EGCG对阿米卡星诱导大鼠螺旋神经元诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯［(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG］对阿米卡星（amikacin,Amk）诱导的大鼠耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neuron;SGN) 诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）表达的影响。方法将30只SD大鼠分为生理盐水对照组、Amk（450?mg/kg·d×14d）损伤组和Amk加EGCG（50?mg/kg·d×14d）保护组。各组动物均经深度麻醉后,半身灌注固定处死,取右侧耳蜗标本固定、脱钙、石蜡轴位包埋、轴位切片,近中轴位切片行iNOS免疫组化染色,光学显微镜下检测耳蜗SGN表达情况,并通过切片图像分析进行半定量处理比较。结果对照组SGN胞浆及细胞核基本上不着色（SGN iNOS染色平均灰度值为111.04±3.15）,损伤组SGN部分神经元胞浆内有棕黄色或黄色颗粒或斑片（SGN iNOS染色平均灰度值为90.32±5.26）,保护组胞浆及细胞核无明显着色（SGN iNOS染色平均灰度值为109.35±4.89）,图像分析结果显示,损伤组与对照组、损伤组与保护组之间的SGN iNOS染色平均灰度值差异有统计学意义。结论iNOS参与Amk耳中毒时耳蜗螺旋神经元的氧化损伤,EGCG可以减弱Amk耳中毒时耳蜗螺旋神经元iNOS的表达,从而减轻Amk耳毒性。     

EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2及相关基因表达的影响

目的:研究EGCG对鼻咽癌细胞系CNE-2的增殖与凋亡作用,探讨其对细胞增殖与凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:应用MTT实验、流式细胞仪检测细胞的增殖与周期;Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果:EGCG明显抑制CNE-2细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用具有剂量-效应关系。EGCG抑制CNE-2细胞Bcl-2表达,诱导CNE-2细胞Bax、Caspase-3表达。结论:EGCG在体外具有抗鼻咽癌细胞的作用,此作用可能是通过调节细胞增殖与凋亡基因的表达实现的。     

过氧化氢体外诱导大鼠螺旋神经节细胞死亡机制的研究

目的:观察过氧化氢(H2O2)对大鼠螺旋神经节细胞(SGCs)的作用,探讨氧自由基损伤SGCs的机制.方法:新生大鼠SGCB原代培养,取培养第4天细胞加入H2O2,浓度分别为0、100、200、500μmol/L,作用2、4、6 h.光镜下观察细胞形态改变,hochest33258及PI染色,计数受损伤细胞的百分比.结果:在H2O2的作用下,原代培养的SGCs随着H2O2浓度的增加以及作用时间的延长,受损伤的细胞数目呈增加趋势.同时,低浓度(100及200 μmol/L)H2O2作用下,SGCs的损伤主要以凋亡表现为主,PI染色多为阴性;高浓度H2O2(500μmol/L)作用下的SGCs损伤以坏死为主.结论:H2O2可以引起SGCs凋亡,且作用有明显的剂量及时间依赖性.凋亡的发生可能和凋亡相关基因的启动有关,但仍需进一步实验证实.     

硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

为观察硫酸庆大霉素对培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞（SGC）的细胞生存数和细胞突起长度的影响，在单离培养的出生1～5d的NIH小鼠SGC培养液中，加入不同浓度的硫酸庆大霉素（25，50，100mg／L）。培养14d后，标本用4％多聚甲醛固定，甲苯胺蓝染色，在光镜下计数SGC生存数，目镜测微尺下测量细胞突起长度。结果显示，实验组与对照组间、不同浓度实验组间的细胞生存数及细胞突起长度无明显差异（P＞0．05）。提示硫酸庆大霉素对小鼠耳蜗SGC的生存和生长无明显影响，氨基糖甙类抗生素对SGC的影响可能是继发性的。     

卡铂对灰鼠螺旋神经节的早期损害

实验中观察了卡铂(50mg/kg)对灰鼠耳蜗螺旋神经节细胞的急性损害.注药后6小时即可发现在Ⅰ型神经元胞体和神经纤维中有空泡形成.注药后1天可见Ⅰ型神经元内充满大空泡并开始发生坏死.其结果表明卡铂产生对螺旋神经节的毒害相当迅速.提示耳蜗传入神经系统可能是卡铂的第一个靶组织.     

Cyclin D1在EGCG抗鼻咽癌中表达的变化及意义

目的：探讨Cyclin D1基因在表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）抗鼻咽癌中表达的变化及意义,揭示EGCG的抗鼻咽癌作用机制。方法：体外培养低分化鼻咽癌细胞株CNE-2并以不同浓度EGCG处理,倒置显微镜下观察不同浓度EGCG作用48h后CNE-2细胞的形态变化,采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,半定量逆转录PCR检测细胞中Cyclin D1mRNA的表达变化。结果：EGCG处理后,CNE-2细胞的数量及密度逐渐降低,分裂象减少,贴壁差,部分细胞变圆且体积变小,漂浮及凋亡细胞不断增多;细胞增殖明显受到抑制,CNE-2细胞被阻滞在G0/G1期,呈时间和剂量依赖性（P〈0.05）;Cyclin D1mRNA表达明显下调,且EGCG作用浓度与时间依赖性（P〈0.05）。结论：EGCG抑制CNE-2细胞的增殖,可能与其呈浓度与时间依赖性下调Cyclin D1mRNA的表达相关。     

