冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的LC-MS-MS定量分析研究

目的：建立定量测定冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的LC-MS-MS方法。方法：HPLC-ESI-MS-MS法,用90%甲醇为提取溶剂,采用多反应监测(MRM)模式测定。结果：腺苷的回归方程Y＝89.04X+506.85,r=0.999 7,虫草素的回归方程Y＝99.66X+1 251.34,r=0.998 8,线性范围均为5.0～1 000.0 μg·L-1；腺苷和虫草素的检出限(LOD)分别为0.44,0.31 μg·L^-1,加样回收率分别为98.12%,97.94%。结论：该法灵敏、选择性好、快速,可用于冬虫夏草及其代用品中腺苷和虫草素的定量测定和质量控制。     

新疆虫草与冬虫夏草中腺苷和虫草素的HPLC法测定比较

目的：建立测定虫草类药材腺苷和虫草素含量的HPLC方法,比较新疆虫草和不同地区冬虫夏草中腺苷和虫草素的含量差异。方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱：DikmaTM C18（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：甲醇-水（15：85）;柱温为30℃,流速：1.0ml/min;检测波长：260nm。结果：新疆虫草和冬虫夏草中均含有腺苷和虫草素,其中新疆虫草中腺苷含量为237.7μg/g,介于3个冬虫夏草样品（145.2～307.4μg/g）之间;虫草素含量为38.9μg/g,明显高于冬虫夏草（4.2～11.3μg/g）的3～10倍左右。结论：本方法具有简便、快捷、准确等特点,适用于虫草类药材中腺苷和虫草素含量的测定,本研究提示新疆虫草可作为冬虫夏草新资源。     

基于高通量测序的人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化转录组分析

目的:探索人工培殖冬虫夏草Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.外观品质形成的分子基础。方法:以重庆和康定人工培殖冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术进行转录组测序分析,基于差异倍数(FC)和错误发现率(FDR)筛选差异表达基因,具体筛选条件为|log2FC|>1、FDR<0.05。结果:共获得21942个转录本,利用DEGSeq筛选获得1575个差异表达基因,其中上调表达基因626个、下调表达基因949个;基因本体(GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析结果显示,这些差异表达基因主要集中于氨基酸代谢、折叠-分选-降解、糖代谢、转运和分解代谢、辅酶因子和微生物代谢等途径;筛选到66个颜色变化差异表达基因,包含46个氧化还原酶活性相关基因、12个过氧化物酶体相关基因、3个单加氧酶活性调节相关基因、3个黑化反应相关基因、2个活性氧代谢相关基因,其中tyr1、TYR基因可能是冬虫夏草僵虫颜色变化的关键功能基因。结论:利用高通量测序技术和生物信息分析获得了人工培殖冬虫夏草僵虫转录组信息特征,为阐明人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化的调控机制研究提供参考。     

HPLC法测定北冬虫夏草和常见食用菌中腺苷和虫草素

目的 建立一种HPLC法快速测定北冬虫夏草和几种常见食用菌中腺苷和虫草素的方法.方法Welch Material XB-C18色谱柱(250mm×4.6mn,5μm),以水-甲醇(85∶15)为流动相,体积流量1.0mL/min,检测波长258 nm,柱温40℃.结果腺苷在0.023 2～0.464 0μg、虫草素在0.030 0～0.600 0μg与峰面积线性关系良好,平均加样回收率分别为98.97％、99.15％,RSD分别为1.41％、1.01％.结论腺苷普遍存在于各种食用菌子实体中,而虫草素是虫草属真菌子实体中的特有活性成分.本法简便快速,为全面评估北冬虫夏草中核苷类成分的质量,推进人工培育北冬虫夏草替代野生冬虫夏草提供检测方法.     

