葛根素对腹膜透析液诱导的体外培养人腹膜间皮细胞损伤的保护作用

【目的】了解葛根素对腹膜透析液干预下的体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性及转化生长因子β1（TGF-β1）分泌的影响。【方法】体外培养的人腹膜间皮细胞,分对照组、PDS组、A组（葛根素终浓度为50μg／mL）、B组（葛根素终浓度为100μg／mL）、C组（葛根素终浓度为200μg／mL）五组观察。检测各组上清液中TGF-β1的含量以及间皮细胞的增殖活性并比较。【结果】腹膜间皮细胞在PDS干预下,TGF-β1分泌显著增加,添加葛根素再干预的A、B、C组TGF-β1分泌与PDS组比较有显著下降。与PDS组比较,A、B、c纽间皮细胞增殖活性显著升高。【结论】葛根素可以抑制腹膜间皮细胞TGF-β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用。     

晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的表达

目的探讨晚期氧化蛋白产物（AOPP）诱导体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMCs）对转化生长因子（TGF-β1）表达的影响及内源性活性氧（ROS）在此过程中的调节机制。方法体外制备AOPP-HSA模型，原代培养人腹膜间皮细胞。采用ELISA法检测TGF-β1蛋白水平，采用RT-PCR半定量分析HPYCs中TGF-β1 mRNA的基因表达水平，同时应用流式细胞仪检测细胞内活性氧的水平。结果AOPP-HSA能显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，同时增加细胞内ROS的生成，呈时间与剂量依赖关系（P〈0．01），不同浓度的抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸预处理细胞，可明显地降低细胞内ROS的生成量，同时显著地抑制AOPP-HSA诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，呈剂量依赖关系（P〈0．01），其中维生素E（50μmol／L）组和NAC（10mmol／L）组抑制更加显著。结论体外制备的AOPP可显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，部分可能通过内源性ROS介导细胞内信号转导途径调节此过程，抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸可显著降低细胞ROS的生成量和显著抑制TGF-β1的分泌与基因表达。此研究揭示抗氧化剂在防治腹膜纤维化发生过程也许是一种可行的治疗策略。     

川芎嗪对TNF-α诱导的人腹膜间皮细胞t-PA和PAI-1表达的影响

【目的】探讨川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMCs）在肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）诱导后组织型纤溶酶原激活物（t‐PA）和纤溶酶原激活物抑制因子‐1（PAI‐1）表达的影响。【方法】应用胰蛋白酶消化法分离HPMCs进行原代培养并传代,分为5组（每组设3个样本）：正常对照组（完全培养液）、单纯TNF‐α（1μg／L）诱导组和TNF‐α诱导加低、中、高剂量川芎嗪（10、20和40 mg／L）组。采用半定量反转录聚合酶链反应（RT‐PCR）法检测细胞内t‐PA和PAI‐1 mRNA表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中t‐PA和PAI‐1的蛋白质水平。【结果】与正常组比较,TNF‐α诱导组上清液中 t‐PA的含量减少和PAI‐1含量显著升高,且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．01）;与TNF‐α诱导组比较,低、中、高剂量川芎嗪组上清液中t‐PA的含量增加,PA I‐1的含量显著降低,且两组相比较差异有显著性（ P ＜0．05或 P ＜0．01）。与正常组比较,单纯TNF‐α诱导组 HPMCs t‐PA／β‐actin mRNA 下降（87±5）％和 PAI‐1／β‐actin mRNA 上升（3．63±0．12）倍（ P ＜0．01）;与TNF‐α诱导组相比,低、中、高剂量川芎嗪组t‐PA／β‐actin mRNA表达明显增加（ P＜0．05或 P ＜0．01）和PAI‐1／β‐actin mR‐NA表达明显减少（ P＜0．05,P＜0．01）,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】川芎嗪干预后能促进 HPMCs在炎症状态下t‐PA生成增加并抑制PAI‐1的表达,从而减少纤维化的发生。     

