TGF-β减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病

为了探讨转化生长因子β（TGF—β）对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响，用C57BL／6小鼠作为供鼠，BABL/c小鼠为受鼠，建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BABL／c受鼠随机分为4组：空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF—β实验组。TGF—β实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF—β1（1μg/kg）。结果显示：TGF-β实验组小鼠生存时间明显长于移植对照组（P〈0．01），TGF—β实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏GVHD病理改变明显轻于移植对照组。移植后7天TGF—β实验组小鼠血清IL-2浓度较空白对照组高，但远低于移植对照组；TGF—β实验组血清IL—10浓度明显高于移植对照组。结论：TGF—β能够减轻或抑制小鼠allo—BMT后致死性的aGVHD发生，提高移植后存活率。TGF—β可能使Th1细胞向Th2细胞偏移，抑制IL-2等Th1类细胞因子的分泌，同时促进了Th2类细胞因子IL—10的表达，降低aGVHD的发生。     

小鼠异基因骨髓移植继发急性移植物抗宿主病细胞因子的表达

背景:急性移植物抗宿主病仍然是限制异基因造血干细胞移植临床应用的主要障碍之一,已证实造成发病的首要因素是转化生长因子β1、肿瘤坏死因子α、干扰素γ等分泌异常.目的:拟通过建立小鼠异基因骨髓移植模型诱导急性移植物抗宿主病反应,检测外周血血清中Th1及Th2型代表因子干扰素γ、白细胞介素4的表达水平,分析其与急性移植物抗宿主病严重程度的关系.设计、时间及地点:随机对照体内移植实验,于2005-08110在北京口腔医院动物部及首都医科大学附属北京友谊医院完成.材料:清洁级C57BL/6(H-2b)雄鼠20只作为供鼠用于制备骨髓细胞及脾脏淋巴细胞,BALB/c(H-2d)雌鼠50只作为受鼠,随机分为正常对照组10只、骨髓细胞移植组20只、混合移植组20只.方法:骨髓细胞移植组、混合移植组均给予总剂量9.0Gy的6MV-X射线照射,前者经尾静脉单纯输入异基因骨髓细胞2.0×107个,后者混合输入异基因骨髓细胞、脾脏淋巴细胞各2.0×107个.主要观察指标:记录小鼠生存时间,计数外周血白细胞,ELISA法测定移植后不同时间外周血血清中细胞因子水平,苏木精-伊红染色观察组织病理学变化.结果:骨髓细胞移植组从第8天开始出现死亡,混合移植组从第4天开始出现死亡.前者平均生存时间明显长于后者,Kaplan-Meier法检验P<0.05.移植后第7天,骨髓细胞移植组白细胞数明显低于混合移植组(P<0.05),第14,21天两组白细胞数比较差异无显著性意义(P>0.05).与骨髓细胞移植组比较,移植后第7,14天混合移植组白细胞介素4水平明显降低(P<0.05,P<0.01),干扰素γ水平明显升高(P<0.05).骨髓细胞移植组镜下可见肝细胞轻度变性,小肠有少量淋巴细胞浸润,病理分级为Ⅰ、Ⅱ级.混合移植组肝细胞呈不同程度的变性或坏死,小肠绒毛坏死脱落,黏膜下层大量淋巴细胞浸润,病理分级为Ⅲ-Ⅴ级.结论:随着急性移植物抗宿主病程度的加重,血清白细胞介素4水平明显下降,干扰素y水平显著升高,尤其在发病早期两种细胞因子变化更为明显.     

非亲缘异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病的护理

非亲缘异基因骨髓移植 (ＵＲＤ -ＢＭＴ)是从无血缘关系人类白细胞抗原 (ＨＬＡ)配型相合的供者体内采集骨髓 ,移植于受者体内以恢复造血功能 ,根治白血病的一种有效方法。在我国因供者选择困难及移植并发症高尚处于起步阶段。据报道 ,ＵＲＤ -ＢＭＴ移植相关死亡率高于亲缘异基因骨髓移植 ,而急性移植物抗宿主病 (ａＧＶＨＤ)是移植失败的主要原因之一[1] 。提高护士对ＵＲＤ -ＢＭＴ后ａＧＶＨＤ临床特点的认识 ,采取有效的护理措施 ,对移植成功与否至关重要。现将我院 1999年 6月～ 2 0 0 1年 8月进行的非亲缘异基因骨髓移植 8例患者ａＧ…     

