CCL22-CCR4轴在胃癌腹膜乳斑转移的机制研究

目的 探讨巨噬细胞衍生因子MDC/CCL22-CCR4反应轴在胃癌腹膜乳斑转移中的作用.方法 用RT-PCR和Western blot方法检测CCR4在5种胃癌细胞系中的表达;MTT法测定不同浓度CCL22对胃癌细胞株BGC-823增殖率的变化;Transwell小室体外侵袭实验检测CCL22对胃癌细胞株BGC-823趋化活性的影响;免疫组化检测标本中CCR4表达;单变量分析CCR4表达与胃癌临床病理参数的关系.结果 CCR4mRNA和CCR4蛋白在5种胃癌细胞系中均有表达.CCL22可以促进BGC-823细胞的增殖和趋化.CCR4在胃癌中有表达,CCR4表达水平与胃癌分化程度相关(P<0.05),而与患者的年龄、肿瘤大小、位置、分期以及淋巴结转移等均无关(P>0.05).结论 CCL22-CCR4反应轴可能在胃癌腹膜乳斑转移中起作用.CCR4可能成为预防和治疗胃癌腹膜转移的潜在靶点.     

胃癌腹膜微转移与网膜乳斑的关系

目的 观察网膜乳斑在腹膜微转移中的作用.方法 将30只小鼠分成3组,向小鼠腹腔内打入1×106经Dil荧光标记的BS186MFC胃癌细胞,3组小鼠分别于24、48、72 h被杀死取其大网膜,免疫荧光标记大网膜乳斑中的巨噬细胞,在免疫荧光显微镜下观察乳斑区胃癌细胞的变化.结果 乳斑与非乳斑区在24、48、72 h不同时间点标记胃癌细胞比率分别为484:1、136:1、10:1.各时间点胃癌细胞在乳斑区的差异有统计学意义(P<0.05).标记细胞数在乳斑与非乳斑区之间的差异有统计学意义(P<0.01).结论 网膜乳斑对胃癌细胞的腹膜微转移有抑制和杀伤作用.     

大网膜乳斑在胃癌腹膜转移中的作用

目的 观察大网膜乳斑在胃癌腹膜转移中的作用.方法 胃癌细胞株MFC,经Dil标记后,以每只小鼠1×10~4个Dil-MFCs注射到72只615小鼠腹腔内,不同时间取大网膜,观察Dil-MFCs在乳斑和非乳斑区的变化.结果 Dil-MFCs注入小鼠腹腔12 h后,Dil-MFCs开始大量出现在乳斑区;48 h,在巨噬细胞杀伤作用下,仅有少量细胞存活;72 h后,乳斑区可见增殖细胞团,形成微转移增殖灶.在非乳斑区,48 h可见散在少量的Dil-MFCs,72 h后散在Dil-MFCs增多,未发现增殖细胞团.腹腔注射14 d,乳斑区形成以乳斑为中心的团状转移灶,而非乳斑区则形成单细胞转移.结论 胃癌细胞在腹膜转移的早期阶段选择性地侵犯乳斑,乳斑转移灶是腹膜进一步转移的基础.     

腹膜乳斑与胃癌细胞在腹膜播散中的关系

目的研究腹膜乳斑与胃癌细胞在腹膜播散中的关系 .方法 30只经环孢素 A处理的 SD大鼠分成 3组 ,分别向大鼠腹腔内接种经溴脱氧尿甙 (BrdU)标记的 Sy86B裸鼠可移植性人胃癌细胞 ,数量分别为 105、 106和 107.应用免疫组织化学染色 ,观察癌细胞的分布 .计数网膜乳斑或非乳斑区标记细胞的数量 ,确定癌细胞的分布 .结果在乳斑或非乳斑区平均标记细胞数的比率分别是 163∶ 1(105)、 280∶ 1(106)和 697∶ 1(107).标记细胞数在乳斑或非乳斑区之间的差异有显著性意义 (P< 0 01).结论标记细胞选择性地侵入网膜乳斑 ,表明在胃癌腹膜播散的早期 ,癌细胞具有特异地侵入腹膜乳斑的特性 .     

