内质网应激分子在慢性氟中毒大鼠成釉细胞中的表达

目的 研究不同浓度的氟化物对大鼠成釉细胞内质网应激分子表达的作用,探讨氟牙症形成的机制.方法 选择30只Wistar大鼠,随机分成A、B、C3组,并分别饮用氟浓度为0、75、150mg/L的自来水,8周后处死动物,并制备下颌切牙切片,通过HE染色、免疫组化、透射电镜、TUNEL检测等实验方法,观察3组大鼠成釉细胞内质网应激分子的表达及细胞凋亡情况.结果 随着氟浓度的升高,内质网应激分子GRP78 A组为阳性表达,B、C组为强阳性表达（F=27.42,P＜0.05）;XBP-1 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=139.7,P＜0.05）;Caspase-12 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=43.91,P＜0.05）;CHOP A组为阴性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=19.61,P＜0.05）;TUNEL检测显示氟浓度为150mg/L组成釉细胞凋亡数量显著高于75mg/L组和自来水组（F=124.02,P＜0.05）.利用MetaMorph显微图像分析软件对结果进行分析,用spss13.0软件包进行统计处理.结论 大鼠饮用高浓度的氟化水可激活内质网应激分子,导致成釉细胞产生内质网应激,并最终诱导细胞发生凋亡.     

不同时期成釉细胞氟损伤程度差异的动物实验研究

目的：GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达和分布,探索氟牙症发病机制。方法：选择20只Wistra大鼠,饲喂氟浓度为75mg F-/L的自来水,8周后处死,通过HE染色和免疫组化技术观察大鼠成釉细胞形态和GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达。结果：GRP78在成釉细胞分泌前期和分泌期表达高于转换期和成熟期,BCL-2在分泌期和转换期表达最高,在分泌前期和成熟期表达下降,各组间具有显著统计学差异（P<0.05）.结论：分泌早期和分泌期成釉细胞对氟诱导的内质网更加敏感,而在分泌期和转换期其抗凋亡能力更强。     

氟对大鼠成釉细胞GRP-78和caspase-12表达的影响

目的研究GRP-78和caspase-12在氟致大鼠成釉细胞内质网应激和细胞凋亡中的作用,探讨氟所介导的内质网应激是否导致细胞凋亡。方法应用CCK8和流式细胞术观察不同浓度的氟对成釉细胞活性及凋亡数量的影响,以实时定量PCR和Western印迹法检测氟对内质网伴侣分子GRP-78和caspase-12基因和蛋白表达的影响,应用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果随着氟浓度的不断增加,大鼠成釉细胞活性呈逐渐下降趋势,流式细胞术同样显示发生凋亡的细胞数量逐渐上升;实时定量RT-PCR和Western印迹结果显示,GRP-78和caspase-12的表达量随着氟浓度增加而增加。结论过量氟介导了大鼠成釉细胞内质网应激,并且通过内质网应激,引起细胞凋亡。     

不同浓度氟化物对体外培养成釉细胞活性的影响

目的建立大鼠成釉细胞原代培养技术,观察不同浓度氟化钠对成釉细胞活性的影响,为研究氟斑牙的形成提供依据。方法取10¹5 d的Wistar大鼠磨牙牙胚组织进行原代培养,通过酶消化法,分离培养成釉细胞。加入不同浓度(0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L)的氟化钠作用于成釉细胞,分别培养24、48、72 h后,采用CCK-8法检测各组细胞的活性情况。结果①当氟化物浓度为0.4、0.8 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有促进作用,且随着时间的增加而增强。②当氟化物浓度为1.6、3.2、6.4 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有抑制作用,随着氟化钠浓度的增加,对细胞的抑制作用也逐渐增强,并且抑制作用随着时间的延长愈发明显。结论不同浓度的氟化物对体外培养成釉细胞的活性具有促进和抑制双向作用。     

过量氟对成牙本质细胞内质网应激作用的动物实验研究

目的：观察不同浓度氟化物对大鼠切牙成牙本质内质网伴侣分子表达的影响,探讨氟对成牙本质细胞的损伤机制。方法：随机分组的30只大鼠分别饮用氟化钠浓度为0、75、150×10^6的自来水,建立慢性氟中毒模型,采用SP免疫组化法检测大鼠成牙本质细胞中Grp78,xBP-1和Caspase-12的表达。利用MetaMorph显微图像分析软件采集数据并使用spss13．0软件分析。结果：随氟化物浓度增加,成牙本质细胞GRP78、xBP-1、Caspase—12的表达强度增加,且各组问具有显著差异（P〈0．05）。结论：一定浓度的氟化物可以引起成牙本质细胞内质网应激,Grp78和xBP-1过表达,高强度的内质网应激会诱导成牙本质细胞通过活化Caspase-12导致成牙本质细胞凋亡。     