霉酚酸酯对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的预防作用

目的：探讨新型免疫抑制剂霉酚酸酯（MMF）对小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT)后急性移植物抗宿主病（aGVHD)的预防作用。方法：用主要组织相容性抗原（MHC）完全不合的纯种近交系小鼠[供鼠：雌性C57BL／6J（H－2^b)鼠；受鼠：雄性BALB／c(H-2^d)鼠]建立allo-BMT/aGVHD动物模型，随机分6组，给予MMF、环孢菌素A（CsA) 甲氨喋呤（MTX）或联合不同剂量MMF作为aGVHD预防方案。观察其aGVHD的预防作用。结果：移植小鼠出现典型的aGVHD症状，未用aGVHD预防方案的移植小鼠（第6组）死亡高峰在移植后第5－第7天，死亡率达100％。用不同aGVHD预防方案的1－5组小鼠aGVHD症状明显减轻，平均生存时间（MST）较第6组显著延长（分别延长3．4，8．4，9．0，6．1，8．8d（P＜0．05）。不同aGVHD预防方案的移植小鼠之间，移植后外周血常规变化差异无显著性。经用各预防方案后，移植小鼠cGVHD病理表现减轻，且MMF、CsA、MTX三药联合组的病理分级轻于MMF单药组或CsA MTX标准方案组。结论：MMF单药及与CsA MTX联合均能有效预防小鼠allo-BMT后的aGVHD，减轻其症状和病理损害程度，显著延长平均生存时间。小剂量MMF（≤30mg/kg）与CsA TMX的联用效果优于大剂量MMF（60mg/kg）与CsA MTX的联用效果。适当剂量的MMF（10－60mg/kg）对骨髓植入和造血恢复没有显著影响。     

苦参碱联合环孢素A减轻小鼠急性移植物抗宿主病

背景：苦参碱具有降低白细胞介素2浓度的作用,作为化疗辅助用药已用于临床。目的：探讨苦参碱联合环孢素A对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响,及苦参碱可能的作用机制。方法：C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/C小鼠为受鼠,建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BALB/C受鼠随机分为7组：空白对照组、单纯照射组、骨髓移植组及足量环孢素A、半量环孢素A、足量苦参碱组、足量苦参碱联合半量环孢素A组。结果与结论：足量苦参碱联合半量环孢素A组小鼠生存时间明显长于其他组。进行骨髓移植的小鼠均出现不同程度病理改变,越早程度越重。移植后7d,与骨髓移植组比较,其他移植组小鼠血清γ-干扰素质量浓度下降,白细胞介素4质量浓度差异无显著性意义。提示,苦参碱能够减轻小鼠异基因骨髓移植后致死性急性移植物抗宿主病的发生,生存时间延长。苦参碱与环孢素A作用相似,二者联用,有协同作用。     

苦参碱联合环孢素A减轻小鼠急性移植物抗宿主病

背景:苦参碱具有降低白细胞介素2浓度的作用,作为化疗辅助用药已用于临床。目的:探讨苦参碱联合环孢素A对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响,及苦参碱可能的作用机制。方法:C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/C小鼠为受鼠,建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BALB/C受鼠随机分为7组:空白对照组、单纯照射组、骨髓移植组及足量环孢素A、半量环孢素A、足量苦参碱组、足量苦参碱联合半量环孢素A组。结果与结论:足量苦参碱联合半量环孢素A组小鼠生存时间明显长于其他组。进行骨髓移植的小鼠均出现不同程度病理改变,越早程度越重。移植后7d,与骨髓移植组比较,其他移植组小鼠血清γ-干扰素质量浓度下降,白细胞介素4质量浓度差异无显著性意义。提示,苦参碱能够减轻小鼠异基因骨髓移植后致死性急性移植物抗宿主病的发生,生存时间延长。苦参碱与环孢素A作用相似,二者联用,有协同作用。     

细胞因子与移植物抗宿主病的关系

异基因骨髓移植是目前治疗血液系统疾病的一个有效方法,移植物抗宿主病αＧＶＨＤ）则是影响移植效果的主要合并症,目前认为细胞因子在ＧＶＨＤ的发生发展过程中起着重要作用,研究细胞因子如Ｆas,ＴＮＦα,ＩＬ－６,ＩＬ－２在ＧＶＨＤ患体内血清水平及mＲＮＡ水平的特异性变化,可以帮助了解ＧＶＨＤ的发生机制,并提出ＧＶＨＤ新的特异性诊断指标,而抑制细胞因子的各种措施有可能成为预防和治疗ＧＶＨＤ的有效方法,对提高     

