慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞上Toll样受体的表达变化

目的 分析慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)上Toll样受体3(TLR3)的表达变化及其临床意义.方法 随机筛选慢性乙型肝炎(CHB)患者20例,并以10例健康者作对照,分别从外周血分离单个核细胞,体外诱导培养DC.流式细胞仪(FCM)测定未成熟期DC(imDC)与成熟期DC(mDC)的表型;分别应用流式细胞仪和Western印迹法测定imDC与mDC上TLR3的表达率和受体蛋白的表达.结果 在健康对照组,mDC表面分子CD80、CD86、组织相容性白细胞抗原(HLA)-DR、CD83的表达率分别为(82.35±8.67)%、(79.61±10.08)%、(92.79±8.48)%和(83.76±5.47)%,imDC表面分子表达率分别为(28.31±8.79)%、(31.17±11.23)%、(27.61±10.28)%和(23.46±11.53)%,各组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);而在CHB组,mDC与imDC表面分子表达率分别为(42.46±9.22)%、(40.72±11.24)%、(48.57±12.51)%、(22.25±11.22)%和(18.57±10.22)%、(24.16±10.46)%、(17.87±10.38)%、(14.28±6.77)%,各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);健康者组mDC上表面分子的表达率与CHB患者组比较,各组间差异均有统计学意义,而两组受试者imDC上表面分子的表达率比较,差异均无统计学意义.健康对照imDC上TLR3的表达率明显高于mDC(P＜0.01),而CHB患者imDC与mDC上TLR3的表达率差异无统计学意义(P＞0.05);且CHB患者imDC上TLR3的表达率明显低于健康对照(P＜0.01).结论 CHB患者外周血DC上存在TLR3的表达下调,可能是HBV感染慢性化的重要原因.     

DC-SIGN在慢性乙型肝炎病毒感染时树突状细胞成熟活化中的作用

目的研究慢性HBV感染时,DC-SIGN在树突状细胞（DC）成熟和活化中介导的作用。方法将α-甘露糖苷酶抑制剂-基夫碱作用于HepG2.2.15细胞,收获上清中的高甘露糖型HBV颗粒,并于第5 d加入到外周血单核细胞衍生的DC培养基中,培养至第7 d,采用流式细胞仪检测DC表面CDla、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子的表达,MTT法检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力,ELISA法检测DC分泌IL-12的水平。结果高甘露糖型HBV组,与天然的HBV组相比,DC表面CDla、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子的表达增加,分泌IL-12的水平升高,刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力亦明显增强,且上述效应均可被DC-SIGN特异性抗体所阻断。结论 DC-SIGN识别高甘露糖型HBV后可以促进DC的成熟和活化,天然的HBV可能利用α-甘露糖苷酶参与的去甘露聚糖修饰来逃避DC-SIGN的识别,从而诱导DC功能的缺陷。     

中药辨证干预对慢性乙型肝炎肾虚患者树突状细胞功能影响

目的研究中药辨证干预对慢性乙型肝炎（CHB）肾虚患者外周血树突状细胞（DC）功能的影响。方法 CHB肾虚证患者60例,健康对照组10例,分离各组外周血单个核细胞,体外诱导培养DC,流式细胞仪检测DC表面分子CD80、CD86、CD1a、HLA-DR表达率;酶联免疫吸附检测（ELISA）检测DC培养上清液中细胞因子IL-10表达水平,同时检测CHB患者血清HBV DNA定量并记录中医证候积分。予中药辨证干预治疗3个月,检测患者治疗后外周血DC表面分子CD80、CD86、CD1a、HLA-DR及培养上清中IL-10的表达水平及血清HBV DNA定量,并记录中医证候积分的变化。结果治疗前CHB肾虚证患者CD80、CD86、CD1a、HLA-DR表达率显著低于正常对照组（P〈0.05）,IL-10表达水平显著高于正常对照组（P〈0.05）;治疗后CHB肾虚证患者CD80、CD86、CD1a、HLA-DR表达率明显提高、IL-10表达水平明显降低（P〈0.05）,中医证候积分明显改善（P〈0.05）。结论 CHB肾虚证患者存在DC成熟障碍及功能异常,主要表现为表面共刺激分子表达率下降,抑制因子表达率升高。中药辨证干预不仅能改善患者中医证候积分,同时能提高DC表面共刺激分子表达率,降低抑制因子表达率,提示DC可能与中医虚实病机存在一定相关性。     

