突触分化诱导基因SynDIG1的5′调控区序列的生物信息学分析

目的:研究突触分化诱导基因SynDIG1转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法:利用BLAST比对获得SynDIG1基因5′调控区序列;利用模序识别分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件Neural Network Promoter Prediction和PROMOTER 2.0分析SynDIG1基因5′调控区序列中启动子;利用在线分析软件CpG Island Searcher分析SynDIG1基因5′调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析SynDIG1基因5′调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果:SynDIG1基因5′调控区序列中存在1个CAAT-box,没有GC-box和TATA-box;SynDIG1基因可能存在5个启动子位点;CpG岛为516bp区间(1 686～2 201bp);结果显示评分在85分以上(Score Threshold:85.0)时,该区域具有406个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上(Score Threshold:90.0)时,该区域具有168个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上(Score Threshold:95.0)时,该区域具有72个潜在的转录因子结合位点;评分在99分以上(ScoreThreshold:99.0)时,该区域具有28个潜在的转录因子结合位点。结论:通过生物信息学的方法对于SynDIG1基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义。     

大鼠脊髓损伤后差异表达基因的筛选与分析

目的:通过对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)相关基因芯片进行生物信息学分析,为阐明继发性SCI的分子机制提供新思路.方法:首先从GEO数据库下载大鼠SCI的mRNA表达谱数据集GSE464和GSE45006,利用R语言limma包筛选损伤和正常脊髓的差异表达基因(differential e...     

α-突触核蛋白在大鼠脊髓损伤后的表达及意义

目的：探究大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后α-突触核蛋白 (α-synuclein, SNCA) 在脊髓中的表达和意义。方法：SD大鼠随机分为对照组和SCI组,采用Allen′s法制备大鼠SCI模型。根据基因芯片分析结果,筛选出目的基因。应用实时定量PCR和免疫组织化学方法分别检测SNCA在脊髓中的定位表达和变化。生物信息学分析预测SNCA相关基因或蛋白。结果：基因芯片结果显示差异下调基因SNCA差异表达倍数2.276,验证结果显示SNCA下调。实时定量PCR显示SNCA的 mRNA在大鼠SCI后3、7、14和28 d的表达量明显降低,与对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.001）;免疫组织化学结果显示SNCA在正常脊髓后角的神经元突起、神经胶质细胞突起以及前角神经元胞浆中表达,在SCI后7 d和14 d,与对照组相比,SNCA免疫阳性物质明显减少。生物信息学分析结果显示SNCA与神经递质传递、氧化应激和细胞凋亡等有关。结论：SCI后SNCA的mRNA和蛋白表达水平均降低,在脊髓前角和后角的表达明显减少。提示在SCI后SNCA可能参与调控神经元和神经胶质细胞的存活,进一步影响SCI后的运动功能和感觉功能。     

骨髓基质细胞体外诱导分化移植治疗大鼠脊髓损伤的研究

目的 探讨大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)在体外由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、全反式维甲酸(RA)联合诱导下分化成的神经细胞样细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性.方法 采用出生4周SD大鼠的全骨髓细胞进行培养,利用bFGF+EGF+RA在体外诱导BMSCs向神经细胞样细胞分化.在倒置相差显微镜下每日观察、记录BMSCs的诱导分化情况,并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单克隆抗体鉴定.实验动物分为3组:细胞移植组(A组)、模型对照组(B组)、正常对照组(C组).A、B组采用改良Allens法建立大鼠急性脊髓损伤模型.A组在造模后立即将诱导后的BMSCs悬液多点缓慢注入到损伤节段的头侧和尾侧,B组同法注射等量磷酸盐缓冲液.C组不造模,于相同部位注射等量磷酸盐缓冲液.于伤后1～5周,按照BBB法观察脊髓神经功能恢复情况并处死动物取材,用HE染色观察脊髓病理变化.结果 诱导7 d后有部分细胞具备神经元样细胞形态,胞体呈锥形或圆形,有较长单极或多极的突起,有NSE阳性细胞表达;细胞移植后1～5周,A、B组动物运动功能均有不同程度恢复,但B组恢复较慢,BBB评分差异有统计学意义(P<0.05);组织形态学观察示A组损伤脊髓恢复较好.结论 bFGF、EGF和RA可以联合诱导BMSCs向神经干细胞分化,并可调控神经元分化,将其移植于大鼠脊髓损伤区,可促进脊髓损伤的恢复.     

