神经干细胞移植治疗创伤性脑损伤的研究进展

创伤性脑损伤目前仍然是全世界死亡和致残的最主要原因之一,伤后的功能恢复仍是治疗面临的难题,神经干细胞移植为促进伤后神经功能恢复带来了光明的前景。     

丙酮酸乙酯对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤中MMP-9表达的影响

目的:利用新生大鼠缺血缺氧脑损伤动物模型,检测MMP-9的表达,探讨丙酮酸乙酯对MMP 9表达的影响及对缺血缺氧性脑损伤的保护作用,方法:7日龄清洁级Wistar大鼠90只随机分为三组:阴性对照组;缺血缺氧组:腹腔注射生理盐水1.5mL;丙酮酸乙酯治疗组:腹腔注射丙酮酸乙酯溶液50mg/kg.HE染色观察缺血缺氧后大鼠...     

乙酰谷酰胺对新生大鼠缺血缺氧性脑病的作用

目的:观察乙酰谷酰胺(aceglutamide)对新生大鼠缺血缺氧性脑病(HIE)模型的作用。方法:建立新生大鼠HIE模型,100只出生7d的Wistar大鼠随机分为假手术组,HIE模型组和乙酰谷酰胺组,于缺血缺氧后48h取左脑,测定脑组织水含量、脑组织MDA及血清TNF-。结果:与HIE模型组相比,乙酰谷酰胺组脑组织含水量、脑组织MDA以及血清TNF-水平均显著降低(P<0.05;P<0,05;P<0.05)。结论:乙酰谷酰胺对新生大鼠缺血缺氧后脑组织有保护作用,其机制可能与乙酰谷酰胺增加脑细胞对缺血缺氧的耐受能力,增加谷胱甘肽合成、增强DNA合成等有关。     

骨髓源干细胞移植与中药联合治疗对大鼠缺血再灌脑损伤的作用

目的比较中药与骨髓单个核细胞（BMNC）、骨髓间充质干细胞（BMSC）蛛网膜下腔移植治疗缺血脑卒中大鼠脑损伤的作用。方法 147只大鼠随机分成七组,为正常组、假手术组、模型组、BMNC组、中药联合BMNC组、BMSC组、中药联合BMSC组,每组21只。除正常组和假手术组,其余组分别移植BMSC和BMNC,中药组同时进行中药联合治疗。分别于移植后4、28 d评定鼠神经功能损伤恢复情况。结果治疗28 d比治疗后4 d MMNSS神经功能评分低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论以相同剂量细胞移植,BMNC对神经功能的修复作用更好,中药联合BMNC移植对缺血性脑梗死神经功能障碍的修复具有协同作用。     

CpG-ODN对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用研究

目的探讨Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)激动剂——含Cp G基序的寡核苷酸(Cp G-ODN)对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用机制。方法 50只健康7日龄新生Wistar大鼠,♀♂不限,随机分为5组,假手术组、缺血/缺氧性脑损伤(HIBD)组、Cp G-ODN低剂量组(0.35m L·kg-1)、Cp G-ODN中剂量组(1.40 m L·kg-1)、Cp GODN高剂量组(5.60 m L·kg-1)。术后48 h对大鼠神经功能进行评分,光学显微镜下观察脑组织病理学改变。免疫印迹法检测缺血/缺氧侧脑组织中磷酸化p38 MAPK、TLR9表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α的表达。结果 Cp G-ODN低、中剂量组较模型组神经行为学评分降低,病理学损伤减轻,而高剂量组较模型组神经行为学评分升高(P<0.05),病理学损伤加重;Western blot分析结果表明,缺血/缺氧侧脑组织中磷酸p38 MAPK、TLR9蛋白表达逐渐上调,TNF-α在脑组织中含量逐渐升高(P<0.05)。结论 TLR9激动剂Cp G-ODN低、中剂量可改善新生大鼠脑缺血/缺氧损伤神经行为学评分及神经系统功能,减轻新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤,其机制可能是通过适度激活p38 MAPK信号通路,并分泌适量TNF-α发挥作用。     

