两色金鸡菊黄酮提取物通过对高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤维化的影响及相关机制研究

目的:探讨两色金鸡菊黄酮取物对高糖诱导的大鼠肾小球系膜纤维化的影响及其作用机制。方法:通过高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞建立体外糖尿病肾病细胞模型,使用不同浓度的两色金鸡菊黄酮提取物进行干预,将细胞分为共5组,分别为正常对照组、模型组、两色金鸡菊黄酮提取物组(25、50、100μg/mL)。采用CCK-8细胞增殖实验结合细胞形态学观察确定黄酮提取物的使用浓度,采用Western blot法从蛋白水平检测纤维化因子纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并通过检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、信号分子Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4、NADPH氧化酶4(Nox4)蛋白研究两色金鸡菊黄酮提取物的抗纤维化机制。结果:两色金鸡菊黄酮提取物能显著抑制高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞中纤维化因子的表达,其作用机制可能与TGF-β1/Smads/Nox4信号通路有关。结论:两色金鸡菊黄酮提取物可以抑制高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜的纤维化。     

两色金鸡菊黄酮提取物对高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤维化的影响及相关机制研究

目的:探讨两色金鸡菊黄酮取物对高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜纤维化的影响及其作用机制。方法:通过高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞建立体外糖尿病肾病细胞模型,使用不同浓度的两色金鸡菊黄酮提取物进行干预,采用CCK-8细胞增殖实验结合细胞形态学观察确定黄酮提取物的使用浓度后将细胞共分为5组,分别为正常对照组、模型组及两色金鸡菊黄酮提取物25、50、100μg/mL组,采用Western blot法检测纤维化因子纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并通过检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、信号分子Smad2、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4、NADPH氧化酶4(Nox4)蛋白研究两色金鸡菊黄酮提取物的抗纤维化机制。结果:两色金鸡菊黄酮提取物能显著抑制高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞中纤维化因子的表达。结论:两色金鸡菊黄酮提取物能抑制高糖高脂诱导的大鼠肾小球系膜的纤维化,其作用机制可能与调节TGF-β_1/Smads/Nox4信号通路有关。     

两色金鸡菊黄酮成分对高糖高脂诱导的细胞模型能量代谢紊乱的影响

目的观察两色金鸡菊黄酮成分对高糖高脂诱导大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1能量代谢紊乱的影响,探讨其保护作用机制。方法采用高糖高脂诱导HBZY-1细胞建立体外糖尿病肾病代谢紊乱细胞模型,将HBZY-1细胞分为正常组、模型组和两色金鸡菊黄酮成分不同剂量组。采用MTS实验检测模型细胞增殖水平,倒置显微镜观察模型细胞形态变化,细胞划痕实验观察模型细胞细胞外基质分泌,Westernblot检测细胞能量代谢调控因子5’腺苷-磷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)、乙酰辅酶a羧化酶1(ACC1)、甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)及氧化应激因子一氧化氮合酶(e NOS)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的蛋白表达。结果两色金鸡菊黄酮成分能抑制高糖高脂诱导的HBZY-1细胞增殖,细胞间隙增大、密度显著降低;两色金鸡菊黄酮成分促进模型细胞p-AMPKα、p-ACC1、e NOS的蛋白表达,抑制模型细胞SREBP1、NOX4、ACC1的蛋白表达;划痕实验结果显示,两色金鸡菊黄酮成分对模型细胞细胞外基质分泌有显著抑制作用,同时α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达显著降低。结论两色金鸡菊黄酮成分可能通过调控AMPK/SREBP1/ACC1能量代谢通路,抑制模型细胞增殖、氧化应激,进而改善肾脏纤维化病变。     

二苯乙烯苷对糖尿病大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌炎症因子的影响

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌炎症因子的影响。方法:分别以正常糖(NG)、高糖(HG)、糖基化终产物(AGE)及过氧化氢(H2O2)孵育大鼠肾小球系膜细胞,CCK细胞计数法检测大鼠系膜细胞的OD值,判断细胞增殖情况。比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH-Px)的活性、丙二醛(MDA)含量的变化。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测方法检测培养细胞上清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)蛋白浓度,Western Blot检测系膜细胞中环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:HG、AGE和H2O2能明显诱导系膜细胞增殖和氧化应激增强,而TSG可明显改善系膜细胞增殖和氧化应激状态,同时三种诱因均可使肾小球系膜细胞MCP-1、ICAM-1和COX-2蛋白分泌增加;TSG预处理后可抑制上述因素诱导的炎症因子分泌。结论:TSG可抑制糖尿病大鼠系膜细胞增殖和调控炎症因子表达,从而在防治糖尿病肾病发生发展过程中发挥重要作用。     

