紫草素通过促进ROS的产生诱导人非小细胞性肺癌A549细胞凋亡的机制

目的 研究紫草素对人非小细胞性肺癌A549细胞的抗肿瘤作用,并探讨其可能的机制。方法 不同浓度紫草素处理A549细胞和人正常肺MRC-5细胞,四氮唑盐还原（MTT）法检测细胞的活性;流式细胞术结合PI-FITC双染色测定细胞凋亡;2''7''-二氯双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）;Western blot法测定caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达。结果 紫草素对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性（P<0.05,P<0.01）;当剂量≤10μmol/L时,其对MRC-5细胞的增殖没有明显的影响（P>0.05）。不同浓度紫草素处理24h后,A549细胞的凋亡率（早期凋亡+晚期凋亡）显著增加（P<0.05或P<0.01）,caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白被诱导活化,caspase抑制剂（Z-VAD-FMK）预处理则明显降低A549细胞的凋亡率（P<0.01）,并抑制以上3种蛋白的活化。另外,紫草素处理可引起A549细胞ROS的产生,且呈现出一定的剂量依赖性。ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）和L-谷胱甘肽（GSH）预处理可使A549细胞的凋亡率下降（P<0.01）。同时,紫草素处理可明显下调抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）,NAC和GSH预处理亦能上调Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）。结论 紫草素可明显抑制肺癌A549细胞的增殖,其作用机制与诱导A549细胞产生大量的ROS,抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL表达,进而激活caspase依赖的凋亡途径有关。     

灭活仙台病毒Tianjin株诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡作用及其机制的研究

【目的】 研究紫外线灭活复制缺陷的仙台病毒Tianjin株致人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡作用及其机制。 【方法】 首先制备并鉴定紫外线灭活仙台病毒Tianjin株,然后用不同剂量灭活病毒感染MDA-MB-231细胞,24 h后,MTT法检测灭活病毒对MDA-MB-231细胞增殖的影响;Hoechst染色及AnnexinⅤ-FITC/PI标记流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞凋亡情况;JC-10染色流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞线粒体膜电位变化;分光光度法测定MDA-MB-231细胞内caspase-9、-8和-3活性;蛋白质印迹法检测MDA-MB-231细胞中Bcl-2、Bax、Cyt c、caspase-9、Fas、FasL、caspase-8和caspase-3蛋白表达水平。 【结果】 MTT检测显示灭活Tianjin株能够抑制MDA-MB-231细胞增殖,且呈剂量依赖性;Hoechst染色发现灭活病毒感染的MDA-MB-231细胞有明显形态学改变,细胞核呈致密浓染或碎块状致密浓染;AnnexinⅤ-FITC/PI标记流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高,JC-10染色流式细胞仪分析显示灭活病毒组细胞线粒体膜电位呈剂量依赖性降低,且与对照组比较均有统计学差异(P<0.01);caspase 活性检测显示灭活病毒组caspase-9、-8和-3活性均呈剂量依赖性升高, 与对照组比较有统计学差异(P<0.01);蛋白质印迹结果显示高剂量灭活病毒组(MOI 80)Bcl-2表达下调,Bax、Cyt C、Fas、FasL、活化caspase-9、-8和-3表达上调。 【结论】 灭活仙台病毒Tianjin株能够诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体内源性途径和死亡受体外源性途径密切相关。     