显微注射增强绿色荧光蛋白-逆转录病毒检测缺血缺氧新生大鼠皮质神经干细胞的增殖

目的用显微注射增强绿色荧光蛋白（EGFP）-逆转录病毒的方法检测缺血缺氧对新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响。方法新生7dSD大鼠结扎左侧颈总动脉,并给予氧浓度为8％的氧氮混合气体缺氧处理2h,制作新生大鼠缺血缺氧模型;将绿色荧光蛋白（GFP）基因片段定向插入逆转录病毒载体pLNCX2,转染DH5a感受态细胞,用lipofectamine将pLNCX2-EGFP逆转录病毒载体导入PA317包装细胞,用G418筛选获得抗性细胞克隆,扩增抗性细胞并收集病毒上清;用显微注射的方法往正常组及缺血缺氧模型动物皮质注射EGFP-逆转录病毒;取脑组织制作冰冻切片,用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染细胞核,荧光显微镜下观察缺血缺氧前后动物大脑皮质EGFP阳性细胞（内源性神经干细胞）的增殖情况。结果成功构建了EGFP-逆转录病毒,并将病毒注射到对照组及模型组动物皮质,荧光显微镜观察显示,新生鼠缺血缺氧后EGFP阳性细胞（内源性神经干细胞）的数目比正常动物多,正常组皮质GFP标记的细胞数为（104±9）;模型组皮质GFP标记的细胞数为（169±12）,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论显微注射EGFP-逆转录病毒是观察内源性神经干细胞增殖的理想方法;缺血缺氧能促进新生大鼠皮质神经干细胞的增殖。     

头顶一颗珠醇提物对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用

目的探讨头顶一颗珠醇提物对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤(HIBD)的保护作用及可能机制。方法 50只7日龄SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=20)、头顶一颗珠治疗组(n=20),各组分别予以3 d相应的生理盐水及头顶一颗珠醇提物腹腔注射。分别通过氯化三苯基四氮唑(TTC)和尼氏染色检测脑缺血及神经细胞死亡情况,通过Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 HIBD模型组可见脑组织稍有肿大,且右侧脑部可见缺血的白色坏死区;治疗组可见大脑形态完好,未见明显肿胀及坏死,TTC染色后,模型组可见右侧脑部出现明显缺血区,经治疗后缺血区域减少。尼氏染色结果提示模型组可见神经元细胞减少,而治疗后神经元细胞增加。Western blot显示HIBD后Bcl-2表达减少(P<0.01),Bax表达增加(P<0.01),而经过头顶一颗珠治疗后,Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01)。结论头顶一颗珠对HIBD具有保护作用,其机制可能与降低神经元细胞凋亡有关。     

神经干细胞移植治疗脊髓损伤临床疗效观察

目的探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的临床疗效。方法对9例脊髓损伤患者进行脊髓探查加损伤局部神经干细胞移植术,术前及术后半年应用ASIA评分系统进行神经功能评定。结果患者在皮肤感觉、运动、二便、排汗等方面均有一定程度的改善;术后ASIA评分与术前比较,两者间有显著差异。结论神经干细胞移植可以改善脊髓损伤患者的感觉、运动、二便及排汗等多方面的神经功能,提高患者生活质量。     

新生儿缺血缺氧性脑病的治疗研究进展

新生儿缺血缺氧性脑病的进展过程中继发性能量衰竭阶段最为关键,一旦该阶段启动,则会引发一系列的病理反应,最终可导致新生儿大脑神经元的损伤加重甚至死亡。因此该阶段成为治疗该病,降低脑损伤的治疗措施的最佳施用时期。该病的治疗关键在于预防,原则在于治疗措施的早期、按时、足疗程以及综合性实施,同时还应时刻注意患儿的病情变化并进行及时进行"三维持"、"三对症"的治疗处理,另外在此基础上有选择性地应用一些其他疗法,做到取长补短,共同提高治疗效果,这对于控制患儿病情,改善预后具有十分积极的治疗意义。     

脐血干细胞移植治疗下肢慢性缺血性疾病的护理

下肢慢性缺血性疾病是因为各种原因造成动脉血流中断,导致闭塞动脉远端组织灌注不足、循环障碍的一系列疾病的总称。轻者患肢皮肤苍白、皮温下降、感觉减退、汗毛脱落及组织萎缩等,临床以间歇性跛行为主要症状;重者主要症状为静息痛,指（趾）端出现坏疽或缺血性溃疡,最终因坏疽和感染导致截肢,致残率极高。     

脐血间充质干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从胎儿脐带血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为神经细胞的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的研究价值,该文将对脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导方法作一综述。     

