低氧诱导因子在缺血再灌注损伤中的作用

缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)是临床上常见的病理生理过程,缺血缺氧是其主要影响因素.低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIF)是一组对细胞缺氧反应性和适应性至关重要的转录因子,缺氧环境下会导致HIF激活,从而提高细胞对机体缺氧的耐受能力.HIF在IRI中的作用已成为当今研究热点,阐明其作用机制,不仅有利于减轻IRI,还可以此为基础进一步探讨HIF在其他病理生理过程的作用.本文对HIF的结构、功能及其在IRI中的具体作用及相关机制进行了综述.     

低氧诱导因子-1α在大鼠脑缺血耐受中的表达

目的 探讨脑缺血耐受中低氧诱导因子-1α（HIF-lα）的表达。方法84只Wistar大鼠随机分成对照组（SS＋SS组,4只）,假手术组（SS＋MCAO组,40只）和缺血预处理组（IP＋MCAO组,40只）。线栓法阻塞大脑中动脉建立缺血预处理模型,分别于预缺血后1、3、7、14、21 d再缺血2 h,然后取脑经苏木精-伊红染色后光镜下进行病理观察,免疫组化方法检测脑组织HIF-1α蛋白的表达。结果 IP＋MCAO组中1、37、d的HIF-1α蛋白表达水平与SS＋MCAO组中相应时间点比较,差异具有显著性（t=2.449～9.898,P〈0.05）。结论 HIF-1α在脑缺血耐受中表达上调,可能是导致脑缺血耐受的分子机制之一。     

一氧化碳在肝脏缺血/再灌注及缺血预处理中的作用探讨

目的 :观察肝脏缺血 /再灌注 (I/R)及缺血预处理 (IPC)之后一氧化碳 (CO)水平的变化 ,初步探讨内源性一氧化碳在此过程中的作用。方法 :制作大鼠肝脏缺血预处理及缺血 /再灌注 (I/R)模型 ,利用分光光度计测定其血浆一氧化碳水平。同时观测有关的肝功能指标 ,包括血浆丙氨酸转移酶 (ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、乳酸脱氢酶 (LDH)及肝脏组织学变化等。结果 :与缺血 /再灌注组相比 ,肝脏缺血预处理组的ALT ,AST及LDH水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,血浆一氧化碳水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,肝脏组织学损害亦较轻。结论 :肝脏缺血预处理之后一氧化碳水平明显上升。内源性一氧化碳可能参与了肝脏缺血预处理的保护作用。     

低氧诱导因子-1α在缺血和缺血/再灌注后大鼠心肌中的免疫组化表达型式

目的观察在心肌缺血和缺血/再灌注时大鼠心肌有无低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其表达的时-空间型式。方法选取220～280 g健康Wistar大鼠48只,随机分为3组:①正常对照组;②单纯缺血组;③缺血/再灌注组。利用免疫组织化学技术检测各组心肌HIF-1α的表达。结果正常对照组大鼠心肌组织未见HIF-1α表达。单纯缺血组大鼠心肌组织在缺血2 h即有HIF-1α的阳性表达,缺血12 h表达面积及强度达到最高,缺血24 h又有所下降。大鼠心肌组织中HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达。在心肌缺血组大鼠心肌中的HIF-1α表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限。缺血/再灌注组大鼠心肌组织在缺血45 min/再灌注1 h后即有HIF-1α表达,再灌注3 h后表达面积达到高峰,再灌注5 h又略有下降。单纯缺血组和缺血/再灌注组大鼠心肌组织的HIF-1α最高表达量差异无统计学意义。缺血/再灌注组大鼠心肌中的HIF-1α表达部位也呈区域性分布。结论心肌缺血或缺血/再灌注后大鼠心肌均有HIF-1α的表达,二者表达的时间过程相似,均在数小时内即达到高峰,且表达量差异无统计学意义;HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达,在心肌组织中的表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限,提示只在缺血部位有表达。     

内源性组胺在小鼠缺血预处理诱导的脑缺血耐受中的作用

目的:利用组氨酸脱羧酶敲除(HDC-KO)小鼠,研究组胺是否参与缺血预处理诱导的脑缺血耐受的形成.方法:分别将野生型(WT)小鼠双侧颈总动脉夹闭(BCCAO)6、10、14 min,再灌注48 h后,再持续BCCAO进行永久性前脑缺血,观察其缺血耐受时间.部分小鼠取脑、冰冻切片、进行甲苯胺蓝染色,观察神经元损伤情况.比较BCCAO 预处理10 min对WT和HDC-KO小鼠永久性前脑缺血耐受时间的影响.测定WT小鼠再灌30 min、5 h、48 h脑内组胺含量.结果:缺血预处理各时间点均可延长WT小鼠在永久性前脑缺血后的存活时间,其中预处理10 min有显著性差异,并且未引起海马和纹状体神经元的损伤.但预处理10 min不能诱导HDC-KO小鼠脑缺血耐受的形成.WT小鼠预处理10 min再灌30min、48 h时脑内组胺含量升高,但再灌5 h时与对照组相比无明显变化.结论:内源性组胺可能参与缺血预处理诱导的脑缺血耐受的形成,其作用机制有待进一步深入研究.     

