受体作用蛋白在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡耐受中的作用

目的 观察受体作用蛋白(RIP)基因的表达变化在肝癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡耐受中的作用.方法 以肝癌细胞HepG2、Hep3B为研究对象,制备RIP siRNA的细胞模型,应用流式细胞仪分析两种细胞模型对TRAIL作用后细胞周期的变化,Western blot检测其在RIP基因沉默前后凋亡信号传导蛋白Caspase-8、Caspase-3、DFF-45的表达变化.结果 转染RIP siRNA后,细胞恢复了对TRAIL诱导凋亡的敏感性,当TRAIL浓度为100 μg/L时,HepG2及Hep3B转染组的细胞生存率为(60.02±5.23)％和(50.78±3.76)％,显著低于对照组的(96.44±5.43)％和(101.85±6.41)％(P＜0.01);细胞生存周期SubG1期为(76.89±6.68)％和(72.45±7.31)％,显著高于对照组的(0.78±0.07)％和(3.62±0.38)％(P＜0.01).转染组TRAIL单独作用,可以引起HepG2 siRNA及Hep3B siRNA凋亡传导通路上传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解.结论 肝癌细胞对TRAI诱导凋亡的耐受可能与其传导通路上RIP蛋白的表达相关,抑制其表达可以导致凋亡传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解,促使凋亡的发生,恢复肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用。方法 10μg/L-100μg/L的TRAIL处理培养的PC-3M细胞4～24h后，采用Annexin-V荧光染色、透射电镜、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡；流式细胞术和MTT比色检测凋亡率、细胞生长抑制率与TRAIL的时间、浓度依赖关系。结果10μg/L～100μg/L TRAIL作用4～24h，肿瘤细胞出现典型的凋亡形态学改变，随着TRAIL浓度的增加或药物作用时间的延长，肿瘤细胞凋亡率也增加，为13．8％～79．6％，同时细胞生长抑制率出现明显增加，药物作用8h为7．5％～37．9％，12h为16．7％～87．9％，24h为39．7％～97．6％。结论 TRAIL能够迅速和显著地诱导PC-3M细胞凋亡，可能成为晚期前列腺癌治疗的新方法。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导结肠癌细胞凋亡的机制

目的探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌细胞发生凋亡的机制。方法流式细胞仪技术、酶联免疫吸附技术、荧光显色技术检测500μg／L TRAIL和／或Caspase抑制剂Z-VAD．fmk处理后,结肠癌细胞SW1116在不同时点(0、2、4、6、24 h)凋亡情况、Caspase-3酶活性及4 h线粒体△ψm、cardiolipin、细胞ROS变化。结果 TRAIL可引起结肠癌细胞凋亡,并于 4 h达凋亡高峰,凋亡指数为32．98％;并出现线粒体△ψm下降、cardiolipin丢失增加及Caspase-3酶活性增加,4 h达到最大峰值为(37．56±2．572)μmol／L·hr-1·mg-1蛋白。但TRAIL所诱导的细胞凋亡作用可被Caspase抑制剂Z-VAD．fmk所抑制。同时证实TRAIL所诱导的结肠癌细胞凋亡与细胞氧自由ROS的生成无关。结论 TRAIL通过Caspase依赖方式引起线粒体△ψm下降、cardi- olipin丢失增加导致线粒体内膜损伤,从而诱导细胞发生凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体介导脓毒症免疫抑制的研究进展

背景 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis induced ligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族成员之一,其与受体DR4/DR5结合可以诱导肿瘤细胞的凋亡,而备受关注. 目的 总结TRAIL通路在脓毒症中的可能机制,探讨其在脓毒症疾病过程中的调控作用. 内容 脓毒症动物模型的研究发现,TRAIL可以加快活化的中性粒细胞发生凋亡并参与脓毒症免疫耐受的形成. 趋势 TRAIL受体在肿瘤、自身免疫性疾病、感染、心血管疾病、器官移植等领域的研究越来越多,作用机制也在不断地阐明.TRAIL及其受体在脓毒症疾病过程中发挥重要调节作用.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体对肝细胞肝癌的抑制作用

