鼻咽癌组织中bcl—2及EB病毒潜伏膜蛋白表达与放射诱发细胞？…

目的：探讨鼻咽癌（ＮＰＣ）组织ｂｃｌ－２及ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）表达与放射诱发细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化Ｓ－Ｐ法及ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄＵＴＰ缺口要端标记技术（ＴＵＮＥＬ法）,分别检测３５例ＮＰＣ组中ｂｃｌ－２及ＥＢ病毒ＬＭＰ的表达,以及放疗总量为１０Ｇｙ时ＮＰＣ组织的细胞凋亡率（ＡＲ）。结果ＮＰＣ组织ｂｃｌ－２及ＬＭＰ的表达率分别为７１．４％（２５／３５）、４５．７％（１６／３５）     

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成中的作用

EB病毒潜伏感染在鼻咽癌的形成中起着重要的作用。现综述近年来研究EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成作用中的进展情况，并着重介绍其对细胞信号传导通路、血管生成及转移等的影响。     

EB病毒潜伏膜蛋白LMP-1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的观察EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白1（LMP-1）在鼻咽癌（NPC）鼻咽拭子中的表达,探讨LMP-1表达与NPC临床病理特征的关系。方法纳入2007年～2008年福建省肿瘤医院放疗科收治的经病理检查确诊为NPC且同意参加该试验的初治患者129例,均在治疗前应用鼻咽拭子法取鼻咽部黏膜脱落细胞,提取DNA,采用PCR法检测LMP-1基因的表达。结果 129例患者中有114例患者LMP-1呈阳性表达,另15例呈阴性表达,阳性率为88.37%（114/129）;对照组中无1例呈阳性表达。LMP-1阳性表达率有颈部淋巴结转移组明显高于无颈部淋巴结转移组。LMP-1表达与患者年龄、性别、临床分期、T分期及M分期无相关性。结论 PCR法检测鼻咽拭子中LMP-1的检出率高于免疫组化法,LMP-1表达与鼻咽癌患者颈部淋巴结转移密切相关,临床中可预测鼻咽癌患者的转移潜能,LMP-1可能做为抗肿瘤转移靶向治疗的潜在靶点。     

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中调节表皮生长因子受体磷酸化的研究

目的 阐明EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）在鼻咽癌(NPC）中调节表皮生长因子受体9EGFR）磷酸化水平。方法 采用已建立的、受四环素调控的、LMP1表达的NPC细胞系（pTet-on-LMP1 HNE2),定量诱导pTet-on-LMP1 HNE2细胞LMP1动态表达水平,并观察EGFR表达和磷酸化水平,采用瞬间转染方法,将EGFR显性负性突变体和LMP1antisense表达质粒分别导入pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,采用免疫共沉淀和Western blot检测EGFR磷酸化;同时观察EGF刺激后对EGFR磷酸化前后的影响。结果 在pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,LMP1能诱导EGFR的表达和磷酸化,并随LMP1表达增加而增加。pTet-on-LMP1 HNE2细胞在导入EGFR显性负性突变体后,不但完全阻断EGFR磷酸化,而且完全抑制EGF所引起的EGFR磷酸化;而导入LMP1 antisense后,可显著地抑制GFR磷酸化水平。结论 LMP1能同时诱导EGFR表达和上调EGFR磷酸化,并呈剂量相关效应,提示EGFR磷酸化可能在NPC发生发展过程中起着重要作用。     

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成中的作用

EB病毒潜伏感染在鼻咽癌的形成中起着重要的作用.现综述近年来研究EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌形成作用中的进展情况,并着重介绍其对细胞信号传导通路、血管生成及转移等的影响.     

鼻咽癌中EB病毒潜伏膜蛋白1对p53表达的调控

目的 探讨EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）是否通过NF-kB在鼻咽癌细胞中促进p53蛋白的表达,为阐明LMP1促进细胞凋亡的机制提供实验依据。方法 利用四环素诱导表达系统,建立受四环素调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系,用报道基因检测法和Western印迹技术,观察LMP1过量表达对NF-kB的功能性活化及p53、bcl-2表达的影响。结果 在鼻咽癌细胞中,LMP1能活化NF-kB。过量表达的LMP1促进p53基因的表达,这种促表达可以被硫代磷酸化修饰的LMP1及p65反义寡聚脱氧核苷酸阻断,LMP1和p65地bcl-2的表达则没有影响,LMP1过表达对bcl-2的表达无影响。结论 鼻咽癌中LMP1通过活化核转录因子NF-kB调节p53的表达;而在LMP1过表达时,bcl-2介导的抗凋亡机制未被启动,至少是未被上调的。     

