高磷对牛血管平滑肌细胞钙化及其骨桥素分泌的影响

血管钙化是一种类似于骨和软骨形成过程，具有可调节性，其中高磷具有促进血管钙化发生和进展的作用．然而，其机制尚未完全清楚。为此，我们进行牛血管平滑肌细胞体外培养，观察不同磷浓度对钙沉积影响，并探讨其与骨桥素（OPN）的关系。     

外泌体参与调节高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的:探究外泌体在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）钙化中的调节作用。方法:体外培养VSMC（A7r5细胞）,随机分为正常磷组（0.9 mmol/L）、高磷组（2.6 mmol/L）及高磷外泌体诱导组（即高磷组细胞提取的外泌体加入正常培养的VSMC中）。至...     

高磷和钠磷协同转运子与血管钙化

血管钙化是终末期肾病患者心血管病变的主要影响因素.血管钙化具有基因易感性,由不同的促进和抑制因素调节.其中高磷血症促进终末期肾病患者的血管钙化.高磷水平使血管平滑肌细胞表达骨软骨原细胞表型,再通过钠磷协同转运子矿化细胞外基质,促使血管平滑肌细胞钙化.疾病状态和一些细胞因子能增加血管平滑肌细胞上钠磷协同转运子的表达,从而增强血管钙化的易感性.     

高磷诱导血管平滑肌细胞钙化的信号通路研究进展

正血管中膜钙化,是动脉血管中膜层钙和磷酸盐病理性沉积的结果,是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)、糖尿病和老年患者的常见并发症~([1])。血管钙化在CKD患者中广泛存在,是心血管事件的一个重要危险因素,并且与心血管和全因死亡率以及发病率增加相关~([2])。然而,迄今为止,由于只有一些观察性临床研究,而且血管钙化的发生及发展速度缓慢、诊断方法有限,CKD患者血管钙     

腺嘌呤灌胃联合高磷饮食诱导CKD-MBD大鼠模型的探讨

目的:观察腺嘌呤灌胃联合高磷饮食方法诱导的慢性肾脏病矿物质和骨代谢异常(CKD-MBD)大鼠模型。方法:34只SD大鼠随机分为对照组及模型组,每组17只。实验第1～4周,每日予250 mg/kg腺嘌呤混悬液灌胃及含1.2%高磷饲料喂养,第5～8周腺嘌呤灌胃改为隔日。对照组和模型组灌胃等体积高纯水。共给药8周。8周后杀检取材,苏木精-伊红(HE)、过碘酸雪夫(PAS)染色、马松(Masson)染色法观察两组大鼠肾脏病理,茜素红、HE染色观察主动脉钙化结节形成情况;HE染色观察胫骨组织形态,显微CT(Micro-CT)与CT-AN软件对股骨进行三维分析,检测皮质骨骨形态计量学参数;全自动生化仪测定血钙(Ca)、血磷(P)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血清全段甲状旁腺激素(iPTH)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠的Scr、BUN、P和iPTH水平均显著升高(P<0.01),Ca²⁺水平明显降低(P<0.01);模型组肾小球结构紊乱,肾小球基底膜增厚,肾小管扩张,管腔内有积水、炎性细胞的浸润和棕褐色结晶沉积,肾脏血管明显减少,肾脏间质纤维化,有...     

网膜素对成骨细胞向钙化血管平滑肌细胞分化的影响及其机理

目的 探讨网膜素对成骨细胞向钙化血管平滑肌细胞（CVSMCs)分化的影响。方法 网膜素处理VSMCs细胞,用茜素红S染色确定基质矿化范围,用PCR探测碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素表达,免疫印迹分析MAPK和Akt活性。结果 网膜素剂量依耐性抑制CVSMCs ALP及骨钙素mRNA转录(P <0. 05);与对照组比较,100 ng/ml,500 ng/ml及1000 ng/ml网膜素分别降低茜素红染色22%、41%及85% (P <0. 05);网膜素时间依耐性提高CVSMCs Akt活性(P <0. 05),对ERK、p38及JNK无影响;网膜素对VSMCs细胞内cAMP生成无明显影响。细胞用LY294002或HIMO处理后,网膜素对ALP活性及基质矿化的影响被消除了。结论 本研究结果首次表明网膜素通过PI3K/Akt途径抑制成骨细胞分化为CVSMCs,表明肥胖者网膜素降低会促进动脉钙化的发展,网膜素有抑制动脉钙化的作用。     