miR-149-5p靶向FGF5调节人口腔鳞状细胞癌细胞凋亡和上皮-间质转换及微管形成

目的：　探究miR-149-5p对人口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞凋亡、上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及微管形成的影响及作用机制。方法：　miR-149-5p mimic（mimic）和pcDNA-FGF5（FGF5）单转或共转CAL-27细胞系,RT-PCR、Western blot检测FGF5表达;双荧光素酶报告实验验证miR-149-5p和FGF5靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Bax/Bcl-2蛋白表达;观察EMT细胞形态转化,Western blot检测CAL-27细胞上皮标记物E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）及间质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin,N-cad）表达;成管实验检测CAL-27细胞微管样形成能力,Western blot检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达。结果：　miR-149-5p mimic能明显抑制CAL-27细胞中FGF5的表达（P=0.000）;miR-149-5p mimic能明显减弱FGF5野生质粒的荧光素酶活性（P=0.000）;miR-149-5p mimic可明显上调CAL-27细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值（P=0.000）,并逆转FGF5过表达导致的细胞凋亡率（P=0.014）及Bax/Bcl-2比值上调（P=0.000）。miR-149-5p mimic抑制EMT细胞形态由圆形到纺锤形转变,并逆向转换FGF5过表达导致的间质样细胞形态。miR-149-5p mimic可上调CAL-27细胞中E-cad的表达（P=0.000）、下调N-cad的表达（P=0.000）,逆转FGF5过表达引起的E-cad表达下调（P=0.020）和N-cad表达上调（P=0.000）。miR-149-5p过表达能明显抑制CAL-27细胞微管结节形成（P=0.002）,降低VEGF蛋白表达水平（P=0.000）,逆转过表达FGF5引起的VEGF表达上调（P=0.000）。结论：　miR-149-5p能抑制OSCC细胞的EMT和微管形成能力并促进细胞凋亡,作用机制与靶向抑制FGF5表达有关。     

藻红蛋白诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡与细胞周期的关系

目的 研究藻红蛋白 (PE) 对人乳腺癌 MCF-7 细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法 采用 MTT 法和 SRB 法检测 PE 对人乳腺癌 MCF-7 细胞增殖的抑制作用。采用倒置显微镜、荧光显微镜 Hoechst 33258 染色观察 MCF-7 细胞凋亡细胞形态。Annexin V-FITC/PI 双荧光染色观察细胞凋亡过程中特异的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻情况确定凋亡的出现。流式细胞仪观察 PE 对 MCF-7 细胞周期的影响。结果 PE 对 MCF-7 细胞有较强的生长抑制作用,并且呈一定的剂量依赖性,其 72 h 的 IC₅₀ 值为 147.82 μg/mL,GI₅₀ 值为 109.76 μg/mL。倒置显微镜下与基本贴壁的饱满、边沿清晰的对照组细胞比较,给药组细胞有明显的细胞变粗糙,贴壁细胞减少的现象,而且浓度越高,作用时间越长,悬浮细胞越多。荧光显微镜下可见各给药组 MCF-7 细胞出现不同程度深染亮点的细胞核质,染色质浓集固缩并伴有凋亡小体形成。激光共聚焦显微镜下可见给药组细胞膜被染成绿色,细胞核被染成红色。流式细胞仪显示 PE 可阻滞 MCF-7 细胞从 S 期进入 G₂/M 期,促使细胞凋亡。结论 PE 对 MCF-7 细胞有较强的抑制作用,可使其凋亡,其作用机制与周期阻滞有关。     

白杨素提高肿瘤坏死因子-α诱导肝癌细胞HepG2凋亡能力的研究

目的 研究白杨素提高肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肝癌细胞 HepG2 凋亡的能力,并对其分子机制进行初步探讨。方法 白杨素以不同浓度 (10、20、40 μmol/L) 单独或联合 TNF-α(10 ng/mL) 处理 HepG2 细胞后,于普通及荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化,获得细胞死亡的定性资料;流式细胞术检测 sub-G1 峰,分析峰值变化规律,获得细胞死亡的定量资料;并以 Western blotting 方法检测凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白和相应的裂解产物的变化情况及凋亡抑制蛋白 Bcl-xL、cIAPs、xIAP、cFLIP 的时间-效应变化规律。结果 形态学观察可发现白杨素联合 TNF-α处理 HepG2 细胞后,与对照组比较细胞出现明显的死亡数量增加,而单独白杨素组、TNF-α组与对照组比较则未观察到明显的细胞减少 (P＞0.05);流式细胞术分析 sub-G1 的定量资料也支持这一结果,联合处理组 sub-G1 值随着白杨素剂量增加而增大,最高达到 (27.84±0.54)%,与对照组比较有显著差异 (P＜0.05),Hochest 33342 荧光染色在联合处理组可观察到明显的核固缩细胞增加;Western blotting 检测到凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白减少、相应的活化裂解片段出现;全 caspase 酶抑制剂 z-VAD-fmk 可有效抑制联合处理组 HepG2 细胞死亡、sub-G1 峰消失比值减少,阻止凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 的活化降解;TNF-α 引起的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达量增加,随联合处理时间延长而明显下调,与对照组比较有明显差异,Bcl-xL、xIAP 等其他凋亡抑制蛋白没有明显改变。结论 白杨素能够有效提高 TNF-α诱导 HepG2 细胞凋亡的能力,NF-κB 调节的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达减少是其重要的分子机制。     

