三氧化二砷对SPCAⅠ/人肺腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡作用的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对SPCAⅠ/人肺腺癌细胞株的抗增殖效应及诱导细胞凋亡的作用。方法将SPCAⅠ/人肺腺癌细胞株培养传代,分别加入不同浓度的三氧化二砷,作用24小时后,分别以酶标仪检测细胞抑制率、FACSAr-ia流式细胞仪检测细胞凋亡率、倒置显微镜观察凋亡细胞形态。结果不同浓度的三氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCA/Ⅰ均有直接的抑制作用,其抑制率与所用药物浓度呈正相关;三氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCAⅠ/有诱导凋亡的作用,细胞凋亡率明显增加。倒置显微镜见细胞由原来贴壁生长而逐渐脱落、外形变圆、体积缩小、折光性增强,核染色质凝集,细胞裂解。结论三氧化二砷能通过诱导细胞凋亡,直接抑制人肺腺癌细胞株SPCAⅠ/增殖。     

三氧化二砷对SPCA/I人肺腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二砷( As2 O3)对SPCA/I人肺腺癌细胞株的抗增殖效应及诱导细胞凋亡的作用.方法 将SPCA/I人肺腺癌细胞株培养传代,分别加入不同浓度的三氧化二砷,作用24小时后,分别以酶标仪检测细胞抑制率、FACSAria流式细胞仪检测细胞凋亡率、倒置显微镜观察凋亡细胞形态.结果 不同浓度的三氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCA/I均有直接的抑制作用,其抑制率与所用药物浓度呈正相关;二氧化二砷体外对人肺腺癌细胞株SPCA/I有诱导凋亡的作用,细胞凋亡率明显增加.倒置显微镜见细胞由原来贴壁生长而逐渐脱落.外形变圆、体积缩小、折光性增强,核染色质凝集,细胞裂解.结论 三氧化二砷能通过诱导细胞凋亡,直接抑制人肺腺癌细胞株SPCA/I增殖.     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)在体外诱导人肝癌细胞BEL—7402凋亡的作用。[方法]用MTT、琼脂糖凝胶电泳、原位末端转移酶技术(TUNEL)、透射电镜及流式细胞仪等方法观察细胞凋亡。[结果]As2O3在体外对BEL—7402细胞生长具有显著抑制作用，随着作用时间的延长和As2O3剂量的增加，抑制作用随之增强。As2O3诱导50％以上BEL—7402细胞发生凋亡的浓度为2μmol/L。经As2O3作用后的BEL—7402细胞，在琼脂糖电泳中出现了典型的DNA凋士条带，用流式细胞仪检测出了典型的凋亡峰，电镜下观察到了典型的凋亡细胞形态学改免令细胞核仁消失，染色质浓缩、碎裂，聚于核膜边缘并形成凋亡小体。[结论]As203在体外能有效诱导人肝癌细胞BEL—7402发生凋亡。     

蛋白磷酸酶2A在三氧化二砷诱导NB4、MR2细胞株凋亡过程中的变化

本研究探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO）诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中蛋白磷酸酶2A（PP2A）活性与表达的变化．不同浓度ATO单用或与冈田酸（OKA）联合作用于NB4、MR2细胞，然后采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响，用瑞氏染色法观察细胞形态学变化，流式细胞术测定细胞凋亡率，丝／苏氨酸磷酸化酶检测试剂盒分析药物对细胞内PP2A活性的影响，Western blot检测细胞内PP2A各亚基表达。结果表明：蛋白磷酸酶抑制剂OKA能明显增强ATO对NB4、MR2细胞的增殖抑制；OKA能促进ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡；ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中PP2A活性均下降，且随ATO浓度的增加PP2A活性下降越明显；与OKA连用后PP2A活性下降更加明显；在ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中，PP2A／A表达较对照组均明显减少，而B和C亚基表达与对照组比较变化不明显。结论：在ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡过程中，细胞内PP2A／A表达减少，PP2A活性降低．且随ATO浓度增加PP2A活性下降越明显，抑制PP2A活性有助于ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡，     