甲状旁腺激素对MG63细胞OPG、OPGL及其相关因子的调节

目的探讨甲状旁腺激素（PTH）调节骨吸收作用的途径和机理。方法用0．2-20μg PTH干预人成骨肉瘤MG63细胞2d，观察PTH对MG63细胞表达护骨素（OPG）、护骨素配体（OPGL）及其相关因子，如肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体（TRAIL）、巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）的影响，用RT-PCR法检测OPG、OPGL、M—CSF和TRAIL mRNA表达情况，用Western blot分析法检测OPG和OPGL蛋白表达情况。结果PTH下调MG63细胞中OPG的表达，上调OPGL、M—CSF及TRAIL的表达。结论删能够减低成骨样细胞MG63中OPG／OPGL表达比率，增加M—CSF、TRAIL的表达。这可能有利于促进破骨细胞生成及活化，进而促进骨吸收。     

转化生长因子-β对血管平滑肌细胞钙化的影响

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)在动脉钙化中的作用.方法建立体外动脉钙化的模型,培养钙化血管平滑肌细胞,在培养液中加入TGF-β,观察钙沉积及细胞碱性磷酸酶的变化,同时观察钙化过程中骨间质蛋白骨钙素分泌情况.结果1μg/L的TGF-β作用10d后,钙化细胞的钙沉积为1.95±0.56μmol/L,较钙化对照组(1.71±0.05μmol/L)增加了14.41%,细胞碱性磷酸酶的活性为546.3±117.65 IU/L,比钙化对照组(165.3±62.6 IU/L)增加了294.82%,这种作用在第8天达到高峰,以后略有下降.在钙化加重的同时,细胞分泌骨钙素亦明显增加,达0.37±0.04 ng/L;而对非钙化的细胞TGF-β无上述作用.结论1μg/L的TGF-β可以促进钙化血管平滑肌细胞的钙化.     

骨质疏松与血管钙化

骨质疏松症与血管钙化是严重威胁中老年人健康的两类重要疾病,通常认为它们与增龄相关且相互独立,但越来越多的临床和基础研究表明,二者密切联系,且可能拥有共同的危险因素,并受同样的通路、蛋白质和激素等的调控,包括RANKLRANK-OPG通路、Wnt通路及甲状旁腺激素等。典型Wnt通路的抑制剂硬骨素不仅在骨重建中发挥着关键作用,在血管钙化中也扮演着重要角色。研究发现,血管钙化发生时,血管平滑肌细胞发生骨样细胞转分化并分泌硬骨素,但硬骨素在血管钙化中起到保护或损害作用仍存在争议。近期临床研究表明,靶向Wnt通路、用于治疗骨质疏松症的硬骨素抗体(罗莫单抗)具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用,其治疗效果优于其他抗骨质疏松药物;但第三期临床试验发现,其会增加心血管疾病的患病风险,而其机制尚不清楚,有待深入研究。总之,研究骨质疏松和血管钙化之间关系及其共性机制,对避免某种特异性药物的不良反应、以及同时防治两种疾病有重要意义。     

硫代硫酸钠治疗钙化防御血管钙化机制的研究进展及其争议

钙化防御是一种发生于终末期肾病患者的特殊的血管钙化,其早期临床症状不典型,预后差,且缺乏明确的临床指南.目前,在临床上,对于钙化防御的治疗主要是采用以硫代硫酸钠(so-diumthiosulfate,STS)为主的综合治疗.STS治疗钙化防御主要通过钙螯合、抗氧化应激、酸中毒、舒张血管和抗炎镇痛作用及钙化抑制因子作用等...     