人脐带间质干细胞对大鼠的免疫毒性研究

目的:研究人脐带间质干细胞(UCMSC)对Wistar大鼠的免疫毒性作用。方法:SPF级Wistar大鼠112只分为4组:溶媒组(给予溶媒5 ml/kg)、低剂量组(给予人UCMSC 1×107个/kg)、高剂量组(给予人UCMSC 5×107个/kg)和对照组(给予大鼠UCMSC 1×107个/kg)。每组28只大鼠,雌雄各14只。大鼠尾静脉注射给药,2周1次,共注射4次。给UCMSC后每周进行受体鼠临床移植物抗宿主病(GVHD)评分,末次注射UCMSC后1、13周检测血IgG、IgM含量,CD3+、CD4+、CD8+T细胞数量,并对大鼠淋巴结、胸腺、脾脏进行脏器系数计算和组织病理学检查。结果:给予UCMSC后,各组大鼠的GVHD评分值均为0。末次给予UCMSC后1周,低、高剂量组雌性大鼠IgG[(0.65±0.12)、(0.63±0.14)g/L]和IgM含量[(0.06±0.01)、(0.06±0.01)g/L]明显高于溶媒组雄性大鼠[(0.41±0.17)g/L、(0.04±0.01)g/L,P<0.01或P<0.05];高剂量组雄性大鼠IgM含量[(0.05±0.01)g/L]明显高于溶媒组雄性大鼠[(0.03±0.01)g/L,P<0.01];对照组雌性、雄性大鼠IgM[(0.06±0.02)、(0.05±0.02)g/L]也明显高于溶媒组(P<0.01或P<0.05)。末次给予UCMSC后13周,各剂量组雌、雄性大鼠IgG、IgM与溶媒组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。末次给予UCMSC后1周,低、高剂量组雌性大鼠的脾脏系数[分别为(0.274±0.016)%、(0.294±0.019)%]明显高于溶媒组[(0.232±0.012)%,P<0.01];高剂量组雄性大鼠的脾脏系数[(0.242±0.027)%]明显高于溶媒组[(0.202±0.012)%,P<0.01];对照组雌、雄性大鼠脾脏系数[分别为(0.261±0.019)%、(0.236±0.014)%]也明显高于溶媒组(P<0.05或P<0.01)。末次给予UCMSC后13周各组大鼠的脾脏和胸腺系数差异均无统计学意义(均P>0.05)。各组大鼠CD3+、CD4+、CD8+T细胞百分比及CD4+/CD8+比值均在正常范围内。各组大鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结组织病理学检查均未见明显异常。结论:人脐带间质干细胞可引起正常Wistar大鼠免疫球蛋白含量和脾脏系数的升高,该作用具有一过性和可逆性。     

体外培养人脐带血间充质干细胞向胰岛细胞分化及对糖尿病治疗的实验研究

目的研究人脐带血间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的潜能及其移植后对糖尿病大鼠的治疗效果。方法体外分离培养HUCB-MSCs,在胰岛细胞培养条件下经药物定向诱导其分化;免疫组化对诱导细胞进行胰岛β细胞标记鉴定;双硫腙染色鉴定锌离子表达及检测胰岛样细胞的移植效果。结果 HUCB-MSCs经诱导后,免疫细胞化学染色显示表达人胰岛素;双硫腙染色呈棕红色;移植后2周,胰岛样细胞组血糖浓度明显降低。结论 HUCB-MSCs在体外诱导培养条件下,具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这种细胞可能为Ⅰ型糖尿病提供一条新的治疗途径。     

人脐血MSCs的分离培养及向神经的诱导分化

目的探讨人脐血中分离所得到间充质干细胞（MSCs）向神经组织细胞诱导分化的实验条件。方法淋巴细胞分离液分离正常人脐血单个核细胞,利用差速消化法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型。取2至4代的MSCs加入含有维甲酸（RA）与神经生长因子（NGF）的诱导分化培养基将其定向诱导,免疫细胞化学染色检测诱导后的MSCs神经元和神经胶质细胞标志的表达。结果脐血MSCs每传一代,细胞数量增加约2～3倍。流式细胞仪检测,脐血MSCs不表达CD34,表达CD25、CD29、CD105、CD106。诱导后的细胞不仅形态类似神经元和神经胶质细胞,而且表达神经丝蛋白200（NF）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）。结论从人脐血中可以分离得到与骨髓相似的MSCs,并且能够在体外分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞。     

移植维甲酸诱导的人胚神经干细胞在受损大鼠脊髓内的分化及作用

目的 将维甲酸(RA)诱导的人胚神经干细胞移植入受损的大鼠脊髓内,观察大鼠后肢运动功能的变化及细胞的分化情况。方法 实验大鼠30只遭受脊髓中度损伤后7天作移植治疗,实验组分两组：一组移植经维甲酸诱导后的细胞,另一组移植未诱导的细胞;对照组注射等量PBS液。每周一次观察大鼠后肢运动情况,移植后4周,应用免疫组化技术检测移植细胞在大鼠脊髓内的生存和分化情况。结果 实验组大鼠脊髓内见许多移植细胞存在,部分可分化出神经元样细胞,其后肢运动功能优于对照组。其中维甲酸诱导组能分化出神经元样细胞,其促进脊髓功能恢复的能力较另一组更强。结论 维甲酸预处理的神经干细胞在体内能替代缺失的神经细胞,促进受损的脊髓功能恢复．在脊髓损伤的临床治疗中具有潜在的应用价值。     