阿托伐他汀对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制

目的：探讨阿托伐他汀（ATO）对人舌鳞癌CAL-27细胞体外增殖、凋亡和迁移的影响,阐明其作用机制。方法：CAL-27细胞分为对照组和1、5、10、20及40μmol·L-1 ATO组。ATO作用后,CCK-8法检测各组CAL-27细胞存活率,克隆形成实验检测各组CAL-27细胞克隆形成率,Hoechst33342荧光染色和流式细胞术检测各组CAL-27细胞凋亡率,细胞划痕实验检测各组CAL-27细胞迁移率,Western blotting法检测各组CAL-27细胞中P53、P21、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、Caspase-9和周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6)蛋白表达水平。结果：培养24和48 h后,与对照组比较,不同浓度ATO组细胞存活率明显降低（P<0.05）。培养48 h后,与对照组比较,不同浓度ATO组细胞克隆形成率（P<0.01）和细胞迁移率（P<0.05）明显降低,40μmol·L-1 ATO组细胞基本丧失克隆和迁移能力;不同浓度ATO组细胞凋亡率明显升高（P&l...     

和厚朴酚对人舌癌CAL-27细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨和厚朴酚（HNK）对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养CAL-27细胞。并将其分为对照组和3个实验组,实验组分别加入20、40、60 μmol/L的HNK进行处理。用MTT法检测 不同浓度和厚朴酚对CAL-27细胞增殖的影响;划痕实验观察CAL-27细胞迁移能力;Hoechst33342荧光染色法和Annexin VFITC/PI法检测CAL-27细胞凋亡数及凋亡率;Western blot检测CAL-27细胞内p-Pi3k、p-Fak、Fak、MMP2、MMP9、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量。结果 HNK（0、20、40、60 μmol/L）处理24 h后CAL-27细胞增殖、迁移能力减弱;且随HNK浓度增大细胞凋亡数升高,凋亡率分别为（6.53±1.80）%、（15.24±2.06）%、（35.03±2.42）%、（48.13±4.61）%,细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9和Bcl-2蛋白表达量减少而Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加（P<0.01）。结论 HNK能抑制CAL-27细胞体外增殖及迁移,同时还能诱导其凋亡,作用机制可能与调控细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量有关。     

丹参酮ⅡA诱导人小细胞肺癌细胞凋亡及其分子机制

目的 了解丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌细胞（H446细胞）的凋亡诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法 采用MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响结果;Hoechst 33258法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响;qPCR法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡基因的影响;Westen blot法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响。结果 不同药物浓度的丹参酮ⅡA （0.3、0.6、1.25、2.5、5和10μg/ml）抑制人小细胞肺癌H446细胞增殖且呈浓度和时间依赖性;随着药物浓度的提高,人小细胞肺癌H446细胞凋亡小体的形成数量增加,高浓度组差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡基因（Bax,caspase-9、caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制基因（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡蛋白（Bax,caspase-9,caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制蛋白（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参酮ⅡA可能是通过Akt-Bax/bcl-2-caspase9-caspase3信号通路诱导人小细胞肺癌H446细胞的凋亡。     