64例新生儿缺血低氧性脑病的发病情况与临床分析

目的：观察新生儿缺血低氧性脑病的发病情况及临床表现。方法：采用回顾分析的方法,对新生儿缺血低氧性脑病的发病情况进行统计,对患儿的临床表现及住院时情况进行分析。结果：64例HIE中,重度9例,占14.06%;中度21例,占32.81%;轻度34例,占53.13%。结论：对于基层儿科医务工作者,HIE的预防、早期诊断和治疗非常重要。     

64例新生儿缺血低氧性脑病的发病情况与临床分析

目的:观察新生儿缺血低氧性脑病的发病情况及临床表现。方法:采用回顾分析的方法,对新生儿缺血低氧性脑病的发病情况进行统计,对患儿的临床表现及住院时情况进行分析。结果:64例HIE中,重度9例,占14.06%;中度21例,占32.81%;轻度34例,占53.13%。结论:对于基层儿科医务工作者,HIE的预防、早期诊断和治疗非常重要。     

银杏内酯诱导的缺血耐受及相关机制探讨

目的 研究银杏内酯（Gin）预处理诱导PC12细胞对缺血的耐受及相关机制。方法将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12株细胞随机分成对照组、缺血9h组、缺血预处理（IP）1.5h＋缺血9h组和银杏内酯预处理＋缺血9h组,用噻唑蓝比色分析、细胞形态学观察、Western印迹法以及凝胶电泳迁移实验等方法比较银杏内酯预处理对PC12细胞缺血模型的影响。结果在PC12细胞缺血模型中,9h缺血可明显降低PC12细胞活力,细胞存活率为（49．3±2．8）％。而银杏内酯24h预处理能显著提高9h缺血细胞的存活率（65．9±2．8）％（P〈0．01）;细胞形态学显示银杏内酯预处理后再缺血处理9h,可明显减轻缺血9h所致的细胞损害,较多细胞保留突起,突起网络依然存在,胞体完好。与对照组比,银杏内酯预处理能明显增加缺氧诱导因子-1d（HIF-1d）蛋白表达（P〈0．01）;银杏内酯预处理诱导表达的HIF-1具有生物学活性,它能与DNA结合,并激活下游基因促红细胞生成素（EPO）蛋白表达（P〈0．01）。结论银杏内酯预处理可以诱导PC12细胞对缺血的耐受,其诱导耐受的作用可能与银杏内酯预处理诱导PC12细胞HIF-1α稳定表达、提高HIF-1与DNA结合活性以及增加其下游基因EPO蛋白表达有关。     

缺血后处理对缺血/再灌注心肌保护作用的研究

缺血后处理是指在心肌再灌注之前进行数次短暂再灌注/缺血的循环,是近年提出的一种新的减轻缺血/再灌注损伤的方法。它具有同缺血预处理相似的心肌保护效应。后处理的这些保护作用可能和内源性活性物质如腺苷、一氧化氮和阿片肽增多、蛋白激酶的活化、线粒体的ATP敏感性钾通道开放和线粒体通透性转换孔道关闭有关。现就缺血后处理的发现、心肌保护机制和临床应用予以简要综述。     

氧自由基在肠缺血/再灌注损伤中的作用机制

肠缺血/再灌注时会引发大量氧自由基的产生,而氧自由基在肠道中可引起肠道细胞的脂质过氧化、DNA损伤、蛋白质变性、钙超载、信号转导异常、能量代谢障碍、线粒体损伤、细胞凋亡等一系列变化。氧自由基清除剂可缓解氧自由基对肠的损伤。通过对氧自由基在肠缺血/再灌注损伤中的作用机制的了解,医师能够更充分地对肠缺血疾病进行系统性的治疗,提高疾病的治愈率以及患者的生活质量。     