血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子的表达

目的:研究血竭素高氯酸盐抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达,探讨其防治糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化的机制.方法:将培养的HMC分为低糖组(LG组,5.5 mmol·L~(-1)D-葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol·L~(-1) D-葡萄糖),每组均设血竭素高氯酸盐浓度7.5 μmol·L~(-1)对照,作用24,48 h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CTGF mRNA和蛋白水平的表达.结果:与高糖组比较,低糖组中CTGF mRNA和蛋白表达均显著性减少(P＜0.01),高糖组加血竭素高氯酸盐干预后,CTGF mRNA和蛋白表达显著性减少(P＜0.01).结论:血竭素高氯酸盐可以抑制CTGF的表达,这可能是其防治DN肾纤维化的部分机制.     

保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响

目的观察保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为正常对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组,每组5只。保肾通络方低、中、高剂量组大鼠分别予浓度为0.5、1.0、2.0 g/mL的保肾通络方颗粒剂药液灌胃,正常对照组大鼠予等容积蒸馏水灌胃。各组大鼠均连续灌胃7 d,通过腹主动脉取血并分离出含药血清。将永生化小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组。正常对照组肾小球系膜细胞予DMEM低糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,高糖对照组肾小球系膜细胞予含30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,保肾通络方低、中、高剂量组肾小球系膜细胞分别予高糖培养基+10%的保肾通络方低、中、高剂量含药血清培养。培养24 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性情况,免疫荧光法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ)及纤维连接蛋白(FN)表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达情况。结果高糖对照组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与正常对照组比较明显升高(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与高糖对照组比较明显降低(P 0.05),但保肾通络低、中、高剂量组细胞增殖活性组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与正常对照组比较均升高(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与高糖对照组比较均降低(P 0.05),但保肾通络方低、中、高剂量组CollagenⅣ及FN灰度值组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与正常对照组相比均明显上调(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与高糖对照组比较均明显下调(P 0.05),但保肾通络方各剂量组CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论保肾通络方可以降低DN肾小球系膜细胞增殖活性,抑制细胞外基质增生,减少CollagenⅣ及FN蛋白的表达,并能够下调CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达,从多途径对DN进行干预治疗。     

消渴平含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、周期及TGF-β1的影响

目的:观察消渴平(xiaokeping,XKP)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、周期及转化生长因子(TGF-β1)表达的影响,探讨其治疗DKD的作用机理。方法:使用不同浓度的消渴平含药血清及厄贝沙坦含药血清与高糖共同培养大鼠系膜细胞,应用MTT法观察各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western-blot及RT-PCR检测TGF-β1蛋白和mRNA表达情况。结果:与空白对照组相比,高糖组系膜细胞增殖明显增加(P 0. 01),消渴平可呈浓度依赖性地抑制系膜细胞增殖。细胞周期检测结果显示,与高糖组相比,消渴平高剂量组可明显降低S期系膜细胞的百分比(P 0. 05),Western-blot及RT-PCR检测显示消渴平可显著减少TGF-β1表达(P 0. 05)。结论:消渴平可明显抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖,阻滞细胞周期,降低TGF-β1表达,这可能是其防治DKD的机制之一。     

槲皮素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的:研究槲皮素在高糖环境下对大鼠肾小球系膜细胞增殖槲皮素对照组及TGF-β1表达的影响。方法:将体外培养的大鼠系膜细胞分为正常组、高糖组、槲皮素对照组及槲皮素低、中、高剂量组6组,MTT法检测槲皮素对肾小球系膜细胞增殖的影响,Western-blot法检测肾小球系膜细胞TGF-β1、P-Smad2、FN的表达。结果:槲皮素能够显著抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、P-Smad2、FN表达。结论:槲皮素可通过降低TGF-β1水平抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,并通过抑制Smad2磷酸化部分影响TGF-β1/Smads信号通路的激活,降低FN的表达,对肾脏起到保护作用。     

