HIF-1α基因修饰NSCs后作用机制探讨

NSCs携带外源基因治疗为神经系统疾病变的治疗及机制探讨提供了广阔的前景,为揭示神经系统中各种转录因子作用相关机制等问题提供了良好的实验模型。扩增AdHIF-1α--GFP后转染NSCs,免疫细胞化学染色法检测转染后NSCs基因表达情况、     

HIF-1α转染脂肪干细胞复合HA/β-TCP人工骨修复兔股骨头坏死模型的实验研究

目的 探究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染脂肪干细胞复合羟基磷灰石/β-磷酸三钙(HA/β-TCP)人工骨修复兔股骨头坏死模型的实验.方法 选取45只健康新西兰白兔,将其分为A(10只)、B(10只)、C(10只)、D(10只)、E(5只)五组,通过探索股骨头坏死修复的机制,为临床上修复早期股骨头坏死提供实验依据...     

壳聚糖纳米粒子介导TFPI基因转染的实验研究

目的：评价壳聚糖纳米粒子携带组织因子途径抑制因子（tissue factor pathway inhibitor,TFPI）基因转染的效率及其细胞毒性。方法：制备壳聚糖纳米粒子-TFPI基因复合物，检测其粒度。zeta电位。包埋效率。以Lipofectamine2000为对照，观察血管平滑肌细胞系A10对壳聚糖TFPI基因纳米复合物的摄入速度和数量；利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测体外转染效果；应用噻唑蓝（MTT）评价壳聚糖纳米粒子的体外细胞毒性。结果：壳聚糖TFPI基因纳米复合物的平均粒径约为141nm，zeta电位为6．8mV；其DNA包埋效率和DNA含量分别为（98．8±34）％和（38．1±2．3）％。A10细胞的摄入和转染实验显示其效率与商品化的细胞转染试剂Lipofectamine2000相近，但是其毒性远低于Lipofectamine2000。结论：壳聚糖纳米粒子可高效携带TFPI基因转染平滑肌细胞，而且对细胞基本无毒性。     

HIF-1α基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建HIF-1α基因RNA干扰慢病毒载体。方法选定HIF-1α基因RNAi靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ双酶切后的慢病毒载体pLentilox3.7（pLL3.7）连接,产生pLL3.7HIF-1α慢病毒载体,转化大肠杆菌DH5α菌株,抽取质粒后,用限制性内切酶XbaⅠ和NotⅠ进行酶切鉴定,将阳性克隆送金斯特公司进行测序鉴定 用PHR、pVSVG和pLL3.7慢病毒载体共转染包装细胞293T细胞（磷酸钙转染法）,包装产生慢病毒,将收集的病毒上清经高速离心浓缩后,按一定比例稀释,然后感染293T细胞,用流式细胞仪检测293T细胞GFP蛋白的表达水平,从而测定病毒滴度。结果酶切和测序证实,构建出HIF-1αshRNA的慢病毒载体pLL3.7HIF-1α 包装慢病毒,测得离心的浓缩病毒悬液的滴度为2×108TU/ml。结论成功构建HIF-1α基因RNAi慢病毒载体。     

HIF-1α在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨HIF-1α在肝癌组织中的表达及临床意义。方法：采用免疫化学SABC染色检测HIF-1α表达情况。结果：HIF-1α在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常肝组织。结论：HIF-1α的表达与肝癌的发生发展有关。     

宫颈癌HIF-1α表达与预后的关系

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（HIF—1α）在早中期宫颈癌发生发展过程中的作用。方法：采用免疫组化S—P免疫酶染色法检测90例宫颈癌、30例CINIII和20例正常宫颈组织中HIF—1α蛋白的表达。结果：HIF-1α在CINIII、早期宫颈侵润癌中存在高表达,而正常宫颈组织无表达。HIF—1α的表达与宫颈癌Ⅰb-Ⅱa期肿瘤大小、宫颈和宫颈管深肌层侵润、盆腔淋巴结转移呈正相关,与年龄、FIG0分期、组织学类型、病理分级无关。结论：HIF-1α过表达可成为宫颈癌独立预后因子。可通过检测HIF—1α表达来评估宫颈癌患者的预后。     