中国地鼠口腔颊囊黏膜癌变过程凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2的表达

目的 探讨凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2在中国地鼠口腔正常黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和鳞状细胞癌组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学法、RT-PCR检测正常中国地鼠口腔黏膜上皮、单纯增生上皮、异常增生上皮和鳞癌组织中caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白及mRNA的表达。结果 在口腔黏膜癌变过程中,鳞癌组织中抑制凋亡蛋白Bcl-2表达明显高于口腔正常黏膜、上皮单纯增生、上皮异常增生（P<0.05）;异常增生上皮caspase-3、caspase-9、Bax表达均明显高于正常组（P<0.05）,但随着增生程度的加重,caspase-3、caspase-9、Bax表达明显降低（P> 0.05）。相关性分析显示,鳞癌组织中Bcl-2与Bax、caspase-3、caspase-9呈负相关（P< 0.05）。RT-PCR结果表明,与正常组织相比,鳞癌组织中Bcl-2高表达,而caspase-3、caspase-9、Bax的mRNA表达显著下调（P<0.05）。结论 本实验在中国地鼠鳞癌组织中caspase-3、caspase-9、Bax表达降低而Bcl-2表达上升,揭示了caspase-3、caspase-9、Bax、Bcl-2表达与口腔鳞癌的发生、发展密切相关,可以为口腔颊囊黏膜癌的基因治疗提供一些线索或并为评价OSCC的生物学特征及预后提供参考。     

人脐带间充质干细胞对肝癌细胞增殖性及凋亡的影响

目的 探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchyma cell, MSC)对肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)癌细胞增殖和凋亡的影响,为HCC的治疗提供新的思路。 方法 取50%覆盖率的MSC培养皿,换上新鲜的DMEM/F-12培养基,待其培养至100%的覆盖率后收集培养基备用,即为MSC条件培养基。用新鲜DMEM/F-12培养基加上等量的MSC条件培养基的混合培养基培养HepG₂人类肝癌细胞株24、48和72h,使用MTT法测定HepG₂细胞的增殖活性、通过Hoechest33342和PI双染色后在荧光倒置显微镜下观察计数以测定HepG₂细胞的凋亡、用Transwell侵袭实验和黏附实验测定HepG₂细胞侵袭能力以及通过Western blot法检测凋亡相关信号通路蛋白的表达。 结果 混合培养基培养HepG₂细胞24h后,对其生长和凋亡及侵袭黏附能力没有显著影响(P>0.05)。但是培养延长到48h和72h后,HepG₂细胞的活性、增殖能力、侵袭能力和黏附能力都受到显著的抑制,这些变化伴随着细胞分裂相关因子Ki-67、PCNA和组蛋白H3磷酸化水平下调,以及细胞凋亡执行者caspase-3的激活和抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制。 结论 体外间接共培养实验表明,人脐带间充质干细胞具有抑制肝脏肿瘤细胞增殖及促进其凋亡的作用。     

PDE5基因沉默对肾透明细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨PDE5基因对肾透明细胞癌细胞株786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成PDE5 siRNA序列,按照HiPerFect转染试剂盒操作手册转染786-O细胞.采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)和Western blot法检测转染后PDE5 基因的表达,通过WST-1法检测细胞增殖情况,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性.结果 与空白对照组和阴性对照组相比较,PDE5 siRNA转染组的mRNA及蛋白表达水平显著降低,786-O细胞增殖能力明显受到抑制,caspase-3活性明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 siRNA干扰PDE5基因表达可抑制肾透明细胞癌细胞株786-O细胞的增殖并促进凋亡.     

