一种快速,稳定制备胶体金的新方法

本文报道了采用微波技术制备胶体金的方法。此法快速、稳定，颗粒均匀一致，大大缩短了制备胶体金的时间，全过程仅用５ｍｉｎ，并且对胶体金制备过程达到了程序化控制，使制备胶体金的操作更简单、更方便。     

柯萨奇病毒IgM抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制

目的建立一种快速检测柯萨奇病毒IgM抗体的胶体金免疫层析试纸条，并优化制备中各关键步骤的实验条件。方法以柠檬酸三钠还原法制备20nm的胶体金溶液，标记羊抗人IgM，制备免疫胶体金复合物，组装胶体金免疫层析快速诊断试纸条。结果用柠檬酸还原法制备的20nm胶体金溶液呈亮红色。胶体金标记羊抗人IgM最低稳定量是1μg/ml，最适稳定量为1．5μg/ml。最适pH为8．2。血清标本检测结果与进口ELISA试剂盒比较差异无统计学意义。结论胶体金免疫层析试纸条制备质量不但与抗原抗体的质量、层析材料的选择、胶体金的制备与标记等因素密切相关，而且缓冲系统、辅助添加剂的选择与优化也非常重要。     

抗吗啡单克隆抗体的制备及其胶体金交联物的初步应用

目的：制备吗啡特异性单克隆抗体(mAb)。方法：将吗啡分子与兔血清白蛋白或牛血清白蛋白交联，免疫BALB／c小鼠并检测免疫效价后，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗吗啡mAb。将纯化mAb与胶体金颗粒交联后利用纸层析技术进行标本检测。结果：成功地制备了3株抗吗啡mAb，利用其中1株抗体制备的胶体金试纸条，检测样品灵敏度达200μg／L。结论：吗啡mAb胶体金试纸条研制成功将为毒品的现场检测打下基础。     

单分散性胶体金的制备工艺优化

目的 利用磁力搅拌器作为加热和搅拌设备，研究了单分散性胶体金的制备工艺。方法 通过三因素三水平正交实验，确定最佳制备条件，并采用UV—visible吸收光谱和透射电镜进行综合评价。结果 粒径为11nm胶体金的最佳制备条件是溶液起始沸腾时间2min,加入还原剂后再继续加热反应时间是6min，反应过程中的搅拌转速为1000r／min。此条件下得到的胶体金平均粒径为10．7nm,标准偏差为1．5nm。结论 加入柠檬酸钠后加热反应时间是影响胶体金制备的主要因素。     

快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法的建立及应用

建立乙肝表现抗原胶体金免疫层析测定法，用于乙肝病毒感染检测。采用亲和力强、特异笥高的自制抗－ＨＢｓ单克隆抗体及胶体金标记和硝酸纤维膜包被技术，制备乙肝表面抗原胶体金免疫层析快速测定试条，并进行了初步临床应用。该法的灵敏度为５ｎｇ／ｍＬ，与目前广泛使用的ＥＬＩＳＡ法对照检测５１３份血清标本，符合率为９９．２％。该法快速、准确、特异、灵敏、简便，基本符合临床应用要求，可用于乙肝表面抗原的检测。     

霍乱毒素B亚单位结合胶体金的逆行轴浆转运复合免疫细胞化学的应用

以ＣＢ－胶体金（ＣｈｏｌｅｒａｔｏｘｉｎｓｕｂｕｎｉｔＢ－ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ）为逆追踪剂（ＣＢ－胶体金，中国协和医科大学神经生物学室制备），观察将其肌肉注射后，大鼠运动神经元的逆行轴浆转运标记及复免疫细胞化学（ＩＣＣ，ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）应用的可行性。     

早期诊断心肌损伤肌球蛋白胶体金免疫层析法研究

目的建立一种简便、快速、准确检测人心肌损伤的胶体金免疫层析法（GICA）。方法制备胶体金标记抗Myosin多肽抗体，抗Myosin单克隆抗体，结合垫和样品垫的处理，组装免疫层析试纸条。检测患者血清中Myosin，进行敏感性和特异性评定。结果测试条灵敏度可达5ng／mL。检测30例急性心肌梗塞（AMI）患者血清Myosin水平，并与Roche肌钙蛋白胶体金免疫层析试剂条比较，符合率达84.2％。结论本方法特异性强、灵敏度高、简便快速、可用于急性心肌损伤的早期诊断。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立一种简便实用胶体金免疫层析检测方法．用于人心肌肌钙蛋白I（cTnI）的快速检测。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,以兔源抗cTnI多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,采用免疫层析技术制备快速检测cThI胶体金免疫层析检测试纸条。并与国外生产的胶体金试剂盒作对比。结果该试纸条检测范围质量浓度为5ng／mL～1μg／mL;灵敏度质量浓度为5ng／mL：特异性：与肌红蛋白、肌酸磷酸激酶同工酶、cTnT、cTnC无交叉反应：与国外胶体金试纸条检测结果比较阳性符合率为96．4％,阴性符合率为100．0％。结论成功建立cTnI胶体金免疫层析检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要．     

