弥漫性大B细胞淋巴瘤3q27染色体状态和不同亚型与预后的关系

目的 从蛋白和基因水平研究弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的3q27染色体状态和不同亚型与预后的关系.方法 应用免疫组织化学EnVision法对有随访资料的73例DLBCL进行CD3、CD10、CD20、bcl-6、MUM-1标记,根据Hans的分类方法分为生发中心B细胞型(GCB型)和非生发中心B细胞型(non-GCB型),其中54例应用荧光原位杂交(FISH)技术检测bcl-6基因所在的3q27染色体的断裂和扩增情况.结果 73例DLBCL患者GCB型16例(21.9%),non-GCB型57例(78.1%).54例DLBCL患者中3q27染色体断裂11例(20.4%),扩增14例(25.9%).5年总体生存率GCB型(78%)高于non-GCB型(40%),差异有统计学意义(P=0.011).bcl-6阳性表达较阴性者预后好(P=0.041);3q27断裂阳性组病例总体生存率低于3q27断裂阴性组.结论 DLBCL的GCB型比non-GCB型预后好.bcl-6蛋白表达有助于DLBCL的预后判断,3q27染色体断裂阳性病例总体生存率低于3q27断裂阴性组.目前仍有必要区分DLBCL的B细胞的起源.     

弥漫性大B细胞淋巴瘤t(14;18)易位及bcl-2基因扩增的检测

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）t（14;18）染色体异位及bcl-2基因扩增在其分类及临床分期、疗效评估中的作用。方法先对60例DLBCL的标本进行显微切割,获取相对比较纯的肿瘤组织,再使用细胞核芯片荧光原位杂交（FISH）对标本进行t（14;18）易位及bcl-2基因扩增检测,采用免疫组织化学SP法在组织微阵列上同步观测CD20、CD10、bcl-6、MUM1的表达,进行生发中心样（GCB）和非生发中心样（non-GCB）分类;通过病例分析得出治疗效果及临床分期的信息,并统计分析以上各因素之间的关系。结果在60例DLBCL中,10例bcl-2／IgH阳性,18例bcl-2基因扩增;GCB29例（48．3％）,non-GCB31例（51．7％）。经FISH检测t（14;18）阳性10例中,GCB8例,non-GCB2例,差异有统计学意义（P=0．031）。t（14;18）阳性及bcl-2基因扩增的病例bcl-2表达均增高。在36例正规CHOP治疗的病例中,bcl-2扩增13例,无扩增23例,bcl-2扩增的13例之治疗结果显效、部分有效、无效率分别为3例（23．1％）、4例（30．8％）和6例（46．2％）;临床分期情况为Ⅰ-Ⅱ期1例（7．7％）,Ⅲ-Ⅳ期12例（92．3％）,这两项指标与bcl-2不扩增的相比差异均有统计学意义（P=0．019、0．046）。结论t（14;18）易位及bcl-2基因扩增均是引起DLBCL之bcl-2蛋白表达的原因,bd-2阳性者与预后有关的原因难以确定,可能是由于引起其阳性表达的原因不同所致;bcl-2基因扩增与治疗效果较差及临床分期较晚有关;FISH检测t（14;18）染色体易位可用于DLBCL的分类。     

儿童与成人弥漫大B细胞淋巴瘤的Hans、Choi免疫分型和C-MYC基因特征

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)各年龄组的Hans、Choi免疫分型及C-MYC基因特征.方法 收集60例DLBCL临床病理资料并进行随访,其中儿童组17例、成人组43例.用免疫组化SP法观察CD10、BCL-6、MUM1、FOXP1、GCET1及CD5蛋白表达,根据Hans及Choi免疫分型标准分型;用间期荧光原位杂交法检测C-MYC 基因.结果 1)Hans分型:儿童DLBCL组GCB型11例,non-GCB型6例;成人组DLBCL中GCB型9例,non-GCB型34例(P＜0.05).2) Choi分型:儿童DLBCL组GCB型13例,ABC型4例;成人DLBCL组GCB型13例,ABC型30例(P＜0.01).3) C-MYC基因:儿童组DLBCL中C-MYC基因断裂6例;成人组DLBCL中C-MYC基因正常43例(P＜0.01).结论 儿童DLBCL以GCB型为主,预后较好;成人DLBCL以non-GCB或ABC型为主,预后相对较差,儿童DLBCL的C-MYC基因断裂明显高于成人.     