氟对大鼠切牙成釉细胞内质网伴侣分子表达的影响

目的：研究不同浓度氟化物对大鼠切牙成釉细胞的影响,探讨内质网应激在氟斑牙形成中的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。观察大鼠切牙成釉细胞的形态学和GRP78、XBP-1、CRT和caspase-12表达的改变,采用MetaMorph显微图像分析软件和SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：随着饮水氟离子浓度的升高,切牙逐渐出现氟斑牙症状。免疫组化结果显示,CRT(F=11.72,P<0.05)、GRP78(F=27.42,P<0.05)、XBP-1(F=139.7,P<0.05)、caspase-12(F=43.91,P<0.05)表达随氟离子浓度的升高而升高,且各组间均具有显著性差异。结论：成釉细胞在一定浓度的氟化物作用下,其CRT、GRP78、XBP-1和caspase-12 均过表达,表明成釉细胞处于内质网应激状态,且caspase-12是导致细胞凋亡的重要途径。     

内质网应激与细胞凋亡研究进展

内质网应激主要表现为蛋白质合成障碍,会扰乱细胞稳态并最终导致细胞凋亡。该机制在神经变性性疾病、糖尿病、心血管类疾病及细胞肿瘤类疾病等领域研究进展迅速,在口腔疾病领域研究相对滞后。深入研究内质网应激机制在口腔疾病中发挥的作用,有助于该类疾病的预防与治疗。现就内质网应激机制作一阐述。     

内质网应激诱导的细胞凋亡在慢性牙周炎中的作用初探

目的:初步探讨内质网应激诱导的细胞凋亡在慢性牙周炎中的作用。方法:利用光学显微镜和透射电镜观察牙周组织中的凋亡细胞,免疫组化染色法检测慢性牙周炎患者及牙周健康者牙周组织中GRP78和CHOP的分布及含量变化。结果:慢性牙周炎组内浆细胞呈现凋亡状态,且GRP78和CHOP在慢性牙周炎组中的阳性表达明显高于正常组(P<0.05)。结论:内质网应激参与了慢性牙周炎的病理生理过程。     

软骨细胞中内质网应激信号通路的研究进展

内外环境多种刺激均可导致内质网中未折叠蛋白的积聚,引起细胞内的应激反应,改变细胞的功能和存活状态,这个过程称为内质网应激（ERS）。软骨细胞是关节软骨内唯一的细胞成分,低糖性损伤、白细胞介素-1β和一氧化氮以及一些药物均能使其发生ERS。ERS可引发蛋白激酶R样内质网调节激酶（PERK）、肌醇需酶（IRE）1和活化转录因子（ATF）6三条主要的信号通路构成未折叠的蛋白反应（UPR）。UPR中多种信号分子对软骨细胞的生长、程序性死亡以及软骨的炎症都有重要的影响,本文就ERS信号通路机制、PERK信号通路、IRE1信号通路和ATF6信号通路等研究进展作一综述。     

过量氟诱导成釉细胞钙超载及细胞凋亡的实验研究

目的 研究过量氟对体外培养大鼠成釉细胞内钙超载及细胞凋亡的影响。方法 取大鼠成釉细胞系HAT-7细胞,分别加入不同浓度（0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol·L^-1）的氟化钠培养液,培养48 h后,采用Cell Counting Kit 8（CCK-8）试剂盒检测各组细胞的活性,流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响,激光扫描共聚焦显微镜、Western blot试验和实时荧光定量聚合酶链反应技术检测过量氟诱导大鼠成釉细胞内Ca²⁺浓度和钙网蛋白表达的变化。结果 氟化钠浓度高于1.6 mmol·L^-1时,可抑制成釉细胞的活性,成釉细胞内Ca²⁺浓度升高,钙网蛋白表达上调,细胞早期凋亡数量增加,并且随着浓度的增加,细胞凋亡的数量也随之增加。结论 过量氟可引起成釉细胞内钙超载,诱导成釉细胞凋亡。     

口腔癌细胞通过传递性内质网应激影响胰岛β细胞功能的初探

目的 探究口腔癌细胞是否通过传递性内质网应激(TERS)影响胰岛β细胞功能.方法 选用衣霉素(TM)作为内质网应激(ERS)剂、人口腔鳞癌细胞系CAl-27、SCC-25作为供体细胞、小鼠胰岛素瘤6细胞系MIN6作为受体细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白免疫印迹(WB)检测ERS标志物及胰岛素表达情况...     