三氧化二砷体外诱导宫颈癌细胞株凋亡及其机制的研究

目的:研究三氧化二砷体外能否诱导宫颈癌细胞株(HeLa细胞)发生凋亡及其相关机制。方法:采用透射电镜、DNA Ladder、TUNEL的方法进行凋亡检测,用ECL Westernblot的方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果:三氧化二砷体外作用于HeLa细胞后,透射电镜观察到了凋亡小体;DNA Ladder法检测到了凋亡时DNA降解形成的梯带;TUNEL法也检测到HeLa细胞有DNA的断裂。在凋亡过程中,凋亡相关基因bcl-2的表达下调,而p53基因的表达没有明显改变。结论:三氧化二砷体外能诱导HeLa细胞发生凋亡,其机制与bcl-2基因的表达下调有关。     

三氧化二砷对肝癌细胞株HLE的细胞毒和诱导凋亡作用

目的：研究As2O3对肝癌细胞株HLE细胞毒和诱导凋亡作用。方法：应用MTT染色，流式细胞仪和电子显微镜观察As2O3对HLE细胞株的诱导凋亡作用和形态学改变，应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)测试肝癌细胞内[Ca^2 ]i变化。结果：As2O3对肝癌细胞株HLE具有诱导凋亡作用，CLSM检测肝癌细胞内[Ca^2 ]i高浓度As2O3作用下48h达最高峰；在低浓度下96h达高峰。结论：As2O3对肝癌细胞具有较强的细胞毒和诱导细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷诱导套细胞淋巴瘤细胞株凋亡及机制研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(ATO)诱导套细胞淋巴瘤(MCL)细胞株凋亡的效应及其机制。以不同浓度的ATO处理细胞,再通过MTT法检测细胞MCL细胞株(jeko-1,mino,JVM-2)增殖;用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测jeko-1细胞的凋亡;用DiOC6(3)染色流式细胞术检测jeko-1细胞的线粒体跨膜电位丢失;用Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白MCL-1,BCL-2,PUMA,NOXA,cCaspase-3,cCaspase-9,cPARP在ATO处理前后的表达变化。结果表明:ATO抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞凋亡,并且引起MCL细胞线粒体跨膜电位丢失,引起MCL-1,PUMA,cyclin D1蛋白表达水平降低,cPARP,cCaspase-3,cCaspase-9表达水平增加,不影响BCL-2,NOXA表达。结论:ATO能有效抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞株凋亡,其中细胞凋亡的线粒体途径起着重要的作用。     

三氧化二砷诱导犬髂动脉平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的；研究三氧化二砷诱导犬髂动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth musclecell，VSMC）凋亡的作用。方法：采用MTT、细胞生长曲线、倒置相差显微镜、细胞爬片HE染色、透射电镜等观察三氧化二砷作用后VSMC的变化。结果：VSMC细胞与三氧化二砷共孵育后出现细胞数目减少，脂肪颗粒增多；电镜等观察到核膜皱缩、核染色质凝结、边集等细胞凋亡现象，并且在一定的范围内此现象随药物浓度的增加而明显。结论：一定浓度的三氧化二砷能抑制VSMC细胞的生长，导致细胞变性，并诱导细胞凋亡。提示三氧化二砷作为涂层支架的药物可以抑制的平滑肌细胞生长，促进平滑肌细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节

目的探讨细胞内巯基、维甲酸、Ｃａｓｐａｓｅ酶与三氧化二砷诱导细胞凋亡之间的关系。方法采用ＮＢ４、ＨＬ６０细胞为体外模型,观察不同巯基化合物、维甲酸及Ｃａｓｐａｓｅ酶抑制物对三氧化二砷诱导细胞凋亡的影响。结果①乙酰半胱氨酸能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,二巯基硫氨（ＢＳＯ）则增强三氧化二砷诱导的细胞凋亡,单巯基甘油,二巯基丙醇对三氧化二砷诱导的细胞凋亡无影响;②Ｃａｓｐａｓｅ抑制剂ＺＶＡＤ．ｆｍｋ可阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡,而ＹＶＡＤ．ｆｍｋ不能阻断三氧化二砷诱导的细胞凋亡;③在ＮＢ４细胞,维甲酸与三氧化二砷有拮抗作用,但在ＨＬ６０细胞中可产生协同作用。结论①三氧化二砷通过与细胞内游离巯基结合,进而改变细胞内信号传导,选择性激活Ｃａｓｐａｓｅ酶,导致细胞凋亡;②维甲酸对三氧化二砷诱导细胞凋亡的调节作用呈细胞特异性。     

