异甘草素诱导人胶质瘤细胞SHG44自噬及凋亡的实验研究

目的研究异甘草素(ISL)对人胶质瘤细胞SHG44增殖、自噬、凋亡及相关分子信号的影响。方法应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测ISL在不同时段、不同浓度下对人胶质瘤细胞SHG44的增殖抑制情况。用流式细胞术Annexin V-IP标记检测ISL(0,20,40,60,80μmol/L)作用于SHG44细胞48 h后细胞凋亡的情况,透射电镜下观测ISL对SHG44细胞内部超微结构的改变,应用免疫荧光染色法观测细胞内部及其周边自噬及凋亡相关蛋白的分布,Western blot检测ISL对SHG44细胞中Caspase-3,Bcl-2以及LC3B等蛋白表达的影响。结果在ISL作用下,SHG44细胞的增殖过程呈现时间及剂量依赖性抑制,ISL(80μmol/L)组在作用72 h后对SHG44细胞的抑制率超过了半数;流式细胞术检测ISL作用SHG44细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(1.54±0.85)%,(6.72±2.81)%,(11.82±3.21)%,(16.61±3.79)%,(26.15±3.82)%;透射电镜下可见SHG44细胞内部出现自噬小泡及自噬溶酶体;在荧光显微镜下可见细胞内出现自噬及凋亡相关蛋白的免疫荧光颗粒;Western blot显示ISL作用于SHG44细胞48 h后,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值以及Caspase-3的表达呈上升趋势,而Bcl-2表达呈下降趋势。结论 ISL能有效抑制人胶质瘤细胞SHG44的增殖,诱导SHG44细胞发生自噬和凋亡,并且抑制了抗凋亡分子Bcl-2的表达,增加了凋亡相关分子Caspase-3以及自噬相关分子LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值。     

异甘草素抑制胰腺癌SW1990细胞增殖及对survivin表达的影响

目的:研究异甘草素对人胰腺癌SW1990细胞增殖及细胞内survivin表达的影响?方法:体外培养SW1990细胞,给予不同浓度的异甘草素处理,MTT法检测异甘草素对SW1990细胞增殖的影响,实时定量PCR技术检测肿瘤细胞survivin基因mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测survivin蛋白的表达?结果:在一定浓度范围内,异甘草素能显著抑制人胰腺癌SW1990细胞的增殖,并呈时间与剂量依赖性,且异甘草素能显著抑制人胰腺癌SW1990细胞内survivin基因mRNA及蛋白的表达?结论:异甘草素对人胰腺癌SW1990细胞增殖有明显的抑制作用,且可能与下调survivin基因mRNA及蛋白的表达有关?     

异甘草素诱导人宫颈癌细胞增殖的影响及作用机制的研究

目的 研究异甘草素(ISL)抑制宫颈癌Hela细胞增殖作用及促进细胞凋亡的作用机制.方法 采用 0.025、0.050、0.100、0.200、0.300、0.400 mg/mL浓度ISL处理HeLa细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色 法检测HeLa细胞增殖;采用流式细胞仪检测HeLa细胞凋亡情况;应用罗丹明123染色法检测HeLa细胞线粒体跨膜 电位的变化;采用RT-PCR检测6种不同浓度ISL对Bcl-2、P53、P21、E6 mRNA基因表达的影响.结果 (1)MTT 检测结果显示:随着ISL浓度增加,对不同时间段HeLa细胞的抑制作用明显增加(P<0.05);(2)流式细胞仪 检测:相比于空白对照组,随着ISL浓度逐渐增加,Hela细胞凋亡率明显升高(P<0.01),且凋亡率呈剂量依赖性;(3)罗丹明123荧光染色检测结果:随着ISL浓度逐渐增加,细胞线粒体膜电位下降(P<0.01);(4)RT-PCR 结果显示:随着ISL浓度逐渐增加,E6、Bcl-2 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而P53、p21 mRNA表达水平越 升高(P<0.05).结论 ISL通过下调E6、Bcl-2的表达和上调P21、P53基因的表达来抑制宫颈癌细胞的增殖.     