荔枝核总黄酮对高糖联合肿瘤坏死因子诱导大鼠肾小球系膜细胞纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白表达的影响

目的观察荔枝核总黄酮(total flavonoids of litchi,TFL)对高糖联合TNF-α诱导大鼠肾小球系膜细胞分泌纤维黏连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白表达的影响。方法以大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)为研究对象,用不同浓度荔枝核总黄酮干预高糖联合TNF-α诱导的大鼠肾小球系膜细胞,作用48 h后,采用酶联免疫分析法(ELISA)和细胞免疫组化法检测HBZY-1表达FN、ColⅣ蛋白情况。结果高糖联合TNF-α刺激大鼠肾小球系膜细胞48 h,FN、ColⅣ蛋白表达明显增高〔(59.946±0.307)vs.(66.825±0.929);(46.445±0.653)vs.(59.443±4.102),P0.01〕,经荔枝核总黄酮干预后FN、ColⅣ蛋白表达明显降低〔(66.825±0.929)vs.(59.496±1.258)、(62.553±1.022)、(52.541±0.608);(59.443±4.102)vs.(51.252±3.676)、(47.742±1.396)、(48.438±0.207)、(47.046±1.810),P0.01〕。结论高糖联合肿瘤坏死因子能够促进大鼠肾小球系膜细胞纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白的表达,且荔枝核总黄酮干预后FN、ColⅣ蛋白表达明显降低,提示荔枝核总黄酮干预糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾纤维化作用的部分机制可能与下调纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白的表达有关。     

壮通饮抑制NADPH氧化酶2对糖氧剥夺诱导星形胶质细胞损伤的保护作用

目的：探讨壮通饮对星形胶质细胞糖氧剥夺（OGD）损伤的保护作用,并从NADPH氧化酶2(NOX2）抑制途径探讨其保护作用发挥的机制。方法：原代培养星形胶质细胞,制成糖氧剥夺损伤模型,分为对照组、糖氧剥夺组、糖氧剥夺+壮通饮组（浓度20mg·L-~1,40mg·L-~1,80mg·L-~1）,糖氧剥夺+夹竹桃麻素组（浓度0.05mg·L~(-1)、0.25mg·L~(-1)、0.5mg·mL~(-1)）。免疫荧光观察细胞纯度,CCK-8试剂盒测定细胞活力,Western Blot检测NOX2蛋白表达。结果：糖氧剥夺诱导星形胶质细胞损伤后复氧8h和24h,壮通饮（40mg·L~(-1)、80mg·L~(-1)和80mg·L~(-1)）分别能提高星形胶质细胞活力。Western Blot显示壮通饮（20mg·L~(-1)、40mg·L~(-1)、80mg·L~(-1)）和夹竹桃麻素（0.25mg·L~(-1)、0.5mg·mL~(-1)）均能抑制糖氧剥夺/再灌注后NOX2活性。结论：壮通饮可以抑制NOX2的活性,保护糖氧剥夺诱导的星形胶质细胞损伤。     

花椒水提物通过抑制滑膜细胞增殖及诱导细胞凋亡治疗类风湿性关节炎

目的：探讨花椒水提物(ZBAE)对类风湿性关节炎的治疗作用。方法：将60只SD大鼠分为正常组、模型组[完全弗氏佐剂(CFA),10 mg·kg^-1]、甲氨蝶呤组(0.25 mg·kg^-1)和ZBAE低、中、高剂量组(90、180、360 mg·kg^-1)。甲氨蝶呤组腹腔注射给药2周，每周给药3次，ZBAE组连续灌胃给药14 d。给药期间，每3 d测量大鼠体质量和足跖肿胀度，同时进行关节炎评分。给药结束后，采用计算机断层(CT)扫描，苏木素-伊红(HE)染色及番红固绿染色观察ZBAE对滑膜增生及骨保护的作用。采用细胞增殖活性检测-8(CCK-8)试剂盒检测ZBAE对细胞增殖活力的影响；根据CCK-8实验结果确定最佳给药浓度与时间，设置空白组、ZBAE低、中、高质量浓度组(0.08、0.10、0.12 g·L^-1)。流式细胞仪分析花椒作用24 h后细胞的周期分布和细胞凋亡率；采用体外划痕实验检测类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)迁移能力；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RA-F...     

