随机扩增多态性DNA分析技术及其应用

随机扩增多态性ＤＮＡ分析技术是９０年代发展起来的一项以ＰＣＲ为基础的基因分析方法。本文介绍了该技术的原理、特点、并综述了其在生物种分类鉴定、世系发育及基因分析等生命科学领域中的应用。     

用随机扩增多态DNA技术区分7种硬蜱

目的 分析7种硬蜱基因组DNA的随机扩增多态性，探讨随机扩增多态性DNA(RAPD)技术在硬蜱分类中的应用。方法 提取草原革蜱、森林革蜱、青海血蜱、台湾血蜱、刻点血蜱、龟形花蜱、卵形硬蜱DNA。选取3条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物(P5、P6、P7)进行RAPD-PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱，对这7种硬蜱的DNA多态性进行分析。结果 7种硬蜱分别扩增出不同数量与不同分子质量的DNA片段。有些硬蜱基因组DNA扩增产物中具有相同的DNA条带，这反映出它们的基因组DNA具有同源性；同时又具有各自独特的DNA条带，且DNA条带的亮度也有差异。结论 RAPD技术可以准确地区分这7种蜱。     

嗜肺军团菌血清I型菌株随机扩增多态性DNA指纹图谱研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法研究我国58株嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的基因型特征。方法58株嗜肺军团菌血清1型菌株来自北京和深圳市的集中空调冷却塔水和温泉水,随机引物采用5’-CGGCGGCG-GCGG-3’序列,分析Lp1型军团菌RAPD基因型和温度、pH值的关系。结果58株Lp1型菌株共分为17个RAPD基因型。与集中空调冷却塔水Lp1型菌株相比,温泉水分离的菌株基因型具有较高的多态性。深圳市29株集中空调冷却塔水分离的Lp1菌株,共呈现出3个RAPD基因型,北京市24株来自温泉水的Lp1菌株分为12个RAPD型,5株来自集中空调冷却塔水的Lp1型菌株分为两个RAPD型。温泉水Lp1菌株的基因型差异和水温度和pH值无明显的关联。结论RAPD分型方法可用于我国Lp1菌株的基因分型,不同地区和来源的Lp1型军团菌菌株具有特征性的RAPD基因型,温泉水中分离的Lp1菌株较集中空调冷却塔水分离菌株基因型呈现较高的基因多态性。     

用随机扩增多态DNA技术区分7种硬蜱

目的　分析 7种硬蜱基因组DNA的随机扩增多态性 ,探讨随机扩增多态性DNA(RAPD)技术在硬蜱分类中的应用。　方法　提取草原革蜱、森林革蜱、青海血蜱、台湾血蜱、刻点血蜱、龟形花蜱、卵形硬蜱DNA。选取 3条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物 (P5、P6、P7)进行RAPD PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱 ,对这 7种硬蜱的DNA多态性进行分析。　结果　 7种硬蜱分别扩增出不同数量与不同分子质量的DNA片段。有些硬蜱基因组DNA扩增产物中具有相同的DNA条带 ,这反映出它们的基因组DNA具有同源性 ;同时又具有各自独特的DNA条带 ,且DNA条带的亮度也有差异。　结论　RAPD技术可以准确地区分这 7种蜱。     

随机扩增多态性DNA(RAPD)技术用于青海田鼠鼠疫菌株亲缘性的研究

目的　对青海省称多县境内和四川省石渠县境内青海田鼠体内分离的 32株鼠疫耶尔森氏菌的基因进行分析 ,明确两地鼠疫耶尔森氏菌间的亲缘关系。方法　用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果　扩增产物在凝胶电泳上显示的条带 ,除 7株菌略有不同外 ,其余 2 5株均相同。TreeView[Win32 ]统计软件分析的结果也显示两地鼠疫耶尔森氏菌之间具有很近的亲缘关系。结论　青海省称多县和四川省石渠县青海田鼠体内分离到的鼠疫耶尔森氏菌在遗传学上属同一来源。     

DNA随机扩增多态性分析技术在枸杞道地药材鉴别中的应用

目的:对宁夏和内蒙两个地区的枸杞DNA进行分子标记分析,获得DNA指纹谱。方法:用随机扩增多态DNA(RNAD)标记方法对宁夏和内蒙不同来源地的枸杞进行遗传多样性分析。结果:用 RAPD标记方法可以从DNA分子水平看出宁夏枸杞与内蒙枸杞的差异,结论:本法可为枸杞道地品种鉴别提供依据。     