终末期肾病患者血管平滑肌细胞凋亡情况及其影响因素分析

目的：观察终末期肾病（ESRD）患者血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡情况及其影响因素.方法：在ESRD患者行动静脉内瘘手术时留取桡动脉0.5～1 cm,共43例.年龄相匹配的因外周血管疾病行血管手术4例患者的动脉作为对照,对照组肾功能正常.采用DNA片段原位缺口末端标记技术（TUNEL法）检测上述二组动脉血管平滑肌细胞凋亡情况,结果用凋亡指数表示.临床指标包括血钙、血磷、钙磷乘积、全段甲状旁腺素（iPTH）、血浆白蛋白（Alb）、血红蛋白（Hb）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、C-反应蛋白（CRP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）.采用Pearson相关分析计算凋亡指数与上述临床指标的相关性.结果：ESRD患者的动脉中膜可见到明显的VSMC凋亡,而在对照组血管中膜,只见到极少量凋亡的VSMC.ESRD患者的VSMC凋亡指数与临床指标中的血磷、钙磷乘积、LDL水平呈显著正相关（P＜0.05）.结论：ESRD患者动脉存在明显的VSMC凋亡;血磷、钙磷乘积和LDL升高可能是VSMC凋亡的促进因素.     

Calcification Inhibitors and Wnt Signaling Proteins Are Implicated in Bovine Artery Smooth Muscle Cell Calcification in the Presence of Phosphate and Vitamin D Sterols

Administration of active vitamin D sterols to treat secondary hyperparathyroidism in patients with chronic kidney disease receiving dialysis has been associated with elevated serum calcium and phosphorus levels, which may lead to increased risk of vascular calcification. However, calcimimetics, by binding to the parathyroid gland calcium-sensing receptors, reduce serum parathyroid hormone, calcium, phosphorus, and the calcium-phosphorus product. Using cultured bovine aorta vascular smooth muscle cells (BASMCs), an in vitro model of vascular calcification, we compared calcification levels and gene expression profiles after exposure to the phosphate source ss-glycerolphosphate (BGP), the active vitamin D sterols calcitriol and paricalcitol, the calcimimetic R-568, or BGP with the active vitamin D sterols or R-568. Cells exposed to BGP (10 mM) alone or with calcitriol or paricalcitol showed dose-dependent BASMC calcification. No change in calcification was observed in cultures exposed to BGP with R-568, consistent with the observed lack of calcium-sensing receptor expression. Microarray analysis using total cellular RNA from cultures exposed to vehicle or BGP in the absence and presence of 10(-8) M calcitriol or paricalcitol for 7 days showed that cells exposed to BGP with calcitriol or BGP with paricalcitol had virtually identical gene expression profiles, which differed from those of cells treated with BGP or vehicle alone. Several osteoblast- and chondrocyte-associated genes were modulated by BGP and vitamin D exposure. In this study, exposure of BASMCs to phosphate and active vitamin D sterols induced calcification and changes in expression of genes associated with mineralized tissue.     

一步法5/6肾切除大鼠加高磷饮食快速建立肾衰竭致血管钙化动物模型法

目的：建立一种慢性肾衰竭快速诱导动脉血管钙化大鼠模型的实验方法,为进一步阐明肾衰竭所致血管钙化发病机制及其防治和新药的研究提供可靠的实验平台。方法：一步法5/6肾切除大鼠同时予以高磷饮食,28d后检测大鼠血清尿素氮、血肌酐、血钙、血磷和血甲状旁腺激素浓度;盐酸萃取法测定胸主动脉血管壁组织钙含量;von Kossa染色光镜下观察胸主动脉血管病理;pQCT仪测试胫骨近端骨密度。结果：大鼠血清尿素氮、血肌酐、血钙、血磷,血甲状旁腺激素和胫骨近端骨密度值,假手术组与正常组之间各项指标差异无统计学意义（P〉0.05）,手术组与假手术组之间各项指标差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：本方法较传统方法相比,具有省时、省力、经济等特点,为慢性肾衰竭引起的心血管钙化研究提供了一个快速可靠的动物模型,为有效新药筛选提供可靠的动物模型。     

