清热利湿外治法对宫颈癌荷瘤裸鼠抗肿瘤作用与MARK信号通路的关系

[目的] 探讨清热利湿外治法对HPV（+）宫颈癌荷瘤裸鼠模型抗肿瘤作用及对ERK及P38/MAPK信号通路的影响。[方法] 建立人宫颈癌Siha细胞荷瘤裸鼠皮下移植瘤模型,裸鼠成瘤后,按随机数字表法分为5组,即顺铂组、空白对照组和清热利湿外治法高剂量（0.942 8 mg/kg）、中剂量（0.471 4 mg/kg）、低剂量组（0.235 7 g/kg）,连续用药观察28天。停药24小时后处死裸鼠,完整取出肿瘤组织,测量肿瘤体积及体质量,计算抑瘤率。将肿瘤组织切片后,HE染色法观察肿瘤的形态学变化,运用免疫组化SP的方法,检测肿瘤组织中的p-ERK及p-p38蛋白表达水平。[结果] 清热利湿外治法用药组的移植瘤体积均明显小于空白对照组（P<0.05）,高、中、低剂量组抑瘤率分别为36.23%、31.24%和14.94%;HE染色法显示清热利湿外治法用药组裸鼠的移植瘤组织出现明显坏死改变;清热利湿外治法中剂量、高剂量治疗组的p-ERK及p-p38蛋白水平明显下降,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 清热利湿外治法对人宫颈癌Siha细胞移植瘤的生长具有明显抑制作用;其作用机制可能与下调ERK/P38 MARK（丝裂原活化蛋白激酶）信号转导通路的磷酸化水平有关。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

目的 探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法 建立人肺癌A549细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后20只裸鼠随机分为4组：对照组、NS398低剂量（1.5mg/kg）组、NS398中剂量（3.0mg/kg）组和NS398高剂量（4.5mg/kg）组。各组均采用腹腔注射给药,每周3次,共4周。给药期间每隔7日测量肿瘤体积。最后一次给药次日,处死裸鼠完整剥取肿瘤,测量肿瘤重量并计算抑瘤率。TUNEL法检测各组移植瘤标本细胞凋亡情况,免疫印迹法检测survivin、XIAP和cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 NS398各剂量组肺癌移植瘤生长速度均慢于对照组,各剂量组肿瘤重量显著低于对照组（P<0.01,P=0.000）,呈剂量依赖性。各剂量组的抑瘤率分别为30.18%、46.50%和53.87%。TUNEL法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组凋亡指数均显著增加（P<0.01,P=0.000）,并呈剂量依赖性。免疫印迹法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组survivin和XIAP蛋白表达量均显著减少,cleaved caspase-3蛋白表达量均显著增加（P=0.000）,也呈明显剂量依赖性。结论 NS398能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与下调survivin和XIAP蛋白表达,上调cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

慢病毒介导lncRNA-AK058003过表达对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究上调SK-Hep1肝癌细胞中lncRNA-AK058003的表达对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用慢病毒转染的方法将lncRNA-AK058003的重组质粒和空质粒分别转入SK-Hep1肝癌细胞株中,经新霉素筛选出lncRNA-AK058003稳定过表达的细胞株,用定量PCR的方法检测lncRNA-AK058003在SK-Hep1肝癌细胞中的过表达,并且将稳定过表达lncRNA-AK058003的SK-Hep1肝癌细胞和含有空质粒的SK-Hep1肝癌细胞分别注射入裸鼠腋下皮下,定期测量裸鼠移植瘤的长径和短径,从而计算出移植瘤的体积,饲养35天后测量移植瘤的重量。结果 构建稳定过表达lncRNA-AK058003的肝癌细胞株,裸鼠皮下荷瘤实验结果显示,过表达组裸鼠移植瘤的体积（308.4±439.4mm³）、重量（0.464±0.518g）和生长速度均低于空质粒组（1410.0±973.0mm³ ,1.363±0.856g,P < 0.05）。结论 lncRNA-AK058003对肝癌裸鼠移植瘤的增殖具有抑制作用。     