HIF-1α在甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义

目的探讨HIF-1α蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学Envision法检测140例甲状腺癌组织、50例甲状腺腺瘤及30例正常甲状腺组织中HIF-1α蛋白的表达,分析HIF-1α蛋白的表达与甲状腺癌临床病理特征之间的关系。结果甲状腺癌中HIF-1α阳性表达明显高于正常甲状腺组织和甲状腺腺瘤,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α在140例甲状腺癌组织中的表达与是否有颈部淋巴结转移、浸润深度、分化程度以及AJCC分期密切相关(P<0.01)。结论 HIF-1α参与了甲状腺癌的形成过程,并与甲状腺癌的浸润、转移和预后密切相关,可作为辅助甲状腺癌早期鉴别诊断和预测其生物学行为的参考指标。     

HIF-1α抑制剂在白血病治疗中的研究进展

缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor,HIF-1)是一种氧平衡转录因子,在人体细胞内广泛分布,能在各种缺血缺氧环境中激活并发挥作用.其主要由HIF-1α和HIF-1β2个亚基组成.HIF-1α是唯一的氧气调节亚单位,其激活可引起细胞增殖、凋亡抑制、代谢转移和癌症进展,因此,该基因的启动常提示肿...     

缺氧诱导因子-1α过表达通过葡萄糖转运载体-4介导缺氧大鼠骨髓间充质干细胞对葡萄糖的摄取

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染是否提高骨髓间充质干细胞(MSC)缺氧状态下的葡萄糖摄取能力以及这种能力是否与葡萄糖转运载体-4(GLUT-4)的表达和易位有关。方法将MSCs分为常氧非转染组(即对照组)、常氧转染组、缺氧非转染组和缺氧转染组,分别于常氧(5%CO_2,37℃)和缺氧(94%N_2、1%O_2和5%CO_2,37℃)条件下孵育8 h。放射同位素法检测~3H-G摄取量,免疫细胞化学和Western-blot检测GLUT-4的表达。结果①与缺氧非转染组相比,缺氧转染组显著提高细胞摄取~3H-G量(P<0.01),但二者均显著低于对照组和常氧转染组对~3H-G的摄取(P<0.01);②与缺氧非转染组相比,缺氧转染组显著提高细胞和细胞膜GLUT-4蛋白的表达(P<0.01),2组均显著低于对照组GLUT-4蛋白的表达和移位(P<0.01);③~3H-G摄取量与细胞膜中GLUT-4表达呈正相关(r=0.437,P=0.001)。结论 HIF-1α基因提高MSCs的葡萄糖摄取能力,此机制与HIF-1α基因提高GLUT-4的表达和易位相关。     

胶质瘤中HIF-1α的表达及其与增殖指标ki67的关系

目的:研究在胶质瘤中HIF-1α和ki67的表达之间的相互关系.方法:免疫组织化学方法检测60例胶质瘤病例中HIF-1α和ki67的表达.结果: 在60例胶质瘤病例中,HIF-1α的阳性率为71.7%(43/60),高级别胶质瘤的阳性表达率(89.7%),显著高于低级别的胶质瘤阳性表达率(54.8%)(P<0.05).Ki67的阳性表达率为65%(39/60);在HIF-1α与ki67表达之间存在正相关关系(P<0.05).结论:HIF-1α与胶质瘤细胞增殖相关.     