弥漫性大B细胞淋巴瘤中hENT1的表达及意义

目的 探讨hENT1在生发中心B细胞(germinal center B cell-like,GCB)型与非GCB(non-GCB)型弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达及意义.方法 采用免疫组化PV 6000两步法检测CD10、BCL-6、MUM1蛋白在DLBCL的表达并对DLBCL进行亚型分类,同时检测hENT1蛋白的表达,探讨免疫组化染色结果和临床病理参数及预后的关系.结果 (1)hENT1蛋白在DLBCL的GCB及non-GCB亚型中表达差异有显著性(P=0.031,P<0.05).(2)hENT1的表达与患者性别、年龄、部位、LDH高低、Ann Arbor分期、有无B症状的差异均无统计学意义.(3)对76例DLBCL患者进行生存分析,中位随访时间21个月.Log-rank检验GCB/non-GCB组累计生存率差异有统计学意义(P=0.010).结论 DLBCL中non-GCB型患者比例较大,预后差.在治疗过程中,检测hENT1的表达为能否使用核苷类药物提供依据.     

上海地区弥漫性大B细胞淋巴瘤的生发中心B细胞样型显著偏低

目的 探讨中国上海地区弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的生发中心B细胞(GCB)样型与非GCB样型的分布以及可能影响因素.方法 应用免疫组织化学EnVision法分析124例来自该院的原发DLBCL中CD10、bcl-6、MUMl、GCET1和FOXP15种蛋白的表达,采用Hans和Choi两种免疫表型分型法进行分型.其中118例应用荧光原位杂交技术检测t(14;18)和bcl-6基因重排情况.结果 使用Hans法对124例DLBCL进行分型,27例(22%)为GCB样型,97例(78%)为非GCB样型.使用Choi法进行分型显示34例(27%)为GCB样型,90例(73%)为非GCB样型(即ABe样型).GCB样型显著低于非GCB样型(P=0.0001).t(14;18)易位仅4例(3%),3例发生于GCB样型中.bcl-6基因重排阳性的病例为46例(39%),高发于GCB样型中.bcl-6基因重排与bcl-6蛋白表达没有明显相关性.结论 中国上海地区DLBCL的GCB样型显著低于非GCB样型,可能与其DLBCL的t(14;18)低水平发生有关.     

AKT/mTOR通路在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的活化及其与临床病理相关性的研究

目的 研究AKT/mTOR通路在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的活化及其与bcl-6基因表达等指标的相关性,并探讨其在不同类型DLBCL中的作用.方法 用免疫组织化学方法 检测100例DLBCL及10例淋巴结反应性增生新鲜组织中pAKT、pmTOR的表达;运用TaqMan即时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)技术检测上述DLBCL中bcl-6 mRNA含量;同时用免疫组织化学方法 观察其中75例相应石蜡组织中bcl-6、CD10和MUM1的表达并据此进行分型.结果 (1)pAKT和pmTOR在DLBCL中的阳性率分别为76.0%(76/100)和75.0%(75/100),二者的表达强度、阳性细胞分布一致.(2)bcl-6蛋白与mRNA表达水平显著相关.pAKT和pmTOR高表达组的bel-6蛋白阳性率与mRNA水平均低于pAKT和pmTOR低表达或不表达者(均P<0.01).(3)非生发中心B细胞样(non-GCB)型DLBCL中pAKT和pmTOR的阳性率分别为82.5%(47/57)和84.2%(48/57),高于GCB型中的阳性比8/18和8/18(均P<0.01).(4)pAKT和pmTOR在男性患者中的表达略高于女性患者,pAKT和pmTOR阳性患者中乳酸脱氢酶(LDH)异常者略高于阴性患者中的比例,但差异均没有统计学意义(P>0.05).pAKT和pmTOR的表达与年龄、临床分期、卡氏体力状况评分(KPS)、B症状之间没有相关性(P>0.05).结论 AKT/mTOR信号转导通路活化在DLBCL发生中起重要作用,特别与bel-6低表达或不表达以及non-GCB亚型密切相关,并有望成为部分DLBCL治疗的新靶点.     