氯离子通道蛋白-3对宫颈癌细胞生长、转移的影响

目的 探讨氯离子通道蛋白-3（CIC-3）对宫颈癌细胞生长和转移的影响。方法 通过免疫组织化学、qRT-PCR和Western blotting检测60例宫颈鳞癌组织和相应癌旁组织中CIC-3的表达。使用靶向CIC-3的siRNA转染SiHa细胞,并通过CCK-8、流式细胞术、伤口愈合实验和Transwell实验考察CIC-3对细胞生长和转移的影响。使用Western blotting检测细胞中PI3K、p-AKT、Bcl-2和p21的表达。此外,通过将转染CIC-3 siRNA的SiHa细胞接种到BALB/c-nu/nu裸鼠背部复制体内肿瘤异种移植模型。结果 免疫组织化学染色结果显示,CIC-3蛋白主要表达于子宫颈鳞状上皮细胞胞质区。癌组织CIC-3的阳性染色评分、CIC-3 mRNA相对表达量、CIC-3/β-actin相对表达量较癌旁组织高（P <0.05）。SiHa细胞CIC-3 mRNA相对表达量、CIC-3/β-actin相对表达量较H8细胞高（P <0.05）。不同肿瘤直径、TNM分期和是否有淋巴结转移患者CIC-3高表达率比较,差异有统计学意义（P <0.05）。下调CIC-3能抑制SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡（P <0.05）。在接种si-CIC-3转染的细胞后,裸鼠的肿瘤体积变小（P <0.05）。下调CIC-3能抑制PI3K、p-AKT和Bcl-2的蛋白表达,但促进p21的表达。结论 CIC-3在宫颈鳞癌中高表达,下调CIC-3可抑制宫颈鳞癌的生长和转移。CIC-3对宫颈鳞癌细胞凋亡的调控作用部分通过PI3K-AKT信号通路介导。     

不同分割照射方式对MDA-MB-231移植瘤增殖活性的影响

目的 以相同剂量下,研究单次大剂量照射对MDA-MB-231乳腺癌移植瘤的生物学效应。方法 建立MDA-MB-231乳腺癌移植瘤模型,待移植瘤直径达8~9mm,随机分为0Gy组（空白对照组）、8Gy组（8Gy/1f/1d）、10Gy组（10Gy/1f/1d）、4×2Gy组（8Gy/4f/4d）、2Gy×5（10Gy/5f/5d）组。每3天观察肿瘤体积变化,绘制移植瘤生长曲线。照射实验组（除对照组）裸鼠分别于放疗结束后第7天、14天行¹⁸F-FDG PET/CT检查,另取各实验组裸鼠分别于放疗结束后7天、14天处死,收集肿瘤组织行免疫组化测定Ki-67的表达。结果 单次大剂量和常规分割照射均能抑制MDA-MB-231移植瘤生长,以单次大剂量10Gy组最为明显（P<0.05）。且在同等剂量条件下,单次大剂量组在放疗后第7、14天PET/CT检查显示移植瘤SUVmax值均低于常规分割照射组（P<0.05）,Ki-67阳性细胞百分比单次大剂量组也低于同剂量常规分割组（P<0.05）。结论 在同等剂量情况下,单次大剂量放疗较常规分割放疗对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖活性的抑制更为显著,同时¹⁸F-FDG PET/CT在一定程度上可以反应早期放疗后MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖活性。     

MicroRNA-137通过Wnt信号通路对宫颈癌细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用研究

目的 探究microRNA-137（miR-137）通过Wnt信号通路对人宫颈癌细胞HeLa的增殖与凋亡,以及对裸鼠移植瘤的作用。方法 将人宫颈癌细胞HeLa分别转染miR-137-mimic质粒（miR-137组）和空载质粒（NC组）,另设空白组只加入等量转染试剂不做其他处理。待细胞稳定转染后,采用CCK-8法检测细胞活性。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Wnt、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）、分泌型蛋白Dickkopf-1（DKK1）、miR-137 mRNA相对表达量;采用Western blotting检测Wnt、MMP-7、DKK1蛋白的相对表达量。将稳定转染的细胞接种于裸鼠背部,观察裸鼠移植瘤的生长情况,绘制生长曲线并计算抑瘤率。结果 空白组、NC组、miR-137组12 h、24 h、48 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）;②3组的OD值有差异（P <0.05）,miR-137组OD值较空白组和NC组低,相对细胞活性较低;③3组OD值的变化趋势有差异（P <0.05）。miR-137组细胞凋亡率高于空白组和NC组（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt和MMP-7 mRNA相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1和miR-137 mRNA相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt、MMP-7蛋白相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1蛋白相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。NC组裸鼠移植瘤的抑瘤率与miR-137组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,miR-137组裸鼠移植瘤的抑瘤率增加。空白组、NC组、miR-137组裸鼠不同时间点的肿瘤体积比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的肿瘤体积有差异（P <0.05）;②3组的肿瘤体积有差异（P <0.05）,miR-137组与空白组和NC组相比,肿瘤生长缓慢,相对抑瘤效果较好;③3组肿瘤体积的变化趋势有差异（P <0.05）。结论 在人宫颈癌细胞中过表达miR-137可以促进癌细胞凋亡,抑制癌细胞增殖,该作用可能与Wnt及其上下游MMP-7/DKK1信号通路有关。     