HPLC同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素和麦角甾醇

目的:建立同时测定冬虫夏草药材中腺苷、虫草素和麦角甾醇的方法。方法:Diamosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水梯度洗脱,体积流量1.0 mL.min-1,柱温30℃,进样量10μL,检测波长260 nm。结果:腺苷、虫草素和麦角甾醇分别在0.032 2～0.805,0.015 4～0.385,0.084 3～2.107 5μg线性关系良好,回归方程分别为Y=2 573X+0.737 8;Y=2 631X+0.624 4;Y=2 315X+0.482 9,平均加样回收率分别为98.94%(RSD 1.16%),99.73%(RSD 2.19%),99.55%(RSD 2.02%)。结论:该方法准确性高,重复性好,可作为冬虫夏草药材的质量控制方法。     

基于转录组测序的银杏类黄酮生物合成关键基因表达分析

目的对银杏进行转录组测序,分析银杏生长发育不同时期类黄酮生物合成关键基因的表达。方法以银杏幼年树和成年树不同时期叶片作为供试材料,利用Illumina HiSeq 2000进行转录组测序,对Unigene进行功能注释,分析银杏类黄酮生物合成关键基因的表达特征。结果转录组测序共获得43 073条Unigene,其中35 179条被注释,基因差异表达(DEG)筛选得到5 117个基因。通过对类黄酮合成相关KEGG途径进行分析,筛选出50条候选基因。分析50条候选基因的表达规律,发现类黄酮合成关键基因均在银杏幼叶中高表达,但在成年树与幼年树同时期叶片之间表达差异不显著。分析与类黄酮合成关系密切的13个基因发现,其中肉桂酸4-羟化酶(C4H)、查耳酮合成酶(CHS)、花青素合成酶(ANS)、花青素还原酶(ANR)和类黄酮O-甲基转移酶(FOMT)基因的表达量较高,类黄酮3′-羟化酶(F3′H)、类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′5′H)和黄酮醇合成酶(FLS)基因的表达量则相对较低。结论通过转录组高通量测序,筛选分析了银杏类黄酮生物合成的关键基因及其表达特征,为提高银杏类黄酮产量提供了分子生药学理论基础。     

基于转录组测序的山茱萸次生代谢生物合成相关基因的挖掘

为探讨山茱萸中环烯醚萜等次生代谢产物合成的遗传基础,采用新一代高通量测序技术对其果实进行转录组测序,共获得得96 032条unigenes,平均长度590.53 bp;其中共有35 478条unigene能被NR,Swissprot,COG,GO,KOG,Pfam和KEGG等7个公共数据库注释。通过对注释所得的unigene进行KEGG代谢通路的分析发现,共有84个unigene与环烯醚萜类成分的生物合成有关;487条unigene参与山茱萸其他次生代谢相关物质代谢调控。研究发现,共有153条unigene参与山茱萸次生代谢产物的氧化/羟基化;72条unigene参与次生代谢产物的糖基化。该研究首次对山茱萸转录组进行了分析,并获得了山茱萸环烯醚萜类等次生代谢生物合成相关的候选基因,为山茱萸的分子生物学研究提供了丰富的数据资源,也为后续探讨候选基因的功能奠定了基础。     

冬虫夏草及虫草菌丝的药理研究现状

冬虫夏草及虫草菌丝的药理研究现状王志欣，王兴民，王同忠，王群冬虫夏革（简称虫草）系麦角科虫草真菌，寄生在蝙蝠蛾科昆虫上的子座及幼虫尸体的复合体，含１０余种氨基酸及微量元素，是一种具有多种药理作用的强壮滋补药。但因受严格的寄生性和特殊的生长地理环境限制...     

冬虫夏草及虫草菌丝体药理研究近况

<正> 冬虫夏草是名贵紧缺药材,由于冬虫夏草(简称虫草)受严格的寄生性和特殊生长地理环境影响,故在来源上受到限制。目前已成功培养出虫草菌丝体(简称虫草菌丝),并在药理方面做了大量研究。本文对虫草及虫草菌丝的药理研究作了综述。 1、细胞及体液免疫作用虫草及虫草菌丝制剂对小鼠免疫器官具有明显的作用,可使肝、脾增大,胸腺缩小,能促进肝枯否氏细胞吞噬功能增强及巨噬细胞增殖;并在激活小鼠腹腔巨噬细胞,增强吞噬功能的同时,可能使巨噬细胞内酸性磷酸酶活性也提高,两者呈正相关。通过采用抗Thyl—SPA花环试验法,检测了虫草和虫草菌丝两制剂对小鼠胸腺和脾脏T细胞的影响,发现虫草和     

