赤芍不同提取物抗病毒活性研究

目的:研究赤芍不同提取物的抗病毒活性。方法:采用细胞体外抗病毒实验法,结合CPE法及CCK-8试剂盒,以TI值(治疗指数)为研究指标,以利巴韦林为阳性对照药,研究赤芍不同提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇病毒(COX-B5)、手足口病毒(EV71)的抑制作用。结果:甲醇超声提取物具有抗RSV、COX-B5的效果,且抗COX-B5效果较好,对COX-B5的TI值为12.042。结论:赤芍不同提取物具有体外抗RSV、COX-B5的活性。     

真菌提取物JN219抗病毒谱的初步研究

目的：探讨真菌提取物JN219的体外抗病毒谱。方法：采用体外细胞病变法，研究JN219对疱疹病毒科病毒（HCMV、HSV-1、HSV-2）、腺病毒科病毒（Ad3）、副粘病毒科病毒（RSV）、呼肠病毒科病毒（RV SA11）、正粘病毒科病毒（流感甲地方株、流感乙地方株）、小RNA病毒科病毒（COX B1-6）、弹状病毒科病毒（VSV）共15株病毒的抗病毒活性。将JN219与以上病毒作用1h后接种于相应宿主细胞（同时设有病毒对照和细胞对照），当病毒对照病变达到90％以上时终止培养，宿主细胞用1％中性红染色，在450nm处读取吸光度A值，计算细胞存活率、半数中毒浓度（TD₅₀）、半数有效浓度（IC₅₀）和抑毒指数（TI）。并根据TI判断JN219的抗病毒活性，确定其抗病毒谱。结果：JN219对HCMV、RV（SA11）、VSV有抑制作用，其IC50分别为1.42、0.96和1.22μg/ml，TI分别为35.26、52.30、40.82；对HSV-1、HSV-2、RSV、流感病毒甲、流感病毒乙有部分抑制作用；对COX B1-6、腺病毒（Ad3）无作用。结论：JN219抗病毒谱比较广泛。     

木芙蓉叶提取物体外抗RSV作用机制研究

目的:研究木芙蓉叶提取物的体外抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial viruses, RSV)作用机制。方法:以利巴韦林为对照药物,检测木芙蓉叶提取物抗RSV的活性。通过观察木芙蓉叶提取物不同给药方式的抗病毒作用,对木芙蓉叶提取物抗RSV的作用机制进行初探。结果:木芙蓉叶提取物能有效抑制RSV引起的细胞病变,具有显著的抗病毒作用,治疗指数(therapeutic index, TI)为86.24。木芙蓉叶提取物对病毒的直接灭活作用,同时具有预防和治疗的作用。结论:木芙蓉叶提取物在体外具有显著的抗RSV作用,且其抗病毒作用发生在病毒穿入细胞后的阶段。     

空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒作用

[目的] 以空心莲子草有效部位提取物为研究对象, 进一步验证其抗甲型H3N2流感病毒的生物活性, 为其开发应用提供依据。[方法] 以利巴韦林注射液作为空心莲子草有效部位提取物抗病毒实验的阳性对照药物, 观察甲型H3N2流感病毒感染幼犬肾(MDCK)细胞后引起的细胞病变效应(CPE), 通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性, 采用治疗指数(TI)作为药物抗病毒效果的评价指标, 评价空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒的生物活性。 [结果] 空心莲子草有效部位提取物对流感病毒有明显抗病毒生物合成作用, 其TI为(2.43±0.01), 但其阻止流感病毒吸附与直接杀伤流感病毒的作用不明显。[结论] 空心莲子草有效部位提取物有较强的抗流感病毒作用, 其作用方式为抗病毒生物合成, 且呈剂量依赖性。     