EB病毒潜伏膜蛋白对鼻咽癌细胞体内外增殖力的影响

 目的:研究EBVLMP对人高分化鼻咽癌细胞株CNE1体内外增殖能力的影响。方法:以人高分化鼻咽癌细胞株(CNE1)为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组EBVLMP表达质粒转染CNE1细胞。以载体质粒转染及CNE1细胞为对照,用细胞体外增殖实验、细胞软琼脂克隆形成率测定、流式细胞术、PCNA检测和裸鼠成瘤实验,观察细胞增殖能力的变化。结果:结晶紫染色法检测体外细胞增殖,结果表明,A比值实验组高于空白组及阴性对照组(P<0.01);实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白组及阴性对照组(P<0.01);FCM法测定细胞周期,实验组S期细胞比空白组及阴性对照组显著增高,S期细胞达349%;PCNA免疫组化染色,实验组细胞PCNA阳性率明显高于空白组及阴性对照组(P<0.01)。CNE1及转染细胞系裸小鼠移植结果表明,LMP表达细胞系移植瘤潜伏期、体内倍增时间明显缩短(P<0.01),成瘤率、瘤重显著增高(P<0.01/0.05)。结论:EBVLMP对CNE1细胞体内外增殖能力有明显的促进作用,提示LMP在NPC细胞演进过程中可能起重要作用,为进一步深入研究提供了依据。     

EB病毒潜伏膜蛋白2A在胃癌中的表达及与预后的关系

目的 探讨EB病毒潜伏膜蛋白2A（LMP2A）在胃癌组织中的表达及其与预后的关系。方法 免疫组织化学染色检测100例胃癌及癌旁组织中LMP2A的表达情况,并分析LMP2A蛋白表达与胃癌患者临床病理特征的关系;Kaplan Meier方法绘制生存曲线,分析76例随访患者LMP2A表达与患者总生存期（OS）、无进展生存期（PFS）的关系。结果 LMP2A在癌旁组织中几乎不表达,在胃癌组织中高表达,高表达率为47.0％（47／100）;LMP2A高表达与胃癌的淋巴管浸润、血管浸润、临床分期有关（P＜0.05）;LMP2A高表达组的中位OS和PFS分别为52.0个月（95％CI：43.8～60.2个月）和47.0个月（95％CI：32.9～61.1个月）,而LMP2A低表达组的中位OS和PFS均未达,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 LMP2A在胃癌组织中高表达,其可能在胃癌的发生和进展中起重要作用。     

EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）的研究进展

EB病毒与鼻咽癌、Burkitt's淋巴瘤、传染性单核细胞增多症、霍奇金病和某些因机体免疫力下降而产生的淋巴增生性疾病密切相关,其中EB病毒与鼻咽癌的关系尤为受到重视.EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)在细胞的恶性转化中起着相当重要的作用,又与鼻咽癌病人的治疗和预后有着密切的关系,本文就EB病毒潜伏膜蛋白1的研究近况与鼻咽癌治疗与预后判断进行综述.     

EB病毒潜伏膜蛋白抑制鼻咽癌细胞分化的定量分析

为了探讨ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＥＢＶ－ＬＭＰ）对鼻咽癌（ＮＰＣ）细胞体外分化及分化诱导剂二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）敏感性的影响。以ＥＢＶ－ＬＭＰ基因转染人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）,并用ＤＭＳＯ诱导,采用免疫组化及图像分析法观察细胞分化及形态的变化。结果显示：ＤＭＳＯ体外诱导ＣＮＥ１细胞生长明显受到抑制,细胞变大,核浆比值明显变小（Ｐ＜０．０１）,细胞角蛋白表达显著增高（Ｐ＜０．０１）;ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的生长,细胞变小,核浆比值明显变大（Ｐ＜０．０１）,细胞角蛋白表达显著下降（Ｐ＜０．０５）,有向低分化鳞癌发展倾向;ＬＭＰ基因转染细胞诱导后体外生长和角蛋白表达无显著改变（Ｐ＞０．０５）。结果表明,ＤＭＳＯ可在一定程度上诱导ＣＮＥ１细胞分化;ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用,可抑制细胞分化;ＬＭＰ可降低ＣＮＥ１细胞对终末分化信号的反应,这有助于对ＮＰＣ发生机理的深入研究及防治     