pH值对胶体金标记单克隆抗体性能的影响

目的探讨pH值对胶体金标记单克隆抗体(mAb)性能的影响。方法用K2CO3调整胶体金溶液的pH值,得到pH值在5.0~9.0范围内的胶体金溶液,并用抗肠道病毒71型(EV71)VP1 mAb进行标记,牛血清白蛋白(BSA)封闭。用紫外-可见光谱扫描监测该标记过程中胶体金的性能改变。采用Mey氏稳定化实验检测免疫金的稳定性并检测制得的成品胶体金试纸条的灵敏度。结果 EV71-VP1 mAb在胶体金溶液pH值为7.0~8.5范围内制备的免疫金较稳定,且制得试纸条灵敏度高。结论 pH值是影响胶体金稳定性、决定胶体金与mAb间作用力的重要因素,并证实了紫外-可见光谱扫描评价pH值对胶体金标记的效果,建立了用紫外-可见光谱选择最适标记pH的方法标准。     

胶体金免疫层析法检测血清癌胚抗原

建立一种快速、简易的检测血清中癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗CEA单克隆抗体4A3。将单克隆抗体3B5划线包被于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试纸条。血清中CEA与试纸条上胶体金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的包被抗体结合形成肉眼可见的红色线条。用GICA与ELISA试剂盒对比检测了637份血清标本，其灵敏度为96．69％，特异性为99．38％，两法符合率为98．74％。GICA检测血清中的CEA特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

检测副溶血弧菌TDH斑点免疫胶体金渗滤法的研究

目的:制备特异性检测副溶血弧菌TDH的斑点免疫胶体金渗滤测试盒(Dot immunogold filtration assay,DIG-FA)。方法:T6D4和T9H4两株抗体分别标记于金颗粒和点样于硝酸纤维素膜,通过双抗体夹心法来开发斑点免疫胶体金渗滤测试盒,并对测试盒的特异性、重复性、稳定性做了分析。结果:研制的斑点免疫胶体金渗滤测试盒能够特异性检测副溶血弧菌TDH,其最低检测限达到250 ng/ml TDH,该测试盒在4℃恒温条件下保存12周后仍表现出准确和稳定的检测结果。结论:成功制备了检测副溶血弧菌TDH的斑点免疫胶体金渗滤测试盒,对现场快速检测TDH提供了可靠的测试工具。     

玉米赤霉烯酮单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析法的建立

目的 制备并鉴定玉米赤霉烯酮(ZEN)单克隆抗体(mAb),并初步建立ZEN的胶体金免疫层析检测方法.方法 采用活泼酯法制备人工抗原ZEN-OVA和ZEN-BSA,以ZEN-OVA作为免疫原制备ZEN mAb.ELISA法鉴定抗体效价、亚类、特异性等.ZEN mAb-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,检测原ZEN-BSA和山羊抗小鼠lgG分别结合于硝酸纤维膜上作为检测线(T线)和质控线(C线),建立ZEN的胶体金免疫层析检测法.结果 经紫外分光光度法和SDS-PAGE鉴定,ZEN人工抗原合成成功.经3次克隆化后,筛选出1株能稳定分泌ZEN mAb的杂交瘤细胞株1G4,腹水效价为1∶1.6×105;抗体亚类为IgG2b;对ZEN的IC50为10.2 ng/mL,检测限为0.58 ng/mL.mAb对ZEN具有高度的特异性,除与β-玉米赤霉烯醇的交叉反应率为12.8％外,与其他ZEN代谢物α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉酮及其他相似毒素呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A等几乎无交叉反应.制备的胶体金免疫层析试纸条在5 min内即可肉眼观察到结果,对ZEN的最低检测限为100 ng/mL.结论 成功制备出1株ZEN mAb,并初步建立了其胶体金免疫层析检测方法,最低检测限为100 ng/mL.     