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAIL)对肝细胞肝癌的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白融合TRAIL质粒,转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞后,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测 TRAIL的表达,采用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;体内实验建立裸鼠肝癌皮下模型,pIRES-EGFP-TRAIL直接瘤体注射,并观察TRAIL的抑癌作用。结果 真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后,RT-PCR和 Western blot证实了肝癌细胞中有 TRAIL的表达,但对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射 pIRES-EGFP-TRAIL 2周,RT-PCR证实瘤体有 TRAIL mRNA强表达,癌旁组织 TRAIL mRNA呈弱表达,正常肝无 TRAIL mRNA表达,但两组间肿瘤大小差异无显著性(P>0.05)。结论 肝细胞肝癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象,提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素,单一的TRAIL治疗HCC疗效有限。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是能够较特异性诱导肿瘤细胞凋亡的肿瘤坏死因子超家族成员 ,由于对正常组织不表现毒性[1] ,在肿瘤治疗方面得到广泛研究。我们对TRAIL诱导膀胱癌细胞EJ凋亡的作用进行了研究 ,现报告如下。材料与方法　重组人TRAIL(rhTRAIL)由KamiyaBiomedical公司制备和纯化 ,浓度设置为 10 0、5 0、2 0和 10ng/ml。Annexin V FluosStainingKit试剂盒购自罗氏公司。人膀胱癌EJ细胞用含 10 %小牛血清 ,10 0U/ml青霉素和10 0 μg/ml链霉素的RPMI 16 4 0 37℃、5 0ml/LCO2 、饱和湿度下培养。细胞按 5× …     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导膀胱癌细胞凋亡的效应。方法 10～100μg／L梯度浓度的TRAIL与培养的EJ细胞共孵育4～24h。采用Annexin V染色，DNA云梯实验和流式细胞技术检测诱导后EJ细胞凋亡发生的时期和程度。结果 TRAIL诱导4h即后可观察到早期细胞凋亡发生，8h后即可检测DNA片段化，24h后凋亡细胞最多达到66．29％。结论 TRAIL能够迅速诱导EJ细胞凋亡，可能成为膀胱癌治疗的新方法。     

白细胞介素12通过抑制survivin表达加强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肝细胞癌(HCC)的治疗作用,以及TRAIL耐药的可能机制和逆转耐药方案。方法 采用原位杂交方法观察HCC与正常肝组织中TRAIL的表达差异。采用不同浓度的sTRAIL(可溶性)处理HCC细胞株及真核表达质粒pIRES-EGFP-sTRAIL转染HCC细胞株,观察sTRAIL的抑癌疗效。建立裸鼠肝癌模型,观察sTRAIL的体内抑癌作用。进一步,检测HCC中survivin的表达并采用反义寡核苷酸封闭治疗。最后,观测sTRAIL和IL-12联合抗癌效果。结果 肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织DR表达量。60例肝癌组织中54例不表达诱捕受体DcRl,25例不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。两种．HCC细胞株中DcR1表达缺失。经sTRAIL(100ng/ml)处理24h,HCC细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上。体外pIRES-EGFP-sTRAIL转染对肝癌细胞杀伤作用不敏感。体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-sTRAIL可对裸鼠肝癌无明显抑制作用。HCC高表达survivin,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12使survivin表达明显下调,显著加强TRAIL对HCC细胞的杀伤作用。结论 HCC对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象。survivin参与HCC对TRAIL的耐药机制,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12可通过抑制siurvivin表达增强TRAIL对HCC杀癌作用。联合基因治疗(如TRAIL和IL-12基因)可能成为一种有前途HCC治疗方案。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体在前列腺癌治疗中的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来研究发现的肿瘤坏死因子超家族新成员,其广泛存在于人体组织中,参与机体免疫调节、免疫自稳和免疫监视。TRAIL受体表达于多种细胞表面。研究表明,TRAIL能够诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无明显不不良反应,TRAIL良好的抗肿瘤活性和安全性得到了广泛的认识。前列腺癌的发生发展受细胞凋亡机制调控,TRAIL能诱导前列腺癌细胞凋亡,在前列腺癌的治疗中具有广阔前景。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与胰腺癌及相关药物研究