亚临床甲状腺功能减退症对腹膜透析患者容量负荷、贫血的影响及干预研究

【目的】探讨亚临床甲状腺功能减退（SCH）对持续不卧床腹膜透析（CAPD）患者容量负荷及贫血的影响。并观察左旋甲状腺素（LT）的干预作用。【方法】检测30例CAPD合并SCH患者及60例甲状腺功能正常的CAPD患者（B组）的超敏促甲状腺素（TSH）,游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）,游离甲状腺素（FT4）及血红蛋白（Hb）,细胞外液（ECW）,体液总量（TBW）,细胞外液与总体液总量之比（E／T）。将A组中的15例患者进行LT治疗（A1组）4周,观察Hb,容量负荷变化情况,并与未治疗的亚甲减组（A2组）进行比较。【结果】A组容量负荷高于,而Hb则低于B组。且差异有显著性（P〈0．01）。经予LT治疗4周后,A1组ECW减少,Hb上升,与治疗前比较差畀均有显著性（P〈0．01）,较未治疗的A2组差异均有显著性（P〈0．05）,且接近同时期单纯CAPD组患者水平。【结论]SCH可以加重CAPD患者容量负荷及贫血水平。LT干预治疗可以减轻该类患者的容量负荷并改善其贫血状况。     

尿毒症腹膜透析患者血脂变化的临床观察

【目的】观察腹膜透析对尿毒症患者血脂的影响。【方法】尿毒症患者42例，对照组40例，分别在腹膜透析前、透析后检测血脂水平。【结果】尿毒症患者血清胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白A（ApoA）较健康人的血脂水平明显升高（P〈0．05）；透析后患者血清TG、LDL-C、Apo A较透析前明显升高（P〈0．05）。【结论】尿毒症患者透析前存在血脂异常，腹膜透析可能会加重患者的高脂血症。     

黄芪对腹膜透析相关腹膜间皮细胞VEGF分泌和表达的影响

【目的】了解黄芪注射液对体外培养的人腹膜间皮细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌及其mRNA表达的影响。【方法】取择期手术患者的网膜间皮细胞体外培养,第三代细胞用于实验。细胞同步后分五组观察,对照组为加入等量的RPMI1640与完全培养基,PDS组加入等量的PDS与完全培养基;黄芪1组加入等量的含黄芪注射液(10 mg/ml)的PDS与完全培养基;黄芪2组加入等量的含黄芪注射液(20 mg/ml)的PDS与完全培养基;黄芪3组加入等量的含黄芪注射液(40 mg/ml)的PDS与完全培养基。细胞培养24 h后,用ELISA的方法检测细胞上清液中VEGF的含量并比较。用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法检测VEGF mRNA表达情况并比较。【结果】VEGF在对照组的浓度显著低于PDS组[(39.40±11.34)VS(86.64±21.64)ng/mg(P<0.05)]。腹膜间皮细胞经含不同浓度黄芪注射液的PDS干预后,VEGF的分泌与PDS组比较有显著下降,在黄芪1、2、3组分别为(63.98±13.51)ng/mg,(49.76±13.51)ng/mg和(42.38±18.05)ng/mg(均P<0.05)。黄芪2组和3组显著低于黄芪1组(P<0.05)。黄芪3组和2组比较呈下降趋势但无显著差异(P>0.05)。VEGFmRNA表达在PDS组最高,比对照组上升(42.33±11.27)%,显著高于黄芪1,2,3组的(23.81±6.77)%,(14.67±4.32)%和(10.69±5.90)%(P<0.05)。黄芪2组和3组显著低于黄芪1组(P<0.05)。黄芪3组和2组比较呈下降趋势但无显著差异(P>0.05)。【结论】黄芪注射液具有抑制PDS导致的腹膜间皮VEGF过度分泌和表达的作用。     

不同浓度钙对人腹膜间皮细胞影响的实验研究

[目的]观察不同浓度钙对体外培养的人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMCs）及细胞外基质的影响.[方法]采用人腹膜间皮细胞株体外培养,用乳酸脱氢酶（LDH）和四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）评估细胞的活力和增殖能力;采用免疫细胞化学法来检测纤维连接蛋白（FN）的表达.[结果]不同浓度钙均可促进HPMCs增殖（P〈0.01）,而以1.25 mmol/L及1.0 mmol/L钙作用最明显,且呈时间依赖关系.不同浓度钙组与对照组相比均可明显升高LDH水平,其中以1.25 mmol/L钙的LDH水平最低（P〈0.01）,且呈时间依赖关系.2.0 mmol/L和1.75 mmol/L钙可明显上调FN的表达（P〈0.01）.[结论]高钙可明显损伤HPMCs及促进FN合成,其在腹膜纤维化的发生中可能起了一定作用;而浓度为1.25 mmol/L钙可保护腹膜,并在一定程度上有预防腹膜纤维化的作用.     