慢性乙型肝炎患者肠源性内毒素血症与树突状细胞表型及功能的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DC)与肠源性内毒素血症(IETM)的关系.方法 CHB患者80例,健康对照者21例,采集外周血,测定血浆内毒素含量、ALT、TBil.根据血浆内毒素水平,将患者分为内毒素阳性组和阴性组.同时用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素-4、酪氨酸激酶受体3配体和TNF-a体外诱导、培养CHB患者DC,采用流式细胞仪检测DC表型,混合淋巴细胞反应检测DC刺激T淋巴细胞的能力,用ELISA检测DC分泌细胞因子的水平.多组间比较采用单因素方差分析.结果 CHB患者DC表达CD83、CD80、CD86和人类白细胞抗原(HLA)-DR分子的水平及诱导同种异体混合T淋巴细胞增殖的能力均明显低于健康对照组.内毒素阳性组患者表达CD83、CD80、CD86、HLA-DR水平及诱导T淋巴细胞增殖的能力分别为(8.25±3.63)%、(10.63±4.52)%、(36.61±16.16)%、(61.65±14.33)%、0.812±0.311,明显低于内毒素阴性组的(11.39±4.35)%、(13.56±5.13)%、(45.90±15.35)%、(70.35±18.89)%、1.153±0.324(F=5.123、4.213、3.714、3.323、3.125,均P＜0.05).培养至第9天,CHB患者DC分泌IL-12和IFN-γ分别为(16.99±6.74)pg/mL和(10.52±4.19)pg/mL,明显低于健康者的(44.51±14.56)pg/mL和(17.94±5.86)pg/mL.内毒素阳性组患者IL-12水平为(13.14±5.71)pg/mL,明显低于内毒素阴性组的(20.98±9.03)pg/mL(F=3.225,P=0.016).IFN-γ水平在内毒素阳性组为(9.46±3.24)pg/mL,与阴性组的(11.54±5.20)pg/mL比较,差异无统计学意义(F=2.003,P=0.076).结论 IETM是导致CHB患者体内DC功能异常的原因之一.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between dendritic cell (DC)and intestinal endotoxemia in patients with chronic hepatitis B (CHB).Methods Peripheral blood were collected from CHB patients (n = 80)and healthy controls (n = 21 ).Plasma endotoxin (ET)levels,liver function (alanine transaminase,total bilirubin)were detected.According to plasma ET concentration,all CHB patients were divided into two groups:ET positive and ET negative.The peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)were isolated and then cultured with recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor ( rhGM-CSF),recombinant human interleukin-4 ( rhIL-4 ),FMS-related tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L)and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α)to derive DC.The phenotypic patterns were characterized by flow cytometry.The proliferation of T lymphocytes was evaluated with mixed leukocytes reaction (MLR)and the levels of IL-12 and interferon-γ (IFN-γ)produced by DC were analyzed with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Comparisons among the two groups and healthy control group were done by single factor analysis of variance.Results Compared to healthy controls,the expressions of CD83,CD80,CD86,human leucocyte antigen (HLA)-DR and the proliferation of allogeneic T lymphocytes by DC were all significantly reduced in CHB patient groups.The expressions of CD83,CD80,CD86,HLA-DR and the activation of proliferation in ET positive subjects were lower than those in ET negative subjects [CD83 (8.25±3.63)% vs(11.39±4.35)% ,CD80 (10.63±4.52)% vs (13.56±5.13)%,CD86 (36.61±16.16)% vs (45.90±15.35)%,HLA-DR (61.65±14.33)% vs (70.35±18.89)%,the activation of proliferation0.812±0.311 vs 1.153±0.324; F=5.123,4.213,3.714,3.323 and 3.125,respectively; all P＜0.05].After cultured for 9 days,the secretions of IL-12 and IFN-γ by DC were significantly lower in CHB patients than in healthy controls [IL-12 (16.99± 6.74)pg/mL vs (44.51±14.56)pg/mL,IFN-γ (10.52±4.19)pg/mL vs (17.94±5.86)pg/mL].The level of IL-12 in the ET positive group was significantly lower than that ET negative group [( 13.14 ±5.71)pg/mL vs (20.98 ± 9.03)pg/mL; F= 3.225,P = 0.016].The level of IFN-γ was not different between two groups [(9.46 ± 3.24)pg/mL vs (11.54 ± 5.20)pg/mL; F = 2.003,P =0.076].Conclusion The intestinal endotoxemia may play a role in DC dysfunction in CHB patients.     