碱性成纤维细胞生长因子对耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠 …

OBJECTIVE: To understand the effects of basic fibroblast growth factor (bFGF) on survival and neurogenesis of the cultured spiral ganglion cell (SGC) of mouse after exposed to glutamate, and the effects of hFGF and glutamate on free intracellular calcium ion concentration. METHODS: After exposed to 2 x 10(-2) mol/L glutamate for 2 hours, the medium of SGC was replaced with the media containing 25, 50, 100 micrograms/L bFGF. Medium without bFGF was used as control. RESULTS: Twenty-four hours later, more cells in the control group showed signs of cell death than in bFGF groups. After 14 days, specimens were fixed in 4% paraformaldehyde and stained with toluidine blue. It was shown that the SGC in medium with bFGF exhibited more survival and longer neurites, and the effect was dose dependent (P < 0.01). Application of glutamate to the medium induced an increase to the the free intracellular calcium ion concentration in SGC, but bFGF had no such effect. CONCLUSION: Glutamate excitotoxicity was associated with free intracellular calcium ion concentration elevation in SGC, and bFGF could protect SGC against glutamate neurotoxicity.     

豚鼠耳蜗单离螺旋神经节细胞外毛细胞同时分离法

随着细胞生物学及分子生物学技术的进步 ,保持活性的单离螺旋神经节细胞 ( SGC)和 (或 )外毛细胞 ( OHC)已成为听觉生理、生化、病理及药理实验的重要模型。OHC为听觉的感受细胞 ,SGC为听觉初级神经元 ,观察同一因素对 OHC及 SGC的影响有重要意义 ,这就需要同时获得来源于同一耳蜗的单离的 SGC和 OHC。为此 ,我们尝试了在同一耳蜗同时分离单离的 SGC和 OHC的可能性 ,获得较好结果 ,报告如下。1　材料与方法1 .1 　 实验动物及溶液配制选用耳廓反射阳性、体重 2 0 0～ 30 0 g的花色豚鼠 6只 ,雌雄兼有。培养液为标准细胞外液 ,组…     

缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞及神经纤维的影响

目的:建立耳蜗器官体外培养模型,详细观察缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)及神经纤维的影响。方法:分离生后3 d Wistar大鼠耳蜗基底膜,平铺在含有DMEM培养液的培养基内(每盘6条基底膜),2盘为1组,随机分为5组。4组作为实验组,按不同时间段(6 h、12 h、24 h、48 h)进行缺氧(37℃,90%N2,5%CO2,5%O2)培养。1组作为对照组放置在37℃、5%CO2培养箱。用抗神经丝蛋白作为一抗,对耳蜗SGC及神经纤维进行免疫荧光染色。激光共聚焦显微镜下观察缺氧时耳蜗SGC及神经纤维形态变化并计数单位面积(24 mm×36 mm)SGC数即细胞密度。结果:缺氧早期(6 h)神经纤维局灶性水肿,SGC变化不明显。12 h神经纤维局灶性断裂及崩解,SGC减少,细胞密度与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。随缺氧时间延长,神经纤维崩解和SGC缺失逐渐加重,48 h神经纤维完全崩解破坏,SGC严重缺失,细胞密度与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:缺氧造成体外培养耳蜗SGC及神经纤维损伤,神经纤维对缺氧更敏感。     

大鼠出生后发育中螺旋神经节神经元凋亡的观察

目的：研究大鼠出生后发育时螺旋神经节（spiral ganglion,SG）神经元凋亡和分化的关系。方法：应用透射电镜观察1、3、5、7、10、14和30天龄大鼠螺旋神经节神经元超微结构的变化及细胞凋亡现象。结果：大鼠出生后5和7天，在透射电镜下观察到SG神经元凋亡，其典型的超微结构改变为染色质凝聚和着边形成的新月样结构、凋亡小体和细胞皱缩；随后的发育阶段细胞凋亡现象消失；最早可识别的富含神经丝的Ⅱ型神经元（neuron2,N2）出现在出生后7天，新出现的N2有明显的细胞皱缩现象；在随后发育的各阶段，SG中I型神经元（neuron1,N1）和N2的结构特征更明显，逐渐发育成熟。结论：神经元凋亡是大鼠螺旋神经节出现后发育过程中的一个重要事件，发生在N2分化过程中，可能与SG中N2发育有关。     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓基质细胞对体外培养小鼠螺旋神经元的影响

目的探讨人脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因工程细胞的建立及其对体外培养的小鼠螺旋神经元生长活性的影响。方法参照分子克隆技术成功构建BDNF真核表达载体———pcD-NA3.1(-)-BDNF,体外证实BDNF基因转染猿猴病毒40肝脏转化细胞(COS7)后正常表达,将骨髓基质细胞分离培养,体外转染骨髓基质细胞建立BDNF基因工程细胞,观察该基因工程细胞对体外培养小鼠螺旋神经元的生长活性的影响。结果成功构建BDNF基因真核表达载体,并且建立了BDNF基因工程细胞;在体外BDNF基因工程细胞能促进螺旋神经元的生长,并保护螺旋神经元免受氧化损伤。结论建立的BDNF基因修饰的骨髓基质细胞,对体外螺旋神经元生长、生存起着重要的保护作用,为进一步研究基因修饰的骨髓基质细胞内耳移植奠定了重要的基础。