硫酸化人参皂苷体外抗新城疫病毒作用

目的 观察硫酸化人参皂苷（sGS）抗新城疫病毒的活性。方法 采用氯磺酸-吡啶法制备sGS,红外光谱仪对sGS结构进行分析,MTT法检测硫酸化修饰前后人参皂苷（GS）预先给药、接种病毒后给药、与病毒同时给药3种不同给药方式的抗新城疫病毒活性。结果 硫酸化修饰后人参皂苷在1 144、807 cm^?1有2个特征吸收峰,表明硫酸基已经和糖链结合成酯。预先给药或病毒接种后给药,加入一定质量浓度范围内的GS和sGS的CEF培养液的 A₅₇₀值均显著大于未给药的病毒组（P＜0.05）,且GS与sGS的抗病毒活性无显著差异（P＞0.05）;GS和sGS与病毒同时给药,两药在一定质量浓度范围内的A₅₇₀值也均显著大于未给药的病毒组（P＜0.05）,且sGS的最大病毒抑制率显著高于GS。结论 GS经硫酸化修饰后可提高其抗新城疫病毒活性,主要表现为提高其直接杀灭病毒的作用。     

五倍子中酚性化学成分及其抗病毒活性

采用硅胶、ODS、Toyopearl HW-40(s)、制备型HPLC等多种色谱技术和波谱学方法,结合物理化学性质,从五倍子的95%乙醇提取物中分离并鉴定了7个化合物,分别为benzoic acid,3,4-dihydroxy-5-［(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxy］-,5-ethoxycarbonyl-2,3-dihydroxyphenyl ester(1)、trigallic acid(2)、1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucose(3)、莽草酸(4)、没食子酸(5)、没食子酸甲酯(6)、没食子酸乙酯(7)。其中,化合物1为新化合物,化合物2为首次从该属植物中分离得到。对五倍子中分离得到的单体化合物进行了体外抗HSV-1、RSV A strain、RSV Long strain病毒活性测试,化合物3表现出显著的抗病毒活性,其IC₅₀分别为13.3,3.3和3.3 mmol/L。     

木芙蓉叶提取物抗病毒作用实验研究

目的:观察木芙蓉叶提取物体内、体外抗病毒的药理作用.方法:通过使用呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)和副流感病毒(HPIVs)致细胞病变的体外感染模型,以治疗指数(TI)为指标,观察木芙蓉叶提取物体外抗病毒作用;通过使用呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠模型,以对小鼠病毒感染肺指数的抑制率为体内抗病毒活性指标,观察木芙蓉叶提取物体内抗病毒作用.结果:体外试验表明,木芙蓉叶提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(Flu A)和副流感病毒(HPIVs)这3种病毒均有不同程度的抑制作用;体内试验表明,木芙蓉叶提取物表现出一定的体内抗病毒活性,在一定浓度范围内,抗病毒活性随剂量的增大而增强.结论:木芙蓉叶提取物具有显著的抗病毒药理活性.     

荔枝核提取物体外抗病毒活性及其机制研究

目的:研究荔枝核提取物(LSE)的体外抗病毒活性,并初步研究其抗病毒的作用机制.方法:采用细胞病变效应(CPE)减少法和MTY法检测LSE对柯萨奇B3病毒(Cox B3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的体外抗病毒活性,并通过观察直接杀病毒作用、对宿主细胞的保护作用、抑制病毒吸附作用以及在病毒感染后不同时间加入实验,对LSE抑制HSV-1的作用机制进行探讨.结果:LSE有一定的细胞毒性,它不能抑制Cox B3在宿主细胞内的增殖,但对RSV、HSV-1和HSV-2表现出明显的浓度依赖性抗病毒活性,其IC<,50>值分别为32.3,27.9和20.4μg/mL.该提取物预培养Vero细胞后不能保护细胞免受HSV-1感染,但它对HSV-1有直接的灭活作用.LSE可影响HSV-1对Vero细胞的吸附,当浓度为31.3μg/mL时对病毒吸附的抑制率为51%.ISE对HSV-1在细胞内的增殖表现出很强的抑制活性.结论:LSE具有较强的体外抗RSV和HSV活性,它对HSV的抑制作用可能通过多种方式和途径实现.     