三氧化二砷诱导MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控研究

为了研究三氧化二砷（As2O3）诱导人类骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型（MDS—RAEB）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控机制，采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验（TRAP—ELISA）检测端粒酶活性；RT—PCR法检测端粒酶逆转录酶（hTERT）、TRF1（TTAGGG repeat binding factor 1）、TRF2（TTAGGG repeat binding factor 2）、bcl-2、bax等基因mRNA水平的表达；磷脂酰丝氨酸（PS）转位等方法检测细胞凋亡，结果表明：1—8μmol／L As2O3诱导MUTZ-1细胞凋亡呈时间、浓度依赖关系。在该浓度范围内，As2O3可下调细胞端粒酶活性。且端粒酶活性下调与凋亡细胞阳性率呈明显负相关（r=一0．938，P=0．018）。MUTZ-1细胞经As，01作用后，hTERT基因mRNA表达下调，并与端粒酶活性变化呈正相关（r=0．783，P=0.022），但As2O3对TRF1及TRF2基因mRNA表达没有明显影响.MUTZ-1细胞端粒酶活性受抑制同时，伴有bcl-2 mRNA表达下调及bcl-2／bax比值下降结论：As2O3可能通过抑制细胞端粒酶活性及hTERT表达，诱导MUTZ-1细胞凋亡。As2O3抑制MUTZ-1细胞端粒酶活性可能是诱导该凋亡机制之一。     

地特胰岛素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖及凋亡的影响

目的：探讨地特胰岛素对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法：用10 U/L地特胰岛素处理人乳腺癌细胞株MCF-7,处理不同时间后,用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用Western blotting法检测胰岛素受体（insulin receptor,INS-R）和胰岛素样生长因子1类受体（type 1 insulin-like growth factor receptor,IGF-1R）的表达,用real-time PCR法检测B细胞淋巴瘤因子2（B cell lymphoma 2,Bcl 2）、IGF-1R、Myc-1和caspase-3的mRNA水平.结果：人乳腺癌细胞株MCF-7经地特胰岛素处理后,细胞增殖水平随处理时间的延长呈现增高趋势（r=0.753,P ＜0.01）,细胞凋亡水平则随处理时间的延长而降低（r=-0.821,P＜0.01）;INS-R和IGF-1R蛋白的表达水平随处理时间的延长而升高,之后有所降低;凋亡抑制基因Bcl-2、IGF-1R和Myc-1的mRNA水平也呈类似变化趋势（r=0.813,P＜0.01）,而促凋亡相关基因caspase-3则呈现相反的变化趋势（r=-0.719,P＜0.01）.结论：地特胰岛素处理可以促进人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖并抑制其凋亡,其机制可能与促进凋亡抑制基因表达以及抑制凋亡基因表达有关.     

三氧化二砷对骨髓瘤细胞系U266抑制增殖及诱导凋亡的机制研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266的生物学效应及其机制。用MTT法观察As2O3对U266细胞增殖的影响,用流式细胞术、DNA凝胶电泳法分析As2O3对U266细胞凋亡的影响,以RT-PCR法检测2μmol/LAs2O3不同处理时间对U266细胞人端粒酶逆转录酶蛋白催化亚单位(hTERT)mRNA的表达变化,用Western blot法检测As2O3不同处理时间对U266细胞procaspase-3、bcl-2及hTERT蛋白水平的表达变化。结果表明:As2O3能明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈现剂量和时间依赖性;2μmol/L As2O3不同时间处理U266细胞后procaspase-3蛋白及hTERT mRNA、蛋白表达呈时间依赖性降低,而bcl-2蛋白表达未发生变化。结论:As2O3通过改变线粒体跨膜电位,触发了U266细胞的线粒体凋亡途径,导致了caspase-3的活化,最终诱导U266细胞凋亡;hTERT表达下调也是As2O3诱导U266细胞凋亡的重要作用机制。     