大蒜素对荷子宫内膜癌裸小鼠移植瘤生长的影响及其机制研究

目的 研究大蒜素（allitridi）对荷子宫内膜癌裸小鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法 取对数生长期子宫内膜癌Ishikawa细胞,皮下注射接种的方法制备荷子宫内膜癌裸小鼠模型,成瘤后取60只裸小鼠模型随机分为模型组、大蒜素高（40mg/kg）、中（20mg/kg）、低（10mg/kg）剂量组和顺铂2mg/kg组,每组12只;各治疗组均隔天腹腔注射给药1次,共给药治疗5次。治疗完成后剥取肿瘤组织并称量、计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织形态学变化;TUNEL染色法观察肿瘤组织细胞凋亡状况并计算凋亡指数（apoptosis index,AI）,免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）观察肿瘤组织bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达并进行半定量分析,计算Bax/bcl-2比值。结果 大蒜素各组和顺铂组裸小鼠移植瘤肿瘤组织细胞呈皱缩、片状坏死等病理性改变,凋亡细胞数量明显增多,以大蒜素高剂量组最为显著。与模型组比较,大蒜素高、中剂量组和顺铂组瘤体重量显著减轻（P<0.05,P<0.01）,抑瘤率显著升高（P<0.01）,肿瘤组织bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.05,P<0.01）,Bax和caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.05,P<0.01）,Bax/bcl-2表达比值显著升高（P<0.01）。与顺铂组比较,大蒜素高剂量组Bax/bcl-2表达比值显著升高（P<0.05）。结论 大蒜素对荷子宫内膜癌裸小鼠移植瘤生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够下调bcl-2表达、上调Bax和caspase-3表达、提高Bax/bcl-2表达比值进而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

miR-205对Ⅱ型子宫内膜癌细胞生物学行为的调控作用研究

目的 通过实验研究下调miR-205的表达对Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖、侵袭力的影响及对裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,以探讨将miR-205作为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗的潜在靶点的可能性。方法 利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-205抑制物转染入Ⅱ型子宫内膜癌细胞HEC-1-B中;利用Q-RT-PCR检测转染后各组细胞中miR-205的表达情况;CCK-8检测细胞增殖能力变化情况;Transwell实验检测穿膜细胞数变化情况;利用BALB/c免疫缺陷裸鼠建立Ⅱ型子宫内膜癌皮下移植瘤模型,并测量各组移植瘤的瘤体重量。结果 Q-RT-PCR结果显示,转染miR-205抑制物组细胞中的miR-205表达水平显著低于无关序列组和空白对照组（P<0.01）;下调miR-205表达量对HEC-1-B细胞的增殖和侵袭力均有抑制作用,并能显著降低裸鼠移植瘤的瘤体体积及重量（P<0.01）。结论 在Ⅱ型子宫内膜癌中,miR-205表现出癌基因的生物学行为,下调miR-205的表达可以显著降低Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的增殖侵袭能力,miR-205的过表达可能参与了Ⅱ型子宫内膜癌的发生、发展及侵袭转移过程,miR-205将有望成为Ⅱ型子宫内膜癌的生物靶向治疗的新靶点。     

