屈洛昔芬逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7／ADR多药耐药性的研究

目的：研究屈洛昔芬（DRO）对乳腺癌耐药细胞株（MCF7／ADR）多药耐药性（MDR）的影响。方法：应用MTT，半定量RT－PCR和免疫细胞化学染色，研究DRO对MCF7／ADR药物敏感性，耐药相关基因MDR1，谷胱甘肽S转移酶Pi(GST-π），拓扑异构酶Ⅱα（Topo Ⅱα)和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。流式细胞技术观察细胞内药物积累。结果：在20，10和5μmol/L浓度时DRO对MCF7／ADR耐药性的逆转倍数分别为16，8和3倍，逆转强度与同类化合物三苯氧胺相当。DRO处理后，MDR1和GSTπ基因表达水平明显降低。DRO使ADR在细胞内的积累分别增加到2.5(20μmol/L),2.0(10μmol/L)和1.5(5μmol/L)倍。结论：DRO具有较强的逆转MCF7／ADR耐药性的作用，其逆转机制是多途径的。     

三氧化二砷逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药的机制研究

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞耐药性的逆转作用及其相关机制。方法　采用MTT法检测As2 O3 的细胞毒性及非细胞毒性剂量 ,对MCF 7/ADM细胞药敏性的影响。以荧光分光光度计测定细胞内药物浓度的改变 ,明确As2 O3 对MCF 7/ADM的逆转作用。同时 ,于逆转前后分别采用生化方法测定谷胱甘肽S 转移酶 (GSTs)酶活性 ,RT PCR方法检测GST πmRNA表达水平的改变。结果　As2 O3 的非细胞毒性剂量为 0 .2 μmol/L ,低毒剂量为 0 .8μmol/L。0 .2 μmol/LAs2 O3 可增加MCF 7/ADM细胞内阿霉素 (ADM)浓度 ,使细胞MCF 7/ADM的IC50 由原来的5 3.74 μmol/L降低至 2 5 .0 μmol/L ,其逆转倍数为 2 .1倍。在 0 .2 μmol/L、0 .8μmol/LAs2 O3 作用前后 ,GSTs酶活性有显著性改变 ,由 2 9.6 8± 0 .2 9(U/ml)分别降低为 19.2 9± 2 .10 (U/ml)、12 .6 6± 2 .78(U/ml) ,P <0 .0 5 ,而GST πmRNA的表达水平也呈不同程度的下调。结论　As2 O3 可部分逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对ADM的耐药性 ,其逆转机制可能与细胞内GST π的改变有关。     

屈洛昔芬与他莫昔芬对K562/A02耐药性影响的比较

目的:比较屈洛昔芬 (droloxifene,DRO)和他莫昔芬 (tamoxifen,TAM)对K562/A02耐 药性的逆转作用。方法:应用 MTT法、RT PCR和免疫细胞化学 染色观察细胞毒活性和MDR1、 GSTpi耐药基因表达变化,采用流 式细胞仪测定细胞内多柔比星 (ADR)浓度。结果:在20、10和5 mmol/L浓度时,DRO和TAM均 显著逆转K562/A02的耐药性, DRO和TAM的逆转倍数相比较 差异无统计学意义。MDR1和 GSTpi的mRNA和蛋白表达在 DRO和TAM处理后第2天开始 降低,第5天出现明显降低。20 mmol/L浓度的DRO和TAM分别 孵育K562/A02,可使其细胞内 ADR积累分别增加2.9和3.0 倍。结论:DRO与TAM类似,有 较强的逆转活性,可明显抑制 MDR1和GSTpi基因的表达及增 加细胞内ADR的积累。     

