Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA 进行基因型分析的研究

目的：探讨采用Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA这一方法的有效性和可靠性。方法：用棉签刮取130例个体口腔颊粘膜脱落细胞，采用Chelex-100法从颊粘膜拭子中提取DNA，采用SSP—PCR及PCR—PFL，P法对其进行检测，观察结果的有效性和可靠性。结果：所有样本中都获得成功。电泳结果显示，PCR扩增及酶切的靶带清晰，无非特异性杂带，扩增结果重复性好。结论：采用Chelex-100法从颊粘膜拭子提取DNA，方法稳定可靠，可以用于基因型检测。     

四种微量石蜡组织DNA提取方法的比较

目的:探讨从微量福尔马林固定石蜡包埋组织(formalinfixation and paraffin embeddedtissues,FFPET)中提取DNA的简单而高效的方法。方法:采用Chelex-100提取法、酚氯仿抽提法、单纯消化法、水煮法4种方法提取组织DNA;应用聚合酶链反应扩增100~500bp长度DNA片段,然后进行电泳分析,1年后重复PCR电泳分析。结果:小于200bp长度DNA片段扩增,Chelex-100提取法、单纯消化法阳性率分别为88.8%、78.8%,明显优于酚氯仿抽提法(15.0%)(P<0.01)及水煮法(21.3%)(P<0.01)。随着扩增长度的增加,PCR扩增效率逐渐降低,Chelex-100提取法PCR反应总阳性率为82.5%,单纯消化法为66.5%,水煮法为13.4%,酚氯仿抽提法为13.4%。1年后重复PCR总阳性率分别为80.1%、31.7%、2.5%、9.2%。结论:Chelex-100提取法方便简单,适用于微量石蜡组织DNA扩增分析;单纯消化法及水煮法在一定条件下适用于微量石蜡组织短片段DNA的扩增。     

用Chelex-100快速提取微量血痕中的DNA

目的 观察用Chelex-100从微量血痕中提取DNA的效果。方法 40份血痕纱布,取血痕3 mm×3mm置于1.5 mL离心管中,采用5％Chelex-100加煮沸法,提取血痕纱布中的DNA。提取液经过紫外分光光法测定,测其A260/280的比值,计算提取液DNA的纯度和浓度;DNA提取液经微型琼脂糖凝胶电泳,检测其DNA电泳带。结果 Chelex-100能快速在1 h之内提取微量血痕中的DNA,其提取液DNA纯度:27.5％样品纯度A260/280比值大于1.6,72.5％样品纯度比值在1.08～1.54之间;提取液DNA浓度:80％样品小于100μg/mL,20％样品在100～166μg/mL之间。微型琼脂糖凝胶电泳未观察到DNA条带。结论 用Chelex-100法有助于快速提取微量血痕中的DNA。     

用差异消化二氧化硅膜纯化技术提取和纯化疑难混合斑DNA效果观察

目的:建立疑难混合斑DNA提取和纯化的新方法.方法:从日常司法鉴定检案中收集现场严重污染的疑难混合斑12份,分别采用差异消化Chelex-100法、差异消化酚/氯仿法和差异消化二氧化硅膜纯化法提取DNA,对D19S253、FGA和CSF1PO 3个STR基因座进行PCR-STR分型.结果:用差异消化Chelex-100法提取模板DNA,12份分型均失败;用差异消化酚/氯仿法提取模板DNA,5份分型成功,1份FGA和CSF1PO基因座分型成功,2份CSF1PO基因座分型成功,4份分型失败;差异消化二氧化硅膜纯化法提取的模板DNA,12份分型均成功.结论:差异消化二氧化硅膜纯化法提取DNA 可有效用于疑难混合斑的个体识别.     

4种提取口腔产黑色素细菌DNA方法的比较

目的 比较4种提取口腔产黑色素细菌中间普氏菌DNA的方法,即酚-氯仿法、溴化十六烷基三甲铵(CTAB)提取法、Chelex-100提取法及试剂盒.方法 分别记录OD260、OD230、OD280及OD340值;聚合酶链反应(PCR)电泳,检测提取DNA的浓度、纯度及对PCR反映体系的影响.结果 试剂盒及CTAB法去除黑色素比较差异无统计学意义(P＞0.05),两者与酚-氯仿及Chelex-100法比较差异有统计学意义(P＜0.05);CTAB法提取DNA的浓度及纯度的效果要优于试剂盒,差异有统计学意义(P＜0.05),PCR电泳条带清晰,无拖带.结论 CTAB法可有效去除黑色素及其他杂质,同时获得较高浓度的DNA样品;黑色素并不溶于氯仿/异戊醇混合液,对PCR反应体系有很大影响.     

