寻常型银屑病（湿热证）的血清蛋白组学表达研究

【目的】应用同位素相对标记与绝对定量技术（iTRAQ技术）对寻常型银屑病（湿热证）患者的血清蛋白进行定量分析,探求其与正常人的差异性表达蛋白质,从蛋白组学角度揭示湿热证的部分内涵。【方法】取寻常型银屑病（湿热证）患者（15例）及正常人（10例）血清,予纯化、去丰度等处理后,十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离,经iTRAQ特异性标记酶解后的肽段,采用串联质谱分析鉴定其差异蛋白。【结果】共鉴定出787个蛋白质组,具有生物信息学分析（gene ontology , GO）功能注释的蛋白质共有718个;与正常人比较发现了651个显著性差异蛋白（P<0.05）,其中有强显著性差异的蛋白418个（P<0.01）。【结论】寻常型银屑病（湿热证）患者血清中存在与正常人有差异性表达蛋白,但哪种蛋白在辨别寻常型银屑病“湿热证”中处于关键地位,以及湿热症状与蛋白之间的关系等,还有待进一步研究。     

基于iTRAQ标记技术研究慢性浅表性胃炎脾虚证的唾液差异表达蛋白

目的 运用iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG)不同中医证候患者唾液中的潜在特异性生物标志物,探索一种客观化、规范化的中医辨证方法 .方法采用iTRAQ定量蛋白质组学技术及后期生物信息学方法,筛选CSG脾虚证28例与CSG湿热证28例对比以及与正常对照组28例对比的唾液差异蛋白质分析.结果 CSG脾虚证对比CSG湿热证,Ratio≥1.5的共有128个蛋白,Ratio≤0.667的共有39个蛋白;CSG脾虚证对比正常对照组Ratio≥1.5的共有113个蛋白,Ratio≤0.667的共有72个蛋白.筛选出多个重要蛋白,如Keratin家族、ANX家族和apolipoprotein家族中的多种亚型以及γ-谷氨酸转移酶等,可能与CSG不同中医证候的发生、发展有密切的关系.结论 iTRAQ唾液蛋白质组技术筛选出了多个具有潜在价值的CSG中医证候无创诊断的重要蛋白,值得进一步深入研究.     

慢性胃炎脾虚湿热证患者的舌苔蛋白质组学初探

目的:比较慢性胃炎脾虚湿热证患者与正常志愿者舌苔蛋白质谱的差异,筛选慢性胃炎脾虚湿热证的特征性舌苔蛋白标志物,并建立特征性舌苔的诊断模型。方法:收集30例慢性胃炎脾虚湿热证患者(实验组)和30例正常志愿者(正常组)的舌苔,经表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检验并筛选舌苔蛋白标志物,经生物信息学分析建立预测模型。结果:在质荷比1 000～15 000范围内检测到189个差异蛋白峰。与正常组相比,实验组的差异蛋白质谱峰表达值较高(P<0.05);通过聚类分析,两组蛋白质谱峰值显示的聚类性质明显不同;利用主成分分析,两组舌苔样本的分布有明显差异,可有效分离;构建的慢性胃炎脾虚湿热证特征性舌苔诊断模型预测正确率为91.67%,灵敏度为100.00%,特异性为83.33%。结论:本研究所构建的特征性舌苔诊断模型能对慢性胃炎脾虚湿热证做出较为准确的判断,可为慢性胃炎脾虚湿热证的临床诊断提供一定的客观依据。     

强直性脊柱炎湿热痹阻证血清差异蛋白组学研究

目的?应用蛋白质组学双向电泳和质谱技术,开展强直性脊柱炎湿热痹阻证证候学研究。方法?对强直性脊柱炎湿热痹阻证、寒湿痹阻证、正常对照共3组各30例血清,分别进行双向凝胶电泳,软件分析获取湿热痹阻证组和其他2组的差异蛋白质点,二级质谱鉴定获得差异蛋白。应用Western blot验证差异蛋白。结果?获得7个湿热痹阻证的共同差异蛋白点,经质谱鉴定和SwissProt数据库检索,获得Fibulin-1、二肽基肽酶1、激肽原1、白细胞介素17F突变型、甘露糖结合蛋白C等5个强直性脊柱炎湿热痹阻证差异蛋白,涉及胞外基质蛋白、蛋白酶类、凝血因子、细胞因子、转运蛋白等。Western blot验证甘露糖结合蛋白C的表达结果与蛋白组学检测结果一致。结论?这些蛋白可能涉及强直性脊柱炎湿热痹阻证的发病和病理过程,为进一步研究湿热痹阻证实质提供了依据。      