4种硬蜱的随机扩增多态性DNA分析

蝉分布广，种类繁多，可以传播多种人兽共患病，在医学上有着重要的意义。蜱的分类与疾病的关系也为许多科学家所重视。近年来，随着科学技术的不断发展，许多新的技术手段也逐渐引入了节肢动物的分类中。1990年，Williams等首先使用单一的10碱基任意DNA序列作为引物扩增DNA，以观察各物种间基因的多态性。他们证实，这种基因的多态性可用于基因的连锁分析，所得结果符合孟德尔定律[1]。随机扩增多态性DNA（RandomAmplifiedPoly－morphicDNA，PAPD）技术由于其简捷、灵敏、对材料要求不高、成本低等优点，从它一问世，就备受人们的…     

随机扩增DNA多态性技术在A组链球菌分型上的应用

目的 了解A组乙型溶血性链球菌的基因分型状况。方法 采用随机扩增多态性DNA技术(Random amplified polymorphic DNA，RAPD)，对1988～1994年度．从广东城市和农村，1993～1994年度，从湖北、吉林9～11岁学龄儿童分离的179株GAS进行RAPD分析。结果 ①同一T型的菌株有特征性条带，但有些亚型带型间差异较大：②不同T型间可有相同的带型；③分型率比T分型高，达到96．6％；④有主导RAPD型菌株流行的情况存在。结论 RAPD方法对GAS分型及流行病学中有一定的应用价值，可以区别同一血清型不同地区来源的GAS。     

四种蝇的随机序列扩增多态性分析

ＲＡＰＤ技术是在１９９０年后发展起来的一项分子生物学手段，它被越来越广泛地应用在昆虫分类方面。它有许多优越性，如简便、快捷、灵敏度强、经济、对材料要求不高等。更重要的是，它可以从分子的角度出发揭示ＤＮＡ的多态性，从而把物种区分开来。本文以家蝇，丝光绿蝇，尾黑麻绳和夏厕蝇为对象，用３４种１０ｈｐ引物对上述四种蝇的ＤＮＡ进行了地毯式的扩增，以筛选能够用于种类区别的引物。我们的结果显示，引物ＯＰＨ－８可以作为科间的鉴别依据，另有１４种引物可用于蝇科内各属间或种间的分类依据。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌的随机扩增多态性DNA的分析

分别对从福建、浙江、沈阳等地分离到的18个血清型的115株小肠结肠炎耶尔森氏菌用随机扩增多态性DNA（RAPD）方法进行了分析，将其分为22个型别。结果提示RAPD方法比血清分型方法的优点是对于追踪传染源有更高的价值。     

单核细胞增生性李斯特氏菌种、株随机扩增DNA多态性研究

目的　分析单核细胞增生性李斯特氏菌种、株基因组DNA多态性 ,为其分型、鉴定提供理论依据。方法　应用随机扩增多态性DNA技术对李斯特氏菌基因组DNA进行扩增 ,根据DNA指纹图谱分析单核细胞增生性李斯特氏菌种、株的遗传多样性 ,同时构建相似性系数矩阵和树状图。结果　不同序列的随机引物扩增的RAPD图谱的多态性程度不同 ,其中单一引物P-7与复合引物P-1P-3 、P-4P-9扩增产生的指纹图谱对单核细胞增生性李斯特氏菌种、株均具有良好的区分能力。由该 3种引物扩增的RAPD图谱计算出的相似性系数矩阵及由此构建的聚类树状图均能得到李斯特氏菌的系统发育关系。结论　RAPD技术可用于李斯特氏菌的快速鉴定。     

我国不同地区马来丝虫DNA多态性的比较分析

目的 分析我国周期型马来丝虫DNA多态性。方法收集长爪沙鼠保种的湖北谷城（H）株、四川乐山（S）株和浙江安吉（Z）株马来丝虫成虫，提取基因组DNA，采用RAPD技术分析DNA多态性。结果得到17个DNA扩增片段，大小为50～1000bp。其中a、c为H、S、Z株共有条带，d、e、f、g为H、S株共有条带，b、h、i为H株特有条带。结论RAPD分析3个地区株马来丝虫在基因结构上既有同源性，又存在差异，表明我国马来丝虫似有种内分化的趋向。     

随机扩增的多态性DNA分析在Hp菌株鉴定中的应用

目的:建立一种快速准确鉴定不同Hp菌株的RAPD分析方法,并评价其在区分Hp复发和再感染中的应用价值。方法:用苯酚—氯仿方法提取Hp DNA,以一个10nt的寡核苷酸为引物,建立Hp PCR扩增体系,所得PCR产物以2％琼脂糖凝胶电泳分析(RAPD分析),以50株临床分离的Hp菌株检测该方法的重复性。对4例十二指肠溃疡伴Hp感染者在三联治疗前后及根除后一年内再现的Hp菌株进行RAPD分析,鉴别复发和再感染。结果:(1)同-Hp菌株于不同时间进行的2次RAPD分析,所得的PCR产物完全一致,说明该方法具有良好的可重复性。(2)50株不同的Hp菌株各产生不同的RAPD图谱,可按此图谱的不同将它们区分开来。(3)对4例十二指肠溃疡伴Hp感染者在治疗前及治疗后1年再现的菌株的RAPD分析,发现3例患者的菌株具有相同的RAPD图谱,证实为原菌株的复发,而1例患者的菌株则产生不同的RAPD图谱,推测为新菌株的再感染。4例患者随访1年均为十二指肠溃疡复发。结论:RAPD分析只需单一的随机引物,方法简便、快速、经济、重复性好,可用于区分不同来源的Hp菌株,特别对治疗前后再现的菌株复发和再感染的鉴别更具临床应用价值。     