弥漫性大B细胞淋巴瘤各分子亚型中的bcl-6基因重排与蛋白表达的临床意义

目的 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)各分子亚型中的bel-6基因重排、蛋白表达情况及其临床病理意义.方法 运用组织芯片技术,通过荧光原位杂交(FISH)技术对149例DLBCL组织中bcl-6基因重排进行检测,应用免疫组织化学技术(EnVision法)检测bcl-6以及细胞增殖指标Ki-67、细胞周期蛋白(cyclin)D3、p27Kill及Geminin等蛋白表达水平;结合临床病理资料,分析它们之间的相关性.结果 149例DLBCL可被分成3个分子亚型,其中4J0例为生发中心B细胞样(GCB样)亚型,75例为活化的非生发中心B细胞样(ABC样)亚型,34例为Type 3亚型.有118例成功进行了FISH检测,33例可检测到bcl-6基因重排,阳性率为28.0%.其中35.5%(22/62)的ABC样亚型DLBCL呈现bcl-6基因重排;较GCB样亚型(6/31,19.4%)和Type 3亚型(5/25,20.0%)的bcl-6基因重排高(P=0.160).在绝大部分(26/33,78.8%)有bcl-6基因重排的DLBCL中,伴随有bcl-6蛋白的过度表达,明显高于无bcl-6基因重排的病例(53/84,62.4%,P=0.088).有bcl-6基因重排的DLBCL中,24例(24/33,72.7%)cyclin D3呈现高水平表达,明显高于bcl-6基因无易位DLBCL组中的cyclin D3表达(37/81,45.7%,P=0.009).在33例bcl-6基因易位的DLBCL中,29例(87.9%)为Ann Arbor Ⅲ-Ⅳ期,较bcl-6基因无易位高者(65/85,76.5%,P=0.167).单变量Cox风险比模型分析发现,bcl-6基因重排与患者的生存率呈负相关,是一个危险因子,相对危险度(RR)为1.842.结论 bcl-6基因重排导致的bcl-6蛋白表达上调参与了部分DLBCL的发病过程,并可能成为DLBCL的ABC样亚型的一个分子标志.     

弥漫大B细胞淋巴瘤中CyclinD2的表达及其临床意义

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中Cyclin D2的表达及其与临床病理分型及预后的关系。方法收集79例确诊为DLBCL,每例分成两组:(1)石蜡标本制成组织芯片,应用光镜观察、免疫组化En Vision两步法检测CD3、CD20、CD10、BCL-6、MUM1、Ki-67、Cyclin D2蛋白,根据Hans分型法分型。(2)新鲜冷冻标本应用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法观察Cyclin D2 mRNA在不同亚型DLBCL中的相对表达量。应用Kaplan-Meier法分析Cyclin D2 mRNA相对表达量及各临床病理特征与生存期的关系。结果 79例DLBCL中,生发中心B细胞样(germinal center B-cell-like,GCB)型26例(32.9%),非生发中心B细胞样(non-germinal center B-cell-like,non-GCB)型53例(67.1%)。13例(16.5%)表达Cyclin D2蛋白,其中2例为GCB型(15.4%),11例为non-GCB型(84.6%),差异有统计学意义(P0.05)。Cyclin D2 mRNA的相对表达量在non-GCB型组显著高于GCB型组,差异有统计学意义(P0.05)。生存分析显示高临床分期及Cyclin D2 mRNA高表达组预后差。结论检测Cyclin D2蛋白及基因表达有助于提高DLBCL临床病理分型的准确性,并可能成为提示预后的重要指标。     

弥漫大B细胞淋巴瘤中C-MYC、BCL-2和BCL-6基因异常与临床病理意义

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中C-MYC、BCL-2、BCL-6基因异常和蛋白表达及其临床意义。方法 收集205例DLBCL标本及临床资料,采用免疫组化EnVision法染色和FISH法检测DLBCL中C-MYC、BCL-2和BCL-6蛋白表达和基因易位情况,分析其与DLBCL临床病理特征的关系。结果 205例DLBCL中男性106例,女性99例,中位年龄60岁,C-MYC/BCL-2双表达44.4%(91/205)。按照Hans分型分类,GCB型占37.1%,non-GCB占62.9%;CMYC、BCL-2和BCL-6基因易位阳性率分别为9.3%、8.8%、30.1%。C-MYC与BCL-2基因异位在双表达组较高,与Hans分型、性别、年龄等无关;BLC-6基因易位在各组间差异均无统计学意义。双重打击淋巴瘤2例,三重打击淋巴瘤3例,占2.44%(5/205)。171例患者获得随访,34例失访,随访时间8～107个月,死亡48例,病死率为28.1%;患者生存时间与Hans分型及年龄有关,而C-MYC与BCL-2双表达组与双重打击及三重打击组总预后比普通组差。结论 C-MYC/BCL-2双表达对基因易位有提示作用,明确诊断可依靠免疫组化和FISH检测;C-MYC、BCL-2及BCL-6基因易位可作为DLBCL患者预后的指标。     