应用iTRAQ技术对支原体肺炎患儿血清差异蛋白的定量分析

【摘要】 目的 应用同位素相对标记与绝对定量技术（iTRAQ）分析支原体肺炎患儿血清蛋白,筛选出差异蛋白并行其功能分析。方法 采用强阳离子交换色谱分析法对8种不同同位素标记的iTRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析支原体肺炎组（MPP组）和健康对照组血清蛋白并通过Mascot软件分析和GO分析表达差异的蛋白。 结果 与对照组相比,MPP组中共鉴定出有定量信息的蛋白质66个,包括52个上调蛋白和14个下调蛋白。生物信息学分析显示差异表达的蛋白主要参与急性期反应、急性炎症反应、氧气输送、空气运输、过氧化氢分解过程、细胞氧化解毒、凝血、及细胞解毒等过程,这些表达差异的蛋白中选择6个显著表达差异作为候选蛋白,分别是上调蛋白SAA、CRP、HBB、APOM和下调蛋白APOC3、GPX3。 结论 本研究发现这6种蛋白在小儿支原体肺炎过程中发挥重要作用,可能作为该病潜在的临床筛查生物标志物。     

基于湿热证的三仁汤研究进展

湿热证是中医临床常见证型,而湿热也是许多难治性疾病的重要病机,且其患病占比率逐年增加。三仁汤是开上、畅中、渗下的经典方剂,具有宣畅气机、清热利湿的功效,主要症状包括头痛恶寒,身重疼痛,面色淡黄,胸闷不饥等。现代临床将其广泛应用于呼吸、心血管、消化、泌尿等系统疾病,并取得了显著的效果。三仁汤能够明显改善湿热证患者的临床症状,提高生活质量,尤其对一些难治性疾病,可以延缓病情发展,延长生存期。目前基于湿热证的三仁汤作用机制主要包括抗炎、调节免疫功能,调节水通道蛋白表达,调节神经内分泌功能,调节胃肠激素水平和胃黏膜蛋白差异表达,改善糖脂代谢及能量代谢紊乱等。笔者对近年来基于湿热证的三仁汤在临床疗效和实验研究进行整合与梳理,阐述了三仁汤的理论基础、临床与机制研究,为扩展三仁汤的现代临床应用提供理论依据和参考。     

从湿热论治脑血管疾病

目的:探讨湿热证在脑血管疾病中的地位及治法特点.方法:从中医古文献入手,结合临床应用总结湿热证的病因病机和治疗特点.结果:湿热证是临床常见证之一,调畅气机,温散与泄热、辛开与苦降并用,分消走泄是治疗湿热证的关键.结论:中医药在脑血管疾病诊疗中具有一定的优势.     

Bax蛋白在肝胆湿热证患者胆囊壁的表达意义

目的:探讨肝胆湿热证的现代医学病理和分子机制。方法:用免疫组化SP法,检测诱导型Bax蛋白在56例被辨证为肝胆湿热证的慢性胆囊炎伴胆结石和胆囊腺肌瘤增生患者胆囊壁的表达。结果:肝胆湿热证的慢性胆囊炎伴胆结石和胆囊腺肌瘤增生患者胆囊壁HE染色均有不同程度的炎症。免疫组化发现有Bax蛋白的高表达,慢性胆囊炎伴腺肌瘤增生Bax蛋白的表达更高。结论:慢性胆囊炎、胆结石和胆囊腺肌瘤增生与肝胆湿热证病、证相符。慢性胆囊炎伴胆囊腺肌瘤增生肝胆湿热证患者Bax蛋白表达增高,是避免良性增生的细胞发生恶变的保护性机制。     