缺氧复氧性心肌细胞损伤过程中钙敏感受体作用探讨

目的观察钙敏感受体（CaSR）在缺氧复氧性大鼠心肌细胞损伤过程中的作用。方法将45份原代培养4d的大鼠心肌细胞按随机数字法分为正常对照组、缺氧／复氧组、钙阻断剂组、CaSR激动剂组和钙耗竭组，各9份。用饱和氮气pH6．8的D—Hands液培养心肌细胞3h，再用含20％新生牛血清的DMEM液培养心肌细胞9h，复制心肌缺氧／复氧模型。测定肌酸激酶（cK）含量。结果不同组CK含量差异有统计学意义（P〈0．01）。缺氧／复氧组、钙阻断剂组及CaSR激动剂组CK含量均高于正常组（均P〈0．05），钙耗竭组与正常组CK含量差异无统计学意义（P〉0．05）；钙阻断剂组、CaSR激动剂组及钙耗竭组的CK含量均低于缺氧／复氧组（均P〈0．01）；CaSR激动剂组的CK含量高于钙阻断剂组和钙耗竭组（均P〈0．05）。结论CaSR参与大鼠缺氧复氧性心肌细胞损伤。     

银杏叶提取物不同剂型对神经元损伤后保护作用的比较研究

目的观察不同制剂工艺生产的两种剂型银杏叶提取物（EGB）对神经元缺氧／复氧损伤的保护作用,探讨EGB在缺血性脑血管疾病中的应用价值,寻求最佳给药途径。方法原代培养新生SD大鼠皮层神经元,建立缺氧／复氧损伤模型。将细胞分为以下6组：正常培养组、缺氧／复氧组、EGB761低剂量组、EGB761高剂量组、EGB1212低剂量组和EGB1212高剂量组。后4组分别在神经损伤前24h给予相应药物处理,采用M丌法测定细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）释放测定检测细胞毒作用,并观察神经元形态变化。结果缺氧／复氧损伤造成神经元细胞形态的改变,表现为轴突断裂、核固缩、细胞水肿。EGB761和EGB1212预处理可减轻神经元形态学改变。EGB761及EGB1212干预均能提高细胞存活率,减少LDH释放。且呈剂量依赖性。同等剂量下EGB1212对神经元的保护作用优于EGB761（P〈0．05）。结论EGB对缺氧／复氧造成的神经元损害有保护作用,新工艺剂型EGB1212比传统剂型EGB761保护作用更为突出。     

细胞间粘附分子在缺血再灌注损伤中的作用和意义

在缺血再灌注（I／R）损伤中,中性粒细胞的聚集和对组织的炎性浸润是加快细胞凋亡和死亡的关键因素,而粘附分子在其滚动、粘附、浸润过程中起着重要的桥梁作用。本文着重探讨细胞间粘附分子（ICAM－1）在I／R中的作用和意义。     

血管内皮细胞缺氧/再给氧后E-选择素的表达研究

目的 检测血管内皮细胞(EC)缺氧／再给氧反应后E—selectin的表达，探讨杭氧化剂PDTC对血管内皮细胞E—selectin转录的抑制作用。方法 以人胚肾血管内皮细胞为材料，建立缺氧／再给氧模型，检测E—selectin的表达；应用PDTC干预EC的缺氧培养过程，观察E—selectin表达的改变。结果 血管内皮细胞缺氧／再给氧反应后E—selectin的表达明显增加，4h到达峰值；PDTC能有效抑制E—selectin的表达。结论 缺氧／再给氧促进EC活化，增强E—selectin的表达，抗氧化剂PDTC能有效降低E—selectin的转录，为缺血再灌注损伤的治疗提供理论基础。     

钙蛋白酶活化在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨钙蛋白酶在小鼠心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法:采用结扎/松解左冠状动脉前降支的方法建立小鼠心肌I/R模型。将实验动物随机分为假手术组、I/R组(冠状动脉结扎45 min,再灌注3h)及PD+I/R组(I/R前30 min静脉注射钙蛋白酶抑制剂-PD150606 1 mg/kg)。再灌注结束后,测定各组心肌梗死面积、细胞色素C含量、caspase-3活性。结果:与I/R组相比,PD150606预处理组心肌梗死区域面积明显减小,且PD150606能明显抑制由I/R引起的细胞色素C含量及caspase-3活性增加。结论:钙蛋白酶活化介导的心肌细胞凋亡在小鼠心肌I/R损伤中发挥了重要的作用。     

卡维地洛对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究卡维地洛对缺氧／复氧损伤心肌细胞的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法新生1-3 d的Sprague-Dawley鼠,原代分离,培养其心肌细胞72 h后,随机分为正常对照组、单纯缺氧／复氧组及卡维地洛 缺氧／复氧组。先将培养板中的心肌细胞缺氧(氧浓度<1％)120 min,再复氧30 min,造成缺氧／复氧损伤模型,测定细胞存活率;抽取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB);并破碎细胞,测定丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果卡维地洛 缺氧／复氧组的细胞培养液中LDH和CK-MB漏出量分别为(32．32±1．46)和(28．33±2．12)U／L,均显著低于缺氧／复氧组[(50．28±1．22)和(42．45±3．22)U／L,P值均<0．05];卡维地洛 缺氧／复氧组的细胞存活率为(70．21±2．12)％,显著高于缺氧／复氧组[(58．39±3．22)%,P<0．05]。卡维地洛 缺氧／复氧组的细胞内MDA含量为(5．32±0．32)nmol／mL,显著低于缺氧／复氧组[(8．32±0．42)nmol／mL,P<0．05];SOD活性为(10．32±0．42)U／mL,显著高于缺氧／复氧组[(7．42±0．20)U／mL,P<0．05]。结论卡维地洛对心肌细胞缺氧／复氧损伤具有保护作用,能清除氧自由基,提高心肌细胞抗氧化能力。     