3种重金属对欧洲花楸悬浮细胞生物量的影响

目的： 以欧洲花楸悬浮培养细胞（SASC）为材料,研究非生物诱导子-重金属对SASC生物量的影响。方法： 配制不同浓度的氯化镧、硝酸铜、硝酸铅溶液对SASC进行处理,用电子天平进行SASC生物量测定。结果： 低浓度氯化镧刺激细胞生长而高浓度则抑制细胞生长,对细胞生长的影响表现为Hormesis现象,最适刺激质量浓度为0.01 mg·L^-1;低浓度硝酸铜抑制细胞生长,高浓度刺激细胞生长,0.05 mg·L^-1 硝酸铜处理后细胞生物量最低;基本所有浓度的硝酸铅都表现为刺激细胞生长,最适刺激质量浓度为0.5 mg·L^-1。结论： 重金属诱导子影响了SASC的生物量,且其作用程度和方式与氯化镧、硝酸铜、硝酸铅3种诱导子种类及浓度相关。     

天山雪莲细胞培养物与原药材中紫丁香苷含量的比较

 目的比较天山雪莲细胞培养物与原药材中紫丁香苷含量的差异。方法建立了一种HPLC-DAD方法测定紫丁香苷的含量:色谱柱采用Agilent Zorbax SB-C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温为25℃,流动相为乙腈-水(10:90),流速1.0mL·min^-1,检测波长220nm。结果与天山雪莲原药材相比,细胞培养物中紫丁香苷的含量在液体培养和固体培养方式下,分别提高了20.96和55.50倍。结论利用细胞培养方式生产紫丁香苷具有良好的开发前景。     

走马胎中三萜皂苷成分H1对6株肿瘤细胞增殖及对A549肺癌细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究紫金牛科紫金牛属植物走马胎Ardisia gigantifolia中的三萜皂苷成分H1对不同肿瘤细胞株增殖的影响,并检测H1对A549肺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:以细胞密度为3×107/L细胞悬液每孔90μL接种于96孔板中,培养24 h后,各组分别加入不同浓度(终浓度分别为0,1.25,2.5,5,10,20μmol·L-1)的H1药液分别作用于MCF-7,HepG2,HeLa,A549,Bel-7402,BGC-823肿瘤细胞株24,48,72 h,并设阴性对照组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT比色法)检测H1对肿瘤细胞株增殖的影响,筛选对H1敏感的细胞株,用荧光倒置生物显微镜观察细胞形态学变化、采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果:H1作用于MCF-7,HepG2,HeLa等6株肿瘤细胞24,48,72 h后的IC50为4.26~6.45μmol·L-1,其中A549细胞株对H1最为敏感。终浓度为0,1.25,2.5,5μmol·L-1的H1干预A549细胞24 h后,中、高剂量组的细胞凋亡形态明显,发生早期凋亡;总凋亡率分别为2.2%,7.0%,14.2%,56.4%,各剂量组与正常组比较均有统计学意义;细胞阻滞发生在G2期,使S期急剧增加。结论:H1对6种肿瘤细胞株有一定程度的抑制作用,对A549细胞增殖的抑制作用较显著,其诱导A549细胞的凋亡机制可能与对细胞周期阻滞有关。     