自肿瘤坏死因子家族的新成员肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体被发现以来,它一直是近些年来在肿瘤研究方面的热点.本文综述了近些年肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在胰腺癌方面的相关研究进展,从肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胰腺癌肿瘤细胞凋亡机制人手,简要介绍胰腺癌对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药机制.并根据目前已认同的耐药机制...     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体与抗肿瘤治疗

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ ,ＴＲＡＩＬ)是近几年发现的肿瘤坏死因子 (ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ)超家族成员 ,为Ⅱ型跨膜蛋白 ,能与其受体 (ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＴＲＡＩＬＲ)结合 ,启动细胞内的信号转导 ,激活半胱—天冬氨酸蛋白酶 (ｃｙｓｔｅｉｎｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｓｐａｒａｔｅｓｐｅｃｉ…     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合阿霉素治疗骨肉瘤

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与阿霉素（ADM）联用对骨肉瘤细胞株HOS是否具有协同杀伤作用，并对其机制进行初步研究。方法 MTT法检测细胞的抑制率和存活率，流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TRAIL受体（receptor，R）的表达水平。结果 单用0．5mg／LTRAIL及1．0、10．0、100．0mg／LADM对HOS8603的抑制率分别为13．18％、5．56％、23．02％和76．72％，联合用药的抑制率分别为42．98％、53．12％、81．91％。0．5mg／LTRAIL和1．0mg／LADM有协同作用．TRAIL和ADM联用时TRAIL R2 mRNA表达较TRAIL单用时明显增强。结论 TRAIL与ADM联用对骨肉瘤细胞有明显的协同作用，其机制可能与ADM上调TRAILR2的表达有关。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体mRNA在肝癌中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体的4种受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在肝细胞癌肝组织中的表达状况。方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测40例人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织、23例正常人肝组织中DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA表达率及表达水平。结果 （1）40例肝癌组织、癌旁组织、23例正常肝组织DR4、DR5的mRNA的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）40例癌旁组织、23例正常肝组织DcR1、DcR2表达水平明显高于40例肝癌组织（P〈0．05）；（3）DR4和DR5mRNA在肝细胞癌组织中表达水平与患者的年龄，肿瘤大小，有无包膜，分级程度，AFP水平，HBsAg，有无肝硬化有关系。结论 肝癌组织中存在TRAIL受体的表达，与其在正常肝组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）；DR4、DR5表达水平与肝癌的病理状况有关系。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体治疗肝细胞癌的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与其受体在肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达及意义,及利用TRAIL对HCC的治疗作用。方法采用免疫组化技术及原位杂交方法分别检测了100例肝癌组织,100例癌旁组织,40例正常肝组织中TRAIL及TRAILR的表达,并结合临床资料进行分析;采用不同浓度TRAIL处理肝癌细胞株HepG2、SMMC7721,观察经药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。结果TRAIL在正常肝组织中无表达,癌旁组织中的表达明显高于癌组织。86例肝癌组织不表达诱捕受体DcR1(86%),55例肝癌组织不表达诱捕受体DcR2(55%),40例正常肝组织两种诱捕受体均有表达。肝癌组织中死亡受体为高表达,诱捕受体为低表达,正常肝组织则相反,两者间有显著差异性(P<0.05)。肝癌组织中死亡受体的表达与肿瘤的分化呈正相关(P<0.01),与肿瘤分级呈负相关(P<0.05),与病人的性别、年龄、AFP水平、肿瘤的大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10%,而Jurkat细胞凋亡率达70%以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50%。结论HCC时,TRAILR普遍表达,但存在受体类型的表达差异,其中DcR1大多缺失,这为利用TRAIL治疗HCC提供了理论依据,然而,单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对结肠癌细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的影响。方法HCT-116细胞经10μg／L和100μg／L重组人类TRAIL蛋白处理后,应用荧光实时定量PCR和试剂盒测定凋亡相关基因（Bcl-2、Bad、caspase-3和-8）和炎性反应相关基因（TNF—α,IL-1β,COX-2）的表达水平。结果经10μg几和100μg／L重组人类TRAIL蛋白孵育处理24h后．HCT-116细胞的凋亡率分别为27．4％和45．9％。同时抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bad以及凋亡指示基因caspase-3和caspase-8的表达均显著上调。且100μg／L组的上调幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。TRAIL蛋白处理后,炎性反应相关基因TNF-α,IL-1β,COX-2的表达亦显著上升．且100μg／L处理组的上升幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。结论TRAIL重组蛋白能够诱导结肠癌细胞凋亡以及炎性反应的发生。     

