃,治疗6周后处死大鼠。测定模型制备前、注射抗体4周后、治疗6周后大鼠的24 h尿蛋白定量水平;收集大鼠血清,测定血清中肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量;肾脏切片后HE染色观察组织病理学改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测NF-κB p65和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达水平。结果:治疗6周后,与对照组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量水平及血清中SCr、BUN含量显著升高,肾组织可见明显的系膜基质增生和系膜细胞增殖,NF-κB p65和MCP-1 mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,洛汀新组和何...     

尿血Ⅰ号方对SD大鼠肾小球系膜细胞增殖影响的实验研究

目的：观察尿血Ⅰ号方对体外培养的系膜细胞（Mesangial cell,MsC）增殖的抑制作用。方法：用SD大鼠30只,随机分成正常组、雷公藤多甙片组、尿血Ⅰ号方高、中、低剂量组,提取动物血清;采用MTT法测定OD值,并求出抑制率（%）,观察各组在48 h、72 h对MsC增殖的影响。结果：作用48 h后,雷公藤多甙片组、尿血Ⅰ号方高、中、低剂量组与正常血清组比较有显著差异（P＆lt;0.05~0.01）;雷公藤多甙片组与尿血Ⅰ号方高剂量组比较无显著差异（P＆gt;0.05）;尿血Ⅰ号方高剂量组较中、低剂量组有显著差异（P＆lt;0.05）。作用72 h后,雷公藤多甙片组、尿血Ⅰ号方高、中、低剂量组与正常血清组比较有显著差异（P＆lt;0.01）,但与48 h比较对细胞生长的抑制作用有减弱的趋势。结论：尿血Ⅰ号方能够抑制MsC的增殖。     

两色金鸡菊中1个新的没药烷型倍半萜类化合物

研究两色金鸡菊Coreopsis tinctoria头状花序的化学成分。采用柱色谱技术从采自新疆的两色金鸡菊中分离得到14个化合物,包括1个新的没药烷型倍半萜类化合物。通过理化性质和波谱数据鉴定其结构分别为coretinterpenoid A(1),coretinphenol(2),槲皮素(3),槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷(4),木犀草素(5),花旗松素(6),7,3',5'-三羟基二氢黄酮(7),异奥卡宁(8),异奥卡宁-7-O-β-葡萄糖苷(9),5,7,3',5'-四羟基二氢黄酮-7-O-β-葡萄糖苷(10),紫铆因(11),奥卡宁(12),硫黄菊素(13),linocinnamarin(14)。其中化合物1为新化合物,化合物4,10,13首次从该植物中分离得到。     

响应面法优化超声辅助法提取昆仑雪菊色素的工艺研究

以昆仑雪菊干燥头状花序为试验材料, 利用响应面法优化超声辅助提取昆仑雪菊色素的条件, 分别考察提取温度、超声时间、液料比及溶剂浓度对提取效率的影响。实验表明昆仑雪菊色素以黄酮类成分为主, 色素提取液在紫外-可见光区最大吸收波长为380 nm。在单因素实验基础上, 进行4因素3水平的响应面分析实验, 优化条件为提取温度70 ℃、超声时间60 min、液料比32.05: 1 mL·g、溶剂浓度为72.25%的乙醇, 在此条件下昆仑雪菊色素提取液的吸光度为0.936, 与模型预测值接近, 方程拟合良好, 适于对昆仑雪菊色素提取工艺进行回归分析和参数优化。     

HPLC同时测定雪菊中4种黄酮类成分

目的:建立雪菊中4种主要黄酮类成分的同时含量测定方法。方法:采用Cosmosil-5C18-AR-Ⅱ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%乙酸溶液梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长280 nm(黄诺玛苷、异奥卡宁)和378 nm(马里苷、奥卡宁),测定雪菊中黄诺玛苷、异奥卡宁、马里苷、奥卡宁的含量。结果:4种黄酮类成分色谱分离良好,黄诺玛苷、异奥卡宁、马里苷、奥卡宁线性范围分别为0.503 5~5.035μg,0.502 5~5.025μg,0.505 5~5.055μg,0.506 5~5.065μg,r值均0.999,加样回收率在95.4%~98.4%。结论:该测定方法快速、准确,可为雪菊的质量控制方法提供参考。     

响应面法优化大孔树脂纯化昆仑雪菊色素的工艺

采用大孔树脂法纯化昆仑雪菊色素,应用响应面法(RSM)建立二次回归模型,优化昆仑雪菊色素纯化工艺。实验表明XDA-7树脂对昆仑雪菊色素的综合纯化效果最佳。昆仑雪菊色素吸附的最佳工艺为色素溶液浓度2.7 g·L-1,流速6 m L·min-1,p H 6,在此条件下的色素吸附率可达94.16%;最佳解吸条件为乙醇浓度64%,流速5 m L·min-1,洗脱用量4 BV,该条件下色素解吸率可达98.72%。     

两色金鸡菊头状花序中聚炔类化学成分的研究

目的研究两色金鸡菊Coreopsis tinctoria头状花序的聚炔类化学成分。方法利用AB-8大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20、ODS及制备液相等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱及旋光数据鉴定化合物的结构;采用脂多糖(LPS)诱导的BV-2细胞NO生成模型对分离得到的新化合物进行抗炎活性筛选。结果从两色金鸡菊干燥头状花序的50%乙醇提取物中分离得到5个聚炔类化合物,分别鉴定为(3S)-(6E,12E)-二烯-8,10-二炔-1-十四烷醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(1)、(2S)-(3Z,11E)-二烯-5,7,9-三炔-1,2-十三碳二醇(2)、(2R)-(3E,5E,11E)-三烯-7,9-二炔-1,2-十三碳二醇(3)、(E)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇(4)、(Z)-7-苯基-2-烯-4,6-二炔-1-庚醇(5)。结论化合物1为新的炔苷类化合物,命名为金鸡菊炔苷E,显示微弱的抗炎活性;化合物3、5为首次从该植物中分离得到。     