冬虫夏草及人工虫草菌丝研究概况

本文就冬虫夏草及人工虫草菌丝的生物学特性、化学成份、药理、免疫作用及临床应用等方面比较全面地介绍了国内外研究概况,尤其突出关于免疫、抗肿瘤等方面研究的进展。     

冬虫夏草指标蛋白IP4的cDNA全长克隆及抗原决定簇预测研究

目的克隆获取冬虫夏草指标蛋白氰酸酶(IP4)的c DNA全长及对其抗原表位预测。方法结合课题组前期采用蛋白组学法筛选得到的冬虫夏草指标性蛋白IP4和冬虫夏草转录组数据,挖掘IP4 m RNA序列,并克隆IP4 c DNA全长,通过NCBI结构分析服务系统对IP4进行保守区和功能区分析,利用DNAMAN 6.0和DNAStar软件分别进行序列比对和抗原表位分析。结果从转录组数据中挖掘到IP4的2个可变剪接体,属于内含子保留的可变剪接。RT-PCR结果显示,IP4 c DNA全长465 bp,编码154 aa(氨基酸)。IP4蛋白的保守区和主要催化活性位点位于87～154 aa,该区域为氰酸酶家族保守核心区域和二聚体结合区域,DNAMAN 6.0分析结果表明1～39 aa和55～81 aa区具有较高种属特异性,DNAStar预测IP4蛋白的抗原表位区主要分布于25～90 aa。结论最终确定IP4的25～39 aa和55～81 aa为最佳抗原特异区,为后续规模化制备IP4蛋白特异抗原区及免疫法鉴定冬虫夏草奠定基础。     

康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比较研究

目的用RAPD方法对康定虫夏、人工虫草及虫草发酵菌丝体进行指纹图谱的研究,为不同虫草的品质和药效差异提供分子依据。方法从65个随机引物中筛选出7个引物,以这7个引物进行PCR扩增,电泳得到其指纹图谱。结果没有发现任何两个样本拥有完全相同的RAPD标记,康定冬虫夏草和人工虫草具有较高的遗传多态性,而与虫草发酵菌丝体相比差异较大。结论来自不同产地冬虫夏草群体均表现出其独特的RAPD标记,其差异可能系虫体的不同所致。随机扩增的DNA片段的差异是否预示其药效的不同,有待进一步研究。     

冬虫夏草人工培殖过程中寄主昆虫粉拟青霉病原菌的分子生物学研究

虫草棒束孢Isaria farinosa是冬虫夏草人工培殖过程中寄主昆虫粉拟青霉病的病原菌。该文通过统计分析国内外相关文献和NCBI网站上登录的相关序列和基因信息,分析虫草棒束孢的分子生物学研究进展。结果发现不同国家发表的文献不同,登录的相关序列或基因的种类和数量存在差异。我国发表的文献和登录的序列或基因总量都最多,美国登录的功能基因总量最多。相关文献主要涉及粉拟青霉病在生物防治方面的应用。而与分子生物学相关的研究主要集中在该菌的系统分类学上;近年来开始了与虫草棒束孢作为生防菌相关的蛋白酶基因和几丁质酶基因等的研究。随着冬虫夏草在健康领域影响力的增强,以及虫草棒束孢全基因组序列的测序完成和药理活性的不断揭示,对虫草棒束孢分子水平的研究也必将越来越广泛和深入。     

