苯乙基异硫氰酸盐对神经分化胚胎干细胞凋亡诱导及其机制的研究

目的研究苯乙基异硫氰酸盐对体外神经分化胚胎干细胞(ES)凋亡的诱导及其作用机制。方法应用MTT法检测苯乙基异硫氰酸盐对ES细胞活性的影响;体外未分化培养和悬滴、悬浮培养后由5×10-7 mol/L视黄酸诱导神经定向分化培养的ES细胞,经不同浓度苯乙基异硫氰酸盐(0、2、4和8μmol/L)作用24 h,采用流式细胞仪、Ho-chest33258染色和Capase-3酶活性分析检验ES细胞的凋亡效应,并采用蛋白免疫印迹方法检测细胞内Bcl-2及Bax基因的表达变化。结果与阴性对照比较,未分化和神经分化培养的ES细胞在苯乙基异硫氰酸盐作用下均可出现凋亡形态变化、细胞凋亡率增加和胞内Capase-3酶活性上升,同时胞内Bcl-2基因的表达受到抑制,且呈一定剂量反应关系;另相同剂量条件下,苯乙基异硫氰酸盐对神经分化ES细胞凋亡的诱导作用远较未分化ES细胞显著。结论苯乙基异硫氰酸盐具有诱导神经分化ES细胞发生凋亡的作用,Capase-3活性增加和Bcl-2表达抑制可能是其作用的主要机制。     

在试管里制造神经细胞等5则

日本《每日新闻》10月26日报道，京都大学再生医学科学研究所井芳树教授领导的研究小组，最近利用小鼠的干细胞(ES细胞)，成功地开发了在试管里制造神经细胞的新技术，称作"SDIA方法"。研究人员成功地从神经细胞中制造出可以释放多巴胺的中脑神经细胞，为神经细胞移植治疗帕金森氏症开辟了道路，这一成果引入注目。井教授利用不含BMP4物质的培养基，将ES细胞置于小鼠骨髓中的基质细胞上，观察其变化。ES细胞的90％以上4～5天后变成了神经细胞，而分化成了皮肤的表皮细胞。研究人员把制造出的多巴胺神经细胞植入小鼠脑里，两周后大约20％的细胞存活了下来。据说，美国的研究小组利用不同的方法进行了试验，制造多巴胺神经细胞花了24天，分化比率仅为7～30％。井教授说"如果日本制定利用人ES细胞的规定，我们就将利用猴子进行试验，在严格检查效果和安全性的基础上，对病人进行临床应用的研究。"     

内窥镜括约肌切开术

内窥镜括约肌切开术(ES)，首先要成功地选择性地把导管插入总胆管(CBD)。这就要求在做ERCP诊断时具有高度熟练的技巧。若欲提高ES技术，其选择性总胆管插管成功率必须达到80％。     

全能干细胞的研究现状与前景

干细胞是具有全能或多能分化潜能（胚胎干细胞ES，EG）和广泛存在于成体器官组织中保留不分化和维持身体自我更新能力（组织干细胞）的特种细胞。由于这种细胞的高度可塑性和在组织修复、疾病的细胞治疗以及生殖遗传工程等方面的潜在应用价值，近年来成为生命科学研究领域中最热点的课题之一。     

抗人内皮细胞生长抑制素单克隆抗体的制备和鉴定

研制抗内皮细胞生长抑制素（Endostatin，ES）单克隆抗体，为ES制剂提供更有效的质量控制手段和为内皮细胞抑制素介入基因治疗肿瘤提供临床评价工具。将重组的人ES蛋白纯化，免疫BALB／c小鼠，取ES蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓细胞Ag8．653进行细胞融合，对杂交瘤细胞进行筛选，阳性孔经3次有限稀释法亚克隆，获得4株鼠抗人ES蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为：1C2、6C4、6134、6C5，以间接ELISA、Western免疫印迹等方法进行抗体鉴定。结果表明4株杂交瘤细胞分泌的单抗具有效价高，特异性好的特点，且免疫球蛋白亚型均为IgG1。其中1C2亲和力强，具有较高的应用价值。所得单克隆体具有一定的特异性和敏感性，可为ES的深入研究提供更好的条件。     