以纳米颗粒为载体转染基因的发展概况

目的综述以纳米颗粒作为基因载体进行基因治疗的发展概况。方法依据国内外刊物公开发表的文献,对有关以纳米颗粒作为基因递送载体进行基因治疗的研究进行分类、归纳与整理。结果纳米颗粒转运系统能够保护被转运的基因,有较高的转染效率,具有良好的靶向性,并且提高了药物的生物利用度,显示出一定的缓控释作用。结论纳米颗粒作为基因递送载体具有广阔的发展前景。     

鼻咽癌细胞中HIF-1α的表达情况及其与预后的关系

目的探究HIF-1α在鼻咽癌患者肿瘤细胞中的表达情况及其与鼻咽癌综合治疗预后的相关性。方法以我院2010年11月至2011年12月接受的200例鼻咽癌患者为研究对象,通过免疫组化检测治疗前后HIF-1α的表达情况、阳性/阴性表达组治疗后肿瘤完全缓解率来研究其与鼻咽癌的关系。结果治疗前鼻咽癌患者的HIF-1α阳性表达率为75.5%;HIF-1α阳性/阴性表达组治疗后肿瘤完全缓解率分别为90.7%、85.4%,差异显著,P<0.05;结论大多数鼻咽癌患者的原发病灶呈现HIF-1α阳性表达,其表达水平对评估预后具重要价值。     

PAR-1和HIF-1α在乳腺癌新辅助化疗中的表达及其临床意义

目的 分析乏氧诱导因子1(HIF-1α)和蛋白酶活化受体1(PAR-1)在乳腺癌中的表达及在新辅助化疗前后的变化.方法 用免疫组化法检测45例乳腺癌患者新辅助化疗前后癌组织中PAR-1、HIF-1α的表达.结果 PAR-1、HIF-1α在乳腺癌组织中的阳性率分别为66.7%、77.8%,化疗后乳腺癌组织中PAR-1表达率明显降低(66.7% vs.40.0%)(P＜0.05).新辅助化疗前、后,PAR-1、HIF-1α在乳腺癌中表达均呈正相关(P＜0.05、P＜0.01).结论 乳腺癌中存在PAR-1和HIF-1α的过表达,新辅助化疗可以显著降低PAR-1表达率,PAR-1有可能作为预测乳腺癌新辅助化疗疗效的生物学指标.     

三七总皂苷调控HIF-1α/PDHK1通路介导的CD4+T细胞有氧氧化促进Treg分化

目的 观察三七总皂苷（PNS）调控HIF-1α/PDHK1通路介导的有氧氧化,探讨其对促进Naive CD4+T细胞向Treg细胞分化的机制。方法 磁珠分选C57BL/6小鼠脾脏Naive CD4+T细胞,诱导其向Treg细胞分化并进行体外培养,将Naive CD4+T细胞分为PNS处理组（5、10、20 μg·mL-1）、PNS联合HIF-1α抑制剂（PX-478）组,并分别设置对照组（Control）,采用流式细胞术检测Treg细胞分化比例,Western Blot检测HIF-1α、PDHK1蛋白表达,实时荧光定量PCR检测PDHK1、FOXP3 mRNA的表达,酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清中IL-10的水平。结果 5、10、20 μg·mL-1的PNS可显著增加Treg细胞比例并增加其IL-10的分泌水平,使细胞中FOXP3 mRNA的表达增加;同时抑制HIF-1α、PDHK1蛋白以及PDHK1 mRNA的表达。10 μM的PX-478处理细胞后再以10 μg·mL-1的PNS干预细胞,其对PDHK1、FOXP3的表达及Treg细胞的分化比例的调控作用与单独使用10 μM的PX-478处理细胞无明显差异。结论 PNS通过HIF-1α抑制PDHK1的表达而增强Naive CD4+T细胞的有氧氧化,促进其向Treg细胞分化。     