冬虫夏草菌的动态产孢量及抗异能力

目的：研究冬虫夏草菌的生长速度和动态产孢量，揭示产孢规律和条件，探索人工繁殖的可能及评估其在对虫害生物防治中的应用潜力；测定它的抗异活性和抗菌谱，为对其活性产物的性质研究打下基础。方法：测量虫草菌株在真菌培养基生长时的菌落直径变化，用孢子计数法跟踪测定普通培养基和水琼脂上单菌落的动态产孢量并与相近虫草菌进行对比分析，用琼脂块法测定培养菌丝对致敏菌的抗异活性，测量比较抗菌圈大小和总结抗菌谱。结果：在PDA等3种常规真菌培养基上，CY－8202的菌落扩展与进时间呈线性关系。动态产孢量的测定表明，该菌株在适宜培养基上的单菌落产孢量可达10^7以上，并随着时间的延长而增长，大约200h后增长趋于平缓。对22个致敏菌株的抗菌实验显示，CY－8202培养菌丝对革兰氏阳性的枯草杆菌、四联球菌、白色葡萄球菌以及革兰氏阴性的普通变形杆菌、伤寒杆菌、产气杆菌和沙门氏菌等7株细菌有较强的抑制能力，对3株霉菌和1株放线菌有轻微抑制，对酵母菌未见抑制影响。结论：虫草菌丝的生长和产孢力是有效侵染寄主的两个重要因素，但菌丝生长速度不宜作为生长力强弱的唯一判断指标，菌丝的穿透力更加重要；具有超量产孢能力是虫草菌株强侵染力的一个重要标志。抗异活性表明冬虫夏草菌具有分泌比虫草菌素更广谱的抗生素的能力。     

虫草菌丝中3种活性成分对血管新生与内皮细胞功能的影响

目的探讨虫草菌丝中的3种活性成分(虫草素、腺苷、麦角甾醇)对血管新生和肝内皮细胞功能的影响。方法采用鸡胚绒毛尿囊膜实验和转基因斑马鱼实验分别观察虫草素、腺苷、麦角甾醇对新生血管面积、功能血管数量及碱性磷酸酶变化的影响;MTT法测定3个化合物对人肝癌SK-HEP-1细胞的细胞毒活性;采用血管内皮生长因子(VEGF)诱导SK-HEP-1细胞增殖为模型,以索拉非尼为阳性对照药,MTT法测定3个化合物对细胞增殖的影响,Transwell法观察细胞迁移,Matrigel管腔形成实验观察细胞管腔形成情况,荧光探针法检测胞内一氧化氮(NO)的量和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果虫草菌丝中腺苷、麦角甾醇能够显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生、减少转基因斑马鱼功能血管数量,而虫草素能够促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生;与对照组相比,VEGF可诱导SK-HEP-1细胞增殖,促进细胞迁移和管腔形成,并可使其胞内NO水平和NOS活性显著升高;与模型组相比,虫草素、腺苷、麦角甾醇呈剂量依赖性地抑制SK-HEP-1细胞增殖,腺苷、麦角甾醇能抑制SK-HEP-1细胞迁移,3者均可不同程度地抑制SK-HEP-1细胞管腔形成,且剂量依赖性地降低胞内NO水平和NOS活性。结论虫草菌丝中的虫草素、腺苷、麦角甾醇对SK-HEP-1细胞增殖、迁移、管腔形成有不同程度的抑制作用,其中腺苷的作用尤为明显;其机制与抑制细胞内NO水平和NOS活性有关。     

中药冬虫夏草和所含多种冬虫夏草菌拉丁名混用的历史和现状

中药冬虫夏草是冬虫夏草菌和蝠蛾科幼虫尸体的物种混合体。但冬虫夏草和冬虫夏草菌使用同一拉丁名Ophiocordyceps sinensis(≡Cordyceps sinensis),导致特指概念不清和争议,甚至影响政府的政策法规的制订和大众的市场消费心理。该文综述了冬虫夏草(虫菌复合体)和冬虫夏草菌拉丁名混用的历史考证和现状,以及文献中有关天然冬虫夏草更名的建议。有学者建议O.sinensis用于多种冬虫夏草菌,而中药冬虫夏草改用Chinese cordyceps,不设拉丁名。另有学者建议中药冬虫夏草更名为OphiocordycepsHepialidae。这些建议有待学界达成共识。该文也分析2011年世界菌物学会IMA颁布《阿姆斯特丹宣言》以来学界在争议中实施"One Fungus=One Name",进一步加剧了拉丁名特指概念的混乱。IMA为解决争议设立了争议解决机制。解决这一拉丁名的混用和争议需要菌物、动物和中药分类学家通力合作,共同努力。     