复智胶囊对血管性痴呆模型大鼠海马神经元突触传递长时程增强的影响

目的:观察复智胶囊对血管性痴呆大鼠海马神经元突触传递长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法(2-VO)制备血管性痴呆大鼠模型。选取造模成功的大鼠,随机分为模型组、多奈哌齐(0.52×10-3g·kg-1·d-1,ig)组、复智胶囊高、低剂量(6.30,3.15 g·kg-1·d-1,ig)组。并设假手术对照组。连续ig 4周后,采用Morris水迷宫检测实验大鼠的学习记忆能力,同时采用LTP诱导法检测大鼠海马齿状回高频刺激诱发的群峰电位(population spike,PS)幅值变化,采用免疫组化检测海马N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)免疫阳性细胞的表达。结果:与假手术组相比,造模术后的大鼠学习记忆能力均有下降,逃避潜伏期和游泳路程明显延长,撤除平台后跨越原平台次数明显减少,高频电刺激后海马神经元齿状回PS增幅明显下降,海马NMDA免疫阳性细胞数明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);而与模型组相比,复智胶囊高、低剂量组和多奈哌齐组大鼠学习记忆能力均有改善,逃避潜伏期和游泳路程均有缩短,跨越原平台次数明显增多,海马神经元齿状回PS增幅明显升高,海马NMDA免疫阳性细胞数明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:复智胶囊通过增加海马NMDA阳性细胞表达,提高海马神经元齿状回PS增幅,改善大鼠学习记忆能力,对血管性痴呆模型大鼠海马神经元突触传递长时程增强有明显的改善作用。     

多伞阿魏体外抗胃癌活性筛选、细胞凋亡及周期阻滞机制

目的:研究确定新疆特色维族药多伞阿魏体外抗胃癌活性部位及其敏感胃癌细胞系,并探讨多伞阿魏诱导胃癌细胞凋亡和细胞周期阻滞情况,为其进一步在抗胃癌方面的研究、开发与应用提供实验依据。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度多伞阿魏不同提取物(挥发油,95%乙醇提取物,及其石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位,正丁醇部位,水部位)分别对5种胃癌细胞系(AGS,MKN-45,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法观察多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位对胃癌细胞AGS和SGC-7901的影响情况;并应用细胞流式仪检测多伞阿魏不同提取部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901的凋亡和周期阻滞影响情况。结果:与空白组比较,多伞阿魏挥发油,95%乙醇提取物,石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位对5种胃癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用(P0.05),并呈现浓度依赖关系。挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的增殖抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为(7.98±2.62)mg·L~(-1),三氯甲烷部位对5种胃癌细胞系均具有较好的敏感性,对胃癌细胞SGC-7901最为敏感,其IC50为(8.73±0.55)mg·L~(-1),而正丁醇部位和水部位未呈现出明显的细胞增殖抑制作用;多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901后,细胞核被Hoechst33258染色呈亮蓝色,且随着药物浓度的增加蓝色荧光越强;流式细胞凋亡检测结果显示,多伞阿魏不同提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901发生不同程度的凋亡(P0.05),且随着药物浓度的增加,细胞总凋亡率明显增高;流式细胞周期检测结果显示,与空白组比较,多伞阿魏挥发油使胃癌细胞AGS的周期发生明显改变,细胞休眠期/DNA复制前期(G0/G1期)细胞比例增高,DNA复制期(S期)细胞比例降低,DNA复制后期/有丝分裂期(G2/M期)比例降低(P0.05);与空白组比较,多伞阿魏三氯甲烷部位使胃癌细胞SGC-7901的周期也发生显著改变,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,G2/M期比例降低(P0.05)。结论:多伞阿魏挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的细胞毒活性,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞均具有较好的增殖抑制作用,尤其对胃癌细胞SGC-7901最为敏感;多伞阿魏各提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901主要发生晚期凋亡,而多伞阿魏乙酸乙酯部位诱导胃癌细胞AGS主要发生细胞早期凋亡;多伞阿魏挥发油能够将胃癌细胞AGS阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期及G2/M期;伞阿魏三氯甲烷部位将胃癌SGC-7901细胞周期阻滞于S期。研究表明多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位具有较好的抗胃癌活性作用,具有潜在的研究价值和开发利用空间,并为多伞阿魏体内抗胃癌及其抗胃癌机制研究提供了一定的科学依据。     