毛萼香茶菜中黄酮和二萜化合物的分离制备及其抗病毒活性

从毛萼香茶菜中分离制备2种黄酮和2种二萜化合物,并研究其体外抗病毒活性。首先采用硅胶、ODS、制备型HPLC等多种色谱技术和波谱方法,从毛萼香茶菜乙醇提取物中分离制备了4个化合物,分别鉴定为8-羟基蓟黄素(1)、蓟黄素(2)、假细锥甲素(3)、毛萼晶D(4)。然后对毛萼香茶菜乙醇提取物和4个化合物开展了体外抗流感病毒(H1N1,H3N2)和呼吸道合胞病毒(RSV)活性研究。结果显示,毛萼香茶菜乙醇提取物和4个化合物对流感病毒H1N1均有一定的抑制作用,其中化合物1和2的抑制效果较优,半数有效浓度(EC₅₀)分别为(14.45±4.90)和(24.54±3.82)μmol/L。但化合物1和2对H3N2和RSV的抑制作用则相对较弱。以上结果表明,毛萼香茶菜乙醇提取物及化合物1~4有一定的抗病毒作用,尤其是对甲型流感病毒H1N1具有较好的抑制作用,黄酮类化合物可能是其抗病毒作用的有效物质之一,本研究为毛萼香茶菜的临床应用提供了科学依据。     

车前草对呼吸道合胞病毒体外抑制作用的研究

目的：研究车前草醇提液体外对呼吸道合胞病毒（ RSV）的作用。方法采用细胞培养技术,以利巴韦林为对照,通过观察细胞病变效应（CPE）,测定细胞半数中毒浓度（TC50）、药物半数抑制浓度（IC50）和抗病毒指数（ TI）,评判车前草抗RSV作用。结果车前草体外有抗RSV作用,浓度在0．0625～8．0 g／L呈量效关系。车前草的TC50＝4．57 g／L,IC50＝0．285 g／L,TI＝16．04。车前草与利巴韦林抗RSV作用差异无统计学意义（ P＞0．05）,但比利巴韦林毒性小,抗病毒指数大,安全范围大。结论车前草在 Hep－2细胞中对RSV有明显的抑制作用,既能抑制病毒的吸附和增殖,又能直接杀死病毒。     

鸡骨草总黄酮超声提取工艺及含量测定研究

目的 筛选鸡骨草中总黄酮超声提取的最佳工艺,并建立其含量测定方法。方法 以芹菜素-6,8-C-二葡糖苷为指标,采用三乙胺显色-紫外可见分光光度法（TEA-UV-VIS法）测定鸡骨草中总黄酮含量,采用L9 （34）正交试验优选鸡骨草总黄酮提取工艺条件。结果 芹菜素-6,8-C-二葡糖苷线性范围为0.000 507～0.101 4 mg/mL（r=0.999）,平均加样回收率为99.72%（RSD为1.54%）。鸡骨草总黄酮超声提取工艺试验因素影响由大到小依次为超声时间〉乙醇体积分数〉 提取次数〉料液比,超声提取时间对提取率的影响有统计学意义,优选的最佳提取工艺为20倍量的50%（体积分数）乙醇超声提取2次,每次45 min,3次试验鸡骨草总黄酮的平均提取率为4.655 mg/g。结论 TEA-UV法具有良好的专属性和稳定性,适合于鸡骨草中总黄酮的含量测定和评价;优选的总黄酮最佳提取工艺方法稳定可行。     

基于抗病毒活性检测的板蓝根质量生物评价方法及优化研究

目的 建立基于抗病毒活性检测的板蓝根质量生物评价方法并进行优化研究。方法 分别采用红细胞凝集活性检测法和流感病毒神经氨酸酶（NA）活性检测法,建立板蓝根抗病毒活性生物测定方法,并对所建立的两种方法进行对比分析与优选。结果 两种方法可用于对不同样品进行活性检测和区分,结果重复性较好（RSD＝7.0%、5.78%）;Pearson相关性分析表明板蓝根凝集活性与NA抑制活性之间具有显著相关性（P＜0.01,r＝?0.81）,进一步印证了凝集活性测定法与抗病毒药理作用的关联性;在安全性、经济性、简便性和实用性等方面凝集活性检测法优势明显,可作为板蓝根质量生物测定的优选方法。结论 本研究优选凝集活性检测法用于板蓝根质量的生物测定,与抗流感病毒药效相关,提高了其现行质量控制水平,并为中药质量生物测定方法的研究提供参考。     