大鼠脊髓急性损伤后凋亡相关基因的表达

目的：检测大鼠脊髓损伤后凋亡相关基因的表达,以探讨神经细胞凋亡的分子机制。方法：大鼠脊髓T8-9经中度压迫损伤后,分别在30min,2、4、8、24、48和72h处死取材（n=6）,应用免疫组化及原位杂交技术对脊髓组织进行标记,以检测p53,bcl-2,bax的表达。结果：损伤4h后P53,Bax蛋白及p53mRNA大量表达,其中P53蛋白在24h达到高峰,而Bcl-2仅有少量表达,bcl-2mRNA未见表达。结论：脊髓损伤后凋亡基因（p53,bax)大量表达,并可能在神经细胞的凋亡过程中起重要作用。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

针刺对大鼠慢性脊髓损伤后Bax和Bcl-2表达的影响

目的：探讨针刺治疗慢性脊髓损伤的作用机理。方法：60只2月龄的Wistar大鼠为受试对象，置入后路渐进性压迫装置，造成中度压迫性损伤，采用针刺进行治疗，应用免疫组化法、原位末端标记法(TUENL)观察针刺对凋亡基因Bax和Bcl—2表达的影响。结果：针刺组中Bax蛋白表达较非针刺组明显少，凋亡指数(AI)低，而Bcl—2表达则较非针刺组多，且着色深，有显著性差异。结论：针刺治疗慢性脊髓损伤可能是通过调控Bax和Bcl—2的表达而起作用。     

突触素在大鼠脊髓损伤后中枢神经不同部位的变化研究

目的 研究脊髓损伤后突触素(SYN)在中枢神经系统中不同部位的变化,为脊髓损伤研究提供实验依据.方法 成年健康SD大鼠42只,随机分成7组(假损伤组;1、3、7、14、21和28 d脊髓挫伤组).观察各组SYN在大鼠脊髓、大脑、脑干、海马的表达分布情况.用图像分析系统测SYN阳性单位和平均光密度.结果 脊髓损伤后,脊髓和延髓段的SYN阳性单位值均在1 d组即开始下降,14 d到最低值,与对照组差异有统计学意义(P<0.05),以后逐渐增高;海马区SYN阳性单位值则在3 d达最低值,与对照组有明显差异(P<0.05);其它部位SYN表达为阴性.SYN阳性单位值的变化趋势与其平均光密度值变化类似.结论 脊髓损伤后,在中枢神经不同部位中的突触素表达有不同的变化规律.     

CD44在大鼠脊髓半横断损伤后的表达变化

目的 通过观察CD44在大鼠脊髓半横断损伤(hemisection of Spinal Cord Injury,hSCI)位点头尾段的表达,了解它与脊髓损伤的关系.方法 免疫组化SP法检测大鼠脊髓半横断损伤后CD44的表达变化情况.制备大鼠脊髓损伤模型.SD大鼠随机分为假手术对照组和脊髓半横断损伤3天、7天和14天组.应用免疫组织化学和图像分析技术检测脊髓组织CD44的表达.结果 CD44阳性产物主要定位于细胞外基质.神经元和神经胶质细胞的胞浆中也有分布.损伤后CD44的表达较对照组明显增多[P<0.05].结论 脊髓半横断损伤后,表达增加的CD44参与损伤后轴突生长被抑制这一过程.     