腹膜乳斑在胃癌腹膜播散过程中的作用

目的　研究胃癌腹膜播散过程中腹膜乳斑的作用。方法　在 3组实验动物中 ,分别向大鼠腹腔内接种经 5 溴脱氧尿苷 ( 5 bromodeoxyurdine ,5 BrdU)标记的Sy86B裸鼠可移植性人胃癌细胞 ,每毫升数量分别为 1× 1 0 5 个、1× 1 0 6 个和 1× 1 0 7个。应用免疫组织化学染色 ,观察癌细胞的分布。计数网膜乳斑或非乳斑区标记细胞的数量 ,确定癌细胞的分布。结果　在乳斑或非乳斑区平均标记细胞数 3组的比率分别是 1 63∶1 ( 1× 1 0 5 个 /ml组 )、2 80∶1 ( 1× 1 0 6 个 /ml组 )和 697∶1 ( 1× 1 0 7个/ml组 )。在乳斑或非乳斑区标记细胞数比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1 )。结论　标记细胞选择性地侵入网膜乳斑。在胃癌腹膜播散的早期 ,癌细胞具有特异地侵入腹膜乳斑的特性     

趋化因子及其受体与胃癌的关系

目的 介绍趋化因子及其受体,尤其是CCL19/CCL21-CCR7及CXCL12-CXCR4轴在胃癌发生、发展中的作用.方法 查阅国内、外近年来有关趋化因子及其受体与胃癌关系的文献并作综述.结果 趋化因子及其受体通过对胃癌生长微环境的调控,CCL19/CCL21-CCR7在胃癌淋巴结转移过程中起着突出作用,CXCL12-CXCR4轴在胃癌腹膜转移过程中起着关键作用.CCR7可能成为特异性评价胃癌淋巴结转移潜能的分子标志物.阻断CXCL12-CXCR4轴有助于推动进展期胃癌腹膜转移治疗策略的进一步发展.结论 趋化因子及其受体从不同的方面促进胃癌的演进,了解这些方面的机理可以为未来的治疗提供理论依据.以趋化因子及其受体作为一种胃癌标志物和肿瘤治疗的新靶点,在胃癌侵袭转移的评估、预后判断和治疗方面将有着广阔的临床应用前景.     

腹膜乳斑与胃癌细胞在腹膜播散中的关系

目的 研究腹膜乳斑与胃癌细胞在腹膜播散中的关系。方法 ３０只经环孢素Ａ处理的ＳＤ大鼠分成３组，分别向大鼠腹腔内接种经溴脱氧尿甙（ＢｒｄＵ）标记的Ｓｙ８６Ｂ裸鼠可移植性入胃癌细胞，数量分别为１０＾５、１０＾６和１０＾７。应用免疫组织化学染色，观察癌细胞的分布，主数网膜乳斑或非乳斑区标记细胞的娄量，确定癌细胞的分布。结果 在乳斑或非乳斑区平均标记细胞数的比率分别是１６３：１（１０＾５）、２８０：１（１     

4-1BBL基因转染对小鼠体内胃癌细胞生长的影响

目的观察共刺激分子4-1BBL基因导入小鼠胃癌MFC细胞后在小鼠体内诱导的抗肿瘤效应以及对小鼠免疫状况的影响。方法用脂质体法把pMKITneo/4-1BBL和pMKITneo质粒导入615小鼠胃癌细胞MFC内,再用MFC、MFC/pMKITneo和MFC/4-1BBL细胞分别接种615小鼠,观察其成瘤情况,并测定肿瘤细胞的凋亡率及外周血的CD4~+、CD8~+T细胞和NK细胞的含量。结果4-1BBL基因转染后的胃癌MFC细胞在615小鼠体内成瘤所需的时间长、瘤体的重量轻；且MFC/4-IBBL组的癌细胞凋亡率(22．45±4．11)%明显高于MFC组(18．47±3．34)%及MFC/pMKITneo组(17．87±4．04)%(P＜0．05)；MFC、MFC/pMKITneo组小鼠外周血CD8~+T、NK细胞数明显低于正常对照组和MFC/4-1BBL组(P＜0．05),且MFC、MFC/pMKITneo两组间差异无统计学意义(P＞0．05)。结论4-1BBL基因导入胃癌MFC细胞后能够提高荷瘤机体的免疫能力、延缓肿瘤的发生、抑制肿瘤的发展、促进肿瘤细胞的凋亡。     