米非司酮逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐多柔比星机制的探讨

目的 探讨米非司酮对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转耐药作用.方法 以亲本乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞MCF-7/ADR为研究对象,分别应用MIF进行干预后,流式细胞仪检测MIF作用前后瘤细胞P-gp的表达、细胞内阿霉素蓄积量的变化以及细胞周期的分布.结果 (1)10 μmol/L MIF作用72小时后,MCF-7/ADR细胞P-gp表达率[(23.21±1.80)％]明显高于MCF-7细胞[(19.37±2.37)％,P＜0.05].(2)5 μmol/L ADR处理后,MCF-7/ADR细胞内ADR蓄积量为(47.13±4.11)％,低于MCF-7细胞[(60.24±2.61)％,P＜0.05].(3) 10 μmol/L MIF联合5 μmol/L ADR处理细胞,MCF-7/ADR和MCF-7细胞内ADR的蓄积量分别为(82.72±2.42)％及(88.63±2.75)％ (P ＞0.05);但均较单用ADR时升高(均P＜0.01).(4) MIF作用前,MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例[(77.21±3.10)％]高于MCF-7细胞G0/G1期比例[(59.05±2.16)％,P＜0.05];MCF-7/ADR细胞S期比例明显低于MCF-7细胞(P＜0.05).经10 μmol/L MIF作用后,MCF-7细胞G0/G1期比例(75.28±2.53)％较MIF作用前明显升高(P＜0.05);S期比例则较MIF作用前显著降低(P＜0.05);MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例和S期比例分别为(80.13±2.72)％及(13.52±1.03)％,与MIF作用前比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);两种瘤细胞的G2/M期比例与MIF作用无关(P＞0.05).结论 (1)MIF可以逆转MCF-7/ADR的耐药性,其作用机制与降低细胞P-gp含量、增加细胞内ADR蓄积量有关.(2) 10 μmol/L浓度的MIF对MCF-7/ADR细胞周期分布影响不大.     

乳腺癌患者肿瘤组织及外周血多药耐药基因表达的临床意义

目的:检测多药耐药基因在乳腺癌患者肿瘤组织及外周血中的表达,探讨其临床意义。方法:荧光定量RT-PCR法检测40例原发性乳腺癌患者肿瘤组织及外周血、13例辅助化疗后乳腺癌患者外周血及10例乳腺良性疾病组织与外周血中mdr1的表达情况。结果:40例原发性乳腺癌患者肿瘤组织mdr1阳性表达率为67.5%(27/40),与对照组组织(无阳性表达)相比差异有统计学意义,χ2=14.380,P=0.001;乳腺癌患者外周血mdr1阳性表达率为22.5%(9/40),高于对照组(无阳性表达),χ2=4.486,P=0.034;化疗后乳腺癌患者外周血中mdr1的表达率为53.8%(7/13),高于化疗前外周血mdr1的表达,二者差异有统计学意义,χ2=12.345,P=0.001。结论:乳腺癌患者存在先天性和获得性耐药性,检测肿瘤组织和外周血mdr1表达对制定个体化化疗方案有指导意义。     

氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用的研究

目的研究氯丙嗪对耐药细胞系K562/AO2多药耐药逆转作用.方法应用免疫组化观察K562/AO2细胞系的耐药蛋白表达情况,用MTT法测定不同浓度的氯丙嗪对K562/AO2细胞系耐药逆转作用,用流式细胞术测定不同浓度的氯丙嗪与K562/AO2细胞作用后细胞内罗丹明的蓄积情况,用半定量RT-PCR法测定氯丙嗪对K562/AO2细胞多药耐药基因(mdr-1)mRNA表达的影响.结果K562/AO2细胞不但P-gp表达阳性,而且肺耐药相关蛋白(lung resistanceelatedprotein,LRP)表达也阳性;氯丙嗪能增强多柔比星对K562/AO2细胞的杀伤作用(单用ADM组、氯丙嗪0.75 μg/mL+ADM组、氯丙嗪1.5μg/m L+ADM组和氯丙嗪3μg/mL+ADM组对K562/AO2的抑制率分别为5.2%、25.9%、39.1%和74.8%)增加K562/AO2细胞内罗丹明的蓄积(对照组、氯丙嗪0.75 μg/mL组、氯丙嗪1.5 μg/mL组和氯丙嗪3μg/mL组细胞内的荧光强度的均值分别为1.87、10.28、48.75和65.63)对K562/AO2细胞mdr-1 mRNA表达无明显影响(对照组mdr-1和β-actin的面积比为0.41,氯丙嗪组为0.42).结论氯丙嗪对K562/AO2细胞的耐药有较强的逆转作用,并呈剂量依赖关系.     