弥漫大B细胞淋巴瘤组织bcl-6蛋白表达及基因重排

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中bcl-6和CD10蛋白表达以及基因重排的特点及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学EnVision法分析51例DLBCL(22例为淋巴结内,29例为淋巴结外)和10例淋巴结反应性增生石蜡组织中bcl-6蛋白表达,并与CD10的表达作比较分析;应用断裂分离探针及间期核荧光原位杂交(FISH)技术检测32例淋巴结内DLBCL(22例为石蜡组织,10例为新鲜组织)和5例淋巴结反应性增生石蜡组织中bcl-6基因的重排。结果(1)淋巴结内、外DLBCL和淋巴结反应性增生中bcl-6蛋白均呈细胞核表达,阳性率分别为72.7%(16/22)、75.9%(22/29)、100.0%(10/10);CD10的阳性率分别为40.9%(9/22)、41.4%(12/29)、100.0%(10/10),所有CD10阳性肿瘤均共同表达bcl-6蛋白。(2)40.9%(9/22)的淋巴结内DLBCL和41.4%(12/29)的淋巴结外DLBCL为两蛋白共同阳性表达;将之与两蛋白均不表达的DLBCL(27.3%,6/22和24.1%,7/29)相比,前者(Ⅰ或Ⅱ期)的临床分期低于后者(Ⅲ或Ⅳ期,P<0.05)。(3)淋巴结内DLBCL样本中bcl6基因重排阳性率为28.1%(9/32),其中石蜡组织样本阳性率为27.3%(6/22),新鲜组织样本阳性率为30.0%(3/10),P>0.05。5例淋巴结反应性增生样本中均未检测到bcl-6基因重排,与DLBCL相比P<0.05。结论(1)在DLBCL中bcl6有较高的阳性表达率,bcl-6和CD10蛋白的联合检测可以协助DLBCL的诊断和鉴别诊断;bcl6和CD10共同阳性的DLBCL可能具有更好的预后。(2)bcl-6基因重排可能参与了部分DLBCL的发生,并可作为DLBCL诊断的参考指标。     

凋亡抑制基因bcl-2在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨凋亡抑制基因bcl-2在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)不同免疫亚型中的表达,以及bcl-2蛋白表达对患者生存期的影响.方法 应用免疫组织化学(EliVision plus和PV-9002法)对214例DLBCL进行CD10、bcl-6、MUM-1、bcl-2及NF-κB检测,采用Hans免疫分型方法将DL...     

bcl-6基因5'非编码区突变与弥漫性大B细胞淋巴瘤生发中心亚型的相关性

目的 分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中bcl-6基因5'非编码区突变频率及与其生发中心B细胞(GCB)型的相关性.方法 对60例DLBCL行套式PCR检测t(14;l8)易位,并经免疫组织化学EnVision两步法进行GCB和非GCB分子分型.PCR扩增bcl-6主要突变区,测序检测突变位点.结果 60例中7例(11.7%)发生t(14;18)易位,为主要断裂点发生转位;联合免疫组织化学分析和t(14;18)易位检测,筛选出GCB型18例和非GCB型42例;5'非编码区总突变率为20.0%(12/60),GCB型突变率为7/18,非GCB型突变率为11.9%(5/42);+363和+469位点频繁发生突变.结论 DLBCL的bcl-65'非编码区发生突变频率较国外低,突变多发生于GCB型中.t(14;18)易位检测有助于DLBCL的分子分型.     