内质网应激在牙周炎影响全身疾病过程 中的作用

牙周炎是发生在牙周组织的慢性感染性疾病,其发病机制及对全身系统疾病的影响一直是学术界关注的热点问题。许多学者认为,牙周炎不仅是一种常见的口腔疾病,更是全身疾病的潜在危险因素之一,但是目前关于牙周炎诱发全身系统疾病的具体机制尚不明确,可能与牙周致病菌、炎症因子及内质网应激等有关。近年来的研究发现,内质网应激是介导细胞凋亡的重要通路之一,并且与全身疾病密切相关。有研究显示,内质网应激在牙周炎诱导全身疾病过程中存在调控作用,但是目前关于内质网应激在牙周炎影响全身疾病过程中的作用研究较少,需要进一步探索。本文就内质网应激在牙周炎影响全身系统疾病中的研究进展进行综述,旨在探究牙周炎和全身系统疾病的内在联系,以期为牙周炎与其相关全身系统疾病的防治提供新的思路。     

不同浓度氟对大鼠切牙成釉细胞Smad2/3表达的影响

目的:研究不同浓度氟对大鼠切牙生长过程中成釉细胞内信号转导分子Smad2/3表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法:40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。用HE染色和免疫组化方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞形态及Smad2/3表达的影响,采用MetaMorph显微图像分析系统和SPSS12.0软件包分别进行图像和数据分析。结果:给氟组大鼠切牙出现典型氟斑牙症状。给氟组Smad2/3的表达显著低于对照组(P<0.01),但低氟组和高氟组间未见显著差异(P>0.05)。结论:过量氟可能通过抑制Smad2/3的表达来影响釉质的分化和发育,导致氟牙症的发生。     

内质网应激关键因子PREK在应力加载下成肌细胞凋亡中的作用及机制

目的 研究周期性张应力对L6大鼠成肌细胞凋亡的影响,探讨蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)在这一过程中的作用及机制。方法 构建L6细胞力学刺激模型,加载参数为细胞拉伸形变率15%,频率10个循环/min,每循环包括3 s拉伸及3 s舒张,加力时间为2、6、12、24 h,以不加力组为对照组。应用DAPI染色观察各组细胞凋亡情况;应用实时荧光定量PCR检测各组PERK、CHOP mRNA的表达;应用Western免疫印迹检测各组PERK、p-PERK的表达变化。加入PERK抑制剂后重复实验,检测各组细胞凋亡情况,PERK、CHOP mRNA 的表达变化及p-PERK的蛋白表达变化。采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。结果 DAPI染色显示,L6大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生凋亡,24 h时达到凋亡最大值。PERK被抑制后,加力组的细胞凋亡程度与对照组无显著差别。RT-PCR 结果显示,随着加力时间的延长,CHOP mRNA 的表达逐渐增加;PERK mRNA 表达无差异。Western免疫印迹结果显示,p-PERK蛋白表达水平随加力时间延长而逐渐升高,总蛋白PERK的表达无明显变化;加入PERK抑制剂后,CHOP的mRNA表达与对照组无显著差异,p-PERK蛋白表达与对照组无显著差异。结论 内质网应激关键因子PERK参与了周期性应力条件下的成肌细胞凋亡,其作用机制可能与PERK磷酸化有关。     

咬合干扰对大鼠髁突软骨细胞内质网应激及凋亡的影响

目的:探讨咬合干扰致大鼠髁突软骨退变过程中内质网应激及凋亡相关分子的表达情况。方法:30只8周龄SD大鼠,采用大鼠上颌第一磨牙粘接不良修复体造成咬合干扰大鼠模型,4、8、12周后取颞下颌关节,甲苯胺蓝染色、苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,透射电镜观察超微结构,免疫组织化学染色检测GRP78、Caspase-12的表达情况。结果:实验组髁突软骨基质降解、细胞密度降低,内质网膨胀、断裂;GRP78阳性细胞率较对照组显著增多(P<0.05),Caspase-12阳性细胞率在8、12周时明显增加(P<0.05)。结论:咬合干扰后大鼠髁突软骨细胞发生内质网应激及内质网凋亡,可能是髁突软骨退变的重要机制之一。     