肺癌转移抑制基因和多药耐药蛋白的表达及意义

目的 :研究肺癌转移抑制基因 (KAI1)和多药耐药蛋白 (MRP)的表达水平及内在联系。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)分别检测肺癌组织中MRP和KAI1。结果 :在肺癌组织中MRP阳性表达率为 4 5 8% (2 2 4 8) ,KAI1阳性表达率为 2 2 9% (11 4 8)。在Ⅰ、Ⅱ期患者中 ,KAI1基因为高表达 ;在Ⅲ期患者中 ,MRP基因为高表达。结论 :早期肺癌患者KAI1基因呈高表达 ,而在晚期患者MRP基因高表达 ,两者之间可能通过p5 3基因来调控     

ER通路信号传导与选择性雌激素受体调节剂耐药机制研究

内分泌治疗是乳腺癌综合治疗中的重要措施之一,此疗法面临的最大难题是原发性、继发性耐药,其确切机制尚不清楚.雌激素受体(ER)信号传导途径及各辅助因子的分子调控是近年来研究的重点,现综述有关研究进展,以期为临床选择性ER调节剂(SERM)耐药病例的治疗及耐药逆转提供帮助.     

肺癌转移抑制基因和多药耐药蛋白的表达及意义

目的：研究肺癌转移抑制基因(KAI1)和多药耐药蛋白(MBP)的表达水平及内在联系。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)分别检测肺癌组织中MRP和KAI1。结果：在肺癌组织中MRP阳性表达率为45．8％(22／48)，KAI1阳性表达率为22．9％(11／48)。在I、Ⅱ期患者中，KAI：基因为高表达；在Ⅲ期患者中，MRP基因为高表达。结论：早期肺癌患者KAIl基因呈高表达，而在晚期患者MRP基因高表达，两者之间可能通过p53基因来调控。     

屈洛昔芬与他莫昔芬对K562／A02耐药性影响的比较

目的：比较屈洛昔芬(droloxifene，DR0)和他莫昔芬(tamoxifen，TAM)对K562／A02耐药性的逆转作用。方法：应用MTT法、RT-PCR和免疫细胞化学染色观察细胞毒活性和MDRl、GSTpi耐药基因表达变化，采用流式细胞仪测定细胞内多柔比星(ADR)浓度。结果：在20、10和5mmol／L浓度时，DR0和TAM均显著逆转K562／A02的耐药性，DR0和TAM的逆转倍数相比较差异无统计学意义。MDR1和GSlTpi的mRNA和蛋白表达在DR0和TAM处理后第2天开始降低，第5天出现明显降低。20mmol／L浓度的DR0和TAM分别孵育K562/A02，可使其细胞内ADR积累分别增加2．9和3．O倍。结论：DR0与TAM类似，有较强的逆转活性，可明显抑制MDRl和GSTpi基因的表达及增加细胞内ADR的积累。     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

目的研究甲基莲心碱逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性;PI 染色流式细胞计数测定细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞 P-gp 的表达;HPLC 检测细胞内药物浓度。结果 Nef(1、5、10μmol·L~(-1))对人乳腺癌细胞(MCF-7/S)和耐阿霉素人乳腺癌细胞(MCF-7/ADM)无显著毒性作用。阿霉素(ADM)对敏感株 MCF-7/S 的 IC_(50)为0.13μg·mL~(-1)而对 MDR 细胞株 MCF-7/ADM 的 IC_(50)为11.63μg·mL~(-1),MCF-7/ADM 细胞较MCF-7/S 细胞对 ADM 耐药88倍,1、5、10μmol·L~(-1) Nef 能使 ADM 对 MCF-7/ADM 细胞的 IC_(50)从11.63μg·mL~(-1)依次下降至4.59、2.44、0.27μg·mL~(-1)。MCF-7/ADM 细胞对 ADM 具有凋亡抗性,Nef(1、5、10μmol·L~(-1))能克服 MCF-7/ADM 细胞对 ADM 的凋亡抗性。MCF-7/ADM 细胞较 MCF-7/S 细胞高表达 P-gp,Nef(10μmol·L~(-1))处理24h 后,MCF-7/ADM 细胞 P-gp 表达明显下降。ADM 作用3h 后,MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度比 MCF-7/S 细胞少2.8倍,Nef(10μmol·L~(-1))可使 MCF-7/ADM 细胞内 ADM 的浓度增加3.2倍,但并不增加 MCF-7/S 细胞内 ADM 的浓度。结论 Nef 具有逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞 MDR 的作用,其作用机理与促进 MDR 细胞内 ADM 积累和下调 MDR 细胞 P-pg 表达有关。     