非亲缘异基因骨髓移植术后重症肠道急性移植物抗宿主病的临床分析

目的分析非亲缘异基因骨髓移植术后并发重度肠炎临床和病理特征及治疗情况：方法3例慢性粒细胞白血病慢性期及1例骨髓增生异常综合症患者接受非亲缘异基因骨髓移植术．预处理方案为马利兰／环磷酰胺,以霉酚酸酯(MMF)和环孢霉素(CsA)加短程氨甲蝶呤(MTX)预防急性移植物抗宿主病(aGVHD)。结果4例患者分别于移植后的后22、56、55、47d并发重度肠炎．肠镜和病理活检示肠黏膜充血水肿或上皮层坏死脱落,肠腔正常结构消失,直、结肠多发性溃疡,见较多淋巴细胞和浆细胞浸润,未见巨细胞病毒(CMV)包涵体和巨细胞,诊断为肠道aGVHD。予以糖皮质激素为主的治疗,其中1例予FK506、抗CD3单克隆抗体治疗。3例出现血CMV抗原血症．给予更昔洛韦／磷甲酸钠治疗。1例治疗无效死亡,3例得到有效控制。结论非亲缘异基因骨髓移植后并发aGVHD所致肠炎,诊断有赖于肠镜和病理活检并为正确治疗提供依据。     

非亲缘异基因骨髓移植术后重症肠道急性移植物抗宿主病的内镜分析

目的 分析非亲缘异基因骨髓移植术后并发中、重度结肠炎内镜、病理特征及治疗情况.方法 分析总结12例接受骨髓移植术后出现急性移植物抗宿主病(aGVHD)患者的内镜下表现资料.结果 4例患者分别于移植后的1～57 d并发不同程度中、重度结肠炎,肠镜和病理活检示结肠黏膜充血水肿或上皮层坏死脱落,肠腔正常结构消失,直、结肠多发性溃疡,见较多淋巴细胞和浆细胞浸润,未见巨细胞病毒(CMV)包涵体和巨细胞,诊断为结肠aGVHD.予以糖皮质激素为主的治疗,其中3例予FK506、抗CD3单克隆抗体治疗.2例出现血CMV抗原血症,给予更昔洛韦/磷甲酸钠治疗.1例治疗无效死亡,其余得到有效控制.结论 非亲缘异基因骨髓移植后并发aGVHD所致结肠炎,诊断有赖于肠镜和病理活栓并为正确治疗提供依据.     

供者自然杀伤细胞减轻急性移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨骨髓移植中供者自然杀伤(NK)细胞减轻急性移植物抗宿主病(GVHD)的作用与受者总树突细胞(DC)、成熟DC、转化生长因子β1(TGF-β1)的关系。方法C57BL／6小鼠作为供鼠,BALB／c小鼠为受鼠,受鼠接受60Coγ射线全身照射(6．5 Gy)后随机分为4组,对照1组无任何处理,对照2组移植供鼠骨髓,实验1组移植供鼠骨髓同时输注激活的受鼠NK细胞,实验2组移植供鼠骨髓同时输注激活的供鼠NK细胞,观察受鼠生存期、GVHD临床和病理表现,检测总DC、成熟DC以及TGF-β1含量。结果对照1组小鼠未发生GVHD,其余三组均发生GVHD。但实验2组GVHD临床和病理评分分别为(3．1±1．2)分和(2．5±1．1)分,较对照2组GVHD程度[分别为(7．2±1．3)分和(7．5±1．1)分]明显减轻(P<0．01),实验1组分别为(8．5±1．0)分和(8．8±1．7)分,较对照2组GVHD加重(P<0．05)。移植后4周,对照1组、对照2组、实验1组和实验2组CD11c+细胞分别占26．1％,24．7％,24．1％,8．6％,CD86+细胞分别占10．2％,19．3％,23．4％,6．1％,CD80+细胞分别占16．1％,24．6％,33．2％,5．1％。实验2组受者总DC和成熟DC含量较对照2组明显减少(P< 0．05),实验1组成熟DC含量较对照2组增加(P<0．05)。实验2组TGF-β1含量较对照2组增加(P<0．05),实验1组较对照2组减少(P<0．05)。结论供者NK细胞减轻GVHD的机制与其减少受者总DC和成熟DC数量以及增加TGF-β1含量有关,这种作用可能与杀伤细胞抑制受体(KIR)-主要组织相容复合物(MHC)Ⅰ不匹配有关。     