冬虫夏草PCR快速检测试剂盒的研制与效果评价

冬虫夏草为我国传统名贵中药材。资源短缺、价格昂贵和巨大的市场需求导致市售冬虫夏草掺伪掺假现象严重,亟需建立快速有效的鉴别方法。该研究基于实验前期已建立的冬虫夏草快速鉴定SS-PCR方法,按照体外诊断试剂评价标准开发试剂盒,并对试剂盒的特异性、检测限、重复性及保存期4项性能进行了评价。结果显示冬虫夏草质量占混合物质量的1/200(质量分数0.5%以上)以上时可被成功检测。试剂盒对冬虫夏草及其伪品的检测结果显示,仅有冬虫夏草可被成功扩增,并在紫外下显示绿色荧光。该试剂盒37℃温育7 d仍有效,说明4℃保存其在1年内稳定有效。同一批次试剂盒在不同条件下,不同批次试剂盒在相同条件下,其检测结果均一致且准确,表明试剂盒具有良好的批内及批间重复性。将该试剂盒用于市售冬虫夏草及其混伪品的检测,操作简单快速,结果准确可靠,为下一步中药快检试剂盒的商品化奠定了基础。     

冬虫夏草及其混淆品HPLC指纹图谱研究及共有成分鉴定

目的建立冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,为冬虫夏草的真伪鉴别及质量评价提供依据。方法采用HPLC法建立冬虫夏草及其主要混淆品(凉山虫草、古尼虫草、蛹虫草)水溶性成分的指纹图谱,标记了16个共有峰,并通过超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)技术对指纹图谱中16个共有峰进行鉴定。结果建立了冬虫夏草水溶性成分的HPLC指纹图谱方法,该方法能区分冬虫夏草及其混淆品,鉴定出其中12个共有峰,分别为胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤+鸟嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷和虫草素。结论该方法简便易行,为冬虫夏草的真伪鉴别提供了科学依据。     

冬虫夏草中砷及其安全性评价研究进展

传统名贵中药冬虫夏草Cordyceps sinensis中砷超标及其安全性问题近年来备受关注,针对冬虫夏草中砷的研究逐渐增加并不断深入.在文献查阅的基础上,从冬虫夏草砷及砷形态的分析方法,砷的含量、分布、存在形态,安全性评价,以及野生和人工仿生繁育冬虫夏草中砷含量等方面进行归纳总结,并对冬虫夏草中砷的认知及研究进行展望...     

基于GC-MS代谢组学技术比较冬虫夏草与蝉花的质量

目的:基于气相色谱-质谱(GC-MS)代谢组学分析方法探究冬虫夏草和蝉花的代谢物组成特征,为冬虫夏草的品质评价提供理论依据。方法:采用GC-MS测定冬虫夏草和蝉花的50%甲醇提取物,结合NIST和GMD数据库进行代谢物结构鉴定,分别采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)考察样品分类情况、筛选差异代谢物。结果:从冬虫夏草和蝉花中共鉴定得到64种代谢物,主要包括氨基酸及其衍生物类、糖醇类、有机酸类和脂肪酸类等。PCA结果显示冬虫夏草与蝉花样品根据代谢物特征完全区分,表明二者化学组成差异较大;采用PLS-DA筛选获得导致2种样品区分的差异代谢物共21种,其中冬虫夏草含有更多的D-甘露醇、海藻糖、脯氨酸、焦谷氨酸等,而蝉花中肌醇和γ-氨基丁酸、鸟氨酸、苏氨酸等代谢物的含量更高。结论:冬虫夏草和蝉花的化学成分差异较大,蝉花不适合替代冬虫夏草使用。