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞多药耐药性的逆转

Objective: To study the reversal effect of neferine on adriamycin (ADM) resistant human breast cancer cell line MCF-7/ADM. Methods: The cytotoxic effect of Nef or ADM was determined by 3-[4, 5-dimethylthiazol-2.-yl], 5-diphenyl tetraxolium bromid (MTT) assay. Apoptosis and the expression of P-glycoprotein (P-gp) were detected by flow cytometry (FCM). The intracellular ADM concentration was measured by HPLC. Results: Nef at 1, 5, 10 mol/L decreased the IC₅₀ of ADM to MCF-7/ADM from 11.63 g/mL to 4.59, 2.44, 0.27 g/mL respectively. MCF-7/ADM could resist the apoptosis induced by ADM while Nef (1-10 mol/L) could augment ADR-mediated apoptosis. Nef (10 mol/L) increased the accumulation of ADM up to 2.88 fold in MCF-7/ADM but not in sensitive cells MCF-7/S and reduced the expression of P-gp in MCF-7/ADM cells. Conclusion: Nef can circumvent multidrug resistance (MDR) of MCF-7/ADM cells and the mechanism was associated with the increase of intracellular accumulation of ADM and the reduced expression of P-gp in MCF-7/ADM cells.     

宫颈癌及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性的研究

目的 :探讨Hela及HHUC细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERTmRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法 :将hTERT核心启动子基因转入Hela、HHUC细胞系、人正常皮肤表皮细胞及子宫内膜上皮细胞中 ,检测细胞系hTERT启动子的活性、hTERTmRNA表达水平及端粒酶活性。分别以HEK2 93细胞系作为阳性对照 ,HELF细胞系作为阴性对照。结果 :细胞系Hela、HHUC、人正常皮肤表皮细胞及正常子宫内膜上皮细胞中的hTERT启动子活性分别为 2 0 1%、14 9%、0 3%和 0 5 % ;hTERTmRNA相对表达水平分别为 0 6 3、0 5 1、0和 0 ;端粒酶活性分别为 0 393、0 387、0 14 4和 0 15 2。结论 :宫颈癌细胞系及子宫内膜癌细胞系中hTERT启动子活性、hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高 ,而在正常角化细胞及子宫内膜上皮细胞中则被抑制或不表达。hTERT启动子活性水平与hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性之间有显著相关性     

甲基莲心碱对乳腺癌MCF-7/Adr 细胞MDR逆转的研究

 目的 探讨甲基莲心碱（Neferine，Nef）对耐药人乳腺癌细胞增殖，细胞内ADM积聚浓度及mdr-1／P-gp表达的影响。方法 采用MTT法测定细胞毒作用，高效液相色谱法测定细胞内ADM积聚浓度，RT—PCR技术及蛋白质印迹技术检测mdr-1／P-gp表达。结果 10μg／ml Nef＋ADM组细胞的抑制率及细胞内ADM积聚浓度比ADM组高（P〈0.01）；20μg／ml Nef＋ADM组细胞抑制率及细胞内ADM积聚浓度较5μg／ml异博定＋ADM组及10μg／ml Nef＋ADM组均高（P〈0．01）。10μg／ml Nef＋ADM组MCF-7／Adr细胞mdr-1 mRNA及P-gp表达比ADM组明显下降（P〈0．01）。20μg／ml Nef＋ADM组细胞mdr-1mRNA及P-gp表达较10μg／ml Nef＋ADM组明显下调（P〈0．01）。结论 Nef能抑制耐药人乳腺癌细胞增殖。Nef能增加MCF-7／Adr细胞内ADM积聚浓度。Nef通过降低耐药人乳腺癌细胞mdr-1 mRNA及P-gp的表达逆转MDR。     