HPLC法测定甘草中甘草素、异甘草素、甘草苷的含量

《中华人民共和国药典》2 0 0 0年版一部收载有甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草 G.in-flata Bat.、光果甘草 G. glabra L .3个种。为了保证临床疗效 ,本实验对甘草中甘草素、异甘草素、甘草苷的含量进行了比较。1　仪器与材料Waters高效液相色谱仪 ,Lambdal2紫外可见分光光度计 ( PE) ,Metter AE1 63电子分析天平。乙腈、二水醋酸、甲醇均为分析纯 ,水为重蒸水。甘草购自浙江中医学院实验药厂 ,胀果甘草和光果苷草均购自浙江省金华市医药站药材公司。甘草素、异甘草素、甘草苷 (自制 ,均经光谱学鉴定 ,采用面积归一化法…     

异甘草素抗肿瘤作用机制中相关信号通路的研究进展

异甘草素是从甘草根的水解产物中分解出的一种黄酮类成分,具有多种潜在的药用价值,相关研究发现异甘草素在肝癌、胃癌、黑色素瘤、前列腺癌、口腔鳞状上皮癌、宫颈癌等癌症中具有明显的生长抑制作用,这与异甘草素抗肿瘤相关的信号通路的相互作用有密切关系,而了解这些信号通路可进一步探查异甘草素抗肿瘤细胞的作用机制,为其早日运用于临床发挥其抗肿瘤作用奠定一定的理论基础.     

异甘草素诱导人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及自噬的研究

目的：观察异甘草素（ISL）对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察ISL对SKOV3细胞生长的抑制作用;吖啶橙／溴化乙锭双荧光染色后观察细胞形态变化;流式细胞术AnnexinⅤ‐FITC／PI双染检测ISL对细胞凋亡的影响;Westernblot检测凋亡相关蛋白Bcl‐2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果ISL能够抑制SKOV3细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性;荧光染色后可见细胞核变圆,碎裂,染色质浓缩;流式细胞仪检测ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后,凋亡率明显高于ISL0μg／mL组,差异具有统计学意义（P＜0．05）;Westernblot结果显示ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后Bcl‐2蛋白的表达下调,Bax、Beclin1、LC3蛋白的表达上调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论ISL对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗体外肿瘤机制可能与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

芹菜素对人肺鳞癌细胞NCI-H520增殖、转移、凋亡及自噬的影响

目的 研究芹菜素对人肺鳞癌细胞NCI-H520增殖、转移、凋亡及自噬的影响。方法 体外培养人肺鳞癌细胞NCI-H520,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素(2.5、5、10、20μmol/L)或顺铂(2.5、5、10、20μmol/L)对细胞活力的影响;采用细胞增殖示踪荧光探针(CFDA SE)检测芹菜素或顺铂对细胞分裂能力的影响;采用划痕实验和Transwell实验检测芹菜素对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Annexin V/PI双染法、Hoechst 33258核染色法检测芹菜素对细胞凋亡的影响;透射电镜观察细胞内自噬嚢泡的产生情况;吖啶橙(AO)染色观察细胞内酸性细胞器的变化;Western blot检测微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和p62蛋白表达情况。结果 与对照组相比,CCK-8法和CFDA SE结果显示芹菜素或顺铂使NCI-H520细胞的增殖水平下降(P<0.05);划痕实验和Transwell实验表明芹菜素使细胞的迁移和侵袭水平下降(P<0.01);Annexin V/PI双染结果显示芹菜素可使细胞凋亡率增加(P<0.05);Hoechst...     

四逆散不同配伍对甘草素和异甘草素煎出量的影响

目的研究四逆散不同药味组合与甘草素和异甘草素煎出量之间的关系。方法采用RP-HPLC法测定四逆散不同配伍中甘草素和异甘草素的煎出量,并对结果进行统计分析。结果全方组甘草素和异甘草素的煎出量较高,而甘柴组中两者的煎出量较低(P(0.05)。结论四逆散不同药味配伍的甘草素和异甘草素溶出具有显著性差异。     

芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和凋亡诱导的作用

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法体外常规培养NCI-H1299细胞,芹菜素作用终浓度分别为10、20、40、80μmol/L。MTT法测定芹菜素对细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测芹菜素对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果芹菜素能够抑制NCI-H1299细胞的增殖,并随药物浓度的增加、作用时间的延长,作用更明显;Hoechst 33258染色结果显示,芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和凋亡小体产生等典型的细胞凋亡特征;不同浓度的芹菜素作用24 h,细胞凋亡率逐渐增加,呈一定浓度依赖性;Western blot结果显示,芹菜素处理组细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H1299细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与调控Bax和Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax比值下降有关。     