DADS诱导人胃癌BGC823细胞凋亡及其与$mac和survivin表达的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导胃癌BGC823细胞凋亡及其机制。方法实验分DADS处理组和DADS未处理组．进行体外细胞培养,通过MTr法检测DADS对胃癌BGC823细胞生长的影响、通过流式细胞术检测细胞周期的分布、通过免疫组化检测smac和survivin蛋白的表达。结果MTT实验显示DADS作用于BGC823细胞后,细胞生长抑制率呈时间、浓度依赖性增高,流式细胞术显示DADS明显将细胞周期阻滞于G2/M期,且呈浓度、时间依赖性。免疫细胞化学显示处理组较未处理组snlae表达明显增加,而survivin蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论DADS可体外抑制人胃癌BGC823细胞增殖,使该细胞阻滞于G2／M期,其机制可能与上调smac及下调survivin的表达有关。     

巨噬细胞炎症蛋白-1β对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖和凋亡的影响

目的 探讨β亚族趋化因子受体5(CCR5)在不同人舌鳞癌细胞株的表达情况以及其配体巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1β)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响.方法 采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)MIP-1β的相应受体CCR5的表达进行检测;根据MIP-1β刺激浓度的不同,细胞被随机分为4组:0 ng/mL组(对照组)、10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组.用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测MIP-1β在刺激12、24、48 h时,对CAL-27细胞增殖的影响;实验分组同前,分别用0、10、20、40 ng/mL IP-10处理24 h后收集细胞,用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测CAL-27细胞的凋亡情况.结果 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CCR5在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色;和对照组相比,MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用.在12 h、24 h时,3种浓度的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);48 h时,10 ng/mL、20 ng/mL的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),但40 ng/mL的MIP-1β对CAL-27细胞的增殖无影响(P>0.05);在24 h时,40 ng/mL MIP-1β组的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),而10 ng/mL、20 ng/mL MIP-1β组细胞凋亡率和对照组之间均无显著差异(P>0.05).结论 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用,但相对较高浓度的MIP-1β对CAL-27细胞的凋亡也有促进作用.随着较高浓度MIP-1β作用时间的延长,促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由MIP-1β的促凋亡作用的逐步发挥所引起的.     

岩大戟内酯4种活性单体对人脑胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究岩大戟内酯4种活性单体对人脑胶质瘤U251细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法 用不同浓度的岩大戟内酯A （JA）、17-羟-岩大戟内酯A （HJA）、岩大戟内酯B （JB）、17-羟-岩大戟内酯B （HJB）处理U251细胞,分别在12、24、48h时间点,用MTT法检测细胞增殖抑制率;在24h时间点,通过LDH释放检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,Western blot法检测凋亡相关信号蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3的表达。结果 JA、HJA对U251细胞无作用。与空白对照组比较,JB、HJB使细胞增殖均受到抑制,并呈浓度和时间依赖关系（P<0.05）;使LDH释放率、早期凋亡率、Bax和cleaved-caspase-3表达均随着给药浓度的升高而增大,而Bcl-2的表达降低（P<0.05）。结论 JB和HJB可能通过诱导细胞凋亡而对人脑胶质瘤U251细胞产生作用。     

乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖迁移和诱导细胞凋亡的研究

目的 研究乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导细胞凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用不同稀释度的乳浆大戟提取液处理人宫颈癌SiHa细胞,MTT实验观察细胞生长抑制现象,吖啶橙染色荧光显微镜观察凋亡细胞的核形态改变并测定凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移能力和侵袭能力,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的表达情况。结果 乳浆大戟对人宫颈癌SiHa细胞有增殖抑制作用,该作用有时间和浓度依赖性。乳浆大戟处理后的人宫颈癌SiHa细胞,凋亡指数和凋亡率均显著上升,均有时间和浓度依赖性。Transwell法检测显示,乳浆大戟提取液处理后的SiHa细胞,迁移能力和侵袭能力显著下降。分光光度法检测发现,乳浆大戟处理后的SiHa细胞中,caspase-3和caspase-9均表达增强。结论 乳浆大戟提取液具有抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其作用通路有caspase-3和caspase-9的参与。     

Altered gene expression reveals molecular mechanisms underlying oridonin-induced apoptosis of multiple myeloma LP-1 cells