CC趋化因子配体22在胃癌病人外周血中的表达及意义

目的检测胃癌病人外周血中Chemokine(C-C motif) ligand 22(CCL22)表达水平,探讨CCL22对胃癌细胞的趋化作用,分析CCL22与胃癌发生发展的关系。方法胃癌组55例,30例健康体检者为对照组,抽取外周血,用TRIzol试剂提取外周血淋巴细胞总RNA,反转录PCR将RNA反转录为cDNA,然后用定量PCR检测CCL22 mRNA表达水平;外周血中CCL22蛋白质表达用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测;用趋化实验检测CCL22对胃癌细胞的趋化作用。结果胃癌组病人外周血中CCL22 RNA表达显著高于对照组(P0.05)。胃癌组病人外周血中CCL22蛋白表达为(1401.67±481.12)pg/ml,对照组为(500.08±100.51)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P0.05),其表达随胃癌临床分期而逐渐增高。CCL22呈剂量依赖性趋化胃癌细胞。结论胃癌病人外周血中CCL22表达增高,CCL22对胃癌细胞具有趋化作用,CCL22可能与胃癌的发生发展密切相关。     

胃癌乳斑微转移在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的意义

目的：探讨胃癌乳斑微转移模型在胃癌干细胞及前驱细胞研究中的意义。方法：胃癌细胞系MFC,1×10~4细胞数量注射到小鼠腹腔内,72 h后取大网膜,收集乳斑微转移灶内的胃癌细胞团;以不同细胞数量进行NOD/SCID小鼠皮下注射,观察细胞的致瘤能力,移植瘤HE染色,免疫组化分析CEA、CK20表达;免疫细胞化学分析乳斑微转移灶内的胃癌细胞团干细胞相关标志物的表达。结果：皮下注射16周后,微转移灶内的胃癌细胞团组中,皮下注射数量为5×10~2个细胞有1个部位产生肿瘤组织：注射数量为1×10~3个细胞时,5个部位均能产生肿瘤组织。对照组皮下注射为5×10~4个细胞时,仅1个部位出现肿瘤,而注射部位全部出现肿瘤组织,需要5×10~6个以上的细胞数量。两组皮下肿瘤组织分别经HE染色和免疫组化分析CEA、CK20表达,与对照组比较无统计学差异。微转移灶内细胞团高表达CD133和CD44,而CD324的表达则明显下降。结论：胃癌乳斑微转移模型内存在丰富的胃癌于细胞及前驱细胞;大网膜乳斑微环境具有富集胃癌干细胞及前驱细胞的作用。CD133~＋、CD44~＋和CD324~-可能是胃癌干细胞的表面标志物。     

携带4-1BBL基因的胃癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗的研究

目的 观察携带4-1BBL基因的胃癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗,在小鼠体内诱导的抗肿瘤效应以及对小鼠免疫力的影响.方法 用脂质体法把pMKITneo/4-1 BBL质粒导入小鼠胃癌细胞MFC内,再提取此细胞的总RNA并转染至树突状细胞内制备MFC/4-1BBL/DC疫苗;把MFC细胞注射于20只615小鼠皮下建立荷瘤小鼠胃癌模型,并随机分为对照组、DC组、MFC/DC组和MFC/4-1BBL/DC组,每组5只;在MFC细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗,于肿瘤细胞接种后第21天,处死实验动物,测量瘤重、测定肿瘤细胞的凋亡率及外周血的CD4+、CD8+T细胞和NK细胞的含量.结果 MFC/4-1BBL/DC组小鼠平均瘤重(2.06±0.39)g显著低于对照组(3.82±0.57)g、DC组(3.63±0.51)g、MFC/DC组(2.67±0.32)g(P＜0.05);且MFC/4-1BBL/DC组肿瘤细胞凋亡率(28.58±2.84)%明显高于MFC/DC组(25.03±1.88)%、DC组(20.66±2.71)%及对照组(19.09±2.73)%(P＜0.05);MFC/4-1BBI/DC组小鼠外周血CID4+T、NK细胞数明显高于对照组和其他治疗组(P＜0.05).结论 携带4-1BBL基因的胃癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗能够提高荷瘤机体的免疫能力、抑制肿瘤细胞的生长、促进肿瘤细胞的凋亡.