水飞蓟素联合阿霉素对耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转耐药作用

[目的]探讨水飞蓟素联合阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药性的影响.[方法]采用MTT法测定单用阿霉素及其联合水飞蓟素对MCF-7/S、MCF-7/ADM细胞增殖抑制率(IR),计算耐药倍数和逆转倍数.[结果]阿霉素作用MCF-7/S的IC50值(2.89±0.35 μg/ml)明显小于MCF-7/ADM(56.85±2.12μg/ml),耐药倍数为27.6倍;阿霉素联合水飞蓟素作用MCF-7/ADM的IC50值(9.07±0.56μg/ml)明显小于单独使用阿霉素(59.52±2.38μg/ml),逆转耐药倍数为6.6倍.[结论]人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素具有明确耐药性,水飞蓟素能够明显逆转MCF-7/ADM对阿霉素的耐药性.     

脉冲磁场逆转乳腺癌细胞多药耐药性的作用研究

目的: 研究脉冲磁场(Pulsed Magnetic Fields,PMF)对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转作用. 方法: 采用MTT实验方法,分别检测不同频率及不同磁场强度条件照射下的MCF-7/ADR细胞的耐药倍数和逆转倍数.用流式细胞术检测经脉冲磁场照射后MCF-7/ADR细胞中Rh123药物蓄积量变化.用流式免疫荧光技术检测膜经脉冲磁场照射后MCF-7/ADR细胞膜表面P-糖蛋白(p-gP)和多药耐药相关蛋白(MRPI)表达情况.采用半定量RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测经脉冲磁场照射后MCF-7/ADR细胞中MDR1和MRP1基因表达情况.建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR裸鼠移植瘤模型,通过测量肿瘤体积及重量观察PMF时肿瘤细胞的体内逆转作用. 结果: 脉冲磁场能有效逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR对阿霉素产生的耐药性(P<0.01),其中110Hz,40mT照射条件逆转效果最好,可达5倍左右;脉冲磁场能提高罗丹明123在细胞内的蓄积量.其中110Hz,40mT照射条件下可有效提升20%左右药物蓄积量;细胞经脉冲磁场照射后,膜表面耐药蛋白P糖蛋白表达量明显下降,MRP1蛋白表达量变化不明显;编码上述两种耐药蛋白的耐药基因表达量均明显下降;此外,脉冲磁场联合阿霉素可有效逆转裸鼠移植瘤的生长增值(P<0.01). 结论: PMF具有逆转体外和体内乳腺癌细胞多药耐药性的作用.     

红霉素逆转乳腺癌多药耐药的临床研究

目的 :研究红霉素逆转乳腺癌多药耐药 (MDR)的临床疗效。方法 :采用免疫组化SP法检测乳腺癌P 糖蛋白 (P gp)表达 ,将P gp表达阳性者随机分两组 :红霉素加化疗组 (试验组 ) 2 8例 ,单纯化疗组 (对照组 ) 14例 ,采用CAF方案化疗。结果 :试验组CR PR 19例 ( 67.9% ) ,对照组 4例 ( 2 8 6% ),两组比较差异有显著性 (P <0 0 5)。结论 :红霉素对逆转乳腺癌MDR具有一定作用。     

乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist的表达与EMT现象的实验研究

目的：观察乳腺癌多药耐药细胞MCF-7／ADR中Twist表达及上皮-间质转化现象．探讨其与MCF-7／ADR侵袭转移能力增强的相关性。方法：分别以RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物（Strept avidin biotin complex，SABC）免疫组织化学方法和Western blot法检测乳腺癌细胞系MCF-7及其多药耐药株MCF-7／ADR中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙粘素（E—cadherin）和间质性标记基因N-钙粘素（N—cadherin）表达的改变情况。结果：亲本细胞MCF-7中E—cadherin mRNA的表达和蛋白水平的表达均为阳性，Twist和N—cadherin表达阴性；多药耐药株MCF-7／ADR中E—cadherin mRNA和蛋白表达缺失，而在亲本细胞MCF-7中不表达的Twist和N—cadherin表达阳性。结论：在多药耐药乳腺癌细胞MCF-7／ADR中．其侵袭力增强可能与Twist介导的EMT发生有关。