原发性肾病综合征湿热证与蛋白关系探讨

目的讨论肾病综合征患者血清中蛋白成分与湿热证的关系。方法对我院肾病综合征伴有湿热证患者的血液过滤液成分分析,与健康对照组进行对比,观察蛋白成分变化结果总血清蛋白质浓度,对照组为(1.25±0.02)μg/μl,湿热证组蛋白质浓度为(1.38±0.03)μg/μl。两组相比(t=-12.277,P=0.001)具有统计学意义(P<0.05)。结论载脂蛋白C-Ⅲ,α2-HS糖蛋白可以作为反映原发性肾病综合征湿热证的特异性蛋白,α1抗胰蛋白酶不能作为湿热证的特异性蛋白检测指标。     

基于iTRAQ技术探索刮痧干预腰椎间盘突出症的生物学基础

目的应用绝对定量同位素标记(iTRAQ)结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术分析刮痧干预后腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节的蛋白质变化,探究刮痧治疗作用的生物学基础。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和刮痧组,每组6只。刮痧组大鼠造模后第5天行刮痧干预,隔日1次,共刮9次。应用iTRAQ结合LC-MS/MS技术对大鼠背根神经节行蛋白质组学分析,采用UniProtKB/Swiss-Prot等数据库对差异蛋白行生物信息学分析。结果共鉴定出106个差异蛋白,其中41个蛋白表达上调,65个蛋白表达下调。分析获得富集度最高的5个典型信号通路和1个信号网络。结论刮痧可以通过减少氧化及炎症损伤、保护神经组织、抑制椎间盘退化等环节治疗腰椎间盘突出症。     

应用iTRAQ技术筛选乳腺癌白苔和黄苔患者血清差异表达蛋白

目的应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术筛选乳腺癌白苔和黄苔患者与正常组之间的血清差异表达蛋白,以寻找乳腺癌早期诊断的生物标记物和探索中医舌苔形成的机制和原理。方法临床收集乳腺癌患者中具有典型的白厚苔和黄厚苔者各10例,并以正常薄白苔者10例作为对照,采血取血清提取蛋白,然后进行蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和ESI-QTOF-QⅡ质谱仪鉴定,得到峰图用DATA ANALYSIS、MASCOTT 2.2搜库和Scaffold软件分析,得到表达量差异结果。结果共鉴定出335个蛋白,其中达到严格定量标准的蛋白数59个,与正常组比较,乳腺癌白苔组和黄苔组共筛选出11个血清差异表达蛋白,乳腺癌白苔组和黄苔组之间筛选出6个差异蛋白。结论 iTRAQ结合LC-MS/MS技术能够快速、有效地进行差异蛋白质组学研究,同时发现一些蛋白与乳腺癌的发生以及中医舌苔形成机制密切相关。     

寻常型银屑病不同证型蛋白组学表达的比较研究

目的 对寻常型银屑病(血热证、血瘀证、血虚证)患者与正常人差异蛋白进行分析,探求三证之间差异性表达蛋白,从蛋白质组学角度揭示三证之间的差异.方法 取寻常型银屑病血瘀证、血虚证、血热证患者的血清,应用蛋白提取、定量、双向电泳技术、质谱鉴定和数据库检索,寻找出三证之间的差异蛋白和共有蛋白,并将这些蛋白进行组间比较.结果 发现了15种显著性差异蛋白(P<0.05),其中补体C3、凝聚素、血清转铁蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂H4重链(片段)、载脂蛋白E、 补体C4-B、 甘露糖结合蛋白C及富亮氨酸-α-2-糖蛋白在血虚型银屑病患者血清表达水平高于血热型和血瘀型(P<0.05).纤维蛋白原β链、血液接合素、纤维蛋白原γ链、HPX蛋白、α-抗胰蛋白酶、甲状腺素转运蛋白及载脂蛋白Ⅳ在血热型银屑病患者血清中的表达水平高于血瘀型患者(P<0.05).共同蛋白有5种(P<0.05),分别为血液结合素、纤维蛋白原γ链、HPX蛋白、α-抗胰蛋白酶、载脂蛋白A-Ⅳ.结论 寻常型银屑病(血热证、血瘀证、血虚证)血清中存在表达差异性蛋白质,可能与寻常型银屑病的发病机制和银屑病不同证型的物质基础有关.     