慢性乙型肝炎患者单核细胞来源树突状细胞Toll样受体的表达特征分析

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者单核细胞来源树突状细胞（moDC）Toll样受体（TLR）的表达，并分析抗病毒相关TLR（TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9）在CHB患者moDC的表达特征及意义。方法用羟乙基淀粉（HES）分离10例CHB患者及15例健康对照外周血单个核细胞（PBMC），经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）诱导培养树突状细胞（DC），经流式细胞仪用特异性单克隆抗体检测不同成熟阶段DC的TLR表达，并以HBcAg负载未成熟DC，应用FACS分析HBcAg的负载效率及细胞内IFN-γ、IL-4表达水平。结果moDC不同成熟阶段TLR的表达水平不同；CHB患者的未成熟moDC（imDC）表达的TLR7、TLR8低于健康对照（75．9％、1．0％比98．4％、15．4％，P〈0．05），CHB患者成熟moDC（mDC）表达TLR3、TLR7低于健康对照（9．5％、79．7％比11．5％、90．7％，P〈0．05）；应用HBcAg分别于细胞培养第3天和第5天冲击DC，第1次冲击后48hHBcAg的膜内、膜外负载率分别为53．0％和7．5％，第2次冲击后分别为80．2％和19．0％；HBcAg负载或未负载的moDC，均刺激淋巴细胞高表达IFN-γ，较少表达或不表达IL-4，呈现显著的Th1免疫应答。结论CHB患者moDC的抗病毒相关TLR表达低下，且可能是其DC功能低下的重要原因之一；应用HBcAg冲击imDC，可使其有效负载HBcAg，负载后DC的成熟过程及功能不受影响，仍以诱导Th1免疫应答反应为主。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞诱导的HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞PD-1的表达

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DC)诱导的HBV特异性细胞毒性T细胞(CTL)表面程序性死亡受体1(PD-1)的表达情况及其与HBV DNA的关系.方法 采集30例CHB患者和10例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMC),在白细胞介素(IL)-4和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的作用下培养使DC增殖、成熟,培养第4d加入纯化的HBsAg进行冲击.采同一患者外周血,分离出自体T淋巴细胞,用含重组人白细胞介素(rhIL)-2的培养基维持T细胞的生长,培养第5d与HBsAg冲击的DC共培养.以流式细胞技术检测CTL的PD-1表达,并分析PD-1表达水平与HBV DNA的关系.结果 与健康对照组比较,CHB组DC诱导的HBV特异CTL的PD-1的表达明显升高(P=0.000).且HBeAg阳性组PD-1的表达率较HBeAg阴性组明显升高(P=0.000).CHB患者DC诱导的HBV特异性CTL的PD-1表达率与血清HBV DNA拷贝数的对数值呈正相关(r=0.53,P=0.008).结论 CHB患者DC诱导的HBV特异性CTL高表达PD-1分子,为HBV慢性感染过程中CTL功能低下,病毒难以清除提供了另一条重要线索.     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞调节作用的体外研究