不同质量浓度氟对大鼠切牙成釉细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的研究不同质量浓度氟对大鼠切牙生长过程中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。3组分别为低剂量氟组（F-质量浓度60 mg·L-1,13只）、高剂量氟组（F-质量浓度120 mg·L-1,13只）和对照组（蒸馏水,14只）。10周后取材,采用苏木精-伊红（HE）染色和免疫组织化学染色的方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞的形态及TGF-β1表达的影响。结果实验组大鼠切牙均出现典型的氟斑牙症状,牙面出现白垩色改变,釉质表面有横纹。HE染色结果显示成釉细胞形态发生改变,细胞排列紊乱,甚至成灶性堆积,可见空泡性变。免疫组织化学染色结果显示TGF-β1在分泌期和成熟期成釉细胞均为强阳性表达,在星网状层、中间层均为阳性表达,在新形成的釉基质中呈阳性表达。2个实验组TGF-β1的表达强度明显低于对照组（P<0.01）,2个实验组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论氟可能通过抑制TGF-β1的表达而干扰了成釉细胞的分化和基质分泌,造成釉质发育障碍。     

北川地区氟化物对人群氟斑牙的影响调查研究

目的　调查青海省大通县北川地区人群氟化物水平。方法　对调查区内随机抽取的不同年龄组居民的氟斑牙患病情况、尿氟结果与当地环境氟水平之间的关系进行分析。结果　氟斑牙患病率达 5 4.6 8% ;尿氟浓度为 ( 1.5 1± 1.12 )mg/L。环境要素中的大气、农作物和土壤含氟量分别超过相应的标准值或背景值。结论　工业氟污染是引起该区人群慢性氟中毒的主要原因。     

短期高浓度氟对小鼠磨牙成釉细胞形态及骨形成蛋白-4表达的影响

目的:通过研究短期高浓度氟对小鼠磨牙成釉细胞形态及骨形成蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)表达的影响,探讨氟牙症形成的可能机制。方法:选择4d龄的ICR小鼠共32只,随机分为2组,每组16只,再分实验动物和对照动物各半。实验动物单次腹腔注射剂量分别为10mg/kg和20mg/kg的NaF,对照动物单次腹腔注射等剂量的NaCl,注射量均为10μl/g。24h后处死动物。采用HE染色、免疫组化染色观察高浓度氟对小鼠磨牙不同分化阶段成釉细胞形态及BMP-4的表达,采用SPSS13.0软件对数据进行分析。结果:分泌早、晚期和过渡期的成釉细胞对短期暴露高浓度F-敏感,实验动物分泌晚期和过渡期的成釉细胞中BMP-4的表达明显弱于对照动物,差异有统计学意义(P<0.01),而成熟期成釉细胞未见明显变化。结论:短期高浓度氟可抑制BMP-4在分泌晚期和过渡期成釉细胞中的表达,影响釉质发育。     

内质网应激诱导的TRB3在人舌体鳞状细胞癌细胞中抑制AKT磷酸化

目的:研究在人舌体鳞状细胞癌发生内质网应激后,TRB3与AKT磷酸化的关系。方法:在人舌体鳞癌细胞Tca8113及CAL-27中,使用毒胡萝卜素或衣霉素诱导内质网应激,采用腺病毒质粒转染及短发夹RNA干扰技术验证TRB3与AKT磷酸化的关系。结果:Tca8113及CAL-27细胞通过毒胡萝卜素或衣霉素诱导24h后,TRB3mRNA及蛋白表达升高。在Tca8113细胞中,通过腺病毒质粒转染上调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达下降;通过短发夹RNA干扰下调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达升高。结论:在人舌体鳞癌细胞发生内质网应激后,TRB3蛋白表达上调并且抑制AKT磷酸化。     

成釉细胞的分化与调控

成釉细胞的分化经历了形态和功能的改变,表现为前成釉细胞、分泌期成釉细胞和成熟期成釉细胞三个阶段,产生成釉蛋白和非成釉蛋白特异性蛋白质。牙胚外间充质的存在是成釉细胞分化的必要条件。TGF和EGF是成釉细胞分化的始动因子,在TGF-β2,EGF,FGF,PDGF和BMP等细胞因子和细胞外基质的作用下完成终末分化。