人神经干细胞移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

目的研究人神经干细胞（hNSCs）移植对大鼠脊髓损伤的修复作用，并初步探讨其作用原理。方法分离、培养和鉴定hNSCs。24例成年SD大鼠分为移植组12例和对照组12例，均采用NYU-Ⅱ型脊髓打击器制作脊髓损伤模型，第9天移植组于损伤脊髓中心分别注入经CM-DiI标记的hNSCs混悬液，对照组注入人DMEM／F12培养液。术后第4、8周取损伤部位脊髓，免疫组织化学染色检测移植细胞的存活和分化；术后每7天行BBB评分，评定大鼠后肢运动功能恢复情况。数据进行成组设计资料的t检验。结果成功建立hNSCs的体外培养体系；移植的hNSCs在大鼠脊髓内存活超过8周，并向脊髓损伤头尾端迁移，免疫组织化学荧光染色示移植细胞可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞；移植组大鼠BBB评分高于对照组（P〈0．05）。结论移植到大鼠损伤脊髓中的人神经干细胞可分化为神经元和神经胶质细胞，并可促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复。     

Transplantation and other uses of human umbilical cord blood and stem cells

Human umbilical cord blood (CB) has established itself as a legitimate source for hematopoeitic stem cell transplantations. Since the first transplantation was performed in 1988, it is estimated that approximately 4,000 patients, with malignant and non-malignant diseases, were transplanted with CB. Comparing to bone marrow transplants, cord blood's collection is easier and safer. It is also quicker to perform CB transplantation from the time of beginning of donor search. One of the major advantages of it is the na?ve nature of newborn's immune system. This allows transplantations with less restriction of the HLA system, and with fewer graft versus host disease (GVHD) cases. A true setback of CB transplantations is the slow pace of engraftment. This fact has negative impact on treatment related mortality and is related to the amount of stem cell infused. Since CB has limited nucleated cell dose, transplanting it to heavier patients, namely adults, poses many difficulties. But the skepticism about the possibility that CB might be used in adult hematopoetic stem cell transplantations, can decline after few large scale trials have shown that it is definitely a feasible procedure. Few fields of research might help to improve the outcome of CB transplantations. While some strategies are at different investigational stages, others are at advanced phases of clinical studies. Main strategies are based on expansion of the number of the stem cells in CB grafts, induction of a temporary engraftment with other stem cell sources, or reduction of the toxicity of the conditioning regimens. It is encouraging to witness that the outcome of CB transplantations is improving constantly. Other potential uses of CB are also discussed. It was used for gene transfer for primary immune deficiency, and it was also demonstrated in animal models that its stem cell could serve as regenerative cells in non-hematopoeitic injured tissues. CB has broad spectrum of possible uses, but hematopoeitic stem cell transplantation is still the major indication. In an era where 30-40% of patients will not have a matched related or unrelated donor, CB is a major alternative, which provide a true chance for cure for a wide variety of diseases.     

人脐带间充质干细胞的生物学特性及向神经样细胞分化的研究

目的探究人脐带间充质干细胞具有的生物学特性,并对其向神经样细胞的分化进行研究。方法检测人脐带间充质干细胞细胞表面的标记;以β巯基乙醇与丹参诱导其向神经细胞分化,并为分化细胞与未分化细胞进行免疫细胞化学鉴定。此外,半定量RT-PCR检测细胞神经相关基因表达。结果分离自人脐带的贴壁细胞在体外可以生长成类似成纤维细胞的形态,在未分化状态下可以维持稳定增殖形态,且体外增殖远超10代,这类细胞表面标记CD105、CD59、CD44、CD29有较高的表达,而造血细胞的表面标记CD117、CD45、CD34、CD33、CD28、CD14则无表达或低表达,而与其相同表达的还有移植免疫排斥相关的表面标记,如CD86、CD80、CD40。经诱导分化的细胞表达神经元标记β-Ⅲ类神经微管和神经微丝、神经干细胞标记巢蛋白、神经胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白。经过RT-PCR检测可知,经丹参诱导后的间充质干细胞表达神经干细胞的相关基因Neatin,而诱导前后间充质干细胞全部表达神经细胞基因Pleiotrophin并且在诱导后表达增强。结论人脐带间充质干细胞具有易于培养扩增的生物学特性,其表达间充质干细胞的表面标记,低或不表达造血细胞、与移植排斥有关的细胞标记。同时,其可以分化为神经样细胞并表达神经细胞的基因与相关标记,这种细胞可以作为肝细胞的一个来源,用于中枢神经系统细胞的移植。     

三七总皂苷对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的保护作用

目的:探讨三七总皂苷对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的脑保护作用及其机制.方法:随机将48只新生SD大鼠分成正常组、缺氧缺血性脑损伤模型组和三七总皂苷治疗组,各组大鼠分别行10d的生理盐水和三七总皂苷腹腔注射,比色法检测大鼠脑匀浆中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量.结果:与模型组比较,三七总皂苷能显著升高大鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛含量,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:脑组织抗氧化应激能力增强可能是三七总皂苷发挥对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑保护作用的机制.