辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠基质金属蛋白酶及炎症因子表达的影响

目的探讨辛伐他汀早期干预对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)大鼠基质金属蛋白酶(MMP)及炎症因子表达的影响。方法 40只雄性Wistar大鼠随机均分为正常组(A组)、辛伐他汀组(B组)、慢阻肺模型组(C组)及辛伐他汀干预组(D组)。C组和D组采用反复香烟烟雾暴露法制备慢阻肺模型。B组和D组大鼠采用辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,其他两组用等体积的生理盐水灌胃,共16周。造模结束后进行大鼠肺功能检测及肺组织病理学观察。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肺组织匀浆中MMP-2、MMP-9、白细胞介素6(IL-6)、IL-8及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果 C组大鼠的气道内阻力[(0.813±0.019)cm H_2O·s~(-1)·L~(-1)]和D组大鼠气道内阻力[(0.622±0.012)cm H_2O·s~(-1)·L~(-1)]显著高于A组[(0.402±0.021)cm H_2O·s~(-1)·L~(-1)]和B组[(0.417±0.019)cm H_2O·s~(-1)·L~(-1)](P0.01)。但D组大鼠气道内阻力低于C组(P0.01)。A组和B组大鼠气道内阻力差异无统计学意义(P0.05)。C组大鼠肺组织病理切片的支气管炎症及肺气肿程度均较D组明显,A组和B组大鼠未见支气管炎症及肺气肿改变。ELISA检测结果显示:C组大鼠肺组织匀浆中MMP-2[(0.226±0.008)ng/m L]及MMP-9[(1.441±0.059)ng/m L]的含量较D组MMP-2[(0.174±0.007)ng/m L]及MMP-9[(1.094±0.047)ng/m L]的含量升高(P0.01)。C组大鼠肺组织匀浆中IL-6[(44.59±1.91)pg/m L]、IL-8[(84.30±6.56)pg/m L]及TNF-α[(40.75±1.55)pg/m L]的含量较D组IL-6[(36.14±1.41)pg/m L]、IL-8[(58.17±6.28)pg/m L]及TNF-α[(34.42±1.83)pg/m L]的含量均增高(P0.01)。结论辛伐他汀对慢阻肺者的肺部炎症有抑制作用,可降低肺内MMP及炎症因子的表达。     

加味二陈汤对ApoE~(-/-)小鼠炎症标志物IL-6和TNF-α的调节作用

目的研究加味二陈汤对Apo E-/-小鼠血清、主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α表达的影响。方法40只Apo E-/-小鼠中10只为空白对照组,30只以高脂饲喂养4周构建动脉粥样硬化(As)小鼠模型,均分成模型组、辛伐他汀组、加味二陈汤组,分别用生理盐水、辛伐他汀及加味二陈汤对小鼠灌胃给药,8周后处死小鼠,Elisa法检测血清中IL-6、TNF-α的含量;免疫组化法检测IL-6、TNF-α在主动脉壁及瓣膜的表达。结果辛伐他汀组血清IL-6和TNF-α分别为392.06±37.70 pg/m L、189.1±50.4 pg/m L,与模型组相比表达下降(P<0.05);加味二陈汤组血清IL-6、TNF-α分别为442.41±172.26 pg/m L、47.2±13.3 pg/m L,与模型组相比表达下降(P<0.05),与辛伐他汀组相比,表达下降(P<0.05);免疫组化结果显示加味二陈汤可降低IL-6、TNF-α在主动脉壁内的表达。结论加味二陈汤可降低血清和主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α的表达。     

过氧化物增殖激活受体α激动剂非诺贝特下调大鼠肝脏糖皮质激素受体表达

目的 探讨过氧化物增殖激活受体α(PPAR-α)激动剂非诺贝特对大鼠糖皮质激素受体(GR)表达调节作用.方法 30 只雄性SD大鼠随机分为对照组,FE1组(非诺贝特50mg·kg~(-1)·d~(-1),1个月),FE2组(非诺贝特100 mg·kg~(-1)·d~(-1),1个月),FE3组(非诺贝特100mg·kg~(-1)·d~(-1),2个月),MK886组[同时给予非诺贝特(100 mg·kg~(-1)·d~(-1))和PPARa抑制剂MK886(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)),1个月].检测SD大鼠肝脏、肌肉、脂肪组织GR基因和蛋白表达水平,同时测定肾上腺11β-羟化酶(CYP11B1)基因表达水平,并以放免法测定大鼠血皮质酮水平.结果 非诺贝特显著下调了大鼠肝脏组织GR基因和蛋门质表达水平,FE1、FE2和FE3 3组GR mRNA水平分别较正常组降低55%、54%、68%,蛋白质表达水平分别降低了28%、77%和99%;并升高.肾上腺CYP11B1表达水平及血中皮质酮水平,而MK886完全逆转了非诺贝特的这些效应[正常组、FE1、FE2、FE3、MK886组皮质酮水平分别为(393±23)、(495±44)、(516±18)、(622±93)、(382±37)ng/ml],提示非诺贝特可抑制肝脏GR表达,并促进肾上腺皮质酮合成增多,这些作用依赖于PPARα激活.结论 PPARα激活剂非诺贝特可抑制肝脏GR表达.     