腹膜透析患者并发脑卒中危险因素的临床分析

目的 探讨腹膜透析患者脑卒中的危险因素.方法 回顾性分析2005年1月至2012年1月深圳市第二人民医院肾内科122例腹膜透析患者的临床资料.将患者分为2组：合并脑卒中的患者（A组,n=17）和无并发脑卒中的患者（B组,n=105）.统计腹膜透析患者脑卒中的发生率.观察并比较2组患者血清C反应蛋白（CRP）水平、同型半胱氨酸浓度、血清尿酸浓度的差异.分析年龄、腹膜透析龄、高血压、糖尿病、同型半胱氨酸浓度、CRP水平、血清尿酸浓度、血清N末端脑钠肽前体（BNP）等指标与腹膜透析患者发生脑卒中的相关性.结果 本组患者共发生脑卒17例,发生率为13.9％,其中男性13例（76.5％）,女性4例（23.5％）.60岁以上患者发生脑卒中者共11例（64.7％）,60及岁以下患者发生脑卒中为6例（35.3％）,A组患者平均年龄63.5±10.7岁,B组患者平均年龄52.7±14.9岁,A组患者年龄大于B组患者年龄,差异有统计学意义（K0.05）.血清CRP水平A组（30.1±21.7mg/1）高于B组（12.1±13.3mg/1）、血同型半胱氨酸浓度A组（19.6±4.8umol/1）高于B组（14.8±6.9umol/1）,差异有统计学意义（P＜0.05）.血清尿酸浓度A组（340.4±71.0umol/l）低于B组（418.4±119.1umol/1）,差异有统计学意义（p=户0.01）.多因素非条件Logistic回归分析显示高血压（P=0.026）,糖尿病（P-0.022）,CRP （P=0.001）,BNP（P=0.045）,血清同型半胱氨酸（P=0.017）均为腹膜透析患者发生脑卒中的危险因素.结论 本组腹膜透析患者脑卒中发生率为13.9％.高血压、糖尿病、高CRP浓度、高同型半胱氨酸浓度均是腹膜透析患者发生脑卒中的独立危险因素.     

盐酸戊乙奎醚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

【目的】探讨盐酸戊乙奎醚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响及作用机制。【方法】通过大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨基酸转移酶（AST）,肝组织匀浆丙二醛（MDA）的变化。观察光镜下肝脏病理形态改变。【结果】经盐酸戊乙奎醚处理的C组血清ALTAST和MDA的浓度明显低于B组（对照组）而高于A组（假手手术组）;C组光镜下肝脏病理形态改变较B组轻微。【结论】盐酸戊乙奎醚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有保护作用。     

慢性肾功能衰竭腹膜透析患者CA125检测的临床意义

【目的】探讨慢性肾功能衰竭腹膜透析患者透出液CA125检测的临床意义。【方法】本院行持续非卧床腹膜透析治疗的慢性肾功能衰竭患者42例,在透析开始前和透析开始后每个月,采用ELISA法检测CA125。采用4h腹膜平衡试验（4hD／PCr）评估腹膜转运功能。【结果】随着透析时间的延长,CA125浓度逐渐下降（F=8．564,P=0．000）;并且CA125与透析时间呈负相关,其相关系数为-0．513（t=4．211,P=0．032）。感染性腹膜炎组CA125水平明显高于同期非感染性腹膜炎组（t=5．704,P=0．000）。但不同的腹膜转运功能,CA125水平没有明显差异（F=1．522,P=0．241）,4hD／PCr和CA125也没有的相关性,相关系数为=0．342（t=0．871,P=0．524）。【结论】CA125在慢性肾功能衰竭腹膜透析患者透出液中的变化,可作为评价腹膜功能、判断腹膜腔感染的重要指标之一。     

TGF-β1对人腹膜间皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

[目的]观察TGF-β1对人腹膜间皮细胞(HPMCs)纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的mRNA和蛋白表达影响并就可能的机制进行探讨。【方法】取健康成年人大网膜进行原代培养,用5ng／ml TGF—β1刺激第三代培养细胞,采用免疫组织化学染色、Western blot、ELISA以及RT—PCR等方法,分别观察PAI-1的mRNA和蛋白表达,纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(COLI)的mRNA和蛋白表达,细胞内磷酸化Smad2／3(p-Smad2／3)的蛋白表达。【结果】刺激组PAI-1的mRNA和蛋白表达与对照组相比均显著增加,其中24h为高峰,48h、72h依次递减;刺激组FN和COLI的mRNA和蛋白表达与对照组比均呈时间依从性显著增加;对照组细胞内几乎不表达p-Smad2／3,阳性细胞率3％,在刺激后15min蛋白表达即开始增加,阳性细胞率29％,1h增加最明显,阳性细胞率达84％,2h明显回落,此时阳性细胞率为37％。[结论]TGF—β1在致腹膜纤维化过程中诱导了HPMCs内PAI-1的转录与蛋白表达,这可能与TGF—β1激活了HPMCs内Smad信号通路有关。     