背景：近年研究显示慢性乙型肝炎（CHB）患者体内树突状细胞（DC）存在不同程度的功能缺失。胸腺肽α1（T-α1）是一种生物学应答调节物质,对CHB的临床治疗有较好疗效。目的：研究T-α1对CHB患者外周血DC分化和功能成熟的影响,寻求改善DC功能的途径。方法：从12例CHB患者和10名健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）中分离培养DC。培养过程中应用不同浓度T-α1干预DC。以流式细胞仪检测DC表面标志,以甲基噻唑基四唑（MTT）实验检测混合淋巴细胞反应中DC刺激T细胞增殖的能力。结果：从PBMC分离培养得到的外周血DC呈现典型树突状形态。CHB组DC表面标记物CD80、CD86、人白细胞位点DR抗原（HLA-DR）水平以及刺激T细胞增殖的能力显著低于正常对照组（P〈0.001）;经T-α1干预后,两组上述指标均较相应空白对照升高,尤以0.5μg/mlT-α1的作用为著（P〈0.05）,可使CHB组上述指标恢复至正常水平。结论：T-α1能促进CHB患者外周血DC分化和功能成熟,在CHBDC疫苗的研究中可能具有重要价值。     

含CpG基序寡核苷酸对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的免疫激活研究

目的 研究含非甲基化CpG基序的寡核苷酸（CpG-ODN）对慢性乙型肝炎患者（CHB）外周血树突状细胞（DC）表型和功能的影响。方法以CD14磁性分选微珠分离CHB患者外周血高纯度单核细胞；以重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（hGM—CSF）、重组人白细胞介素-4（hIL-4）诱导扩增DC；以CpG-ODN刺激DC成熟，并与肿瘤坏死因子（TNF）-n比较，评价其对DC表达表面分子人类白细胞组织相容性抗原（HLA）-DR、CD86、CD1a，分泌IL-12p70以及刺激同种T细胞增殖能力的影响。结果与non—ODN和磷酸盐缓冲液（PBS）组比较，CpG-ODN能明显提高CHB患者外周血DC表面分子HLA—DR、CD86的表达，使IL-12分泌增加，刺激同种异体T细胞增殖的能力亦显著增强（P=0．017和0．023），但不能明显提高CD1a的表达；CpG-ODN的上述刺激作用接近或略逊于hTNF-α，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CpG-ODN与hTNF-α一样能够促进CHB患者外周血DC成熟进而增强其抗原提呈功能。     

自体树突状细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的观察乙型肝炎表面抗原(HBsAg)疫苗负载的自体树突状细胞(DC)治疗慢性乙型肝炎(CHB)的临床效果。 方法 试验19例CHB患者,取静脉外周血,用密度梯度离心及贴壁法获得单核细胞;用粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)细胞因子诱导扩增出DC;于第7天用HBsAg致敏后经皮下回输入患者体内,共回输两次(间隔两周)。治疗后,每隔两个月检测受试者的肝功能、HBV DNA定量及血清乙型肝炎标志物。 结果 截止2002年11月的随访结果,57.9％(11/19)的患者发生了不同程度的应答反应,HBeAg的阴转率为52.6％(10/19),HBeAg/抗-HBe血清转换率为26.3％(5/19),HBV DNA定量的拷贝数下降101.77±2.39(t=3.13,P<0.01),两例联合拉米夫定治疗的患者出现较完全的应答,DC疗法与另两种抗病毒方法效果间差异无显著性;试验前患者肝功能的高低与试验有效率间并无显著相关性。 结论 在体外诱导扩增的自身DC细胞,经HBsAg致敏后皮下回输,可有效抑制HBV的复制,减少血内病毒载量,清除HBeAg和促进HBeAg/抗-HBe的血清转换。在试验前丙氨酸氨基转移酶(ALT)高或正常的患者均可对DC治疗发生应答。DC联合拉米夫定治疗可达快速清除病毒的效果。     