邓老冠心方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块NOX4的影响

【目的】探讨邓老冠心方防治动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块发生发展的可能作用机制。【方法】以高脂饲料喂养雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))鼠12周,复制AS小鼠模型。将AS小鼠随机分成模型组,中药高剂量组、低剂量组,辛伐他汀组,每组10只。另设C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组。中药高剂量组、低剂量组给予邓老冠心方(剂量分别为3 500、700mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀(剂量为0.005 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,共给药12周。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉组织病理学变化,采用实时定量PCR(qPCR)法检测各组小鼠胸主动脉组织尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶4(NOX4)mRNA的表达。【结果】与模型组比较,中药高、低剂量组及辛伐他汀组的斑块面积/管腔面积比值呈不同程度降低(P 0.05或P 0.01)。与正常对照组比较,模型组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平明显升高(P 0.001);各药物处理组小鼠胸主动脉组织NOX4 mRNA表达水平较模型组均显著降低(P 0.01),其中中药高剂量组下降最明显,与辛伐他汀组、中药低剂量组比较,差异均有统计学意义(P 0.05)。【结论】邓老冠心方可增加斑块的稳定性,并具有剂量依赖性,其机制可能与降低AS小鼠胸主动脉组织中NOX4 mRNA的表达有关。     

辛伐他汀对BALB/c小鼠病毒性心肌炎急性期的作用及其机制

目的:研究辛伐他汀对小鼠病毒性心肌炎急性期的作用及其机制。方法:应用柯萨奇B3病毒制作BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型,辛伐他汀混悬液灌胃,按辛伐他汀剂量不同分为1mg/kg组、10mg/kg组及100mg/kg组,并设正常对照组及病毒对照组,7d后观察心肌组织病理学改变、血清白细胞介素6(IL-6)水平、心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平,并做心肌组织中病毒滴度检测。结果:辛伐他汀1mg/kg组各检测指标较病毒对照组无显著性改变(P>0.05)。辛伐他汀10mg/kg组及100mg/kg组心肌组织损伤程度较病毒对照组均明显减轻(P<0.05)、心肌组织中病毒滴度显著性增高(分别为P<0.05,P<0.01)、IL-6和TNF-α水平明显降低(分别为P<0.05,P<0.01);辛伐他汀100mg/kg组与10mg/kg组比较,各检测指标差异显著(P<0.05)。心脏重/体重各组间差异不具有显著性(P>0.05)。结论:辛伐他汀在小鼠病毒性心肌炎急性期对心肌具有保护作用,呈剂量依赖性。这种作用可能与IL-6、TNF-α水平降低而免疫损伤减弱有关。应用辛伐他汀后病毒性心肌炎小鼠清除病毒的能力减弱,但没有导致病毒性心肌炎急性期心肌损伤加重。     