阿托伐他汀与螺内酯对腹膜纤维化的作用研究

目的探讨腹膜纤维化的药物防治措施。方法50只Wister雄性大鼠随机分成5组,每组10只。A组为对照组,每日腹腔内注入0.9%生理盐水20ml。B、C、D、E组腹腔内每日注入20ml4.25%百特透析液,并于试验第7,14,21,28天分别加入乳酸盐红霉素6.25万IU;C组螺内酯100mg/（Kg·d）灌胃;D组阿托伐他汀20mg/（Kg·d）灌胃;E组两药合用。于第1、第30天测定腹膜透析液中的转化生长因子（TGF-β1）,30天后收集大鼠腹膜作常规病理（HE染色.Masson染色）,行腹膜平衡试验（PET）,免疫组化检测eNOS表达和血管生成情况。结果C、D、E组的腹膜纤维化程度比B组轻（P〈0.05）;TGF-β1）浓度明显下降（P〈0.05）;各组腹膜间皮细胞均有eNOS表达,B、C、D、E组均有新生毛细血管表达,C、D、E组较B组表达下调（P〈0.05）。结论阿托伐他汀及螺内酯能有效的防治腹膜纤维化进程。     

丙氨酰-谷氨酰胺二肽对大鼠创伤性脑损伤后应激性肝损害的干预作用

【目的】探讨丙氨酰-谷氨酰胺二肽（Ala-Gln）对创伤性脑损伤（TBI）大鼠应激性肝损害（HSI）的干预作用。【方法】将60只健康雄性Wister大鼠随机分为假手术对照组（A组）、TBl组（B组）,和Ala-Gin干预组（C组）。C组再分四个亚组分别于致伤后不同时间点3～24h给予Gln干预,各组大鼠均于伤后48h处死取材,检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天门冬氨酸转氨酶（AST）,测定肝组织超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平,观察肝脏组织病理学改变。【结果】B组的ALT、AST较A组明显升高,SOD值明显低于A组,MDA显著高于A组,肝脏组织病理学可见变性、坏死等改变;c组各时点ALT、AST及MDA均较B组显著下降,SOD值明显升高,肝脏组织病理学改变显著改善,且伤后早期干预效果明显。【结论】TBI后可出现肝损伤,应用Ala-Gln对TBI后的肝损伤具有干预作用,且此保护作用可能通过改善肝组织的氧化应激状态完成,并具有显著的时效相关性。     

疝囊套扎在腹腔镜全腹膜外腹股沟疝修补术的临床应用

【目的】总结疝囊套扎在腹腔镜全腹膜外疝修补术（TEP）的临床应用体会和经验。【方法】入住本院的腹股沟斜疝患者114例,其中56例采用腹腔镜全腹膜外疝囊横断后套扎（A组）,58例采用腹腔镜全腹膜外疝囊结扎后横断丝线结扎（B组）。观察两组患者术中出血量、手术时间、住院时间和并发症等指标。【结果】A组手术时间显著短于B组（P〈0．01）,两组术中出血量和术后阴囊血肿比较无统计学意义（P〉0．05）,均无复发病例。【结论】疝囊套扎的TEP操作安全易行,效果好,能减少手术时间,降低手术难度。     

腹膜透析患者残余肾功能对营养状况的影响初步探讨

【目的】初步探讨残余肾功能（RRF）对腹膜透析（PD）患者营养状况的影响。【方法】检测54名PD患者血清营养学指标和以主观综合营养评估法评估患者营养状况变化,以肾脏尿素氮（BUN）与肌酐清除率（CCr）的算术平均值评估患者RRF。【结果】PD患者普遍存在营养不良,发生率为64．8％（35／54）,早期开始透析,RRF较好者,营养不良发生率明显低于RRF较差组（P〈0．01）。PD患者随着透析时间的延长,RRF逐渐下降,但营养恶化组,RRF下降更明显。【结论】PD患者RRF是影响营养状况的重要因素之一。     