坏死细胞释放IL-1对血管平滑肌细胞增殖及炎性反应的影响

目的 研究坏死血管平滑肌细胞对周围正常细胞增殖及炎性因子分泌的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 无血清低糖低氧条件下培养细胞,建立细胞坏死模型,收集坏死细胞培养上清液,用于干预正常血管平滑肌细胞.实验设坏死上清组、IL-1组、坏死上清+IL-1RA组和对照组.MTT法检测各组细胞增殖情况;RT-PCR检测各组MCP-1、IL-6和IL-8 mRNA的表达;ELISA检测各组MCP-1、IL-6和IL-8的分泌;Western blot检测各组NF-kB的激活情况.结果 NCS组和IL-1组细胞增殖能力均显著高于对照组(P＜0.01),NCS+IL-1 β组细胞增殖能力显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.01);NCS组和IL-1 β组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6、IL-8 mRNA的表达均显著低于NCS组和IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1 β组的MCP-1、IL-6及IL-8蛋白的分泌均显著高于对照组(P＜0.05),NCS+IL-1RA组MCP-1、IL-6和IL-8蛋白的分泌显著低于NCS组及IL-1组(P＜0.05);NCS组和IL-1组NF-kB的活性显著高于对照组(P＜0.05),与NCS组和IL-1组相比NCS+IL-1RA组NF-kB的活性显著降低(P＜0.05).结论 坏死血管平滑肌细胞能够促进正常细胞的增殖,诱导NF-kB的激活以及炎性因子的释放,并且这种促进作用可能与IL-1的大量释放有关.     

RANKL/QPG在青少年特发性脊柱侧凸患者低骨量发生机制中的作用

目的从骨髓间质干细胞（MSCs）水平探讨RANKL及OPG与青少年特发性脊柱侧凸（AIS）患者骨量降低的关系。方法46例12-17岁志愿者分为2组,其中AIS组30例,年龄12-17岁,平均14.1岁。正常对照组16例,年龄12-17岁,平均14.7岁。AIS组Lenke1型14例,2型2例,3型6例,5型8例。2组均采用双能X线吸收测量仪测量BMD,测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。分别从2组志愿者髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。体外密度梯度离心法分离培养MSCs,扩增至P3代行表型鉴定,RT-PCR法检测2组MSCs中RANKL及OPG的 mRNA表达强度。结果AIS组腰椎（L2-L4）及股骨近端的BMD值明显低于正常对照组。AIS组RANKL的 mRNA表达显著强于对照组（P〈0.01）,而OPG的 mRNA表达显著低于对照组（P〈0.01）。结论RANKL及OPG在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。     

MicroRNAs 29b, 133b,and 211 Regulate Vascular Smooth Muscle Calcification Mediated by High Phosphorus

Vascular calcification is a frequent cause of morbidity and mortality in patients with CKD and the general population. The common association between vascular calcification and osteoporosis suggests a link between bone and vascular disorders. Because microRNAs (miRs) are involved in the transdifferentiation of vascular smooth muscle cells into osteoblast-like cells, we investigated whether miRs implicated in osteoblast differentiation and bone formation are involved in vascular calcification. Different levels of uremia, hyperphosphatemia, and aortic calcification were induced by feeding nephrectomized rats a normal or high-phosphorus diet for 12 or 20 weeks, at which times the levels of eight miRs (miR-29b, miR-125, miR-133b, miR-135, miR-141, miR-200a, miR-204, and miR-211) in the aorta were analyzed. Compared with controls and uremic rats fed a normal diet, uremic rats fed a high-phosphorous diet had lower levels of miR-133b and miR-211 and higher levels of miR-29b that correlated respectively with greater expression of osteogenic RUNX2 and with lower expression of several inhibitors of osteoblastic differentiation. Uremia per se mildly reduced miR-133b levels only. Similar results were obtained in two in vitro models of vascular calcification (uremic serum and high–calcium and –phosphorus medium), and experiments using antagomirs and mimics to modify miR-29b, miR-133b, and miR-211 expression levels in these models confirmed that these miRs regulate the calcification process. We conclude that miR-29b, miR-133b, and miR-211 have direct roles in the vascular smooth muscle calcification induced by high phosphorus and may be new therapeutic targets in the management of vascular calcification.     