冠心康对LDLR~(-/-)小鼠脾脏巨噬细胞胞葬作用的影响

目的:观察冠心康对LDLR~(-/-)小鼠脾脏巨噬细胞吞噬凋亡细胞及脾脏血小板反应蛋白1(Thbs1)表达的干预作用,从而探讨冠心康对脾脏胞葬作用的影响。方法:选取6周龄LDLR~(-/-)小鼠和C57BL/6J小鼠。C57BL/6J小鼠为正常对照组,全程给予普通饮食;LDLR~(-/-)小鼠随机分为模型组、冠心康组、辛伐他汀组,每组8只,冠心康组按14.43 g·kg~(-1)·d~(-1)给药,辛伐他汀组按2.6 mg·kg~(-1)·d~(-1)给药,正常对照组与模型组给予等体积的0.9%NaCl溶液,均灌胃干预12周。采用HE染色观察主动脉病理形态学变化;经小鼠尾静脉注射凋亡胸腺细胞,2 h后摘除小鼠脾脏,收集脾细胞,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏巨噬细胞的胞葬率;用Western blot技术检测脾脏Thbs1蛋白的表达。结果:HE染色结果显示,模型组小鼠胸主动脉可见动脉粥样硬化斑块,且内膜增厚,存在较多的泡沫细胞,胆固醇酯及胆固醇结晶明显增多;辛伐他汀组胸主动脉斑块和结晶较模型组减少。与正常对照组比较,模型组小鼠脾脏巨噬细胞胞葬率明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,冠心康组、辛伐他汀组巨噬细胞胞葬率明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠脾脏Thbs1蛋白的表达量明显降低(P0.05);与模型组比较,冠心康组小鼠脾脏的Thbs1蛋白表达水平均明显升高(P0.05)。冠心康组与辛伐他汀组各指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论:LDLR~(-/-)动脉粥样硬化模型小鼠脾脏巨噬细胞胞葬作用功能受损;冠心康可调节小鼠脾脏巨噬细胞吞噬凋亡细胞的能力,可能与其调节Thbs1的表达相关。     

病毒性心肌炎病程中肿瘤坏死因子α和Fas mRNA表达的变化

目的 观察病毒性心肌炎(VMC)的小鼠模型中肿瘤坏死因子(TNF)-α和Fas mRNA在心肌中表达的动态变化,探讨它们在VMC中的可能作用及其机制。方法 腹腔接种柯萨奇病毒B组3型(CVB3)建立VMC小鼠模型。在接种病毒后第7、14和28天,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠心肌中TNF-α和Fas mRNA表达水平,并观察心肌形态学改变的差别。结果 与正常对照组相比,VMC小鼠TNF-α和Fas mRNA表达明显增加。TNF-α mRNA表达高峰在接种后第7天,14d后仍有大量表达,28d后表达明显减少;Fas mRNA在接种第7天后明显增加,14d后达到高峰,28d后仍有一定量表达。结论VMC小鼠心肌中TNF-α和Fas mRNA表达明显增加。TNF-α参与炎症反应和心肌损伤,Fas是引起心肌细胞坏死的重要蛋白。     

复方黄芪养心合剂对大鼠缺血心肌缝隙连接蛋白CX43磷酸化的影响

目的观察复方黄芪养心合剂(CAMNH)对冠状动脉左前降支结扎所致心肌缺血模型大鼠缝隙连接蛋白CX43的影响。方法 50只SD大鼠采用随机数字表法分为CAMNH大剂量组28g(14mL·kg~(-1)·d~(-1))、CAMNH小剂量组7g(3.5mL·kg~(-1)·d~(-1))、琥珀酸美托洛尔(MSSRT)组9.5ug(7mL·kg~(-1)·d~(-1))、模型组、假手术组五组,每组10只,给予相应药物灌胃后采用冠状动脉左前降支结扎术造模,结扎1h后腹主动脉取血,HE染色观察心肌细胞形态改变;采用ELISA法检测心肌肌钙蛋白I(cTn-I)和肌钙蛋白T(cTn-T)水平;采用Western blot(WB)法检测磷酸化的缝隙连接蛋白CX43表达。结果 cTn-I、cTn-T:与假手术组相比,模型组、MSSRT组、CAMNH小剂量组、CAMNH大剂量组均升高[cTn-I:(144.94±28.83)ng/L、(85.48±24.06)ng/L、(115.07±21.34)ng/L、(81.63±16.89)ng/L比(58.50±9.53)ng/L;cTn-T:(144.33±20.29)ng/L、(97.89±11.78)ng/L、(121.33±15.02)ng/L、(100.20±5.66)ng/L比(77.40±12.52)ng/L,P0.05或P0.01];MSSRT组与模型组比较升高幅度明显减少(P0.01);CAMNH大剂量组与假手术组比明显增高,与CAMNH小剂量组、模型组比增高程度减少(P0.05或P0.01)。WB结果:与假手术组相比,模型组、MSSRT组、CAMNH小剂量组、CAMNH大剂量组CX43表达减少[(0.07±0.01)、(0.13±0.01)、(0.10±0.02)、(0.13±0.02)比(0.18±0.02),P0.01];MSSRT组与模型组比较明显增多[(0.13±0.01)比(0.07±0.01),P0.01];CAMNH小剂量组与模型组比较略升高[(0.10±0.02)比(0.07±0.01),P0.01],与假手术组、MSSRT组相比明显减少[(0.10±0.02)比(0.18±0.02)、(0.13±0.01),P0.05];CAMNH大剂量组与假手术组比明显减少[(0.13±0.02)比(0.18±0.02),P0.01],与CAMNH小剂量组、模型组比增高程度减少[(0.13±0.02)比(0.10±0.02)、(0.07±0.01),P0.05]。结论复方黄芪养心合剂能降低冠状动脉左前降支结扎所引起的心肌缺血损伤,作用与琥珀酸美托洛尔缓释片相当。     