花旗松素通过PI3K/AKT/mTOR通路对宫颈癌SiHa细胞自噬、凋亡和衰老的影响

[目的] 观察花旗松素（Taxifolin）对宫颈癌SiHa细胞自噬,凋亡和衰老的影响。[方法] 采用0、5、10、20μmol/LTaxifolin处理宫颈癌SiHa细胞。CCK-8法检测细胞细胞增殖倍数;蛋白免疫印迹检测Beclin1、p62、LC3II/LC3I蛋白表达水平;免疫荧光检测LC3+含量;流式细胞仪检测细胞凋亡;流式分选检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、cleavedCaspase-3、Caspase-9、cleavedCaspase-9、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、pPI3K、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR蛋白表达水平,加入AKT激活剂SC79进行验证。[结果] 与Taxifolin0μmol/L组相比较,Taxifolin10、20μmol/L组细胞增殖倍数显著降低（P<0.05）,p62蛋白水平显著降低（P<0.05）,Beclin1、LC3II/LC3I蛋白水平显著升高（P<0.05）,LC3+含量显著升高（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）,线粒体膜电位显著升高（P<0.05）,Bcl-2/Bax比值显著降低（P<0.05）,cleavedCaspase-3/Caspase-3、cleavedCaspase-9/Caspase-9比值升高（P<0.05）,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低（P<0.05）。加入PI3K/AKT信号通路激活剂SC79可逆转花旗松素对SiHa细胞凋亡、自噬及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。[结论] Taxifolin通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的活化诱导宫颈癌SiHa细胞自噬,凋亡和衰老。     

大黄素对胰腺癌裸鼠皮下移植瘤抑癌基因去甲基化作用

目的 通过建立胰腺癌Panc1细胞株皮下移植瘤模型,探讨大黄素对胰腺癌皮下移植瘤抑癌基因p16、RASSF1A、ppENK启动子区CpG岛的去甲基化作用的影响。方法 首先建立人胰腺癌细胞裸鼠模型,后给予不同药物浓度的大黄素（0、30、50、70mg/kg）处理裸鼠,观察大黄素对裸鼠移植瘤生长的影响,采用MSP、RT-PCR以及Western blot法分别检测不同组别移植瘤的3个抑癌基因甲基化状态以及mRNA、蛋白的改变。结果 大黄素能够抑制胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长,随着大黄素浓度的升高,其对胰腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制率逐渐升高,特别50、70mg/kg浓度组与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。MSP结果显示大黄素可使裸鼠移植瘤组织的甲基化条带减弱,非甲基化条带增强,同时可以使经RT-PCR和Western blot法结果证实的低表达或无表达的mRNA和蛋白表达增强或者重新表达,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 通过体内实验笔者证实大黄素可以对胰腺癌裸鼠移植瘤抑癌基因p16、RASSF1A、ppENK发挥不同程度的去甲基化作用,使因启动子区甲基化而失表达的抑癌基因重新表达,大黄素抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长可能和其具有对抑癌基因去甲基化作用有关。     

RAGE在不同宫颈鳞癌细胞中的表达及意义

目的 探讨人宫颈鳞癌细胞中晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced-glycation end products,RAGE）的表达水平及定位,筛选出合适的细胞用于研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响。方法 选取人宫颈鳞癌细胞SiHa、MS751、C33-A及CaSki,采用免疫细胞化学染色检测癌细胞中RAGE蛋白的定位,应用qRT-PCR法检测癌细胞中RAGE mRNA的表达水平。应用免疫印迹法检测癌细胞中RAGE蛋白的表达水平。采用酶联免疫吸附法检测4种人宫颈鳞癌细胞分别培养至12、24、36、48及72h时,上清中分泌型RAGE蛋白的表达水平。结果 RAGE蛋白主要在人宫颈鳞癌细胞的胞质和胞膜中表达,大部分位于胞质。RAGE mRNA的表达量在SiHa细胞中最高,为0.986±0.053,而在MS751细胞中的表达量相对最低,仅0.111±0.008（P<0.05）。RAGE蛋白在SiHa细胞中的表达量相对最高的（0.982±0.096）,而在MS751细胞中的表达量相对最低（0.250±0.056）,差异有统计学意义（P<0.05）。SiHa、MS751、C33-A及CaSki细胞各个时间点均检测到其分泌至上清中的RAGE蛋白,且4种细胞随着培养时间的延长,其分泌型RAGE的表达量逐渐增高。结论 RAGE在4种人宫颈鳞癌细胞中均有表达。C33-A和CaSki细胞适合用做后续RAGE干扰和过表达实验;SiHa细胞可在培养液中加入抗RAGE抗体改变RAGE表达量;用于后续研究RAGE对宫颈鳞癌细胞生物学行为的影响。     