α-突触核蛋白在大鼠脊髓的表达

目的研究α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)在正常大鼠脊髓中的表达。方法利用2种抗α-Syn单抗3D5和2E3进行免疫组化染色,观察α-Syn在脊髓的表达和分布;用免疫荧光双标方法观察α-Syn与神经肽Y(NPY)共存的情况。用Luxol fast blue染色鉴别有髓与无髓神经纤维。结果α-Syn主要存在于脊髓灰质神经元核及灰质无髓神经纤维中。富含α-Syn的神经纤维主要分布在脊髓灰质的第Ⅰ、Ⅱ层,而α-Syn核阳性神经元主要分布在第Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ层;后根第Ⅰ、Ⅱ层一小部分α-Syn阳性纤维与NPY共存;前角细胞核呈α-Syn阳性神经元胞质中存在NPY,而其他部位的α-Syn核阳性神经元胞质中无NPY。结论α-Syn存在于大鼠脊髓灰质的神经元核及无髓神经纤维中,部分阳性神经纤维和神经元胞体呈NPY免疫阳性反应。     

甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后c-fos基因表达的影响

探讨甲基强的松龙对脊髓损伤后ｃ－ｆｏｓ基因表达的影响。方法采用Ａｌｌｅｎ’ｓ法制成大鼠脊髓损伤模型,动物随机分三组：假手术组、手术组、术后给药组。分３个时间点（术后１小时、２小时,４小时）进行ｃ－ｆｏｓ免疫细胞化学法染色。结论脊髓损伤后脊髓ｃ－ｆｏｓ基因表达显著增多,甲基强的松龙能抑制损伤后ｃ－ｆｏｓａ基因表达。     

脊髓损伤后疼痛

目的 探索脊髓损伤(SCI)后疼痛的机理及临床。方法 回顾分析94例SCI后疼痛患者的临床表现、诊断治疗。结果 随访3月～2年，94例SCI患者经手术药物等治疗，62例治愈，21例改善，11例无效。结论 SCI后疼痛分为机械性疼痛和中枢性疼痛．前者治疗效果满意；后者机制复杂．需采用整体性综合治疗，以消除或减轻患者疼痛，提高患者生活质量。     

MK-801并胚胎脊髓移植促进大鼠脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的研究胚胎脊髓移植同时应用NMDA受体拮抗剂MK-801观察其是否能够促进半切洞脊髓损伤运动功能恢复.方法将成年大鼠分为三组,A组单纯脊髓半切洞损伤组.B组脊髓半切洞损伤+胚胎脊髓移植组,C组脊髓半切洞损伤+胚胎脊髓移植+MK-801组.手术后应用联合行为评分(CBS)、感觉诱发电位(SEP)、运动诱发电位(MEP)检查.结果三组CBS得分A组＞B组＞C组,SEP和MEP潜峰时A组＞B组＞C组,统计学分析有显著差异性.结论通过分析CBS、SEP、MEP结果表明胚胎脊髓移植和NMDA受体拮抗剂MK-801能够促进脊髓损伤后功能恢复.     

NT-3在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的：了解NT-3在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法：制作成年SD大鼠T13-L1节段脊髓挤压伤模型并设正常对照组。分别于术后24h，7d，21d处死动物。取L3节段脊髓制作20胛厚冰冻连续切片，用抗NT-3抗体行免疫组织化学ABC法染色，观察NT-3在背角的表达，记录其免疫反应强度，计数其免疫阳性神经元数和胶质细胞数。结果：NT-3的阳性反应物主要分布于脊髓背角的神经元和胶质细胞，挤压伤后NT-3的表达从术后24h至术后7d进行性减少，而术后21d时则增加并高过正常者水平。结论：NT-3不仅参与脊髓的正常生理活动，而且可能与脊髓挤压伤的早期修复有关并具有双向效应。     

三七总皂甙对脊髓损伤大鼠一氧化氮含量的影响

目的　探讨脊髓继发性损伤的病理生理机制及三七总皂甙 (panaxnotoginsengsaponins ,PNS)防治该病的作用机理。方法　以Wistar大鼠 6 5只为研究对象 ,分为空白组、假手术组、溶媒对照组、三七总皂甙 (PNS)组 ,各实验组按 2、6、12、2 4小时相点观察 ,Allen s脊髓损伤模型 10 0g·cm致伤脊髓。各组在相应时相点取脊髓组织 ,采取组织化学方法观察脊髓一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元的表达变化。结果　脊髓NOS阳性神经元表达 :溶媒对照组 >PNS组 >假手术组 >空白组。结论　NO参与了脊髓继发性损伤的病理生理机制 ,PNS通过抑制NOS活性而起保护作用。     