Abstract：

Objective To observe the induced anti-tumor effects and immune state in vivo by the transfection of dendritic cell vaccine into the total RNA of gastric cancer cells carrying 4-1BBL gene.Methods The liposome-mediated pMKITneo/4-1BBL gene was inserted into the MFC gastric cancer cells,and the cell total RNA was extracted and transfected into dendritic cells to make the MFC/4-1BBL/DC vaccine.After MFC cells were injected into the 615 mouse to establish tumor-bearing mouse model,and those 20 mice were randomly divided into control group,DC group,MFC/DC group,MFC/4-1BBL/DC group.The dendritic cell vaccine was subcutaneously injected on the day 7 and 14 after inoculation of tumor cells,and on the day 21 animals were killed and tumor weight was measured,tumor cell apoptosis rate was assayed and the contents of CD4 +,CD8 + T cells and NK cells in peripheral blood were analyzed.Results The mean tumor weight in MFC/4-1BBL/DC group (2.06 ±0.39) g was significantly less than that in control group (3.82 ±0.57) g,DC group (3.63 ±0.51 ) g,MFC/DC group (2.67 ±0.32) g (P ＜0.05).Moreover the apoptosis rate in MFC/4-1BBL/DC group (28.58 ± 2.84 ) % was significantly higher than that in MFC/DC group (25.03 ± 1.88)%,DC group (20.66 ±2.71 )% and control group ( 19.09 ±2.73 )% (P ＜0.05).The percentage of CD4 + T,NK cells in MFC/4-1BBL/DC group was significantly higher than in other groups ( P＜0.05).Conclusion The transfection of dendritic cell vaccine into the total RNA of gastric cancer cells carrying 4-1BBL gene can increase immunity of the bearing tumor mice,inhabit tumor growth and promote tumor cell apoptosis.     

胃癌患者血清中CCL20和CCR6的表达及临床意义

目的 测定趋化因子CCL20及其受体CCR6在胃癌患者的血清中表达,并探讨CCL20和CCR6表达水平与胃癌的发生发展关系.方法 应用荧光定量PCR技术、流式细胞术和酶联免疫吸附法测定50例胃癌患者和30例健康对照者外周血中CCL20和CCR6的mRNA和蛋白表达水平.结果 胃癌患者CCL20和CCR6的mRNA表达均显著高于健康对照组(P<0.01);胃癌患者外周血中CCL20和CCR6的蛋白表达分别为(45.4±10.9)pg/mL和(7.11±1.03)%,显著高于健康人的(18.6±4.7)pg/mL和(1.83±0.43)%(P<0.01),且其升高程度与胃癌临床分期有明显关系.结论 胃癌患者CCL20和CCR6的表达与胃癌的发生发展存在一定的相关性,可能参与胃癌的发病过程,推测其可能作为胃癌诊断、复发和转移的分子标志物.     

IgA肾病伴扁桃体炎患者Th22细胞及CCL27/CCR10轴的表达

目的分析IgA肾病(IgAN)伴扁桃体炎患者辅助T细胞22(Th22)细胞及相关细胞因子、趋化因子轴的表达变化,探讨其与临床病理改变的关系。方法纳入2015年6月至2016年6月在中南大学湘雅医院经肾活检确诊为IgAN的患者为研究对象。按照肾脏病理类型及是否合并扁桃体炎分为IgAN合并扁桃体炎(IgAN+扁桃体炎)组、单纯IgAN(IgAN)组、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)组和对照组(HC)组。采用流式细胞术检测外周血Th17、Th22细胞及Th22细胞CC型趋化因子受体(CCR)4、CCR6、CCR10表达阳性细胞占比;酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th22细胞效应因子白细胞介素(IL)-22,促分化因子IL-1β、IL-6、TNF-α、CC型趋化因子配体(CCL)22、CCL20、CCL27水平。免疫组织化学方法(IHC)检测肾组织中CCL22、CCL20和CCL27的表达。比较分析各组临床病理指标、Th22细胞占比及相关趋化因子表达的差异。结果本研究共纳入44例IgAN患者,其中14例合并扁桃体炎,另纳入10例MsPGN患者及16例健康人作为对照。各组性别、年龄匹配,血压、肾功能、血脂等生化指标的差异无统计学意义(均P>0.05)。IgAN组、MsPGN组及IgAN+扁桃体炎组外周血Th22细胞、CCR10表达阳性细胞占比明显高于对照组,血清IL-22、IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL20、CCL22、CCL27水平亦较高,且IgAN+扁桃体炎组更为显著(均P<0.05)。各组肾脏组织CCL20、CCL22、CCL27表达改变与其外周血变化一致。合并血尿的IgAN患者外周血Th22细胞占比显著高于无血尿组患者。病理分型(E1、S1或T1-2)较重的IgAN患者外周血Th22细胞占比显著高于病理分型较轻者(E0、S0或T0)。结论Th22细胞及CCL27/CCR10轴参与了IgAN发病过程,扁桃体炎可加重IgAN的临床与病理损伤。     

Chemokine redundancy in BOS pathogenesis. A possible role also for the CC chemokines: MIP3-beta, MIP3-alpha, MDC and their specific receptors