FLCN在子宫颈鳞癌组织中的表达及其对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨folliculin (FLCN)基因在子宫颈鳞癌组织中的表达及其对子宫颈鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 采用qRT PCR和免疫组化法分别检测正常宫颈组织和子宫颈鳞癌组织中FLCN mRNA和蛋白的表达;在子宫颈鳞癌SiHa细胞中敲减或过表达FLCN后,qRT-PCR检测FLCN mRNA表达,采用CCK 8检测各组细胞增殖活力,采用TUNEL和磷酸化组蛋白H3(PH3)染色,观察各组细胞凋亡和增殖情况。结果： 与对照组相比,宫颈鳞癌组中FLCN mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。FLCN siRNA 沉默后细胞增殖活力增强、凋亡减弱,PH3蛋白阳性比例增加,TUNEL阳性细胞比例减少(P<0.05或0.01)。过表达FLCN细胞增殖活力减弱、凋亡增强,PH3蛋白阳性细胞比例减少,TUNEL阳性细胞比例增加(P均<0.01)。结论： FLCN基因在宫颈鳞癌组织中呈低表达,其可抑制SiHa细胞增殖并促进其凋亡。     

蓝萼乙素对两种宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 探讨蓝萼乙素(GLB)对两种宫颈癌细胞株HeLa、SiHa裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制.方法 将HeLa、SiHa细胞分别种植至BALB/C nu裸小鼠右大腿根部背侧皮下,建立裸小鼠移植瘤模型;待移植瘤体积约为0.1 cm3时,于第10天将HeLa组随机分为4组,第14天将SiHa组随机分为4组,分别为生理盐水组、10%乙醇组、GLB低剂量组和高剂量组,每组5只;经腹腔注射给药,HeLa组给予生理盐水0.4 mL/只、10%乙醇0.4 mL/只、GLB 0.15μmol/g 0.4 mL/只和0.20μmol/g 0.4 mL/只,隔日1次,共20 d;SiHa组给予生理盐水0.4 mL/只、10%乙醇0.4 mL/只、GLB 0.18μmol/g 0.4 mL/只和0.24μmol/g 0.4 mL/只,隔日1次,共20 d.腹腔注射给药的同时,隔天用标准体重秤称量体质量并做好记录,每隔2d专人用游标卡尺精确测量移植瘤的最大长径和短径,至少测量两次取平均值.给药结束后处死裸鼠前,眼球取血,测生化指标和肿瘤标志物,观察各组荷瘤鼠生化指标和肿瘤标志物的变化;通过移植瘤生长抑制试验,组织HE染色,观察各组移植瘤的大体形态、组织形态学的变化;免疫组化法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白PTEN、Beclin 1、LC3的表达变化,Western blot法进一步检验相关蛋白变化.结果 裸鼠处死后,HeLa、SiHa组中生理盐水组、10%乙醇组、GLB低剂量组和高剂量组生化指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);GLB低剂量组和高剂量组的肿瘤标志物较生理盐水组、10%乙醇组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);GLB低剂量组和高剂量组的移植瘤体积均明显小于生理盐水组和10%乙醇组,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色显示:GLB低剂量组和高剂量组移植瘤组织出现凋亡、坏死改变;HeLa和SiHa组心肝脾肺肾均未发现转移瘤细胞;免疫组化法、Western-blot法结果示:GLB低剂量组和高剂量组的肿瘤组织PTEN、Beclin 1及LC3蛋白表达水平较生理盐水组和10%乙醇组明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 GLB对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调PTEN、Beclin 1、LC3的表达,诱导细胞自噬凋亡有关.     

IDO基因转染对裸鼠体内宫颈癌种植瘤生长的影响

 目的 通过建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,研究吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）在裸鼠体内对人宫颈癌细胞的生长促进作用。方法 IDO基因表达质粒和空白质粒分别稳定转染至人宫颈癌SiHa细胞。应用Western blot检测IDO在SiHa、SiHa/Mock 和SiHa/IDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3种肿瘤细胞体外生长速度。种植3种肿瘤细胞至裸鼠皮下,比较其在裸鼠体内的生长速度。结果 IDO蛋白在SiHa/IDO细胞中表达阳性,在SiHa和SiHa/Mock细胞中无表达。3种肿瘤细胞体外生长曲线无统计学差异（P＞0.05）。3周后接种SiHa/IDO细胞的肿瘤与接种SiHa和SiHa/Mock细胞的肿瘤相比生长迅速,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 IDO可作为宫颈癌评价预后的指标之一,也可能是宫颈癌基因治疗潜在的靶点。     