黏质沙雷菌随机扩增多态性DNA法基因分型及意义

目的 探讨黏质沙雷菌（SM）随机扩增多态性DNA（RAPD）法基因分型及意义。方法 以优化的反应体系及单一随机引物AV15对临床分离的109株SM进行RAPD分析并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱。结果 109株SM共得78种RAPD型。结论 RAPD法可用于SM的基因分型。     

随机扩增多态性DNA分析在微生物基因分型中的应用研究进展

随机扩增多态性ＤＮＡ分析在微生物基因分型中的应用研究进展郭永建一、微生物基因分型微生物分型对于社区和医院的感染性疾病的流行病学调查和监测、传播途径的了解和阻断、以及发病机理研究，极为重要。传统的表型分型方法，有许多局限性。随着分子生物学的理论和技术高...     

安徽省3种常见蜚蠊基因组多态性DNA的研究

目的研究随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,用于蜚蠊分子分类。方法提取3种蜚蠊的基因组DNA,鉴定及定量分析。确定RAPD反应总体积、反应条件。选取3条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行PRPD-PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱,通过对DNA图谱和遗传距离的分析,研究这3种蜚蠊基因组DNA的多态性。结果分别扩增出不同数量和分子大小的DNA片段。3种蜚蠊基因组DNA扩增产物中具有相同的DNA条带,这反映了各蜚蠊基因组DNA具有同源性;3种蜚蠊基因组DNA扩增产物又具有各种独特的DNA条带,DNA条带亮度也有差别。结论 RAPD技术简便、快速、精确,可用于蜚蠊分子生物学分类。     

金黄色葡萄球菌随机扩增多态性DNA指纹图与药敏谱对医院感染管理的指导意义

目的 探讨金黄色葡萄球菌(SA)药敏谱型对医院感染管理的指导意义。方法 通过随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分型76株SA，并归纳出药敏谱型与RAPD型的对应关系。结果 药敏谱型35种，RAPD分型50种。二者呈单一对应关系的有22种，呈一对二关系的有12种，呈一对三关系的有1种。结论 依据SA药敏谱型可对SA进行分型，从而指导医院感染管理。     

随机扩增多态性DNA基因分型对铜绿假单胞菌克隆菌株的分析

目的 了解铜绿假单胞菌(Pseudomorlas aeruginosa,PA)的基因分型及克隆菌株在医院内感染中所占的比例.方法 通过随机扩增多态性DNA基因分型对69株PA进行克隆菌株的分析.结果 69株PA基因分型36型,有33株菌是同源菌.结论 切断患者之间、患者和护工、患者和护士、医生之间交叉感染可降低PA感染率,加强医院感染控制措施有可能成为降低感染率最重要的关键因素之一.     

我国不同地区马来丝虫DNA多态性的比较分析

目的分析我国周期型马来丝虫DNA多态性。方法收集长爪沙鼠保种的湖北谷城(H)株、四川乐山(S)株和浙江安吉(Z)株马来丝虫成虫,提取基因组DNA,采用RAPD技术分析DNA多态性。结果得到17个DNA扩增片段,大小为50~1000bp。其中a、c为H、S、Z株共有条带,d、e、f、g为H、S株共有条带,b、h、i为H株特有条带。结论RAPD分析3个地区株马来丝虫在基因结构上既有同源性,又存在差异,表明我国马来丝虫似有种内分化的趋向。     

安徽省三种常见蜚蠊基因组多态性DNA的研究

目的；研究随机扩增多态性DNA（RAPD）技术，用于蜚蠊分子分类。方法：提取3种蜚蠊的基因组DNA，鉴定及定量分析。确定RAPD反应总体积，反应条件。选取3条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物，进行RAPD－PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱，通过对DNA图谱和遗传距离的分析，研究这三种蜚蠊基因组DNA的多态性。结果：分别扩增出不同数量和分子大小的DNA片段。3种蜚蠊基因组DNA扩增产物中具有相同的DNA条带，这反映了各蜚蠊基因组DNA具有同源性；3种蜚蠊基因组DNA扩增产物又具有各自独特的DNA条带，DNA条带亮度也有差别。结论：RAPD技术可以精确地区别这三种蜚蠊。