胚胎干细胞鉴定的生物学特性及其应用前景

胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES细胞）是指胚泡期的内细胞团中分离出的尚未分化的、能在体外培养、具有发育全能性的早期胚胎细胞。ES细胞具有胚胎细胞和体细胞的某些特性。既可进行体外培养、扩增、转化和制作基因突变模型等遗传操作，又保留了分化成包括生殖细胞在内的各种组织细胞的能力。具有无限增殖、自我更新和多向分化潜能的ES在临床移植医学、组织工程、生物学、药理学及发育学基础等研究领域具有重要的科学意义和巨大的应用前景,对于有效地治疗人类多种疾病。维护和促进人类健康具有巨大的潜在价值。     

光电成像系统在评价胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞中的应用

目的采用简易光电成像系统记录胚胎干细胞(ES细胞)体外定向分化心肌细胞的搏动频率,为药物诱导ES细胞体外定向分化心肌细胞提供量化评价指标。方法以简易光电成像系统记录心肌细胞搏动频率,并以维A酸和淫羊藿苷诱导ES细胞定向分化心肌细胞为例,收集分化过程中发育依赖性基因(α-肌球蛋白重链、心室肌球蛋白轻链及β-肾上腺素受体)和心肌特异性蛋白(α-辅肌动蛋白和肌钙蛋白T)表达情况,同步分析光电成像信号与分子生物学指标的一致性。结果光电成像系统可灵敏反映分化心肌细胞的搏动频率,在与维A酸和淫羊藿苷共培养体系中,搏动频率与心肌发育依赖性基因、蛋白表达和β-肾上腺素受体形成等一致,可体现心肌分化的不同时间段。结论简易光电成像系统能灵敏记录ES细胞定向分化心肌细胞的搏动频率,此搏动频率与细胞分化成熟程度一致,可望成为药物诱导分化心肌细胞初步评价的量化指标。     

心脏毒性的临床前检测

胚胎干细胞（ES）衍生心肌细胞代表一个系统，介于原位细胞和培养细胞之间。未分化ES细胞允许进行标准化、扩展和基因操控处理，已分化细胞可提供反映其原始细胞正常生理活动的图像。本文对检测心脏毒性的几种常见模型与含有体外分化的纯心肌细胞的检测系统进行比较。     

5-脱氧杂氮胞苷对上皮性卵巢癌细胞株生长及侵袭力的影响

目的 探讨不同浓度的甲基转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-CdR)对上皮性卵巢癌细胞系ES2、SKOV3细胞生长和体外侵袭力的影响.方法 应用甲基化特异性PCR检测上皮性卵巢癌细胞系ES2及SKOV3 E-cad基因启动子区5'CpG岛甲基化状况.观察ES2和SKOV3用5-Aza-CdR处理前后细胞的形态变化.用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况并绘制生长曲线.用Transwell 小室法检测药物处理前后细胞侵袭力的变化.结果 经不同浓度5-Aza-CdR处理后SKOV3细胞的穿膜细胞数发生了明显变化,分别为对照组(97.6±2.7)个,5-Aza-CdR 0.1μmol/L组(88.2±2.1)个,5-Aza-CdR 1 μmol/L组(60.5±2.2)个,5-Aza-CdR 10 μmol/L组(36.2±3.0)个,随着药物浓度的增高穿膜细胞数逐渐下降,在10 μmol/L浓度时穿膜细胞数最少.结论 甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR能够使卵巢癌细胞的恶性生物学行为发生部分逆转,其在卵巢癌治疗方面的价值值得进一步探讨.

Abstract：

Objective To observe the effects of different concentrations of 5 - aza cdr ( methyl transferase inhibitor) on epithelial ovarian cancer cell line ES2, SKOV3 growth inhibition and invasive capacity. Methods Methylation-specific polymersse chain reaction was applied to detect epithelial ovarian cancer cell line ES2, 3AO and SKOV3 E-cad gene promoteR5'CpG island methylation status. The morphological change of ES2 and SKOV3 before and after treatment with 5- Aza CdR was observed. Thiazolyl blue (MTT) method was used to detect cell growth and the growth curve. The change of cell invasive capacity was detected by transwell chamber method before and after treatment. Results After being treated by different concentrations of 5-Aza-CdR, invasive cell numbers in SKOV3 changed dramatically. Invasive cell numbers of the control group, 5-Aza 0. 1 μmol/L group, 5-Aza 1 μ mol/L group and 5-Aza 10 μmol/L group were (97.56 ±2.67), (88.23 ±2.12), (60.46 ±2.25) ,(36.21 ±2.98), respectively. With the increase of drug concentration,the number of penetrating cells decreased. Conclusion Methyl transferase inhibitoR5-Aza-CdR can partially reverse the malignant behavior of ovarian cancer cells.     