两种获取牙龈卟啉单胞菌基因组DNA方法比较

目的：筛选方便、快捷、有效地获取细菌基因组DNA的方法。方法：采用UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒法和Chelex-100法获取患者龈下菌斑DNA，比较作为PCR扩增模板检测牙龈卟啉单胞菌感染位点的检出率差异，并对2种方法进行比较。结果：试剂盒法与Chelex-100法对牙龈卟啉单胞菌的感染位点检出率差异无统计学意义，但Chelex-100法提取DNA更简单、快速。结论：Chelex-100法抽提细菌基因组DNA适用于对大样本牙周炎患者作细菌学检测分析。     

Chelex-100法提取真核表达质粒pcDNA3-HERG的应用体会

目的探讨Chelex-100法提取先天性长QT综合征相关人类真核表达质粒pcDNA3-HERG的可行性。方法分别用Chelex-100法和碱裂解法提取pcDNA3-HERG质粒,将环状质性DNA酶切为线性,0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测质粒提取的有效性。结果用Chelex-100法和碱裂解法提取的pcDNA3-HERG质粒的OD(A260/A280)比较差异无统计学意义[分别为(1.8±0.6),(1.9±0.4),P0.05],经0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测均有特定的清晰条带。结论两种方法均能提取纯度较高的大肠杆菌质粒DNA,Chelex-100法简便、省时,值得推广。     

用多聚酶链反应和免疫组织化学方法评估HHV-8/KSHV在卡波济肉瘤发生中的作用

人类γ疱疹病毒8(H H V-8)被首次报道在AID S相关的卡波济肉瘤(K S)肿瘤标本检测到。该研究中,作者作了AID S相关K S(AK S)和地方性KS(EKS)的石蜡包埋活检标本中H H V-8的比较研究,检测方法用聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学。D NA提取采用Chelex-100或Q ia-基因试剂盒,用半定量PCR分析。PCR检测H H V-8中,用Chelex-100法提取的D NA比Qia-gene法提取的敏感。PCR敏感度的阈值用系列D NA稀释倍数定为5个质粒OR F-26区域,25个体腔淋巴瘤-1细胞的DNA水平。以病毒载量/肌动蛋白单位表示,结果表明H H V-8水平在晚期(结…     

高温处置后人体组织DNA提取研究

目的：研究高温后人体组织DNA的提取方法对DNA-STR分型的影响。方法：用不同浓度TritonX-100处理高温后的人体组织样本,采用Chelex-100提取DNA的方法,经DNA-STR复合扩增,用ABI-3130序列分析仪电泳分离并运用Gene mapper ID V3.2基因分析软件对基因进行分型。结果：用1% TritonX-100+Chelex-100处理样本后提取DNA,再经QIA quick PCR纯化后可检出全部基因座且基因座能较平衡地扩增。结论：该方法简便易行,实验效果好,是法科学领域中一种值得推荐的方法,尤其适合检案。     

几种单头螨线粒体基因组提取方法的比较

目的:比较几种单头螨线粒体基因组提取方法。方法:参考文献的方法,分别用酚氯仿抽提法、Chelex-100抽提法和蛋白酶K法提取单头螨的总DNA,用COⅠ引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,比较不同抽提方法的结果。结果:酚氯仿抽提法未能扩增出目的基因,而Chelex-100抽提法和蛋白酶K法均成功扩增出了目的基因。结论:Chelex-100抽提法和蛋白酶K法均可用于单头螨线粒体基因的提取,前者获得的模板量大于后者,但是提取效率小于后者。     