临床路径在腹膜透析相关性腹膜炎的应用价值

【目的】探讨临床路径在腹膜透相关性腹膜炎患者治疗中的应用效果。【方法】将在本科住院的2012年7月起至2013年7月启用临床路径的腹膜透析相关性腹膜炎49例患者（试验组）与2011年6月至2012年6月未启用临床路径前的腹膜透析相关性腹膜炎的49患者（对照组）进行研究,观察比较两组患者腹透液培养的阳性率、腹透液转清的时间、住院天数及住院费用及复发情况等方面的差异。【结果】两组患者治疗前临床相关指标相比较无明显差异,试验组腹透液细菌培养阳性率稍高于对照组,但两组相比较差异无显著性（P＞0．05）;试验组腹膜透析液检测好转及恢复正常时间均低于对照组,住院天数和人均住院费用较对照组显著降低,腹膜炎复发显著减少,且两组相比较差异均有显著性（P＜0．05）。【结论】在腹膜透析腹膜炎的治疗中采用临床路径,可促进患者的临床好转、减少了患者的住院天数及住院费用,并能显著减少腹膜炎复发,值得临床推广应用。     

妊娠期高血压疾病与缺钙关系的临床研究

【目的】观察妊娠期高血压疾病(HDCP)与缺钙的关系。【方法】将128例有HDCP高危因素的孕妇随机分为两组(A1组及A2组),自孕20～24周起A1组每日口服迪巧钙咀嚼片2片(每片含碳酸钙750mg),另选择无HDCP高危倾向的正常孕妇70例(B组)。分别观察各组血浆钙离子浓度及HDCP患病率。【结果】A1组每日补钙1500mg后HDCP患病率明显低于未补钙组(A2组)(P<0.05),A1与B组间患病率无统计学差异(P>0.05);补钙组血浆钙离子浓度明显高于未补钙组(P<0.01)。【结论】有HDCP倾向的高危孕妇其血浆钙离子浓度明显降低,补充一定量的钙剂后血浆钙离子浓度可恢复至正常孕妇水平,同时可预防HDCP的发生。     

辛伐他汀对高糖诱导下人腹膜间皮细胞TGF—β1和CTGF表达的影响

【目的】探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。【方法】胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链反应法（Semi—QuantitativeRT—PCR）检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;酶联免疫双抗夹心法（ELISA）检测细胞上清液中TGF—β1和CTGF蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。【结果】辛伐他汀能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF蛋白质水平（TGF—β1,P〈0．05;CTGF,P〈0．01）,并下调其mRNA表达（TGF-β1,P〈0.01;CTGF,P〈0．05）,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】辛伐他汀能抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF的过度表达。     

白藜芦醇诱导白念珠菌凋亡的机制探讨

目的探究白藜芦醇诱导白念珠菌凋亡的机制。方法将不同浓度的白藜芦醇(终浓度0.256、0.128、0.064mg/mL)和作为阳性对照的两性霉素B(AmB,终浓度0.5μg/mL)分别加入指数生长期的白念珠菌悬液,同时设置空白对照组,检测白念珠菌的凋亡率、细胞内活性氧和线粒体膜电位等指标。结果与空白对照组比较,白藜芦醇处理后的白念珠菌凋亡率、活性氧水平明显升高,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论白藜芦醇具有诱导白念珠菌凋亡的作用,这可能与活性氧积累和线粒体损伤相关。     

水盐摄入限制对腹膜透析患者血容量及血压的影响

【目的】探讨限制水盐摄入对腹膜透析患者血容量和血压的影响。【方法】对41例接受连续性不卧床腹膜透析（CAPD）治疗至少3个月的患者,在不增加高渗腹膜透析液的前提下,指导患者限制饮食中水盐摄入。采用自身前后对照的方法,检测并评估水盐限制前后水肿程度、体重、容量负荷、血压、尿量和超滤量等变化。【结果】水盐限制后,患者水肿程度减轻,体重由（61．7±9．1）kg减至（60．6±8．6）kg,收缩压由（137．3±22．9）mmHg降至（133．4±23．6）mmHg,总体液（TBW）、细胞外液（ECW）、细胞内液（ICW）、总液体清除量均有显著降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）;降压药种类（1．5±1．2比1．2±1．1,P=0．054）及透析液总剂量[（7956．4±1183．8）ml。比（7651．3±1313．7）mL,P=0．062]有减少倾向,但未达统计学意义;24h尿量在水盐限制前后无明显改变（P〉0．05）。【结论】单纯限制饮食中水盐摄入可改善容量超负荷状态,并降低血压。限制水盐摄入是CAPD患者控制高血压的重要因素。