肝素对慢性乙型肝炎患者树突状细胞免疫功能的作用

慢性乙型肝炎(CHB)发生的重要原因之一是患者的机体不能对乙型肝炎病毒川BV)形成充分有效的免疫应答以清除病毒。树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞,在激活T细胞介导的免疫中具有重要的作用。近期文献报道及我们的研究结果提示CHB患者DC不仅数量较少而且发育障碍、功能低下。所以促进CHB患者DC发育并改善其功能,对提高CHB患者的免疫功能以清除体内的HBV有重要意义。本文通过研究肝素在体外对CHB患者DC功能的调节作用,为寻找能促进DC成熟的经济有效的诱导因子提供实验依据。一、材料与方法 1．材料：巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(北京医科大学免疫室提供)；白细胞介素(IL)4、肿瘤坏死因子(TNF) α、干扰素(IFN)γ(美国Promega公司产品)；荧光标记的抗人CDla、CD40、CD80、CD83、CD86、人类白细胞抗原-DR 单克隆抗体(美国lmmunotech公司产品)；RPMI 1640培养基、MTT、异硫氰酸荧光素(FITC)-Dextran(美国Sigma     

慢性乙型肝炎患者CD11c+髓样树突状细胞数量和功能的变化

BV形成免疫耐受是其持续感染的主要原因.树突状细胞(DC)作为体内最强的抗原递呈细胞,在诱导HBV特异性细胞毒T淋巴细胞反应中起重要作用[1].其中外周血DCs前体CD11c+髓样树突状细胞(mDC)主要发挥抗原提呈功能,促进Th1细胞极化和细胞免疫的发生[2].     

乙型肝炎患者树突状细胞内HBV DNA存在状况的研究

目的:研究慢性乙型肝炎患者外周血培养的树突状细胞(DC)内乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)存在状况,分析HBV DNA与DC功能下降的内在联系.方法:从慢性乙型肝炎患者外周血中分离单个核细胞,在含rhGM-CSF,rhIL-4的培养基中诱导培养为DC,用流式细胞仪检测乙肝患者DC的表型变化,用流式细胞仪分选出树突状细胞,应用PCR技术检测DC内HBV DNA存在状况.结果:①表达于慢性乙型肝炎患者DC表面的共刺激分子(B7-1,B7-2,CD1α)及MHC-Ⅱ类分子(HLA-DR)的水平明显降低.②树突状细胞内HBV DNA检测结果阳性.结论:乙型肝炎患者树突状细胞内存在HBV DNA感染,慢性乙型肝炎患者树突状细胞与正常人相比,表型表达降低.     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞Toll样受体3触发后Ⅰ型干扰素的表达

目的 了解慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞来源的树突状细胞Toll样受体3(TLR3)触发后Ⅰ型IFN表达情况.方法 选取CHB患者26例,健康对照者18例,抽取外周血用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的单核细胞(同时留取血浆),体外培养诱导为未成熟的树突状细胞,给予聚肌胞苷酸(Poly Ⅰ:C)刺激,在刺激0、24 h收集细胞培养上清液,用ELISA法测定血浆及细胞培养上清液中Ⅰ型IFN(IFN-α,IFN-β)表达水平.均数间两两比较采用t检验.结果 在血浆中,两组Ⅰ型IFN表达水平的差异无统计学意义.刺激前(0 h),CHB组单个核细胞来源的树突状细胞表达的IFN-α、IFN-β分别为(80.00±16.15)ng/L和(36.39±13.90)ng/L,对照组分别为(76.76±15.90)ng/L和(37.14±13.68)ng/L,差异均无统计学意义(t=1.651,t=0.178;均P＞0.05).两组刺激后24 h的IFN-α表达水平均比刺激前(0 h)升高,但差异无统计学意义(t=1.534,t=1.243;均P＞0.05).刺激后24 h,对照组IFN-β水平为(54.57±16.80)ng/L,显著高于刺激前(0 h)的(37.14±13.68)ng/L(t=4.061,P＜0.05);但在CHB组,两者的差异无统计学意义(t=1.796,P＞0.05).刺激后24 h,两组的IFN-α表达水平差异无统计学意义(t=0.792,P＞0.05),而IFN-β水平在对照组为(54.57±16.80)ng/L,显著高于CHB组的(41.64±12.57)ng/L(t=2.921,P＜0.05).结论 CHB患者单个核细胞来源的树突状细胞存在功能障碍,不能正常表达Ⅰ型IFN.TLR3触发后单个核细胞来源的树突状细胞表达的Ⅰ型IFN以IFN-β为主.     