复方野马追胶囊抗呼吸道合胞病毒研究

目的 观察复方野马追胶囊对呼吸道合胞病毒（RSV）感染及炎性因子IL-8释放的抑制作用。方法 采用细胞病变（CPE）观察和活细胞染色方法,观察复方野马追胶囊对呼吸道合胞病毒感染细胞的保护。同时,通过ELISA法测定培养上清IL-8的变化。结果 复方野马追胶囊对呼吸道合胞病毒感染有抑制作用,其中以治疗法效果最为明显。同时该药对呼吸道合胞病毒感染后引起的IL-8释放也有明显抑制作用。结论 复方野马追胶囊具有明显的体外抗呼吸道合胞病毒感染、降低感染后气道炎症因子释放的作用。     

抗病毒Ⅰ号中药有效部位体外抗呼吸道合胞病毒作用

目的　了解抗病毒Ⅰ号中药有效部位 (AD1)对呼吸道合胞病毒 (RSV)的抑制作用。方法　采用细胞培养技术 ,以病毒唑为阳性对照药 ,比较观察AD1对RSV的抑制作用。结果　AD1的半数中毒浓度 (TC50 )为 2 5 .98mg/ml,抗RSV的半数有效浓度 (EC50 )为 0 .75 8mg/ml,治疗指数 (TI)为 34.2 9,且对RSV抑制作用存在明显的量效反应关系 (P <0 0 1)。感染RSV 2h、6h、12h后加药均可抑制RSV活性 (P <0 .0 1)。结论　AD1在Hela细胞中对RSV有明显抑制作用     

鱼腥草注射液治疗呼吸道合胞病毒感染的体外实验研究

目的探讨鱼腥草注射液体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的有效性。方法采用MTT比色法检测鱼腥草对Hep2单层细胞的毒性作用;以利巴韦林为对照,通过空斑试验和试管观察细胞病变法确定鱼腥草对RSV的抑制作用。结果鱼腥草最大稀释度(1∶10)对细胞无毒性,不影响细胞形态及生长;鱼腥草(1∶10)和利巴韦林(5 mg/L)均可以完全抑制稀释度为10-5(100TCID50)的RSV、半数抑制10-4(1 000 TCID50)的RSV,二者均可使空斑明显变小。结论鱼腥草注射液对RSV有体外抑制作用,对培养细胞无毒性。     

人胶质瘤自杀基因细胞系的建立及其在胶质瘤治疗研究中的应用

目的 构建CD基因工程化人脑胶质瘤细胞并在此基础上进行胶质瘤治疗研究。方法 通过In-fusion基因克隆的方法,构建携带CD基因慢病毒载体;通过293T细胞体外包装获得慢病毒,并测定病毒效价;通过慢病毒体外感染细胞获得CD基因工程化人脑胶质瘤细胞;通过流式分选获得基因稳定表达细胞;通过CCK-8评价加入5-FC前药和(或)HSV-1后细胞存活率。结果 成功构建pLVX-CD-IRES-ZsGreen1慢病毒载体并体外包装获得相应慢病毒;慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后获得携带CD基因的阳性细胞,并通过体外培养30天后流式分选获得稳定阳性细胞;加入前药5-FC和(或)HSV-1后对携带CD基因的U87细胞杀伤作用明显(P<0.01),其中5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞作用更加高效(P<0.01)。结论 成功获得携带CD基因的人脑胶质瘤细胞;前药5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞具有更加高效的杀伤疗效。     

鸡骨草醇提物对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响

目的研究鸡骨草醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的影响。方法复制肝纤维化大鼠模型,随机分成5组:模型组,阳性组(秋水仙碱0.2mg/kg),鸡骨草醇提物低、中、高剂量组(20、40、80mg/kg),并设立正常组。连续灌胃给药30天。检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性以及肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的表达,采用Masson染色观察肝组织纤维化程度。结果与模型组比较,鸡骨草醇提物组显著降低肝纤维化大鼠血清中AST、ALT水平,提高GSH-Px活力(P<0.05),同时减少肝组织中Hyp含量(P<0.05),并减少大鼠肝脏胶原纤维。结论鸡骨草醇提物对CCl4所致的肝纤维化大鼠具有保护作用。