Bronchiolitis obliterans syndrome (BOS) is one of the most important factors limiting the long-term survival of lung transplant recipients (LTR), however its pathogenesis still remains unclear. We hypothesized that an increased production of certain specific proinflammatory mediators in the first post-transplant year would predispose to BOS. We retrospectively evaluated temporal kinetics of some CC chemokines that have not yet been evaluated, including CCL3/MIP1-alpha, CCL4/MIP1-beta, CCL17/TARC, CCL19/MIP3-beta, CCL20/MIP3-alpha, CCL22/MDC and CCL26/eotaxin, in broncho-alveolar lavage fluid (BAL-f) in the first post-transplant year in a cohort of 8 LTR before the development of BOS (pre-BOS LTR) and 8 LTR with long-term stable clinical conditions (stable LTR). Chemokine levels were assayed by means of a multiplex sandwich ELISA. Furthermore, for those ligands which resulted significantly predictive of BOS onset, we analyzed the expression of specific receptors (CCR) on BAL cells. The proportion of CCR-expressing BAL cells was assessed by flow cytometry. We demonstrated that MIP3-beta/CCL19, MIP3-alpha/CCL20, MDC/CCL22 levels at 6 months post-transplant significantly predicted BOS onset. In addition, the temporal behavior of these factors resulted significantly different in pre-BOS patients as compared to stable LTR. Finally the expression of CCR was documented on BAL lymphocytes and macrophages, and, in some cases, their expression was found to vary between the two groups. Within the complexity of the chemokine network, these three CCL factors could play an additive role in the pathogenesis of the inflammatory process leading to bronchiolar fibro-obliteration.     

血清血管内皮生长因子-C联合MDCT诊断胃癌淋巴结转移的可行性

目的探讨术前测定血清血管内皮生长因子-C（serum vascular endothelial growthfac—tor,SVEGF—c）浓度联合MDCT扫描能否判断胃癌淋巴结转移。方法ELISA方法测定80例胃癌患者及20例健康人SVEGF—C浓度,MDCT平扫及三期强化动态扫描,常规病理检查淋巴结有无转移。结果胃癌组SVEGF—C浓度为595．9±201．0pg／ml,对照组为360．0±97．4 pg／ml（P=0．000）;伴有淋巴结转移的58例胃癌患者SVEGF—C明显升高（650．9±198．6 vs．451．0±115．5 pg／ml,P〈0．01）;取临界点为542．5pg／ml时,SVEGF—C诊断淋巴结转移的敏感度为82．8％,特异度为81．8％,准确度为82．5％,阳性预测值为92．3％,阴性预测值为64．3％。MDCT诊断淋巴结转移的敏感度为51．7％,特异度为54．5％,准确度为52．5％,阳性预测值为75．0％,阴性预测值为30．0％。SVEGF—C联合MDCT诊断淋巴结转移的敏感度为91．4％,特异度为86．4％,准确度90％,阳性预测值94．6％,阴性预测值79．2％。结论术前SVEGF-C浓度测定可有效地判断胃癌淋巴结转移,联合MDCT扫描进一步提高准确度。     

逆转录病毒载体介导的CD基因对小鼠胃癌的原位杀伤作用

目的　探讨自杀基因的旁观者效应及引发的抗肿瘤免疫对胃癌的治疗作用。方法　将含有ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体ｐＣＤ２ 在ＰＡ３１７ 细胞中进行包装后,收获病毒上清;将此上清直接注射接种于６１５ 小鼠皮下并已成瘤的ＭＦＣ小鼠前胃癌的肿瘤部位,再腹腔给予前药５ＦＣ 进行治疗。治疗结束后,检测ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性以判断机体免疫活性。结果　在前药治疗阶段中,转ＣＤ基因肿瘤较未转基因肿瘤的生长明显受抑,且有部分肿瘤消失（ Ｐ＜０ ．０１ ,ｎ＝１０） 。在成瘤对照组中,ＮＫ、ＬＡＫ 活性受到抑制,低于正常对照组,而ＣＤ／５ＦＣ组的ＮＫ、ＬＡＫ活性明显增高。肿瘤消失小鼠在远离原肿瘤部位再接种ＭＦＣ细胞,９０ 天后均未见肿瘤生长且长期存活。结论　在胃癌肿瘤部位直接转导ＣＤ 基因不仅可以对肿瘤产生强效的杀伤作用,由此引发的抗肿瘤免疫反应对阻止肿瘤复发有重要意义。