乙型肝炎相关慢加急性肝哀竭患者外周血树突状细胞水平及临床意义

目的：探讨乙型肝炎相关的慢加急性肝衰竭（acute －on －Chronic hepatitis B liver failure,ACHBLF）患者外周血树突状细胞（DCs）水平与临床转归的关系。方法收集2010年6月－2014年9月北京佑安医院收治的 ACHBLF 患者70例,以3个月后的临床预后结局分为存活组和死亡组。多因素 Logistic 回归分析影响患者预后的临床指标,同时采用流式细胞术检测外周 DCs 亚群绝对数（107）及百分比（％）;两独立样本 t 检验或秩和检验比较两组 DCs 水平差异并通过线性相关及多因素回归分析确定其是否可作为慢加急性肝衰竭临床转归的独立预测因素。结果TBil 是影响慢加急性肝衰竭3个月预后的临床指标[比值比（OR）＝1．008,95％可信区间（95％CI）：1．003～1．014,P ＝0．003）。存活组外周血髓样 DCs（mDCs）绝对数[（7．3±6．2）×107]明显高于死亡组[（4．1±4．0）×107]（t ＝2．336,P ＜0．05）;存活组患者外周血浆系 DCs（pDCs）绝对数[（0．8±0．6）×107]也明显高于死亡组[（0．4±0．5）×107]（t ＝2．307,P ＜0．05）;mDCs 百分比（Z ＝－0．080,P ＞0．05）及 pDCs 百分比（t ＝－0．248,P ＞0．05）在两组间差异无统计学意义。mDCs 和 pDCs 绝对数与 TBil 无线性相关关系（R2值分别为0．009和0．059）,mDCs 与 pDCs 绝对数可纳入多因素回归方程,结果显示 mDCs（OR ＝0．789,95％CI：0．665～0．935,P ＝0．006）和 TBil（OR ＝1．013,95％CI：1．006～1．020,P＜0．001）是慢加急性肝衰竭预后的独立预测因素。结论ACHBLF 患者外周血 mDCs 及 pDCs 绝对数存活组高于死亡组,mDCs 绝对数是慢加急性肝衰竭预后的独立预测因素。DCs 数量的差异可能是影响肝衰竭患者临床转归的原因之一。     