细胞因子与移植物抗宿主病的关系

异基因骨髓移植是目前治疗血液系统疾病的一个有效方法,移植物抗宿主病αGVHD)则是影响移植效果的主要合并症,目前认为细胞因子在GVHD的发生发展过程中起着重要作用,研究细胞因子如Fas,TNFα,IL-6,IL-2在GVHD患者体内血清水平及mRNA水平的特异性变化,可以帮助了解GVHD的发生机制,并提出GVHD新的特异性诊断指标,而抑制细胞因子的各种措施有可能成为预防和治疗GVHD的有效方法,对提高移植生存率有着重要的意义。     

细胞因子基因表达在急性移植物抗宿主病中的意义

移植物抗宿主病(GVHD)是异基因骨髓移植后主要的并发症,是影响骨髓移植成功及病人预后的重要因素之一。细胞因子过度表达,是GVHD发生的主要病理生理学基础。本实验采用斑点杂交和细胞原位杂交方法研究了急性GVHD时患者外周血淋巴细胞中6种细胞因子基因表达的情况,发现急性GVHD时,各种细胞因子表达均有不同程度的升高。提示细胞因子在急性GVHD发病过程中具有重要意义,通过细胞因子的表达调控以预防和治疗GVHD,可能是一个颇具前景的方向。     

清除小鼠特异性活化淋巴细胞预防急性移植物抗宿主病的研究

试图通过消除异基因Ｔ细胞中能够识别宿主主要组织相容性抗原复合物（ＭＨＣ）的Ｔ细胞克隆细胞，以抑制移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）．异基因供者经宿主来源的细胞特异性致敏后，用ＩＬ－２Ｒ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）联合补体杀伤骨髓移植物中活化Ｔ细胞，能明显抑制供者淋巴细胞在宿主脾脏中的增殖，并使异基因骨髓移植受体小鼠生存时间明显延长。本研究结果证明，清除特异活化的Ｔ细胞可以有效地预防ＧＶＨＤ。     

体外阻断CD40-CD40L共刺激途径减轻小鼠异基因骨髓移植中移植物抗宿主病的研究

目的在异基因骨髓移植移植物抗宿主病(GVHD)小鼠模型中,观察抗CD40L单克隆抗体(单抗)体外预处理供鼠T细胞输注,观察其减轻GVHD的作用并探讨其作用机制.方法供鼠(C57BL/6H-2b)脾T细胞作为反应细胞,受鼠(BALB/cH-2d)脾细胞作为刺激细胞,分别加抗CD40L单抗或不加单抗进行混合培养,培养第5天的细胞作为经体外诱导后的脾T淋巴细胞,分别混合供鼠骨髓细胞后移植给接受8.0 Gy全身照射预处理的受鼠.比较受鼠GVHD发生和造血重建.在移植后不同时间点采用流式细胞仪检测受鼠脾细胞中T细胞表型的改变,用ELISA法检测外周血血清中Th1和Th2类细胞因子的水平.结果移植后对照组受鼠均于25 d内死于GVHD,实验组GVHD的发生率为20%,与对照组小鼠相比,存活率和存活时间明显增高和延长(P<0.01);存活的实验组小鼠(8只)第40天时骨髓细胞中H-2Db阳性细胞为(93.54±2.32)%.实验组小鼠CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD25+、CD4+CD69+、CD8+CD25+、CD4+CD40L+和CD8+CD69+T细胞比例明显低于对照组(P<0.05),CD8+CD40L+和CD4+CD45RA+T细胞比例在两组中变化差异无显著性(P>0.05).实验组受鼠血清中细胞因子水平明显低于对照组(P<0.05).结论应用抗CD40L单抗体外孵育的脾T细胞与骨髓细胞混合移植,可明显减少GVHD的发生率,且不影响供鼠造血干细胞的植入,CD4+和CD8+T细胞对异体抗原发生耐受,耐受化T 细胞的活化障碍发生于活化的早期和成熟阶段,同时抑制了Th1和Th2类细胞因子分泌,为抗CD40L单抗应用于临床移植预防GVHD提供了实验依据.     

可溶性Fas配体与异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病及感染关系的探讨

目的　明确可溶性Fas配体（sFasL）与急性移植物抗宿主病（aGVHD）及感染的关系。方法　采用ELISA方法检测异基因骨髓移植受者移植前后血浆sFasL水平,比较其与临床发生aGVHD和感染的相关性。结果　发生Ⅱ～Ⅳ级aGVHD时受者血浆sFasL水平［（0.313±0.372）μg/L］明显高于发生0～Ⅰ级aGVHD者［(0.173±0.280)μg/L］(P=0.02）;发生同级aGVHD,有感染者sFasL水平与无感染者相比差异无显著性;发生Ⅱ～Ⅳ级aGVHD的患者在移植前的sFasL水平较发生0～Ⅰ级aGVHD者低。结论　移植后受者血浆sFasL水平对于aGVHD的诊断有重要意义;可作为aGVHD与感染相鉴别的指标;移植前较高水平的sFasL可能对减少移植后aGVHD发生的危险性有一定意义。     