HIF-1α及HSP-70在子痫前期胎盘中的表达及意义

目的观察子痫前期患者胎盘组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及热休克蛋白-70(HSP-70)的表达水平的变化,并探讨其意义。方法采用免疫组织化学方法及Western blot法分别检测11例轻度子痫患者、15例重度子痫患者(观察组)及30例健康产妇(对照组)胎盘组织中的HIF-1α及HSP-70。结果子痫前期组胎盘组织中HIF-1α及HSP-70水平与健康产妇组相比:对照组、轻度、重度组HIF-1α蛋白相对表达量分别为0.36±0.12、0.67±0.19、1.12±0.30,三组相比,P均<0.01;对照组、轻度、重度组HSP-70蛋白相对表达量分别为0.33±0.09、0.54±0.15、0.95±0.25,三组相比,P均<0.01。子痫前期组中HSP-70表达水平随HIF-1α水平相应增高,呈明显正相关(r=0.928,P<0.01)。结论 HIF-1α及HSP-70参与了子痫前期缺氧发病机制,其胎盘组织中表达水平可能与疾病发作及严重程度密切相关。     

Vasohibin-1、VEGF 及 HIF-1α在子宫内膜腺癌中的表达及意义

目的：通过研究血管生成抑制蛋白 Vasohibin-1、缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）在正常增殖期子宫内膜（normal endometrium,NE）、子宫内膜非典型增生（endometrial atypical hyperplasia,EAH）和子宫内膜腺癌（endometrioid adenocarcinoma,EA）组织中的表达,探讨上述指标与血管内皮生长因子（ vascular endometrial growth factor,VEGF）及 EA 临床病理特性的关系。方法采用免疫组织化学方法检测 Vasohibin-1、VEGF 及 HIF-1α在15例 NE、30例 EAH 和50例 EA 组织中的表达,分析各指标之间及与 EA 临床病理特性的关系。结果在 EA 组织中,Vasohibin-1、VEGF 和 HIF-1α的阳性表达率明显高于 NE 组（ P <0.05）;VEGF 和 HIF-1α的表达阳性率与 EA 临床手术分期有关且随期别升高而升高（ P <0.05）,而 Vasohibin-1与临床手术分期无关（ P >0.05）;在 EA 组织中, Vasohibin-1、HIF-1α与 VEGF 的表达呈正相关（ P <0.01）,而 Vasohibin-1与 HIF-1α无相关性（ P >0.05）。结论Vasohibin-1、VEGF 及 HIF-1α均在 EA 组织中高表达,Vasohibin-1在高水平的 VEGF 诱导下表达升高,但并不足以抑制EA 组织中新生血管形成,可能存在其他旁路调节途径来调节两者之间的平衡。     

血管形成素-1基因转染对血管内皮细胞影响的实验研究

目的　探讨血管形成素 1(Ang1)基因重组腺病毒 (Ad .Ang1)的获取及其对人脐静脉上皮细胞 (ECV30 4 )的影响。方法　以逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)自人脾组织中克隆出Ang1全长cDNA ,测序后克隆到Ad5腺病毒载体中 ,制备纯化的Ad .Ang1;以Ad .Ang1转染ECV30 4细胞 ,1至 7d后 ,用RT PCR与Westernblot分别检测ECV30 4中Ang1转录与表达情况 ,同时观测其对ECV30 4的影响。结果　克隆的Ang1DNA片段为 15 15bp的全长cDNA。所获得的Ad .Ang1与 β 半乳糖苷酶 (LacZ)基因重组腺病毒 (Ad .LacZ)滴度分别为 5 6× 10 8pfu/ml、5 3× 10 8pfu/ml。β 半乳糖苷 (X gal)染色显示LacZ基因转染Hela细胞 ,蓝染率可达 95 %以上。Ang1基因转染后第 1、3、7d可检出mRNA表达 ,第 3、7d可检测到其蛋白表达。XTT检测显示Ad .Ang1组与对照组相比 ,各时间点的OD值差异不显著 ,P >0 0 5。结论　Ad .Ang1在体外培养的ECV30 4细胞中能有效表达 ,但对ECV30 4细胞增殖功能无明显促进作用