国家级继续医学教育备案项目免疫诊断新技术及其在临床诊断试剂开发中的应用培训班报名通知

根据卫继委发(2000)第003号文件精神,2000年第二批国家级继续医学教育项目公布。由中华预防医学会生物制品分会、卫生部北京生物制品研究所主办“免疫诊断新技术及其在临床诊断试剂开发中的应用”培训班,此项目已被列为国家级继续医学教育备案项目(项目编号172号),培训班将于2000年9月在北京举办。培训主要内容:胶体金快速诊断试剂:将系统介绍胶体金标记技术的原理及其在快速诊断试剂中的应用,使学员们掌握有关胶体金的制备、胶体金标记技术及胶体金层析快速诊断试剂的研制方法。聚合酶链反应酶联免疫技术(ＰＣＲ-ＥＩＡ):将系统介绍聚合酶…     

金标免疫层析法测定前列腺抗原方法的应用

目的：采用前列腺抗原（ＰＳＡ）单抗标记胶体金的方法。测定ＰＳＡ抗原。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金、金标免疫层析方法（ＧＳＬＩＡ）测定。结果：将金标方法与ＥＬＩＳＡ方法进行比较灵敏度、特异性、其两者无显著性差异。金标方法可在室温放置１年以上。结论：金标免疫层析法测定前列腺抗原，是一种快速、简便、灵敏的筛选前列腺癌患者的诊断方法。     

胶体金免疫层析法在检测粪便血红蛋白中的应用

胶体金免疫层析技术是把免疫层析技术与胶体金标记技术结合而建立的一种新的免疫学方法，具有灵敏度高，特异性强，简便、快速等特点，有广阔的应用前景。本文就胶体金免疫层析技术的基本原理及其在检测粪便血红蛋白中的应用进行综述。     

检测流行性出血热病毒抗体的滴金免疫测定法的建立及应用

应用自行制备的直径１５ｎｍ的胶体金标记ＳＰＡ，建立了检测血清流行性出血热病毒抗体的滴金免疫测定法。与同步建立的ＥＬＩＳＡ法对比检测临床标本，结果有良好的一致性，两法符合率为９６．４％。本法中抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应，数分种内即可用肉眼观察结果，操作简单，试剂稳定、安全。     

胶体金—葡萄球菌A蛋白的制备与质量鉴定

胶体金－葡萄球菌Ａ蛋白的制备与质量鉴定徐霞（广州医学院检验系，广州５１０１８２）周文达（上海第二医科大学医用试剂实验室，上海２０００２３）作者简介：徐霞，女，３５岁，讲师，主要从事免疫学检验教学及研究工作；周文达，男，４２岁，副研究员，主要从事免疫学...     

Dipstick快速免疫诊断反应模式的实验研究

对Dipstick快速免疫诊断技术的免疫层析条和免疫胶体金的制备方法。操作步骤及条件等进行了实验室探讨。该技术具有简便,快速的特点,特别适合于现场检测。     

用自制单克隆抗体建立检测NGAL 的胶体金方法

目的:通过免疫、融合、纯化获得了抗中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的特异性单克隆抗体,并建立了胶体金试纸条的检测。方法:本研究筛选得到5株抗NGAL的单克隆抗体,通过配对测试,1B4和2C6能用于双抗夹心胶体金试纸条的制备。以重组hr NGAL为检测对象,对本试纸条的灵敏度、重复性、稳定性进行了全面评价。结果:本试纸条的灵敏度为5 ng/ml,重复性和稳定性良好,对临床样本的检测与临床结果一致。结论:本研究建立的NGAL免疫胶体金检测方法,灵敏度高,检测时间短,成本低,为普及临床检测早期肾损伤具有重要意义。     

霍乱毒素B亚单位结合胶体金的逆行轴浆转运复合免疫细胞化学的应用——一种新的非荧光双标法

以CB-胶体金(Cholera toxin subunit B-colloidal gold)为逆行追踪剂(CB-胶体金,中国协和医科大学神经生物学室制备),观察将其肌肉注射后,大鼠运动神经元的逆行轴浆转运标记及复合免疫细胞化学(ICC.immunocytochemistry)应用的可行性.结果为:(1)运动神经元末梢能摄取CB-胶体金,并经轴浆转运到胞体,经银加强后于光镜下可见清晰标记的神经元胞体和近端树突;(2)转运后的胶体金,可长期稳定地标记运动神经元长达30天;(3)经银加强复合免疫细胞化学的双标记运动神经元,由于两种标记反差大极易辨认.实验结果显示了这一新的非荧光双标记技术的优越性.