Protective effects of allicin on acute cerebral ischemia-reperfusion injury in rats

目的：观察并比较麻黄碱(ephedrine,Eph)、伪麻黄碱(pseudoephedrine，PE)及其水杨酸衍生物麻黄碱水杨酸(ephedrine salicylate，ES)及伪麻黄碱水杨酸(pseudophedrine salicylate，PES)的中枢药理作用，、方法：Eph、PE、ES和PES对戊巴比妥钠睡眠潜伏期和持续时间的影响；对正常小白鼠自主活动的影响；与阈下剂量     

聚乙二醇重组人血管内皮抑制素注射液联合TC方案治疗晚期非小细胞肺癌的单中心、开放性Ⅰ期临床安全性研究

目的 评价聚乙二醇重组人血管内皮抑制素注射液(PEGylated recombinant human endostatin solution for injection,M2ES)在非小细胞肺癌患者中联合紫杉醇、卡铂化疗(TC方案)多剂量给药的耐受性和安全性.方法 23例经病理确诊的晚期非小细胞肺癌患者按入组标准进入本研究.M2ES共包括4个剂量组:7.5、10、12.5、15 mg/m2,每个剂量组至少含3例非小细胞肺癌患者;第1天按175(±20％) mg/m2给予紫杉醇,第2天按AUC=(5±0.5) mg/(mL·min)给予卡铂,M2ES按给药剂量组设定的剂量于第3、10、17天给药,21d为1个周期,共2个周期.观察治疗期间患者的耐受性和安全性,治疗结束计算客观有效率和疾病控制率.结果 M2ES联合TC方案最常见的不良反应是白细胞下降82.6％、心电图异常34.8％、恶心21.7％.剂量限制性毒性见于15 mg/m2剂量组,表现为1例Ⅳ度皮疹、1例Ⅲ度黄疸和Ⅳ度转氨酶异常.M2ES最大耐受剂量(MTD)为15 mg/m2,推荐Ⅱ期临床试验剂量为12.5 mg/m2.根据RECIST标准评价肿瘤缓解程度,治疗结束时13例患者病情稳定,2例患者部分缓解,临床有效率为13.3％,临床受益率为100％.结论 M2ES与TC联合并不明显增加化疗的不良反应,M2ES的MTD为15 mg/m2,推荐Ⅱ期临床试验剂量为12.5 mg/m2.     

17β-雌二醇-3位衍生物抗辐射活性研究

目的 研究新雌激素衍生物17β 雌二醇 3 烯丙基醚（ES 1）、17β 雌二醇 3 异戊烯基醚（ES 2）的抗辐射活性。方法以炔雌二醇和茜草双酯为阳性对照药,小鼠接受铯137（137Cs）γ 射线6.5 Gy一次性全身照射,观察各给药组白细胞数（WBC）、股骨有核细胞计数(BMNC)及DNA含量、脾结节数（CFU S）、脾指数、胸腺指数等相关指标变化。结果与对照组比较,ES 1和ES 2各给药剂量组小鼠在WBC、BMNC及DNA含量、CFU S、脾指数、胸腺指数均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,WBC变化非常明显,ES 1和ES 2两组均差异有极显著性（均P＜0.01）。结论ES 1、ES 2具有明显的抗辐射活性,有可能成为高效、低毒、口服的辐射防护药。     

内窥镜括约肌切开术

内窥镜括约肌切开术(ES),首先要成功地选择性地把导管插入总胆管(CBD)。这就要求在做ERCP诊断时具有高度熟练的技巧。若欲提高ES技术,其选择性总胆管插管成功率必须达到80％。     

内皮抑素基因逆病毒载体的构建及其在白血病细胞中的表达

目的 探究内皮抑素基因转移在白血病抗血管新生治疗中的价值。方法 构建分泌型内皮抑素的表达载体,联合脂质体转染与交互感染建立逆病毒介导的内皮抑素基因转移系统,并用内皮抑素病毒分别感染白血病细胞WEHI-3B和K562;用聚合酶链反应(PCR)检测靶细胞中内皮抑素基因的整合与表达。结果 脂质体转染与交互感染策略分别获得单嗜型(GP+E-86/ES)和双嗜型(Am12/ES)病毒生产细胞,后者上清的病毒滴度约为7.8×105CFU/ml;内皮抑素病毒感染、G418选择得到内皮抑素基因修饰的WEHI-3B细胞和K562细胞,PCR分析显示两者均有内皮抑素基因整合并持续表达。结论 逆病毒载体有效介导白血病细胞表达内皮抑素,可用于血液肿瘤的血管抑制基因疗法研究。     