杭白菊中黄酮类化合物及其抑制人源肿瘤细胞增殖活性的研究

 目的 分离和鉴定杭白菊中黄酮类化合物并对其进行抗肿瘤活性研究。方法 利用系统溶剂萃取法、聚酰胺柱色谱、半制备型高效液相色谱法分离。通过理化性质和IR、UV、MS、¹H-NMR、¹³C-NMR等光谱数据鉴定化合物。采用MTT法测定化合物对人肿瘤细胞增殖的影响, 并以氟尿嘧啶（5-FU）作为阳性对照,比较其对正常细胞的毒性作用。流式细胞术检测细胞周期分布的改变。结果 分离得到8个黄酮化合物单体,分别鉴定为木犀草素(Ⅰ),木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ),木犀草素7-O-β-D (6″-O-丙二酸单酰) -葡萄糖苷(Ⅲ),芹菜素(Ⅳ),芹菜素 7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ),芹菜素 7-O-β-D-(6″-O-丙二酸单酰)-葡萄糖苷(Ⅵ),香叶木素(Ⅶ),香叶木素 7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅷ)。MTT法测定木犀草素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞 和肝癌SMMC-7721细胞的IC₅₀分别为56.67和72.92 μmol·L^-1。结论 化合物Ⅲ和Ⅵ首次从杭白菊中分离得到。木犀草素能抑制MDA-MB-231和SMMC-7721增殖,阻滞其细胞周期于G2/M期,且对正常细胞无毒性。     

酢浆草提取物对成骨细胞增殖及分化的影响

目的:探讨酢浆草水提物对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法:不同质量浓度酢浆草水提物(10,100,200 mg·L-1)作用人成骨肉瘤细胞株SaOS-2后,MTT法测定细胞增殖情况、磷酸对硝基苯酯(PNPP)法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测钙离子(Ca2+)和骨钙素(OTC)的分泌以及用茜素红染色法测定成骨细胞矿化结节数。结果:与空白组比较,酢浆草水提物能明显促进SaOS-2细胞的生长(P<0.01);ALP活性呈时间依赖性增加(P<0.05),以100 mg·L-1剂量组最为显著(P<0.01);增强了细胞分泌Ca2+(P<0.05)和OTC的能力(P<0.01);并且酢浆草中、高剂量组可以明显促进矿化结节形成(P<0.05)。结论:酢浆草水提物在体外可以促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,提示酢浆草可能具有促进骨形成的能力。     

附子水溶性生物碱对心衰细胞模型的治疗作用

目的:研究附子水溶性生物碱对心力衰竭大鼠心肌细胞膜ATP酶以及相关离子的影响,以揭示其对急性心力衰竭细胞的治疗作用。方法:取新生大鼠心室肌细胞原代培养5 d至细胞成熟,用0.8%戊巴比妥钠作用5 min造模后,分别给予附子水溶性生物碱0.01,0.02,0.04 g·L-1,以及阳性药物去乙酰毛花苷注射液4 mL·L-1,作用1.5 h后检测心肌细胞ATP酶活性以及各相关离子浓度。结果:模型组与正常组比较,心肌细胞活力明显减小,细胞内Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性与Na+,Mg2+含量降低,K+,Ca2+的含量与Na+-K+-ATP酶的活性上升;去乙酰毛花苷4 mL·L-1以及附子水溶性生物碱各剂量组均能提高心衰细胞的细胞活性,并能升高模型细胞Na+,Mg2+含量,提高细胞内Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,降低K+,Ca2+的含量与Na+-K+-ATP酶的活性。结论:附子水溶性生物碱能调节心衰细胞内酶的活力与离子浓度使之趋于正常,对戊巴比妥钠致心衰细胞模型具有一定的治疗作用。     

巴戟天中有效成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运

目的：研究巴戟天中的有效成分水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在人源结肠癌细胞Caco-2单层模型中的吸收特性。方法：通过细胞培养技术建立Caco-2细胞单层模型,以细胞形态学特征、细胞跨膜电阻等指标验证和筛选模型。考察不同pH、不同质量浓度的水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖对Caco-2细胞活力的影响,以确定给药pH和质量浓度。通过Caco-2细胞转运实验探究药物质量浓度、作用时间与P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖吸收转运的影响。采用高效液相色谱法(HPLC)测定水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖的累积转运量。结果：水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在Caco-2细胞单层模型中吸收良好,三者低质量浓度的双侧表观渗透系数(P_app)明显大于中、高质量浓度;加入盐酸维拉帕米后,三者的P_app变化不大,说明这3个成分的小肠吸收不需要载体。去乙酰车叶草苷酸的液相色谱图中存在少量水晶兰苷,说明去乙酰车叶草苷酸存在首过效应。结论：巴戟天中水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖3个特征性成分在跨膜转运过程中均以被动转运为主,且3...