慢性乙型肝炎同病异证发病的分子机制：蛋白质组学分析

目的利用蛋白质组学方法研究慢性乙型肝炎肝郁脾虚、湿热中阻同病异证病人外周血总蛋白表达谱的变化,分析差异表 达蛋白质与证型之间的关系。方法通过双向凝胶电泳,获得了外周血浆差异蛋白表达图谱,经基质辅助激光解析飞行时间质 谱分析鉴定出差异表达的蛋白质。结果获得了慢性乙型肝炎中医肝郁脾虚和湿热中阻同病异证病人及健康人对照组血浆总 蛋白双向凝胶电泳银染图谱,健康组蛋白点为278±16个,肝郁脾虚证组为320±14个,湿热中阻证组为343±19个;通过对差异蛋 白质点进行质谱鉴定,共发现7个差异表达蛋白,主要包括免疫相关蛋白,炎症蛋白以及脂类代谢相关蛋白。结论慢性乙肝肝 郁脾虚和湿热中阻证型间存在多个差异表达蛋白,提示不同的蛋白质表达谱可能是同病异证的分子标签和证侯基础。     

Hp相关性胃病脾胃湿热证、脾气虚证的胃黏膜菌群特征及炎症水平分析

  目的  探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)相关性胃病脾胃湿热证、脾气虚证形成的生物学机制。  方法  收集107例Hp相关性胃病患者的胃黏膜样本, 其中脾胃湿热证70例,脾气虚证37例, 同时招募平和体质健康受试者10名作为正常对照组。采用16S rDNA技术检测胃黏膜样本菌群组成, 免疫组织化学法检测胃黏膜NLRP3和白介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β)蛋白表达水平。  结果  与正常对照组比较, 脾胃湿热证患者胃黏膜菌群放线菌门、拟杆菌门的相对丰度显著降低(P < 0.05), 脾气虚证组患者胃黏膜菌群的门水平物种丰度无明显差异;线性判别分析显示, 与正常对照组比较, 幽门螺杆菌属为Hp相关性胃病脾胃湿热证、脾气虚证患者的胃黏膜标志菌属。与正常对照组比较, 脾胃湿热证、脾气虚证患者胃黏膜NLRP3和IL-1β蛋白表达水平均显著升高(P < 0.05)。  结论  胃黏膜菌群结构差异、炎症水平升高可能是Hp相关性胃病脾胃湿热证、脾气虚证形成的内在生物学机理。      

从差异表达蛋白及其调控层面探讨慢性乙型肝炎肝胆湿热证与脾胃湿热证的证候差异

背景　湿热证是慢性乙型肝炎（CHB）的常见证候,而作为CHB常见证型的肝胆湿热证与脾胃湿热证有湿热共性,辨证分型较易混淆,探讨二者证候差异的本质及区分二者的生物学标志物对丰富中医证候现代科学内涵、提高精准化辨证论治等具有重要意义。目的　从差异表达蛋白及其调控层面探讨CHB肝胆湿热证与脾胃湿热证的证候差异,并探寻区分二者的潜在客观标志物。方法　选取2018年1月-2019年1月中国人民解放军西部战区总医院肝病科门诊、消化科门诊收治的CHB患者30例,其中辨证分型为肝胆湿热证者15例（肝胆湿热组）、脾胃湿热证者15例（脾胃湿热组）;另选取同期在中国人民解放军西部战区总医院体检健康者10例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测目标蛋白〔包括人癌胚抗原相关细胞黏附分子1（CEACAM1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）、人类黏蛋白2（ORM2）、人膜突蛋白（MSN）、纤维胶凝蛋白2（FCN2）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）、人神经源性基因座同源缺口蛋白2（NOTCH2）、人β-淀粉样前体蛋白（β-APP）、人乌头酸酶（ACO1）、人山梨醇脱氢酶（SORD）、人乙醛脱氢酶1家族成员A1（ALDH1A1）〕,并进行生物信息学分析;绘制受试者工作特征（ROC）曲线以分析差异表达蛋白对CHB肝胆湿热证与脾胃湿热证的鉴别诊断价值。结果　肝胆湿热组、脾胃湿热组患者CEACAM1、MCP-1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP、ACO1、SORD、ALDH1A1蛋白表达量均低于对照组（P<0.05）;脾胃湿热组患者CEACAM1、MCP-1、MSN、VCAM-1蛋白表达量高于肝胆湿热组,SDF-1、ORM2、FCN2、IGF-1、NOTCH2、β-APP蛋白表达量低于肝胆湿热组（P<0.05）。以P<0.01为标准进一步筛选肝胆湿热证与脾胃湿热证差异表达蛋白,则上述10种差异表达蛋白仅CEACAM1、SDF-1、MSN、IGF-1入选,其中脾胃湿热组患者CEACAM1、MSN蛋白表达量高于肝胆湿热组,SDF-1、IGF-1蛋白表达量低于肝胆湿热组（P<0.01）。生物信息学分析结果显示,CHB肝胆湿热证与脾胃湿热证之间CEACAM1、MCP-1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP存在较紧密的关联,且这10种差异表达蛋白共同参与多条信号通路。ROC曲线分析结果显示,CEACAM1、SDF-1、MSN鉴别诊断CHB肝胆湿热证与脾胃湿热证的ROC曲线下面积分别为0.73〔95%CI（0.54,0.87）〕、0.70〔95%CI（0.51,0.85）〕、0.72〔95%CI（0.53,0.86）〕,灵敏度分别为86.67%、86.67%、80.00%,特异度均为56.25%。结论　CHB肝胆湿热证与脾胃湿热证之间存在客观差异,CEACAM1、SDF-1、MSN、IGF-1是二者主要差异表达蛋白;CHB肝胆湿热证与脾胃湿热证证候差异的生物学机制可能与核因子（NF）-κB信号通路、晚期糖基化终末产物（AGE）-晚期糖基化终末产物受体（RAGE）信号通路介导的氧化应激反应等有关,而CEACAM1、SDF-1、MSN可作为区分CHB肝胆湿热证与脾胃湿热证的潜在客观标志物。     