The Effect of RhoC siRNA on the Invasiveness and Proliferation of Human Cervical Cancer Cell Line SiHa Cells

This study investigated the effect of RhoC GTPase on the proliferation and metastasis of cervical cancer cells, SiHa cells, in vitro. RhoC siRNA was introduced into SiHa cells to silence the RhoC gene. The mRNA and protein expression of RhoC, before and after RhoC siRNA transfection, was examined by RT-PCR and Western blotting, respectively. The proliferation and apoptosis of SiHa cells were examined by MTT assay and flow cytometry （FACS）, respectively. Adhesive rate was evaluated by Matrigel adhesive assay, and the invasive capability and migration capability were assessed by transwell invasive assay and migration assay, respectively. The results showed that after the RhoC siRNA transfection, the mRNA and protein expression of RhoC was down-regulated in SiHa cells. The down-regulation of RhoC GTPase did not affect the cell proliferation and apoptosis （P〉0.05）, but it did suppress SiHa cells＇ adhesion to matrigel （P〈0.01）, the invasive capability （P〈0.01） and the migration capability （P〈0.01）. It was concluded that RhoC obviously promotes the adhesion, invasion and migration of SiHa cells in vitro, but not proliferation and apoptosis, suggesting that RhoC plays an important role in the progression in cervical cancer.     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。     

肿瘤间质细胞分泌成纤维生长因子10促进结肠癌细胞侵袭

目的 确定结肠肿瘤间质细胞的旁分泌因子FGF10对肿瘤细胞侵袭的影响。方法 体外分离培养结肠肿瘤间质细胞,ELISA检测其FGF10的表达,并与结肠癌细胞系HCT116和SW480共培养。同时设添加人重组FGF10培养结肠癌细胞系作为试验对照组。Real-time-PCR检测HCT116细胞侵袭相关基因的表达变化。Western blot法检测共培养后结肠癌细胞系中上皮-间质蛋白表达变化。显微镜下计数透过Matrigel包被Transwell膜的细胞数量检测细胞的侵袭能力。结果 结肠肿瘤间质细胞高表达FGF10生长因子。结肠癌细胞系HCT116和SW480与TAFs共培养系统中,HCT116和SW480细胞中Twist、Snail、Slug、ZEB1基因的表达上调,Vimentin蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下降,侵袭能力较正常培养细胞显著增强。同时添加人重组FGF10培养结肠癌细胞系表现出同样的表型变化。结论 肿瘤微环境中肿瘤相关间质细胞分泌的FGF10能够增强结肠肿瘤细胞的侵袭能力。     

Sp1与宫颈癌细胞放射敏感性的关系

目的探讨Sp1 在不同种类宫颈癌细胞系的表达情况及其与宫颈癌放射敏感性的关系。方法通过蛋白免疫印迹 （Western Blot）和实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测不同种类的6种人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski、Me180、Ms751、C33a） 中Sp1的基础表达水平,选择Sp1高表达细胞株和低表达细胞株,利用慢病毒载体进行SP1的沉默及过表达。采用克隆形成实 验检测沉默/过表达稳定株及其对照组经不同剂量X射线照射后的存活情况,曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参 数。结果6种宫颈癌细胞Sp1表达量由高到低依次Me180>Caski>C33a>SiHa>Ms751>HeLa。Western blot证实成功构建稳定 沉默Sp1及过表达Sp1的宫颈癌细胞株。克隆形成实验结果显示,电离辐射作用后,靶向抑制Spl的表达可以使Me180细胞的 存活分数进一步降低,差异有统计学意义（P<0.05）,同时,Me180/shSP1细胞SF2、D0、Dq值较对照组偏低,α/β增高。经X射线作 用后,稳定过表达Sp1（HeLa/SP1）细胞存活分数较对照组高,差异有统计学意义（P<0.05）,HeLa/SP1细胞SF2、D0、Dq较对照组显 著升高,α/β值则显著降低。结论沉默Sp1的表达能够增加宫颈癌细胞的放射敏感性,而过表达Sp1则能增强宫颈癌细胞放疗 抵抗,Sp1在宫颈癌放疗过程中起着重要作用。