免疫健全小鼠Panc02胰腺癌发展过程中免疫细胞群的动态变化

目的了解免疫健全小鼠胰腺癌发展过程中免疫细胞群的动态变化情况。方法利用C57BL6/J小鼠Panc02同源胰腺癌细胞株建立免疫健全小鼠胰腺癌种植瘤模型。根据肿瘤大小将其分为T1~T4期。流式细胞染色计数胰腺癌发展过程中炎细胞(CD45+)、辅助T(Th)淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、B淋巴细胞、粒细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、自然杀伤(NK)细胞及自然杀伤T(NKT)细胞在外周血及肿瘤组织中的动态变化。结果随着小鼠胰腺癌进展,免疫细胞群比例分别呈现"持续减少"、"持续增多"及"先增多后减少"3种变化形式。1外周血中,Th淋巴细胞、CTL及B淋巴细胞比例逐渐减少;粒细胞比例持续增多;DC、巨噬细胞、NK细胞及NKT细胞比例在T1~T3期逐渐增多但在T4期骤然减少。2肿瘤组织中,总炎细胞浸润逐渐增多;粒细胞、DC及巨噬细胞比例逐渐增多;Th淋巴细胞及CTL比例逐渐减少;B淋巴细胞比例无明显变化;NK细胞及NKT细胞比例在T1~T3期逐渐增多但在T4期骤然减少。结论随着小鼠胰腺癌进展,外周血及肿瘤组织中各免疫细胞群呈现不同的动态变化趋势,提示不同免疫细胞群在预测胰腺癌预后及综合治疗中可能起重要作用。     

吉西他滨与胰腺癌化疗耐药

目的探讨胰腺癌对吉西他滨化疗产生耐药性的相关机理。方法复习近年国、内外相关文献，对介导胰腺癌吉西他滨耐药性的主要基因及信号通路加以综述。结果癌基因c—Src与bcl—X1、NF-κB炎症信号通路、细胞因子IL-1β及NO等与介导胰腺癌对吉西他滨的耐药性密切相关；多药耐药基因MDR1／P-gP与胰腺癌吉西他滨耐药的相关性仍有待研究。结论癌基因c—Src与bcl—X1、NF-κB炎症信号通路等可能成为新的治疗靶点以增加胰腺癌的化疗敏感性；介导胰腺癌化疗耐药的关键基因与中心信号通路尚有待阐明。     

吉西他滨单药化疗在胰腺癌术后的应用

目的：探讨胰腺癌术后吉西他滨单药化疗的疗效。方法：对胰腺癌手术后患者64例,应用吉西他滨单药化疗作为治疗组,术后未进行化疗的28例作为对照组。结果：治疗组的1～2.5年生存率明显高于对照组。结论：胰腺癌术后应用吉西他滨单药辅助化疗,疗效明显,而且安全、低毒。     

胰腺癌细胞Panc-1中AKT2基因表达对吉西他滨敏感性的影响

目的 探讨胰腺癌细胞Panc-1中AKT2基因表达对吉西他滨敏感性的影响.方法 体外将AKT2特异性shRNA表达载体pAKT2-shRNA转染胰癌细胞株Panc-1.应用RT-PCR、Western blot检测转染shRNA后Panc-1细胞AKT2基因和蛋白的表达变化,应用MTT法检测干扰AKT2后Panc-1细胞对吉西他滨敏感性的变化.结果 转染pAKT2-shRNA后Panc-1细胞AKT2基因和蛋白的表达水平明显下降;吉西他滨对Panc-1细胞的半数抑制量从(1.96±0.22) mg/L降到(0.24±0.03)mg/L,Panc-1细胞对吉西他滨的敏感性明显增加.结论 用pAKT2-shRNA抑制AKT2基因表达,能增加人胰癌细胞株Panc-1对吉西他滨的敏感性.     

吉西他滨在非手术晚期胰腺癌治疗中的应用

胰腺癌是一种发病隐匿、侵袭性强、难以早期诊断的恶性肿瘤,〉80％的胰腺癌病人确诊时已为晚期,并已失去手术治疗时机。数十年来化疗药物虽有发展。其治疗效果仍很有限。这些因素使得晚期胰腺癌成为最具挑战性的肿瘤之一。回顾过去十余年的中晚期胰腺癌化疗发展历程,吉西他滨、顺铂、奥沙利铂、卡培他滨及氟尿嘧啶在晚期胰腺癌一线化疗中均获得一定效果,其中以吉西他滨疗效尤为突出。现就吉西他滨在晚期胰腺癌中的应用情况作一综述。     

吉西他滨代谢酶与胰腺癌化疗耐药关系的研究进展

目的 介绍吉西他滨代谢酶对胰腺癌化疗耐药影响的研究进展.方法 复习和总结了近年来的相关文献,对吉西他滨代谢酶与胰腺癌化疗耐药关系的研究进展加以综述. 结果hENT1、dCK、RRM1、CDA等代谢酶与胰腺癌对吉西他滨化疗的耐药具有密切关系;代谢酶的单核苷酸多态性与胰腺癌对吉西他滨耐药的关系仍有待研究.结论 胰腺癌对吉西他滨化疗耐药是多因素、多因子共同作用的结果,对于代谢酶影响胰腺癌化疗耐药的机理有待进一步研究.     