阿仑膦酸钠对假体周围骨溶解中OPG及RANKL的影响

目的 探讨阿仑膦酸钠对聚乙烯颗粒诱导假体周围骨溶解中OPG及RANKL影响.方法 将钛金属棒植入新西兰大白兔左侧股骨内,每2周向左膝关节内注射聚乙烯颗粒,使用随机数字表随机分成实验组和对照组,各6只.实验组给予阿仑膦酸钠灌胃,而对照组给予等量的0.9％的氯化钠溶液灌胃.12周后处死动物,取出假体周围界膜组织,用ELIS...     

不同血管供血的活骨移植治疗股骨头缺血性坏死

目的　通过对 6 0例由同一术者采用不同血管供血的自体活骨移植治疗股骨头缺血性坏死 (AVNFH)的远期随访结果进行比较研究和术者的经验总结 ,进一步探讨不同方法治疗AVNFH的适应证和优缺点。方法　同一术者采用带旋髂深动脉髂骨移植治疗AVNFH 30例 ;吻合血管游离腓骨移植治疗 1 2例 ;带旋髂浅动脉髂骨移植治疗 6例 ;带旋股外动脉升支髂骨移植治疗 8例 ;带胫前动脉胫骨骨膜移植治疗 4例。进行了 5～ 2 0年的 (平均 8年 )随访。结果　 6 0例患者 ,按Harris髋关节评分 ,总体优良率为 78 3% ,统计分析表明 ,各种方法治疗的优良率之间无显著差别。结论　不同血管供血自体活骨移植 ,只要适应证掌握得当 ,均可取得较好效果     

人骨保护素在CHO细胞内初步稳定表达

目的构建人OPG的稳定表达载体,并在DHFR-型CHO细胞内稳定表达。方法用RT-PCR的方法获得人全长OPG的编码基因,并将其克隆入载体pcDNA3.1-DHFR/CT-GFP,鉴定无误后,转染DHFR-型CHO细胞,经MTX筛选获得阳性表达OPG的细胞株。结果成功构建人OPG的稳定表达载体,并获得阳性表达OPG的细胞株。结论全长人OPG基因可以在CHO细胞内成功稳定表达,这为OPG的功能研究及临床应用奠定物质基础。     

RNA干扰对兔血管平滑肌细胞bcl-2基因表达的影响

目的研究RNA干扰(RNAi)对兔血管平滑肌细胞(VSMCs)bcl-2基因表达的干扰效应。方法用脂质体法将构建的装载靶向bcl-2基因小干扰性RNA(siRNA)的表达载体(pshRNA-bcl-2质粒)转染VSMCs(基因组),以转染空载体的细胞和加DMEM的空白细胞作为对照,采用半定量RT-PCR和Westernblot法检测bcl-2基因的表达,用MTT法检测VSMCs生长情况。结果转染siRNA的表达载体可以抑制内源性bcl-2基因在转录和转译水平上的表达,基因组bcl-2的mRNA和蛋白表达较空载体组和空白对照组明显减少(P<0.01);基因组的VSMCs生长也较空载体组和空白对照组明显受到抑制(P<0.01)。结论载体介导的RNAi技术可明显抑制内源性bcl-2基因的表达和VSMCs生长。