慢性乙型重型肝炎患者外周血单个核细胞衍生的树突状细胞表型与功能

目的 通过检测慢性乙型重型肝炎(CSHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)衍生的树突状细胞(MoDC)经聚肌胞苷酸刺激后表型变化及细胞因子分泌情况,了解MoDC的免疫调节功能及其在慢性乙型肝炎(CHB)重症化中的作用.方法 采集CSHB组患者37例、CHB组患者20例和健康对照者20例的外周血,分离PBMC,免疫磁珠细胞分选法获得纯化的PBMC,体外培养诱导为未成熟树突状细胞(iDC),聚肌胞苷酸刺激为成熟树突状细胞(mDC).流式细胞术检测iDC及mDC细胞表面人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、CD83、CD86、CD80的平均荧光强度(MFI);ELISA测定聚肌胞苷酸刺激后12、24、48 h的MoDC培养上清液中IL-12、IL-6、TNF-α分泌水平.多组间比较采用单因素方差分析,并进行方差齐性检验.结果 3组iDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI比较,差异无统计学意义.CSHB组患者mDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI与CHB组、健康对照组比较,显著低下(F值分别为59.73、13.95、34.80和73.02,均P＜0.05).聚肌胞苷酸刺激12、24、48 h时IL-12分泌量为:健康对照组＞CHB组＞CSHB组(F值分别为151.34、126.65、72.76,均P＜0.05),其中24 h时分泌量最高,分别为(48.2±7.6)、(56.7±11.8)、(97.8±16.2)ng/L.IL-6在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为92.50、86.89、64.57,均P＜0.05),其中12 h分泌量最高,分别为(1698.3±340.4)、(965.8±231.7)、(697.8±213.6)ng/L.TNF-α在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为58.66、122.36、44.73,均P＜0.05),24 h表达量分别为(19 672.7±4214.7)、(9946.1±2586.5)、(6659.2±955.8)ng/L.结论 CSHB患者MoDC成熟障碍,表现为IL-12分泌低下,而IL-6及TNF-α分泌亢进,可能是加剧肝脏炎性反应致重型肝炎的重要因素.     

e抗原阳性慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞Toll样受体3的表达及意义

目的探讨Toll样受体3（TLR3）的表达与HBV感染后宿主免疫清除障碍的关系。方法选取轻度CHB患者50例,健康对照者48名,其外周血用免疫磁珠细胞分选法获得纯化的CD14^＋单核细胞,用RPMI 1640培养基培养,并且用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和hIL-4诱导单核细胞成为未成熟的髓样树突状细胞（mDC）,加入聚肌胞刺激后获得成熟的mDC。分别在剌激后0、12、24、48h用流式细胞仪检测TLR3、CD86、HLA-DR和CD1a的表达,实时PCR检测TLR3的表达变化。结果健康对照组中mDC在刺激后24h,TLR3表达较0 h时上调显著（P〈0.05）,48h时TLR3的表达与0h相比差异无统计学意义（P〉0.05）;患者组在刺激后12、24h TLR3的表达与0h时相比,上调不明显,48h时TLR3的表达显著上调（P〈0.05）。实时PCR检测mDC上TLR3 mRNA结果发现,对照组TLR3 mRNA在刺激后12h的表达水平较0h显著上升（P〈0.05）,也显著高于患者组刺激后0、12、24h的表达水平;患者组刺激后48h的TLR3 mRNA表达水平较0h显著上升（P〈0.05）。与0h比较,健康对照组在刺激后12、24h和48h,CD86的表达水平显著高于患者组（P〈0.05）。患者组与对照组间CD1a和HLA-DR的表达差异无统计学意义。结论慢性HBV感染者mDC受聚肌胞刺激后TLR3表达异常,协同刺激因子CD86表达低下,可能造成宿主对HBV感染的免疫清除障碍,导致疾病慢性化。     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的体外影响

树突状细胞(DC)是人体内抗原提呈能力最强的抗原提呈细胞(APC),在抗病毒的细胞免疫中起重要作用[1].慢性乙型肝炎(CHB)形成的重要原因之一是患者DC功能低下[2];胸腺肽α1是一种由28个氨基酸构成的胸腺多肽,被广泛用于调节机体免疫,促进T淋巴细胞功能可能是其重要机制之一.作为临床上治疗CHB的重要辅助用药,我们对胸腺肽α1调节CHB患者DC功能进行了研究.     