短期大剂量氢化可的松诱发小鼠药源性证候的评价研究

目的:研究大剂量氢化可的松短期给药诱发小鼠药源性证候的特征及对肾上腺皮质功能的影响。方法:32只雄性ICR小鼠随机分为对照组与氢化可的松不同剂量干预组(12.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)组、25 mg·kg~(-1)·d~(-1)组、50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组),每组8只。氢化可的松不同剂量组小鼠分别灌胃给予相应浓度的氢化可的松溶液,对照组小鼠灌胃给予相同体积灭菌水,连续5 d。分别于给药第1、3、5天称量每只小鼠体质量。末次给药后,采用课题组前期建立的小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(躯体不同部位红外温度、腋温、抓力);取各只小鼠胸腺、脾脏称重,计算脏器指数;分离肾上腺组织,实时荧光定量PCR技术检测类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)基因表达,Western blot检测StAR、SRBI与LDLR蛋白表达。结果:①给药1、3、5 d后,氢化可的松25 mg·kg~(-1)·d~(-1)和50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠的体质量均较对照组显著降低(P0.05,P0.01)。②给药5 d后,氢化可的松12.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)和25 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠的头部最高温度均较对照组显著降低(P0.05),但氢化可的松各剂量组小鼠的躯干平均温度、尾部最低温度、腋温、抓力无明显变化。③与对照组相比,氢化可的松各剂量组小鼠的脾脏指数均明显下降(P0.01),且呈剂量依赖性;50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组小鼠的胸腺指数较对照组显著降低(P0.01)。④与对照组相比,氢化可的松25 mg·kg~(-1)·d~(-1)和50 mg·kg~(-1)·d~(-1)组肾上腺组织中Star、Cyp11a1、Cyp11b1和Cyp21a1的mRNA表达均显著减少(P0.05,P0.01),StAR、LDLR和SRBI蛋白表达均显著降低(P0.05,P0.01)。结论:大剂量氢化可的松(25 mg·kg~(-1)·d~(-1)和50 mg·kg~(-1)·d~(-1))短期给药5 d可显著抑制小鼠肾上腺皮质功能,其证候表现以药源性阴虚证为主。     

不同剂量姜黄素对急性脊髓损伤模型小鼠神经功能的保护作用

目的:探讨不同剂量姜黄素预处理对急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)模型小鼠神经功能保护作用,研究其作用机制,为临床合理用药提供参考。方法:将50只成年ASCI模型小鼠随机分为姜黄素高剂量组、姜黄素中剂量组、姜黄素低剂量组、甲强龙组和模型组,分别给予姜黄素200 mg·kg~(-1)、100 mg·kg~(-1)、50 mg·kg~(-1),甲强龙50 mg·kg~(-1)以及生理盐水腹腔注射。采用BBB分级法和改良Rivlin斜板实验检测后肢功能,采用酶免疫吸附测定法检测血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;采用免疫印迹法(Western blot)检测Nrf 2蛋白的表达。结果:姜黄素高剂量组BBB评分与Rivilin斜板评分均高于其他组,与甲强龙组、模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);姜黄素中剂量组、低剂量组及甲强龙组BBB评分与Rivilin斜板评分显著高于模型组(P0.05);姜黄素中剂量组、低剂量组及甲强龙组BBB评分与Rivilin斜板评分比较,差异无统计学意义(P0.05)。模型组有少量Nrf 2蛋白表达,姜黄素中剂量组、低剂量组及甲强龙组表达均明显,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),其中姜黄素高剂量组表达最为明显。姜黄素高剂量组IL-6、TNF-α表达水平分别为(0.92±0.06)μg·L~(-1)和(42.54±12.41)μg·L~(-1),明显低于其他组(P0.05);姜黄素中剂量组、低剂量组及甲强龙组IL-6、TNF-α比较,差异无统计学意义(P0.05),但均低于模型组(P0.05)。结论:姜黄素能够上调ASCI模型小鼠Nrf 2蛋白表达,降低IL-6、TNF-α水平,保护神经功能,促进运动功能的恢复,其中给予200 g姜黄素效果最佳。