胎儿细胞进入孕妇血循环的实验研究

目的 从胎盘组织中寻找胎儿细胞穿越胎盘屏障，进入孕妇外周血的实验室证据，为利用孕妇外周血进行无创性产前基因诊断提供实验依据。方法 分娩胎盘组织22份(男婴的12份，女婴的10份)，平行切片，分2组：一组HE染色，光镜观察绒毛中胎儿细胞的分布；另一组用Dig-碱性磷酸酶标记SRY区域(Sex determlining region)基因扩增片断制成探针，通过原位杂交鉴定胎盘绒毛内，特别是绒毛间隙胎儿细胞的存在。阳性对照由男性外周血有核细胞涂片经原位杂交提供。结果 HE染色光镜观察：22例胎盘组织切片可见胎儿细胞有穿越绒毛毛细血管内皮和滋养层基膜的现象。胎盘组织原位杂交结果显示：分娩男婴的12份胎盘切片的绒毛毛细血管腔内、绒毛滋养层基膜边缘，以及绒毛间隙，可见阳性信号；分娩女婴的10份胎盘切片均无阳性信号出现；阳性对照涂片杂交后可见清晰阳性信号。结论 胎盘组织切片常规HE染色观察胎儿细胞分布，结合原位杂交技术鉴定绒毛内、绒毛间隙细胞的性质，可以初步反映胎儿微量遗传物质穿越胎盘进入母亲血液循环的过程。     

腐败及角化组织的DNA提取及mtDNA(CA)n重复子分型

目的建立腐败及角化组织的mtDNA（CA）n重复子分型方法。方法收集腐败肌肉、指（趾）甲及毛干各10份,采用Chelex-100法、含有DTT的Chelex-100处理法及PCR缓冲液处理法三种方法提取DNA。经PCR扩增,PAG电泳分离、银染技术进行mtDNA（CA）n重复子分型。结果10份腐败肌肉用3种方法提取DNA均获得分型成功;10份指（趾）甲及毛干,用Chelex-100法提取DNA,只有1份指甲分型成功,用含有DTT的Chelex—100处理法及PCR缓冲液处理法提取DNA均获得分型成功。结论用本文建立的方法提取DNA适用于腐败及角化组织的mtDNA（CA）n重复子分型检验,在法医学上具有一定的应用价值。     

脐动脉S／D值联合胎心监护在胎儿脐带缠绕预后的临床价值

目的探讨胎儿脐血流监测与胎心监护在预测胎儿脐带缠绕妊娠结局的临床价值。方法孕晚期B超诊断为胎儿脐带绕颈的孕妇452例行胎心监护、脐血流S／D值测定,并记录分娩方式、产时羊水情况及新生儿Apgar评分。结果胎监异常同时脐血流S／D比值〉3在羊水过少发生率、胎盘功能低下发生率、胎儿窘迫发生率、羊水污染发生率、剖宫产率、新生儿窒息率均明显高于胎监及S／D比值正常的孕妇。结论对胎儿脐带缠绕孕妇联合应用胎心监护与脐血流测定,可减少新生儿窒息,改善围产儿预后具有积极的临床意义。     

妊高征母胎界面血管紧张素Ⅱ水平测定及意义

目的 检测血管紧张素(ANG)Ⅱ在妊高征(PIH)及正常孕妇母血、脐带血以及胎盘母面和子面的水平,探讨PIH发病因素及胎儿宫内生长迟缓(IUGR)的发生机制.方法 选取PIH和正常孕妇各30例,以ELISA法检测母血、脐带血、胎盘母面及子面组织中ANGⅡ的含量,对两样本进行t检验和Pearson相关分析.结果 妊高征和正常孕母外周血ANGⅡ含量分别为(46.44±8.48)pg/ml、(32.43±5.87)pg/ml,两者差异显著(P＜0.001);妊高征和正常孕母脐带血ANGⅡ含量分别为(68.83±8.68)pg/ml、(72.47±8.51)pg/ml,两者无统计学差异(P＞0.05);妊高征和正常孕母胎盘母面ANGⅡ含量分别为(8.51±4.01)pg/ml、(7.76±3.47)pg/ml,两者无统计学差异(P＞0.05);妊高征和正常胎盘子面ANGⅡ含量分别为(11.82±3.92)pg/ml、(9.64±2.63)pg/ml,两者差别显著(P＜0.05);妊高征脐带血ANGⅡ水平与母亲外周血ANGⅡ水平相关系数为0.7379,P＜0.05.结论 妊高征患者外周血及胎盘子面ANGⅡ水平升高,其脐带血中的ANGⅡ水平与母血的ANGⅡ水平正相关.     