国产丝裂霉素在胚胎干细胞饲养层制备中的应用

目的:探讨不同浓度的国产丝裂霉素在不同的作用时间下对小鼠胚胎成纤维细胞体外生长的影响,为国产药品在 ES细胞研究中的应用提供试验依据。方法:采用 MTT 法测定小鼠胚胎成纤维细胞的生长曲线。结果:当丝裂霉素浓度为20μg·mL~(-1)作用4 h 或30μg·mL~(-1)作用2 h、4 h,均可有效抑制细胞的分裂而不影响细胞活力。结论:海正药业生产的丝裂霉素,不仅满足胚胎干细胞饲养层制备的要求,而且价格低廉,大大降低了实验成本。     

咪唑安定持续静脉输注治疗惊厥性癫痫持续状态24例

目的　研究咪唑安定持续静脉滴注对惊厥性癫痫持续状态 (ES)的疗效 ,探讨其安全有效剂量。方法　选择 ES患儿共 4 5例 ,其中治疗组 2 4例 ,给予咪唑安定持续静脉输注 ;对照组 2 1例 ,应用一线抗惊厥剂治疗(安定静注、苯巴比妥钠负荷量肌注等 ) ;将两组的疗效进行对照 ,同时观察治疗组的有效安全剂量、副反应等。结果　治疗组疗效明显高于对照组 (P<0 .0 1 ) ,治疗组在治疗剂量下未见明显副反应。结论　持续静脉滴注咪唑安定是治疗 ES的安全有效方法     

视频脑电监测在婴幼儿期发作性疾病鉴别诊断中的价值

癫痫发作(ES)及非癫痫样发作(NES)的鉴别是临床医生急需解决的问题,近年来视频脑电图(Video-EEG)的应用,为鉴别ES和NES提供了可靠的依据.我院自2005年7月至2007年7月对150例婴幼儿发作性疾病进行视频脑电监测,现对患儿资料作一回顾,以探讨视频脑电监测在婴幼儿发作性疾病鉴别诊断中的价值.     

内皮抑素在妊娠肝内胆汁淤积症胎盘中的表达和意义

目的：观察内皮抑素（ES）在妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）胎盘中的表达。方法：采用免疫组织化学方法,检测25例正常妊娠胎盘（对照组）和25例ICP胎盘（ICP组）中ES的水平。结果：ES在正常妊娠胎盘和ICP胎盘中分布基本一致,分布在胎盘滋养叶细胞、血管及绒毛间质。ICP组胎盘中ES轻度表达占28%,中度表达占36%,重度表达占36%。而对照组中ES的轻度表达占32%,中度表达占56%,重度表达占12%。ICP组中ES表达明显高于对照组（P〈0.01）。结论：ICP胎盘中ES的增加可能与胎盘血管生成减少及胎盘滋养叶细胞侵入异常有关,在ICP发病中占有一定的地位。     

产超广谱β—内酰胺酶的检测及耐药性观察

目的：探讨超广谱β-内酰胺酶（ESβLs)的检测技术及调查产ESβLs细菌的耐药情况。方法：对486株肠肝菌科细菌用双纸片协同法和复合纸片法做表型确证实验进行检测。结果：大肠埃希菌阳性率为31%，克雷伯菌属阳性率为43%，产ESβLs菌对10种常用抗生素耐药率明显高于非产酶菌株，结论：选择准确快速的检测方法提高ESβLs的阳性检出率，具有十分重要的临床意义。     

血清和腹水内皮抑素对良、恶性腹水的鉴别诊断价值

目的 探讨血清和腹水内皮抑素(ES)对恶性及非结核良性腹水的鉴别诊断价值.方法 收集61例恶性腹水患者(A组)及47例非结核性良性腹水患者(B组)血清及腹水标本,ELISA法检测血清及腹水ES含量,ROC曲线分析其诊断价值.结果 A组患者腹水ES含量高于B组[(458.74±126.77) ng/ml vs.(362.07±103.82) ng/ml] (P＜0.01);A、B两组患者血清ES含量相仿[(160.38±65.79) ng/ml vs.(151.48±67.77) ng/ml](P＞0.05).A组血清ES与腹水ES水平无相关性(r=-0.167,P=0.198).以腹水ES 462.15 ng/ml为诊断界值时,其诊断恶性腹水灵敏度和特异度分别为54.1％和85.1％,ROC曲线下面积0.727(95％ CI为0.603-0.852,P=0.003).结论 ES可能成为新的恶性腹水潜在标志物,对良、恶性腹水有鉴别诊断价值.