线粒体途径在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导结肠癌细胞凋亡中的调节作用

目的探讨线粒体途径在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌细胞凋亡过程中的调节作用,为临床合理用药提供理论指导。方法采用流式细胞仪技术、荧光显色技术和Western印迹技术检测TRAIL处理结肠癌细胞SW1116后,在不同时间细胞凋亡情况、线粒体完整性改变(ΔΨm、cardiolipin情况)以及线粒体下游通路细胞色素C和Caspase-9的表达情况。结果TRAIL诱发结肠癌细胞凋亡,于4 h达凋亡高峰,凋亡指数为32．98%；在4 h出现线粒体ΔΨm下降和cardiolipin丢失增加,造成其内膜损伤；细胞色素C表达及Caspase-9酶活性随时间的延长而增加,24 h酶活性达到最大峰值为(48．12±2．21)μmol·L~(-1)·h~(-1)·mg~(-1)蛋白。TRAIL诱导的线粒体损伤可被Caspase抑制剂Z-VAD．fmk所抑制。结论线粒体途径参与TRAIL诱导结肠癌细胞的凋亡过程,以Caspase依赖方式引发线粒体ΔΨm和cardiolipin丢失,造成内膜损伤,导致细胞色素C释放和Caspase-9激活,诱发凋亡。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因在糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡中的表达及其作用。方法 应用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，采用原位末端标记法和流式细胞术检测4组(对照组、糖尿病4周组、8周组和12周组)大鼠肾脏细胞凋亡情况；免疫组化和流式细胞术检测肾脏TRAIL基因及其死亡受体DR4、DR5的蛋白表达。结果 与正常对照组相比．各糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多，TRAIL、DR4、DR5的表达亦显著增强。结论 在高糖环境的诱导下．TRAIL基因及其死亡受体出现的高表达，可能部分参与了糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体在肝癌组织中的表达的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (tumornecrosisfactorrelatedapopto sis inducingligand,TRAIL)是近来发 现的TNF超家族成员,为II型跨膜蛋 白,与其受体(TRAILR)结合并启动细 胞内的信号传导,在体外强烈诱导多种 肿瘤细胞凋亡,而正常细胞对其不敏 感,TRAIL的这一特性引起了学者的 高度重视,认为有望找到一种新的肿瘤 治疗方法。本文通过研究TRAIL及其 受体在肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨 TRAIL用于治疗HCC的潜在可能性。 1.材料和方法:(1)肝癌组织:50 例肝细胞肝癌组织选自同济医院肝脏 外科中心手术切除标本,全部标本…     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体治疗肿瘤存在的问题及策略

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近几年发现的TNF超家族成员 ,为Ⅱ型跨膜蛋白 ,能与其受体(TRAILR)结合 ,启动细胞内的信号转导 ,激活Caspase级联反应诱导细胞凋亡。这种新发现的凋亡诱导途径有重要的生物学意义 ,尤其是在抗肿瘤方面具有选择性杀伤肿瘤细胞同时赦免正常细胞的作用 ,因而引起了人们的高度重视 ,认为有望找到一个全新的肿瘤治疗方法。然而 ,随着对TRAIL研究的深入 ,TRAIL治疗肿瘤可能存在的障碍不断出现 ,人们对TRAIL能否成为一个理想的抗癌新药提出质疑 ,现从TRAIL治疗肿瘤可能存在的问题作一综述 ,并…