分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响

目的：探讨常规分割放疗和超分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响。方法：采用ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄｕｔｐ缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,分别检测６０例鼻咽癌患者在放疗第２周和第４周时细胞凋亡率（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ,ＡＲ）和增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｎｈｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达。结果：常规分割放疗组放疗第４周后的ＡＲ     

Caspase-3在X线诱导的鼻咽癌细胞凋亡中的调控作用

目的探讨X线诱导后鼻咽癌CNE-2细胞凋亡存在形式以及Caspase-3酶活性、mRNA、蛋白的表达及相互之间的关系,拟阐明Caspase-3在X线诱导的鼻咽癌细胞凋亡中的调控及意义。方法用不同剂量X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,于不同时间检测细胞形态学及早期细胞凋亡率变化,分别用比色法、Western blot 、RT-PCR检测Caspase-3酶活性、蛋白含量、mRNA,同时设立酶活性抑制剂AC-DEVD-CHO对照组,观察Caspase-3酶活性被阻抑后细胞凋亡及Caspase-3表达的变化。结果（1）X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的凋亡特征,且早期凋亡率与射线剂量、诱导时间成正比;（2） CNE-2凋亡细胞中Caspase-3酶活性明显增高,用AC-DEVD-CHO抑制Caspase-3活性后细胞的凋亡率减少,且凋亡形态学特征不明显。（3）凋亡细胞中Caspase-3 mRNA表达量未见明显升高,而蛋白在凋亡形成后则完全裂解为17kD的活性Caspase-3,在正常细胞为32kD的pro-Caspase-3。结论X线诱导后CNE-2细胞呈典型的凋亡改变。凋亡细胞中有明显的Caspase-3激活,其Caspase-3的活性增高并非源于其转录的提高,而可能是翻译后酶前体的活化。抑制鼻咽癌Caspase-3酶活性,凋亡的发生可被抑制或是延迟。     

鼻咽癌放疗前及放疗中细胞凋亡的变化和意义

 目的　探讨鼻咽癌放疗前及放疗中细胞凋亡的变化及其意义。方法　采用TdT酶介导的生物素化dutp缺口末端标记技术(TUNEL),检测35例鼻咽癌患者放疗前及放疗中鼻咽部刷落癌细胞的细胞凋亡率(apoptosis rate,AR)。结果　鼻咽癌放疗前的AR为7.2％±2.4%;放疗量分别为10GY、30GY和60GY时的AR分别为64.3%±21.4%、57.2%±17.3%、16.2%±7.4%,明显高于放疗前(P＜0.01);放疗前的自发性细胞凋亡与放射治疗诱发的细胞凋亡呈正相关。结论　检测鼻咽癌患者刷落癌细胞的细胞凋亡率有助于判断放射敏感性。     

p53、bcl-2蛋白和p-gp在鼻咽鳞癌中表达的研究

 目的　研究 p5 3、bcl 2蛋白和 p gp在鼻咽鳞癌组织中的表达及其临床病理特征的关系 ,探讨其在预后评估中的意义。方法　采用免疫组化SP法检测 6 4例鼻咽鳞癌组织中p5 3、bcl 2和 p gp的表达。结果　鼻咽鳞癌组织中 p5 3、bcl 2和p gp阳性率分别为76 .5 6 % (4 9/ 6 4 )、89.0 6 % (5 7/ 6 4 )、17.19% (11/6 4 )。p5 3、bcl 2蛋白过表达均与颈部淋巴结转移、组织分化程度有关 (P <0 .0 1)。p gp过表达与bcl 2蛋白过表达呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,p5 3蛋白过表达与bcl 2蛋白过表达呈正相关 (P <0 .0 0 1)。结论　p5 3和bcl 2蛋白均参与鼻咽鳞癌的发生与分化 ,其表达水平的不同有助于预后判断 ;未经治疗的鼻咽鳞癌存在原发性耐药     