外周血基因组DNA提取方法比较

目的建立快速经济有效提取微量外周血基因组DNA的方法。方法采用酚/氯仿提取法、NaCL沉淀法和试剂盒法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因片段的扩增及鉴定。结果酚/氯仿法和试剂盒法提取的DNA量大,需血量少,用于PCR扩增结果稳定。结论酚/氯仿提取外周血DNA稳定、高效、经济,可用于批量临床标本的制备。     

用改良的盐洗法与酚-氯仿法提取基因组DNA效果比较

目的:探索更为安全可靠的基因组DNA提取方法.方法:采用改良盐洗法提取人外周血白细胞基因组DNA,与传统的酚-氯仿抽提法在提取效果、DNA纯度等方面加以比较.结果:通过对15份不同静脉血标本与酚-氯仿抽提法同步对比研究显示:改良盐洗法提取模板DNA无污染、无害,所提DNA质量好、纯度高,达到酚-氯仿抽提法所获DNA的水平;操作简单、快速,方法稳定可靠,无一例失败.结论:该方法提取的DNA可用于实验以及临床上DNA分型等研究.     

多普勒超声检查脐动脉频谱S／D值的临床应用

目的：研究胎盘血管阻力、胎盘功能以预示胎儿健康状况。方法：对脐带的三个部位,即胎盘附着点（Ｐ）、脐带游离部（Ｍ）及胎儿脐轮部（Ａ）,作多普勒检查,测量脐动脉血流频谱中收缩期血流速度峰值（Ｓ）、舒张期血流速度最低值（Ｄ）,并计算Ｓ／Ｄ值。结果：正常孕妇组的三点Ｓ／Ｄ值不同,Ａ点最高,Ｐ点最低。３２例妊娠高血压综合征者的Ｓ／Ｄ值,均较正常妊娠者明显升高。３０例脐带绕颈胎儿绕颈部位脐带Ｓ／Ｄ值近似于Ｍ点的测量值。结论：观察Ｓ／Ｄ值可以对高危胎儿进行有效的监护     

米非司酮对中期引产胎盘血管及循环的影响

目的 :了解米非司酮对中期引产胎盘血管的影响 ,探讨药物作用的机制。方法 :将 70例宫内孕 16周～2 0周的孕妇 ,随机分组 : 组 (试验组 ) 1d～ 3d服米非司酮共 30 0 m g,用药前、后各用彩超进行脐血流 S/ D、阻力指数(RI)值测定 ,第 4天服用米索前列醇 ; 组 (对照组 )水囊引产。两组均于分娩后取胎盘标本进行免疫组化分析 ,采用第 因子相关抗原 (F RAg)单克隆抗体 ,链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶 (SP)免疫组化染色法 ,计算绒毛微血管密度(MVD)。统计学处理用 SAS软件进行 t检验。结果 :与 组比较 , 组绒毛间质 MVD下降、内皮细胞着色浅淡。用药后脐血流 S/ D值、RI值升高 ,经统计学处理差异有显著性。结论 :米非司酮对绒毛间质微血管 ,脐血流 ,产生了较明显的影响     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

不同吸入氧浓度对剖宫产时产妇和新生儿的影响

【目的】探讨剖宫产术中不同吸入氧浓度对产妇和新生儿的影响。【方法】 选择30例在腰麻下行剖宫产术的单胎足月初产妇,按随机对照的原则分为3组(n = 10)。Ⅰ组(吸空气),Ⅱ组(吸体积分数为30%O2),Ⅲ组(吸体积分数比为50% O2),术中监测并记录血压、心率、血氧饱和度的变化。比较3组新生儿1min及5min的Apgar评分,脐带血血清S100B浓度、乳酸值、血气的变化,取胎盘组织进行免疫组化、染色,利用体视学的方法对绒毛微血管体视学进行研究。 【结果】 3组患者心率,收缩压,血氧饱和度组间比较皆无统计学差异(P > 0.05);3组新生儿1 min及5 min的Apgar评分、脐动脉血pH、PaCO2、PaO2、Hct、Hb、脐带血血清S100B浓度比较差异皆无统计学意义(P > 0.05);Ⅲ组脐血乳酸值与Ⅰ、Ⅱ组相比显著降低,差异有统计学意义(P < 0.05);3组胎盘绒毛微血管的长度密度差异无统计学意义(P > 0.05),但胎盘绒毛微血管体积密度Ⅲ组与Ⅰ、Ⅱ组相比显著增加,差异有统计学意义(P < 0.05)。【结论】 在腰麻下行剖宫产术中,围术期吸体积分数为30%和50%的氧组与空气组相比都能增加产妇及新生儿的氧含量,从而证明了产妇吸氧的必要性,通过3组乳酸值和胎盘体积密度的比较,围术期吸体积分数比为50%的氧浓度略优于吸30%的氧浓度,但是考虑到有氧自由基的损伤,故推荐围术期吸入30%的氧浓度。