弥漫大B细胞淋巴瘤免疫表型分型与预后的关系

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的免疫表型之生发中心B细胞样（GCB）和非GCB两个亚型的特征及其与DLBCL预后的关系。方法 根据肿瘤细胞免疫组织化学EnVision法标记CD10、bc1-6、MUM-1的表达情况,将133例DLBCL分为GCB和非GCB两个亚型。对以下指标的5年总生存率（OS）及5年无进展生存率（PFS）进行了比较：（1）CD10、bc1-6和MUM-1的阳性和阴性病例;（2）GCB亚型与非GCB亚型;（3）不同国际预后指数（IPI）分组中GCB亚型与非GCB亚型的关系。结果 133例DLBCL中,44例（33．1％）CD10阳性,48例（34．6％）bc1-6阳性,60例（45．1％）MUM-1阳性。CD10阳性DLBCL患者的5年OS及PFS均明显高于CD10阴性患者（P=0．041和0．031）;bc1-6阳性DLBCL患者的PFS明显高于bc1-6阴性患者（P=0．044）,MUM．1阳性DLBCL患者的5年0s及PFS均明显低于MUM-1阴性患者（P=0．031和0．028）。GCB型54例（40．6％）,非GCB型79例（59．4％）。GCB型5年OS及PFS均明显高于非GCB型（P=0．004和0．003）。国际预后指数（IPI）0-1分组及2-5分组中,GCB型5年OS及PFS均明显高于非GCB型（IP10-1分组P=0．019和0．014,2-5分组P=0．006和0．009）,其中IPI2-5分组中的非GCB预后最差。结论 DLBCL亚型及其与IPI联合分析可以作为预测患者预后的有效指标。     

结内外弥漫性大B细胞淋巴瘤的免疫表型和分化特征及预后的比较

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的临床生物学特征和预后并比较结内与结外的差异。方法分析142例DLBCL的临床病理资料,结内90例,结外52例（胃肠30例,其他22例）,并随访2～108个月,制备组织芯片,并经免疫组织化学EnVision法染色,观察CD10、bcl-6、MUM1蛋白的表达并进一步区分其生发中心B细胞（GCB细胞）和非生发中心B细胞的分化特征。结果胃肠道DLBCL常为Ⅰ～Ⅱ期,国际预后指标评分低,预后也好于结内及其他结外DLBCL。单个抗原的表达率,CD10为19％（27例）,bcl-6为51％（72例）,MUM1为58％（82例）。36％（51例）的DLBCL显示GCB细胞分化特征,64％（91例）的DLBCL显示非GCB细胞分化特征。结外DLBCL的bcl-6的表达（63％）高于结内DLBCL（43％）。在不同的结外部位,甲状腺等部位多见为GCB细胞分化的DLBCL;睾丸等部位多见为非GCB细胞分化的DLBCL。结论DLBCL显示生发中心B细胞和非生发中心B细胞分化特征,结内外以及结外不同部位的DLBCL有着不同的生物学特征和预后。     

Bcl-6 and Bcl-2 protein expression in diffuse large B-cell lymphoma and follicular lymphoma: correlation with 3q27 and 18q21 chromosomal abnormalities.

The bcl-2 gene on chromosome 18 at q21 and the bcl-6 gene on chromosome 3 at q27 are both highly regulated during B-cell differentiation and show an inverse relationship of expression in the normal secondary lymphoid follicle. The objective of this study was to investigate the relationship between bcl-2 and bcl-6 protein expression and the relationship between protein expression and the corresponding chromosomal alterations in malignant lymphomas, including those associated with the germinal center. Expression of bcl-2 and bcl-6 proteins was studied in 55 cases of diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and 21 cases of follicular lymphoma (FL), and the results correlated with the presence of t(14;18) and 3q27 abnormalities in a subset of 52 cases with cytogenetic analysis. These cases were selected to represent a spectrum of nodal and extranodal lymphomas, including those with and without a t(14;18). It was shown that the neoplastic cells in 71% of DLBCLs and 100% of FLs expressed bcl-6 protein. Expression of bcl-6 was seen more frequently in diffuse large B-cell lymphomas with large noncleaved morphology compared with immunoblastic morphology (82% v 27%, P = .0015), but failed to correlate with 3q27 abnormalities. Thirty-eight percent of cases with 3q27 abnormalities were bcl-6 protein negative, whereas 85% of cases without a 3q27 abnormalities were bcl-6 protein positive. Expression of bcl-2 protein was shown in 51% DLBCLs (nodal v extranodal, 71% v 30%, P = .012). bcl-2 protein was expressed in 89% of FLs with t(14;18), in contrast to 25% of FLs without t(14;18) (P = .016). In DLBCL and FL with t(14;18), the most common pattern of expression was bcl-2+/bcl-6+. In lymphomas without t(14;18), there was not an inverse relationship between bcl-2 and bcl-6 protein expression. In conclusion, these data suggest that mechanisms other than gene rearrangements can deregulate bcl-2 and bcl-6 expression in lymphomas, and there does not appear to be an inverse relationship between these two proteins as seen in the normal germinal center.