Objective: To investigate the effect of oridonin on proliferation and invasion of human multiple myeloma LP-1 cells and the underlying mechanism. Methods: LP-1 cells in culture medium in vitro were treated with oridonin at the different concentration. Cell proliferation was measured by Microwave Theory and Techniques (MTT) assay and cell apoptotic rate was detected by flow cytometry. Morphology of cell apoptosis was observed by transmission electron microscope. Expressions of Bax, Bcl-2, Caspase-3, NF-κB as well as I-κB mRNA were detected by real-time PCR. Results: The MTT assays and flow cytometry revealed that oridonin could inhibit the growth of LP-1 cells and cause apoptosis significantly; the suppression was both in time- and dose-dependent manner. Marked morphological changes of cell apoptosis were found under a transmission electron microscope after the cells were treated with oridonin at 25 μmol/L for 24 h. Along with the apoptotic process, Bcl-2, Caspase-3,NF-κB gene expressions were down-regulated (P<0.05). On the contrast, the Bax and I-κB gene expressions were up-regulated (P<0.05). Conclusion: Oridonin could inhibit the proliferation of LP-1 cells via inducing apoptosis. We concluded that oridonin induces apoptosis in LP-1 cells via activation of caspase-3 as well as down-regulation of Bcl-2 and up-regulation of Bax expression. The results suggested that oridonin could induce apoptosis of LP-1 cells through mitochondria- and caspase3-dependent pathways. Meanwhile, the inhibition of NF-κB and the activation of I-κB indicate pro-apoptotic stimuli. In one word, oridonin might be an important potential anti-myeloma reagent.     

LncRNA PCBP1-AS1对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA PCBP1-AS1（LncRNA PCBP1-AS1）对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及其可能机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测OSCC细胞中PCBP1-AS1的表达水平;采用Lipofectamine 2000将pcDNA-PCBP1-AS1及pcDNA-control转染入口腔鳞癌CAL-27细胞;甲基噻唑基四唑实验检测CAL-27细胞的增殖能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞的凋亡率;蛋白免疫印迹法检测细胞周期依赖蛋白激酶1（CDK1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活因子3（STAT3）信号通路相关蛋白表达。结果与正常口腔上皮细胞比较,OSCC细胞CAL-27、Tca8113、KB中PCBP1-AS1的表达水平显著降低（P < 0.01）;PCBP1-AS1过表达可显著抑制CAL-27细胞的增殖、侵袭（P < 0.01）,促进细胞凋亡（P < 0.01）;PCBP1-AS1过表达可显著抑制CDK1、MMP-2、Bcl2、p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达（P < 0.01）,而促进Bax的蛋白表达（P < 0.01）。结论PCBP1-AS1过表达可抑制OSCC细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡,其作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。     

吗啡对胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制

目的探讨吗啡对人胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制。方法体外培养的HGC27细胞,用不同浓度吗啡处理24、48、72 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;实验组用吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）处理HGC27细胞48 h,对照组加入不含药物的培养基,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测细胞凋亡蛋白酶-3（Casepase-3）相对活性、western blot法检p16、bcl-2、bax基因表达情况。结果吗啡（浓度0.025～0.4μmol/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为9.4%、11.5%、21.4%,而对照组凋亡率仅为2.2%;Casepase-3相对活性显著增加,处理后Casepase-3相对活性分别为（1.32±0.08）、（1.85±0.06）和（2.45±0.07）,对照组为（0.92±0.07）;p16和bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,呈剂量依赖性。结论吗啡能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16表达,进而引起bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,并增加细胞Casepase-3活性有关。     

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。     

DADS抑制XIAP介导的人胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)过表达胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法建立XIAP过表达HGC27细胞株;实验设置为Vector组、Vector+DADS组、XIAP组和XIAP+DADS组;DADS处理细胞后,Western blotting检测各组XIAP;MTT和平板克隆实验分析各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果XIAP过表达细胞增殖率和克隆形成率增高,迁移和侵袭的细胞数增加;DADS处理XIAP过表达细胞后,XIAP表达降低的同时,细胞增殖率和克隆形成率下降,迁移和侵袭的细胞数减少。结论过表达XIAP促进HGC27细胞增殖和迁移侵袭;DADS下调XIAP,抑制HGC27细胞增殖、迁移和侵袭。