骨髓移植中的移植物抗宿主病和移植物抗白血病作用

骨髓移植中的移植物抗宿主病和移植物抗白血病作用白海综述达万明审校（兰州军区总医院，兰州７３００５０）ＥｆｆｅｃｔｏｆＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｏｎＧｒａｆｔ－Ｖｅｒｓｕｓ－ＨｏｓｔＤｉｓｅａｓｅａｎｄＧｒａｆｔ＇ｓＡｎｔｉ－Ｌ...     

受鼠年龄对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生的影响

本研究通过建立2种周龄的小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型,探讨受鼠年龄对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD发生的影响。选用近交系8-10周龄C57BL/6(H-2Kb)小鼠作为供鼠,18-20周龄及8-10周龄的BALB/c(H-2Kd)小鼠作为受鼠;两种周龄的小鼠均分为正常对照组、单纯照射组和模型组。单纯照射组及模型组小鼠给予总剂量率为7.5 Gy的60Coγ射线全身照射,其剂量率为0.68 Gy/min。模型组小鼠照射后4 h进行骨髓细胞+脾细胞移植,每只小鼠输入骨髓细胞数5×106个,脾细胞数5×105个。每天观察各组小鼠的一般情况、生存状态。于照射后第5、10、15、20、25、30天计数各组小鼠外周血白细胞数量;采用流式细胞术测定各组小鼠外周血白细胞嵌合率及T淋巴细胞亚群、Th1细胞比例;观察正常对照组、单纯照射组及第5、15和25天模型组小鼠肝脏、小肠和皮肤的组织病理学变化。结果表明:照射后1个月模型组小鼠均发生aGVHD,18-20周龄组小鼠与8-10周龄组相比,移植后aGVHD发生率低(60%vs 100%),临床评分低,生存率比为83%vs 61%,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血白细胞在移植后第10天达到清髓,第15天白细胞开始恢复,而8-10周龄组则分别为移植后第5和第10天,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血供者来源的白细胞在移植后第20天达到完全嵌合,而8-10周龄组为第10天,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD8+T细胞及Th1细胞比例均低于8-10周龄组,两组间差异显著。组织病理学变化显示,在相同时间点,18-20周龄组小鼠的肝脏、小肠及皮肤的炎症和坏死程度均较8-10周龄组轻微。结论:18-20周龄受鼠比8-10周龄受鼠aGVHD发生率低,程度轻,生存状况较好,受鼠年龄影响aGVHD的发生和进程。     

肝细胞生长因子对急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病和移植物抗白血病的影响

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠异基因骨髓移植(alloBMT)后移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)的影响及其可能的相关机制。方法随机将20只裸鼠(用于观察白血病复发)分为对照组(A组)和实验组(B组),将20只BALB/c小鼠(用于观察GVHD)分为对照组(C组)和实验组(D组),实验组在移植0天至移植后7天注射HGF,对照组注射PBS。流式细胞术检测HGF对alloBMT后ALL小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的影响。记录ALL小鼠BMT后的存活时间。观察移植后ALL小鼠肝脏、小肠的GVHD病理变化。ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平。结果A、B、C、D4组小鼠alloBMT后中位生存时间分别为(7.00±1.58),(9.00±1.58),(11.00±3.95),(24.00±13.44)d,D组生存时间明显延长(P值均<0.05)。D组CD4+T淋巴细胞[(10.39±1.15)%]较C组[(13.50±1.81)%]明显降低(P<0.01),CD8+T淋巴细胞[(12.25±2.85)%]较C组[(6.12±1.99)%]明显增加(P<0.01)。D组TNFα水平[(112.10±18.99)pg/ml]明显低于C组[(143.90±25.35)pg/ml](P<0.01)。GVHD明显减轻。结论HGF具有减轻ALL小鼠alloBMT后GVHD程度并且保留GVL的作用。     

非亲缘异基因骨髓移植后慢性移植物抗宿主病的观察与护理

慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是非亲缘异基因骨髓移植(Allo-BMT)后的主要并发症,是导致Allo-BMT后期失败的主要原因之一,同时也严重影响移植患者后期的生活质量。因此对cGVHD的观察与护理的研究对提高Allo-BMT的成功率及移植患者生活质量具有重要的意义。现将36例白血