吉西他滨白蛋白纳米粒对胰腺癌微血管生成的影响

目的：研究吉西他滨白蛋白纳米粒（GEM-NP）对胰腺癌微血管生成的影响。方法：以人胰腺癌裸鼠移植瘤为对象,分为5个给药组：110nm—GEM—NP组（n=6）、406nm—GEM—NP组（n=6）、GEM组（n=6）、NP组（n=6）及无药对照组（n=6）;运用CD34免疫组化检测微血管密度（MVD）,RT—PCR法检测血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达。结果：5个组给药后MVD依次为1．80±0．90、2．58±1．10、3．92±1．13、6．61±1．65及9．56±2．99;其中3个GEM阳性给药组与2个无GEM组间均有显著差异（P〈0．05）,110nm—GEM—NP组与GEM组间也具有显著差异（P〈0．05）。而各组间VEGFmRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：GEM—NP对胰腺癌微血管生成有较显著的抑制效应。     

吉西他滨联合伊立替康一线治疗晚期胰腺癌随机对照试验的Meta分析

目的 通过Meta分析,探讨吉西他滨联合伊立替康治疗晚期胰腺癌的地位和价值。方法 通过MEDLINE、EMBASE、ASCO论文集等数据库检索国内外已发表和未发表的相关文献。选择治疗组为吉西他滨联合伊立替康化疗,对照组为吉西他滨单药化疗的晚期胰腺癌随机对照试验（randomized controlled trial,RCT）。由2位评价者分别按上述检索策略收集资料,按纳入标准入选,主要对总生存率进行Meta分析,其次是客观缓解率和毒副反应。结果 共纳入3个RCT。吉西他滨联合伊立替康化疗与吉西他滨单药化疗比较,前者半年生存率及一年生存率均无差别（P值分别为0.88,0.97）,客观缓解率提高9%（P=0.0009）;同时WHO3/4度骨髓毒性（除中性粒细胞减少症外）及非骨髓毒性可能增加：血小板减少症增加2%（P=0.46）、贫血增加1%（P=0.58）,恶心/呕吐增加6%（P=0.34）、腹泻增加10%（P=0.10）,但均未取得统计学意义。结论 现有证据不推荐吉西他滨联合伊立替康一线治疗晚期胰腺癌。     

蛙皮素受体拮抗剂RC-3095联合吉西他滨对人胰腺癌细胞CFPAC-1生长的影响

目的:探讨蛙皮素受体拮抗剂RC-3095联合吉西他滨(gemcitabine,GEM)是否有协同拮抗人胰腺癌细胞CFPAC-1生长的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的RC-3095、GEM以及联合治疗对胰腺癌细胞体外增殖的影响;给予荷瘤裸鼠RC-3095(20μg/d)、GEM[15 mg/(kg·3 d)]以及两者联合治疗4周,观察移植瘤的体积和重量变化;采用Western印迹法检测干预后移植瘤组织中蛙皮素受体的表达变化,包括GRP-R、NMB-R和BRS-3。结果:在体外试验中,联合用药组展现出强大的肿瘤细胞增殖抑制效应。干预4周后发现,RC-3095或GEM都可显著降低移植瘤的体积和重量。联合组比任何单一用药组都能更显著地抑制CFPAC-1移植瘤的生长。Western印迹法显示,RC-3095组或GEM组均能降低移植瘤中GRP-R和BRS-3的蛋白质表达;联合用药组降低作用更明显。结论:RC-3095联合GEM能协同抑制人胰腺癌细胞CFPAC-1在体外和体内的生长发展。这种协同抑制的效果与GRP-R和(或)BRS-3表达下降有关。     

海扶刀联合吉西他滨在中晚期胰腺癌治疗中的应用

[摘 要] 目的 探究采用高强度聚焦超声联合吉西他滨治疗中晚期胰腺癌的效果及安全性。方法 将2012年6月至2017年6月间郑州大学第一附属医院诊治的165例中晚期胰腺癌患者随机分为高强度聚焦超声联合静脉滴注吉西他滨治疗组（联合组,92例）和吉西他滨治疗组（化疗组,73例）。对比两组患者治疗2个月后的疼痛缓解率、外周血CA19-9水平、肿瘤体积变化、并发症的发生情况以及治疗后3、6个月的生存率。结果 治疗两个月后,联合组患者疼痛缓解率明显高于化疗组（94.4% vs 21.1%）;联合组治疗2个月后VAS评分[（2.7±3.2）vs（6.2±2.8）]及CA19-9水平[（204.6±195.6）U/mL vs（537.2±274.5）U/mL]明显下降（P<0.05）;肿瘤体积[（20.13±13.25）cm 3 vs （33.45±13.68） cm 3 ]明显缩小（P<0.05）。治疗3个月后,联合组生存率为97.6%,化疗组生存率为94.3%,两组对比无统计学差异（P>0.05）;治疗6个月后,联合组生存率为69.5%,化疗组生存率为24.3%,两组对比有统计学差异（P<0.05）。联合组患者均未出现胃肠道穿孔、胰瘘和出血等HIFU治疗并发症。结论 高强度聚焦超声联合吉西他滨治疗中晚期胰腺癌可明显缩小肿瘤体积,减轻患者的疼痛症状,且并发症少,有效改善生活质量,延长患者的生存期。     