鼻咽癌中自发凋亡与临床放射敏感性的研究

目的探讨鼻咽癌组织中细胞自发凋亡在预测临床放射敏感性中的意义。方法对38例初治、无远处转移、放疗前鼻咽癌患者活检标本,采用TUNEL法检测细胞自发凋亡,临床观测患者放疗过程中鼻咽部肿瘤的消退情况。结果自发凋亡率与鼻咽癌瘤体的消退率呈显著正相关(放疗剂量为40Gy时,γ=0.836;放疗剂量为70Gy时,γ=0.909;P<0.01)。患者性别、年龄及分期与鼻咽癌瘤体的消退率均无相关性(P>0.05)。结论鼻咽癌中细胞自发凋亡率可以作为鼻咽癌临床放射敏感性可能的预测指标。     

血浆EB病毒DNA数量与鼻咽癌细胞凋亡的相关性分析

目的探讨血浆EBV-DNA数量与鼻咽癌细胞凋亡的关系。方法采用巢式荧光定量PCR,检测鼻咽癌患者血清EBV-DNA的拷贝数,TUNEL法检测鼻咽癌组织中癌细胞凋亡情况,分析EBV-DNA拷贝数与凋亡癌细胞的相关性。结果鼻咽癌患者血浆EBV-DNA检出率为96.4%（27/28）,中位数为1 800 copies/μl（0～22 100 copies/μl）。28例鼻咽癌活检组织中癌细胞平均凋亡指数为30.0±18.0。EBV-DNA拷贝数与鼻咽癌细胞凋亡呈正相关（γ=0.927,P〈0.05）。结论血浆EBV-DNA水平与鼻咽癌细胞凋亡呈正相关,鼻咽癌患者血浆EBV-DNA可能部分来源于凋亡的癌细胞。     

COX-2和bcl-2异常表达与鼻咽癌生物学行为的关系

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)、bcl-2在鼻咽癌中的表达及其与生物学行为的关系。方法选取临床资料完整并随访达5年以上的86例鼻咽癌患者,采用免疫组化技术检测活检标本中COX-2及抗凋亡蛋白bcl-2的表达,并分析其与临床病理及预后的相关性。结果COX-2在鼻咽癌组织中阳性表达率为73.3%(63/86),与原发灶范围、颈淋巴结转移、肿瘤分级、生存期密切相关(P<0.05);bcl-2蛋白阳性表达率为84.9%(73/86),与组织学类型、肿瘤分级、病灶范围、淋巴结转移均无相关性,但生存期≤5年组bcl-2蛋白表达阳性率显著高于生存期>5年组(P<0.05)。结论COX-2在鼻咽癌组织中高表达,可能参与了鼻咽癌的发生发展过程,可作为判断预后的一种有用指标;bcl-2的表达可能与鼻咽癌病因学有关,在鼻咽癌病程中的作用有待进一步探讨。     

拓扑异构酶Ⅱ抑制剂诱导SUNE-1鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的:探讨拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)抑制剂吡喃阿霉素(THP)、阿霉素(ADM)诱导鼻咽低分化鳞癌细胞株SUNE-1细胞凋亡的作用;并检测药物作用后SUNE-1线粒体膜电位及Livin表达水平的变化。方法:采用MTT法检测THP、ADM对SUNE-1细胞的生长抑制,Annenxin V FITC染色检测凋亡早期细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位改变和Livin的表达情况。结果:ADM和THP对SUNE-1具有较强的体外抗肿瘤作用,随着药物浓度增高细胞增殖抑制率增高,其IC50分别为0.004 1±0.000 3"g/ml和0.003 8±0.000 8"g/ml(P=0.542)。随着药物作用时间的增加,SUNE-1细胞凋亡率逐渐增高,同时伴有线粒体内膜电负性逐渐增加。ADM、THP诱导SUNE-1细胞凋亡中出现Livin的表达上调,但THP作用后表达上调的程度较ADM低。结论:TopoⅡ抑制剂蒽环类药物THP、ADM具有抑制细胞增殖和诱导鼻咽低分化鳞癌细胞株SUNE-1细胞凋亡的作用。TopoⅡ抑制剂作用鼻咽癌细胞后诱导IAP蛋白中的Livin表达上调,但THP作用后所引起的Livin表达上调不如ADM显著,因此THP在治疗鼻咽癌时可能具有更好的应用价值,需在临床中进一步证实。