异甘草素脂质体对人前列腺癌细胞体外增殖的抑制作用

要目的要观察异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)脂质体对人前列腺癌细胞体外增殖的抑制作用。方法要采用MTT法测定细胞增殖,计算细胞抑制率。结果要ISL脂质体(5～80μmol/L)浓度依赖性地抑制前列腺癌细胞增殖,并呈时间依赖性,于72h时达高峰,其抑制率为85.26%I;C50为38.46μ     

益康唑诱导HL-60白血病细胞内质网应激反应性细胞凋亡

目的研究唑类抗真菌药物益康唑（Ec）的抗白血病作用及其机制。方法将12μmol／L Ec、0．1μmol／L倍半萜烯酯（Tg）和0．2μg／ml依霉素（Tu）作用于体外培养的人急性髓细胞性白血病细胞HL-60，利用细胞核荧光染色进行形态学观察．Western blot法检测分子伴侣蛋白（GRP78）和胱天蛋白酶（Caspase）的表达。结果HL-60细胞经Ec，Tg和Tu处理后．细胞呈典型的凋亡形态，凋亡率分别为94％、63％和85％。分子伴侣蛋白GRP78的表达明显增加．位于内质网的Caspase12被活化。结论Ec可诱导人白血病HL-60细胞内质网应激反应性细胞凋亡，凋亡的发生与蛋白质合成抑制．Caspase12的活化有关。     

Endoplasmic Reticulum Stress-mediated Aldosterone-induced Apoptosis in Vascular Endothelial Cells

The aim of this study was to examine the effects of endoplasmic reticulum （ER） stress on aldosterone （Aldo）-induced apoptosis of endothelial cells. Glucose-regulated protein 78 （GRP78） and C/EBP homologous protein （CHOP, a hallmark of ER-associated apoptosis） were used to evaluate ER stress. Western blotting and real-time PCR were used to analyze indicators of ER molecule. Apoptosis was detected by annexin V/propidium iodide staining and flow cytometry. Human umbilical vein endo- thelial cells （HUVECs） were stimulated with different concentrations of Aldo for different durations. Aldo promoted apoptosis of HUVECs and induced ER stress, as evidenced by increased expression of GRP78 and CHOP. siRNA knockdown of CHOP attenuated Aldo-mediated apoptosis. These results in- dicate that ER stress may be involved in Aldo-induced apoptosis of HUVECs.     

异丙酚对人脐静脉内皮细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响

目的 :观察异丙酚 (Propofol)及肿瘤坏死因子 α(TNF α)对培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡相关基因Bcl 2及Bax表达的影响 ,探讨异丙酚抑制凋亡的机理。方法 :将培养的人脐静脉内皮细胞 3～ 4代于融合状态 ,随机分为 7组 :对照组 (P0 ) ,2 5 μmol/L异丙酚组 (P2 5) ,TNF α组 (P0 +TNF α) ,12 .5 μmol/L异丙酚和TNF α组 (P12 .5+TNF α) ,2 5 μmol/L异丙酚和TNF α组 (P2 5+TNF α) ,5 0 μmol/L异丙酚和TNF α组 (P50 +TNF α) ,10 0 μmol/L异丙酚和TNF α组 (P10 0 +TNF α)。各组加入相应药物培养 2 4h后收获细胞 ,采用免疫细胞化学染色方法测定Bcl 2及Bax蛋白表达。结果 :与对照组 (P0 )相比 ,异丙酚 2 5 μmol/L组 (P2 5)Bcl 2及Bax蛋白表达无明显变化 (P >0 .0 5 ) ;TNF α(P0 +TNF α)组Bcl 2蛋白表达降低 ,Bax蛋白表达升高 (P <0 .0 0 1) ;而不同浓度的异丙酚预处理后再加入肿瘤坏死因子的各组 (P12 .5+TNF α、P2 5+TNF α、P50 +TNF α、P10 0 +TNF α)Bcl 2蛋白表达增加 ,Bax蛋白表达降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :临床相关浓度的异丙酚可通过调节Bcl 2及Bax蛋白表达抑制TNF α诱导的内皮细胞凋亡     

鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤中癌细胞增生凋亡及其相关基因的表达

目的：研究鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２裸鼠移植瘤中癌细胞增生、凋亡及其与肿瘤生长速度的关系,探讨移植瘤中肿瘤细胞凋亡的机理。方法：将鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２分别接种于裸鼠皮下,并连续在体内传９代。对每一代肿瘤组织进行ＨＥ染色,ＴＵＮＥＬ法（原位细胞死亡末端标记法）检测原位细胞凋亡及免疫组化法检测ＰＣＮＡ、ｂｃｌ２、ｂａｘ和ｐ５３的表达。结果：ＣＮＥ２移植瘤生长速度快于ＣＮＥ１移植瘤;ＣＮＥ２移植瘤内肿瘤细胞分裂指数和细胞增生指数明显高于ＣＮＥ１移植瘤,而细胞凋亡却相对较少;移植瘤组织中的凋亡主要表现为“皱缩性坏死”和“凋亡小体”的形成;所有移植瘤组织中都有ｐ５３蛋白积聚和ｂａｘ过表达,但却未见ｂｃｌ２的表达。结论：ＣＮＥ１和ＣＮＥ２细胞株移植于裸鼠皮下后,生长速度的差异是由于肿瘤细胞增生凋亡比例不同所致;裸鼠移植瘤组织中瘤细胞的死亡主要表现为凋亡,凋亡的途径可能是不依赖于野生型ｐ５３,而由ｂａｘ所介导的     

强精煎对小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因表达影响的研究

目的:观察强精煎对实验小鼠睾丸Fas、Fasl、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:将80只健康雄性昆明种小鼠分为正常组、模型组、强精煎组、黄精赞育胶囊组,以环磷酰胺注射液40mg/kg腹腔注射制造小鼠生精功能障碍模型,以HE染色观察小鼠睾丸病理形态,采用Johnson评分评价精子发生和发生障碍程度,用免疫组织化学SABC法检测Fas、Fasl、Bcl-2和Bax蛋白在小鼠睾丸实质组织中的表达率。结果:模型组小鼠睾丸组织可见明显的病理损伤,强精煎组则生精功能良好,黄精赞育胶囊组稍差。与正常组比较,模型组Johnson评分偏低,且Fas和Fasl蛋白表达率偏高(P<0.01),强精煎组和黄精赞育胶囊组与正常组各方面差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,正常组、强精煎组和黄精赞育胶囊组睾丸Johnson评分偏高,Fas、Fasl和Bax蛋白表达率显著降低(P<0.01),Bcl-2表达率显著升高(P<0.01),细胞内Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.01)。结论:强精煎可以抑制Bax、Fas和Fasl,并促进Bcl-2蛋白在受损伤小鼠睾丸实质组织中的表达。     

全反式维甲酸通过内质网应激诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V受阻的人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的初步探讨全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid,ATRA）诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V（N—acetylglucosaminyltransferase V,GnT—V）表达受阻的人肝癌SMMC-7721细胞（AsGnT—V／SMMC-7721）发生凋亡与细胞中内质网应激的关系。方法利用RT-PCR检测ATRA处理前后AsGnT-V／SMMC-7721细胞中内质网应激关键分子GRP78（glucose regulated protein 78）、XBP1（X box binding protein 1）等的变化。并用Western blot检测ATRA处理前后AsGnT—V／SMMC-7721细胞中内质网应激相关凋亡途径中的重要分子CHOP（C／EBP homologus protein）、caspase-9、caspase-12以及caspase-3的变化。结果GRP78和XBP1的变化表明经ATRA处理后AsGnT-V／SMMC-7721细胞的内质网应激加剧了,而与内质网应激相关的凋亡分子CHOP、caspase-9、caspase-12以及caspase-3都发生了激活。结论ATRA诱导AsGnT—V／SMMC-7721细胞发生的凋亡与内质网应激有关。     

Dexamethasone protects airway epithelial cell line NCI-H292 against lipopolysaccharide induced endoplasmic reticulum stress and apoptosis

Background  Endoplasmic reticulum (ER) stress and ER stress-mediated apoptosis were reported to be involved in the pathogenesis of several diseases. In a recent study, it was reported that the ER stress pathway was activated in the lungs of lipopolysaccharide (LPS)-treated mice. It was also found that the C/EBP homologous protein (CHOP), an apoptosis-related molecule, played a key role in LPS-induced lung damage. The aim of this study was to verify whether LPS could activate the ER stress response in airway epithelial cells and which molecule was involved in the pathway. This study was also aimed at finding new reagents to protect the airway epithelial cells during LPS injury.