脊髓损伤对大鼠生殖激素水平的影响

目的 研究大鼠脊髓损伤后生殖激素水平的改变。方法 应用放射免疫法检测大鼠行脊髓损伤术后第2周、第4周血清FSH、LH、T（睾酮）的水平。结果 术后第2周，手术组与假手术相比较，血清FSH、LH、T水平没有显著性差异。术后第4周，手术组与假手术组比较，手术组LH水平显著升高（P＜0．05），T水平显著降低（P＜0．05）。结论 生殖激素的改变与脊髓损伤后各组生精细胞的减少有密切关系。     

脊髓半切损伤后脊髓与大脑部分核团c-fos蛋白表达的实验研究

目的 :探索脊髓半切损伤后 ,脊髓、下丘脑室旁核 (PVN)和视上核 (SON)的c -fos蛋白表达的规律。方法 :将 5 6只大鼠随机分为脊髓损伤组 2 4只、假手术组 2 4只和正常组 6只 ,损伤组行左侧半脊髓横断术 ,损伤后 1,6,12 ,2 4h取脊髓、PVN和SON行冰冻切片 ,免疫组化法标记c -fos阳性细胞。结果 :脊髓半切损伤后 ,各时间点损伤侧脊髓灰质中有明显的c -fos阳性表达。PVN和SON在损伤后各时间点均有c -fos表达阳性细胞的增加 ,与假手术组、正常组比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :脊髓损伤后脊髓、PVN和SON可产生明显反应 ,PVN和SON以不同的反应特点影响着神经递质的改变。     

恒河猴脊髓半横断损伤后腹角及对侧脑皮质前运动区EGF阳性神经元数的变化

目的 探讨脊髓损伤(SCI)对表皮生长因子(EGF)表达的影响及EGF在脊髓损伤再生修复中的作用.方法 18只成年恒河猴被随机分为假手术对照组,脊髓半横断损伤(hSCI)7 d、14 d、1月、2月和3月组,各损伤组于第11胸髓节段切断左侧半脊髓,在相应时间点取材,脊髓取损伤处近、远段5 mm两段,脑取损伤对侧皮质前运动区.制作冰冻切片,采用抗EGF多克隆抗体免疫组织化学SP法染色,观察并计数脊髓腹角及对侧大脑皮质前运动区EGF免疫阳性神经元数的变化.结论 恒河猴hSCI后3月内,损伤处脊髓近、远段损伤侧与未损伤侧腹角及对侧皮质前运动区EGF阳性神经元数均较假手术对照组减少(P＜0.05),表现为先降低后增加,晚期呈逐渐减少的变化趋势,不同部位EGF阳性神经元数波动不一致.结论 恒河猴hSCI后3月内脊髓损伤侧腹角EGF阳性神经元数明显减少;hSCI也会影响未损伤侧EGF的表达;损伤早期,邻近损伤处脊髓腹角及对侧脑皮质前运动区EGF阳性神经元数急剧减少后均有自发回升.     

NGF在挤压伤脊髓背角表达的时相变化

目的　了解神经生长因子 (NGF)在挤压伤脊髓背角表达的变化。方法　采用成年 SD大鼠 (T1 3-L1 )脊髓挤压伤模型并设正常对照组 ,分别于术后 2 4小时、7天、2 1天处死动物。取 L3节段脊髓制作 2 0μm厚冰冻连续切片 ,用抗 NGF抗体按 ABC法行免疫组织化学染色 ,观察 NGF阳性反应物在正常及挤压伤位点尾侧端 (L3)背角的分布 ,记录其免疫反应强度 ,计数其免疫阳性神经元和胶质细胞数。结果　 NGF阳性反应物主要分布于正常脊髓背角的神经元和胶质细胞。挤压伤后 2 4小时至 2 1天 ,背角中 NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性升高 (P<0 .0 1)。结论　脊髓挤压伤后早期 ,背角 NGF的免疫阳性细胞数及免疫反应强度均进行性增加 ,提示NGF可能在脊髓挤压伤的早期修复中发挥作用