卡维地洛对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的抗凋亡作用

目的研究卡维地洛对缺氧/复氧损伤心肌细胞的抗凋亡作用,并探讨其可能的作用机制。方法新生1～3 d的SD鼠,原代分离,培养其心肌细胞72 h后随机分成正常对照、单纯缺氧/复氧及卡维地洛 缺氧/复氧组。使培养板中的细胞缺氧(氧浓度<1%)120 mm,复氧30 min,制造缺氧/复氧损伤模型。观察卡维地洛对缺氧/复氧心肌存活率及Bcl-2、Bax蛋白表达情况的影响。结果卡维地洛 缺氧/复氧组心肌细胞存活率为(70.21±2.12)%,显著高于单纯缺氧/复氧组的(58.39±3.22)%(P<0.05);卡维地洛 缺氧/复氧组Bcl-2蛋白表达为(12.22±1.62)%,与单纯缺氧/复氧组(20.32±3.62)%的差异无统计学意义(P>0.05);卡维地洛 缺氧/复氧组Bax蛋白表达为(32.62±4.22)%,显著低于缺氧/复氧组的(40.21±3.22)%(P<0.05);卡维地洛 缺氧/复氧组Bcl-2/Bax比值为0.62,显著高于缺氧/复氧组的0.30(P<0.05)。结论卡维地洛有显著抗缺氧/复氧损伤后心肌细胞凋亡的作用,其作用机制可能与抑制缺氧/复氧损伤的心肌细胞Bax表达,使Bcl-2/Bax比值升高有关。     

独一味抗疲劳与耐缺氧作用的实验研究

目的研究独一味的抗疲劳和耐缺氧作用。方法采用小鼠常温负重游泳和常压缺氧模型,通过比较小鼠的游泳时间和缺氧存活时间,分析独一味的抗疲劳作用和耐缺氧作用。结果 1）独一味醇提取物使小鼠的游泳时间明显延长（与生理盐水组比较,P〈0.05）,作用较独一味水提取物和银杏叶片略佳,但较泼尼松弱。2）独一味醇提取物使小鼠的缺氧存活时间明显延长,与泼尼松组小鼠的存活时间相近（P〉0.05）,而独一味水提取物和银杏叶片的作用与生理盐水无明显差别。结论独一味具有抗疲劳和耐缺氧作用,其醇提取物的作用较好。     

参苓白术散对小鼠耐缺氧及抗运动性疲劳作用研究

目的观察参苓白术散水提物的抗疲劳、耐缺氧作用。方法采用小鼠力竭游泳实验和小鼠常压耐缺氧实验,观察连续14 d灌胃给予参苓白术散水提物对小鼠的抗疲劳和耐缺氧能力的影响,并测定用药后各组小鼠负重游泳时间、耐缺氧时间、体内肝糖原贮备量、运动后血中尿素氮、血乳酸含量。结果参苓白术散水提物40.0、20.0 g/kg剂量均可显著延长小鼠常压耐缺氧时间和负重游泳时间（P〈0.05）,显著降低小鼠血中乳酸及尿素氮含量（P〈0.05）,显著增加小鼠体内肝糖原储备量（P〈0.05）。结论参苓白术散水提物能显著增强小鼠的抗疲劳和耐缺氧能力。     

缺血预处理与心肌缺血/再灌注细胞凋亡及NF-κB表达的关系

目的:研究缺血预处理对心肌缺血/再灌注细胞凋亡及NF-κB表达的影响。方法:健康SD大鼠30只随机分为3组:对照组,缺血/再灌注组,缺血预处理组,每组10只。利用心肌缺血/再灌注模型,采用原位末端标记(TUNEL)法测定凋亡细胞,采用W estern-b lot法测定NF-κB的表达。结果:缺血再灌注组心肌细胞的凋亡百分数和NF-κB的表达均显著增加,与对照组相比有显著差异;而缺血预处理组与缺血/再灌注组相比,其凋亡心肌细胞百分数和NF-κB的表达均显著减少。结论:缺血预处理抑制心肌细胞的凋亡的作用机制与其抑制NF-κB的表达有关。