慢性乙型肝炎患者浆样树突状细胞体外诱导CD4+CD25+调节性T细胞的研究

目的 观察慢性乙型肝炎患者,乙型肝炎恢复者和健康人浆样树突状细胞(pDCs)体外诱导CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)能力的差异,为阐明HBV感染慢性化的机制奠定基础.方法 采用免疫磁珠分离法体外分离46例慢性乙型肝炎患者,10例乙型肝炎恢复者和25名健康人外周血单个核细胞中pDCs,并将其分别与健康人CD4+CD45RA+初始T细胞共培养.采用HBcAg或破伤风毒素对去除CD25+细胞的外周血单个核细胞进行增殖刺激后,使用流式细胞仪及RT-PCR对pDCs-T共培养细胞中CD4+CD25+Treg的数量、表型及FOXP3基因表达情况进行测定;采用酶联免疫吸附法对共培养细胞上清液中的白细胞介素-10和转化生长因子β1进行了进一步检测.两组数据比较采用Mann Whitney U-test.结果 当细胞增殖刺激物为HBcAg时,细胞增殖幅度慢性乙型肝炎患者组为(7999.36±374.74)cpm,乙型肝炎恢复者组为(11 282.56±1174.46)cpm和健康人组为(12 304.58±1462.81)cpm,慢性乙型肝炎患者组细胞增殖幅度明显小于乙型肝炎恢复者组和健康人组,U=0～22.0,P值均<0.05·乙型肝炎恢复者组和健康人组间增殖幅度差异无统计学意义.当增殖刺激物为破伤风毒素时,细胞增殖幅度与阳性对照组之间,差异无统计学意义.CD4+CD25+Treg比例慢性乙型肝炎患者组为5.99%±1.85%,乙型肝炎恢复者组为3.04%±0.79%,健康人组为3.01%±1.53%,慢性乙型肝炎患者组中韵CD4+CD25+Treg比例明显高于乙型肝炎恢复者组和健康人组,U=6.0～71.5,P值均<0.05.3组人群pDCs-T共培养细胞的CD4+CD25+T细胞均检测到Fox p3 RNA,而在CD4+CD25 T细胞中,均未检测到Fox p3RNA.3组人群pDCs-T共培养细胞实验组上清液的白细胞介素-10和转化生长因子β1含量均明显高于阳性对照组.结论 pDCs以诱导CD4+CD25+Treg形式参与了乙型肝炎的慢性化.     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能与单个核细胞乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)及树突状细胞(DC)内HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的存在状况,DC成熟度及功能状态与DC或PBMC中HBV cccDNA载量的关系.方法 分离29例CHB患者和10例健康对照者的PBMC,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CS...     

乙型肝炎病毒感染不同时期患者外周血树突状细胞亚群数量的变化

目的 探讨HBV感染患者不同感染时期(免疫耐受期、免疫活动期、非复制期)的树突状细胞(DC)亚群髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)数量的差异及其与外周血HBV DNA水平的相关性.方法 收集HBV感染不同阶段的患者30例,分为免疫耐受组、免疫活动组、非复制组各10例,另选健康人10名作为对照组.取4组患者的抗凝血10 ml,提取外周血单个核细胞,然后用流式细胞仪检测并计算出患者外周血DC亚群的频率(百分比)和数量.统计学分析不同组间DC亚群频率、数量变化及其与HBV DNA的相关性.结果 HBV感染组mDC绝对值、pDC百分比、pDC绝对值分别为(9.40±4.16)x 106/L、0.17%±0.10%、(3.77±2.44)×106/L,均低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05).健康对照组mDC百分比(0.56%±0.11%)高于免疫耐受组(O.47%±0.19%),mDC绝对值[(14.81±4.75)×106/L]高于免疫耐受组[(9.50±3.98)× 106/L]和免疫活动组[(8.44±2.66)× 106/Ll,pDC百分比(0.26%±0.08%)高于免疫活动组(0.14%±0.10%)和非复制组(0.18%±0.11%),pDC绝对值[(16.65±2.01)×106/L]高于其他3组,差异均有统计学意义(P<0.05).HBV感染不同组别中仅免疫耐受组pDC细胞数与HBV DNA水平呈负相关关系(P<0.05).结论 HBV感染不同时期mDC和pDC频率和数量较健康人群下降.不同组DC亚群数量中仅免疫耐受组pDC细胞数与HBVDNA水平呈负相关.