新疆金鸡菊提取物对2型糖尿病小鼠氨基酸代谢谱的影响

目的:研究新疆金鸡菊(Xinjiang Coreopsis tinctoria)乙酸乙酯提取物对2型糖尿病小鼠血清氨基酸代谢谱的影响。方法:高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立2型糖尿病模型,造模成功后随机分组,灌胃给予新疆金鸡菊提取物8 g·kg-1·d-1,阳性药二甲双胍0.16 g·kg-1·d-1,每周测空腹血糖(FBG),给药4周后处死,收集小鼠血清,检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。采用柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)检测小鼠血清中氨基酸代谢谱的变化。结果:结合SIMCA-P软件的偏最小二乘法判别(PLS-DA)对氨基酸数据进行分析,结果显示新疆金鸡菊乙酸乙酯提物给药后对血清氨基酸代谢谱的改变较模型组有很大区别,有4种氨基酸对组间贡献较大(牛磺酸、天冬氨酸、苏氨酸、蛋氨酸)。小鼠成模后体内氨基酸发生了明显变化。与空白组、模型组、阳性组相比,新疆金鸡菊乙酸乙酯给药组小鼠血清氨基酸代谢谱发生了显著变化。结论:新疆金鸡菊乙酸乙酯提取物显著影响小鼠血清中与糖尿病相关的氨基酸代谢标志物,为进一步阐释新疆金鸡菊抗糖尿病药理作用的研究提供了依据。     

自发性高血压大鼠尿液氨基酸代谢谱改变及两色金鸡菊提取物调节作用初探

在确证自发性高血压大鼠(SHR)模型成功后比较其与正常大鼠(Wistar)尿液氨基酸代谢谱的差异,在此基础上初步研究两色金鸡菊提取物对SHR血压及氨基酸代谢谱的调节作用。选取经过适应性饲养后的适龄雄性SHR大鼠和同龄Wistar大鼠测量大鼠收缩压(SBP),舒张压(DBP),同时收集大鼠尿液,运用AQC柱前衍生高效液相色谱(HPLC)-荧光法测定尿液中氨基酸代谢谱,利用多元统计分析中的偏最小二乘方判别分析(PLS-DA)研究2组动物的氨基酸代谢差异物。将所有饲养的SHR大鼠随机分成5组,即模型组,两色金鸡菊提取物高、中、低剂量组(3.2,1.6,0.8 g·kg~(-1)),西药卡托普利组(4mg·kg~(-1)),连续灌胃给药4周后收集大鼠尿液,测定各组氨基酸代谢谱。药物干预4周后,与Wistar组相比,SHR组的氨基酸代谢谱中丝氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸对分组的贡献较大,均显著高于Wistar组;与SHR组相比,卡托普利组的苏氨酸、蛋氨酸较模型组显著降低(P0.01);新疆两色金鸡菊醇提物低、中、高剂量组氨基酸代谢均有不同程度改变,其中低剂量苏氨酸较模型组显著降低(P0.01);中剂量组的丝氨酸、苏氨酸较模型组降低(P0.05),缬氨酸、蛋氨酸、赖氨酸显著降低(P0.01);大剂量组的苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、赖氨酸显著降低(P0.01)。研究结果显示,中、高剂量提取物能明显改善氨基酸代谢异常,帮助进一步阐释两色金鸡菊的药性研究,为高血压病存在氨基酸代谢通路异常提供数据支持。     

秦皮甲素对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨秦皮甲素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度秦皮甲素(10、30、90μmol·L-1)对正常培养条件(含糖5.6 mmol·L-1)和高糖培养条件(含糖25 mmol·L-1)下的HBZY-1细胞增殖的影响;以PI3K抑制剂Wortmannin(1μmol·L-1)干预为对照,采用Western Blot法检测秦皮甲素对高糖培养条件下HBZY-1细胞FN蛋白表达及PI3K/Akt蛋白磷酸化水平变化的影响。结果在正常培养条件下,与正常组比较,秦皮甲素给药组(10、30、90μmol·L-1)的HBZY-1细胞增殖均无明显变化(P>0.05)。在高糖培养条件下,与正常组比较,高糖组的细胞活力明显增加(P<0.05),HBZY-1细胞FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平明显升高(P<0.05);与高糖组比较,90μmol·L-1秦皮甲素给药组的HBZY-1细胞活力明显降低(P<0.05),FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平亦显著下调(P<0.05)。结论秦皮甲素能够抑制高糖诱导的HBZY-1细胞增殖,下调FN蛋白表达,可能与其抑制PI3K/Akt信号通路激活密切相关。     

葛根素对大鼠肾小球系膜细胞体外增殖抑制作用及其机制

 目的 探讨不同浓度葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其作用机制。方法 采用体外细胞培养技术,采用MTT检测不同浓度葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的量效和时效关系。分别采用RT-PCR和ELISA,检测不同浓度葛根素作用大鼠肾小球系膜细胞后,结缔组织生长因子mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 葛根素可抑制大鼠GMCs增殖（P<0.05）,该增殖抑制作用呈浓度依赖模式。不同浓度葛根素作用于大鼠GMCs后,结缔组织生长因子mRNA和蛋白表达水平均随药物浓度增加而逐渐减弱（P<0.05）。结论 葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制作用,其作用机制可能与下调结缔组织生长因子基因转录和表达水平有关。