三氧化二砷诱导人胃癌细胞株MGC-803细胞凋亡的研究

【目的】为探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对胃癌细胞的作用及可能的机制。【方法】用不同浓度的Ａｓ２Ｏ３作用于培养的胃癌细胞株ＭＧＣ－８０３细胞。【结果】噻唑蓝（ＭＴＴ）细胞活力测定显示Ａｓ２Ｏ３能明显抑制ＭＧＣ－８０３细胞生长;进一步用Ｈｏｅｇｈｅｓ３３３４２和碘化丙啶（ＰＩ）双荧光流式细胞仪（ＦＣＭ）检测和琼脂糖ＤＮＡ电泳,ＭＧＣ－８０３细胞表现为明显凋亡特征;扫描电镜显示凋亡的形态学特征。【结论】Ａｓ２Ｏ３能有效地抑制胃癌细胞的生长增殖,并具有时—效和量—效关系。     

亚硒酸钠和三氧化二砷诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡机制的比较

为比较亚硒酸钠（Na2SeO3）和三氧化二砷（As2O3）诱导NB4细胞凋亡的作用机制，本研究应用MTT实验、DNA琼脂糖电泳，细胞内DNA含量检测研究细胞生长抑制和细胞凋亡，用化学发光法，化学比色法检测细胞内活性氧和还原型谷胱甘肽，用流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位，结果显示：5μmol/L亚硒酸钠和1μmol/L三氧化二砷作用24小时后均能诱导NB4细胞凋亡。在诱导细胞凋亡的过程中，亚硒酸钠和三氧化二砷组均伴有细胞内活性氧水平的提高和线粒体膜电位下降，但在亚硒酸钠组还伴有细胞内还原型谷胱甘肽下降，用N乙酰半胱氨酸提高细胞内还原型谷胱甘肽后，增强了硒诱导NB4细胞细胞和氧化应激的作用，但是抑制了砷诱导细胞凋亡和氧化应激的作用。结论：亚硒酸钠和三氧化二砷同样可以诱导NB4细胞的凋亡，但是二的作用机制可能存在差异。     

亚砷酸联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导人淋巴瘤细胞Raji凋亡的研究

本研究探索亚砷酸、硼替佐米对人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的协同诱导凋亡作用。小剂量亚砷酸、硼替佐米单用以及二者联合分别处理Raji细胞，用台盼蓝拒染法计数活细胞数和细胞生长抑制率；用流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化；以Western blot检测Caspase-3、BCL-2、BAX、JNK2、IκB-α等凋亡相关元件在蛋白水平的变化。结果表明：相比于单用亚砷酸和硼替佐米，以小剂量亚砷酸联合硼替佐米处理Raji细胞后，细胞生长受明显抑制（P〈0．01），细胞凋亡比例增加（P=0.001），但细胞周期未见明显阻滞；在蛋白水平，细胞凋亡相关元件Caspase-3、BAX和IκB-α表达增加，而BCL-2和JNK2表达量下降。结论：小剂量亚砷酸联合硼替佐米能更有效地诱导Raji细胞凋亡，并具有协同作用。该作用可能是通过抑制NF—κB和JNK2通路实现的。     

AS_2O_3逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(As2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制。以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象。采用SRB法检测As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨As2O3对恶性淋巴瘤细胞周期的影响。结果表明:①As2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMT1表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加。结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长。     

三氧化二砷诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡与细胞周期阻滞

本研究探讨研究三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤Raji细胞株凋亡诱导的作用特点及其机制。用MTT比色法观察不同浓度As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应，电子显微镜观察不同浓度As2O3作用不同时间后细胞的凋亡形态，DNA-ladder琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带，流式细胞术检测Raji细胞凋亡、细胞周期分布。结果表明：1—8μmol／LAs2O3能明显抑制Raji细胞的活力，并存在一定的量效、时效关系。2—8μmol／L浓度的As2O3可以诱导Raji细胞周期阻滞及凋亡，而1μmol／LAs2O3不诱导细胞凋亡，只是通过细胞周期阻滞作用抑制细胞增殖。结论一定浓度三氧化二砷可以抑制Raji细胞的增殖，阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡。细胞周期阻滞伴随细胞凋亡而发生。