肾康灵干预阿霉素肾病大鼠血蛋白质组的实验研究

目的 应用蛋白质组学筛选阿霉素肾病大鼠血清中差异表达的蛋白质,旨在观察频复发性肾病综合征的诊断标志物及肾康灵的作用靶点. 方法利用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱合CM10蛋白质芯片技术检测45组大鼠血蛋白质组质谱的表达,用Cipbergen Proteinchip Soft-ware 3.2.1和Biomarker...     

基于临床研究的湿热证文本信息挖掘

湿热证是多种重大疾病常见证候,古今文献报道众多,多集中于疾病诊疗和单一疾病的关联分析,缺少对湿热证的证本质、分布规律、辨证标准研究等.本研究系统梳理已发表的现代证候文献,以"湿热证"+"临床研究or流行病学"为关键词,检索CNKI、万方、VIP、PUBMED等数据库,采用改良Jadad量表和质量指数量表分别评价和筛选全部文献,最终纳入193篇.对所选文献进行统计分析,发现:①湿热证临床研究关注度日益提高,发表文献增量明显;②湿热证是多种临床重大疾病的常见证候,以消化病、代谢病、泌尿系统疾病最为突出,但多为单病研究,罕见"异病同证"研究;③湿热证地区分布广泛,但病源区域却较为集中,多为经济发达区域,缺少全国性的协同攻关.因此,亟需系统开展湿热证的证本质研究,特别是湿热证在常见重大慢性疾病如糖尿病及其相关疾病、慢性肝病、慢性胃炎、肾炎等疾病中的共性研究.同时,需要开展大样本、多区域流行病学调查和临床研究,并建立湿热证现代辨识标准.     

采用iTRAQ方法研究男性弱精子症精子蛋白的差异表达

目的:探讨精子蛋白在成年男性弱精子症中的差异表达情况。方法:用iTRAQ标记以及二维高效液相色谱/串联质谱联用的方法研究成年男性正常精子以及轻、中、重度弱精症患者的精子蛋白表达情况。结果:以正常组作为参照,本研究共发现1 073个蛋白质与弱精症相关。其中,与正常相比,轻度、中度和重度精子表达上调蛋白数为474,232和311,精子表达下调蛋白数为529,800和719,上调和下调的蛋白质数量在弱精子症患者组构成比存在明显差别(P<0.05),以蛋白质表达数量降低为主。经蛋白功能注释,弱精症中明显上调和下调的蛋白质主要为结合、酶催化、分子结构、酶调节以及氧化还原功能等相关蛋白。其中,38个蛋白明确与精子发生、精子活动及受精过程相关。结论:采用iTRAQ标记技术能很好的应用于弱精症精子蛋白质组学研究。同时,弱精症中部分精子蛋白质表达以蛋白质数量降低为主,并且其变化幅度与弱精症严重程度相关。