Methods  ER stress markers were observed in LPS-incubated NCI-H292 cells. SiRNA-MUC5AC was transfected into NCI-H292 cells. The effects of dexamethasone and erythromycin were observed in LPS-induced NCI-H292 cells.

Results  LPS incubation increased the expression of ER stress markers at the protein and mRNA levels. The knockout of MUC5AC in cells attenuated the increase in ER stress markers after incubation with LPS. Dexamethasone and erythromycin decreased caspase-3 activity in LPS-induced NCI-H292 cells.

Conclusions  LPS may activate ER stress through the overexpression of MUC5AC. Dexamethasone may protect human airway epithelial cells against ER stress-related apoptosis by attenuating the overload of MUC5AC.

     

Bcl-2、Bax蛋白表达与外阴营养不良细胞凋亡的相关性研究

目的探讨慢性外阴营养不良中细胞凋亡及相关基因的表达情况。方法采用原位末端标记及免疫组织化学S-P法检测90例慢性外阴营养不良和12例外阴营养不良恶变的石蜡包埋组织中的细胞凋亡、Bcl-2(Bcelllymphoma/leukemia-2,Bcl-2)和Bax(Bcl-2associated X protein,Bax)的表达情况。另取石蜡包埋的正常外阴皮肤10例作为对照。结果正常外阴皮肤、外阴营养不良及营养不良恶变中存在细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达,凋亡指数及Bcl-2和Bax的表达在营养不良组明显高于营养不良恶变组（P<0.01）,在正常外阴皮肤及外阴营养不良中凋亡细胞的分布区域与表达Bcl-2和Bax蛋白的细胞分布区域一致,Bcl-2与Bax表达呈正相关(r=0.7706,P<0.05),但在恶变的部位三者间无相关性。结论外阴营养不良的发生发展和恶变与细胞凋亡有关,Bcl-2和Bax起一定作用。     

新藤黄酸通过内质网应激诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的机制。方法采用不同浓度的GNA作用细胞24h,对照组是相同浓度GNA加内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)共同作用HCT116细胞24h。采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)染色测定两组细胞增殖抑制率的差异,采用吖啶橙(acridine orange,AO)和溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色观察细胞的形态学变化,采用膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙碇(propidium iodide,PI)双重染色检测细胞凋亡率。结果内质网应激抑制剂4-PBA可以缓解GNA对HCT116细胞增殖的抑制作用;AO/EB染色后荧光显微镜观察发现GNA作用的细胞具有凋亡特征;流式细胞仪检测显示4-PBA可降低HCT116细胞的凋亡率。结论 GNA能抑制人结肠癌细胞HCT116增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的作用可能与内质网应激途径有关。     

Kupffer 细胞对实验性肝癌中细胞凋亡相关基因表达的影响

对单纯用二乙基亚硝胺 (DENA)及氯化钆 (GC)或酵母多糖 (ZM)分别阻断或激活 Kupffer细胞后 ,同时给以 DENA所引起的大鼠肝癌中的增殖细胞核抗原 (PCNA )、 bax、 p5 3蛋白的表达和肝癌细胞的凋亡运用免疫组织化学和 TU NEL 法进行了对比研究 ,以探讨 Kupffer细胞在大鼠实验性肝癌细胞凋亡中的作用。结果显示 :肝癌组织的增殖指数、凋亡指数在 C组、 A组、 B组分别呈增高或降低趋势 ;bax、 p5 3阳性率在 C组明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,同时 ,bax、p5 3蛋白的表达与凋亡指数存在正相关。结果提示 ,Kupffer细胞可能促进实验性肝癌细胞凋亡。