吉西他滨单药与以其为基础的联合化疗治疗进展期胰腺癌疗效的meta分析

目的 研究吉西他滨(GEM)单药与以吉西他滨为基础的两种药物联合用药(GEMCOM)对于进展期胰腺癌的治疗效果.方法 以PhaseⅢ、gemcitabine、pancreatic cancer为检索词,在Pubmed中检索2002至2010年GEM和GEMCOM治疗进展期胰腺癌三期临床试验文献,以文献为基础采用固定效应模型或随机效应模型对客观缓解率、1年生存率进行meta分析.结果 Meta分析的结果显示,14个临床随机对照试验(RCT)入选客观缓解率分析,结果为GEMCOM组客观缓解率优于GEM单用组(z=4.400,P=0.000);10个RCT入选两组1年生存率分析,GEMCOM组1年生存率高于GEM单用组(z=2.190,P=0.028).14个RCT获益率分析发现,GEMCOM组获益率高于GEM单用组(z=4.400,P=0.000).通过Egger直线回归法检测,入选客观缓解率分析的14个RCT中,尚不能说明存在发表偏倚(t=0.070,P=0.946);入选1年生存率分析的10个RCT中,尚不能说明存在发表偏倚(t=-0.740,P=0.483).结论 吉西他滨联合用药的客观缓解率、1年生存率、获益率高于吉西他滨单独用药组.吉西他滨联合用药有优于吉西他滨单用的可能.

Abstract：

Objective To compare the efficacy of gemcitabine (GEM)alone and gemcitabine based combination chemotherapy (GEMCOM) on advanced pancreatic cancer. Methods Keywords Phase Ⅲ,gemcitabine and pancreatic cancer were used to search and collect Phase Ⅲ-randomized references about gemcitabine and gemcitabine-based combination chemotherapy applied on advanced pancreatic cancer. A references-based meta-analysis was made to compare the efficacy between GEM and GEMCOM.Beefore that,test for heterogeneity was committed. Fixed effect model was used if the I2 ≤50% ,and random effect model was used if not. The evaluating indicators were overall response rate and 1-year survival rate. Results There were 14 randomized controlled trial(RCT) and 10 RCT enrolled in overall response rate analysis and 1-year survival rate analysis, respectively. Results of meta-analysis showed that, arm GEMCOM's overall response rate and 1-year survival rate were higher than arm GEM's(z =2. 190,P =0. 028 vs. z =4. 400,P =0. 000).The differences were significant. The biases of the results were tested by Egger-test. The tests showed that no bias exists in both of two meta-analysis (t = 0. 070, P = 0. 946 and t = - 0. 740, P = 0. 483) respectively.Conclusion There is a possibility that the gemcitabine-combination is more effective than the gemcitabine on overall response rate and 1-year survival rate.     

乳香胶联合吉西他滨对人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及机制初探

目的 研究乳香胶联合吉西他滨对体内、外培养的人胰腺癌BxPc-3细胞的作用及相关机制.方法 四唑氮蓝还原法检测BxPc-3细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡(PI单染色法).Western blot检测不同浓度的乳香胶联合吉西他滨(两药联合组)用药后BxPc-3细胞内测核转录因子-κB(NF-κB) p65亚基以及NF-κB抑制蛋白IkB、凋亡调节蛋白Bcl 2和Bax的表达水平的变化.建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,监测移植瘤体积变化.结果 两药联合组选择乳香胶(40 mg/L)和吉西他滨(10 mg/L)处理72 h后,抑制人胰腺癌细胞株BxPc-3细胞的作用显著优于单独使用(P＜0.01);凋亡比例(45.13±4.01)明显高于乳香胶组或吉西他滨组(P＜0.01)和对照组(5.07±1.37,P＜0.01);乳香胶或两药联合可抑制NF-κB的活性;对人胰腺癌BxPc-3细胞作用48 h后,Bcl-2的蛋白表达明显低于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).而IkB和Bax蛋白的表达显著高于吉西他滨组和对照组(P＜0.01).与对照组比较,乳香胶或两药联合组可显著抑制裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长(P＜0.05).结论 乳香胶可通过抑制NF-κB的活性,增加IkB和Bax蛋白表达、抑制Bcl-2的蛋白表达,发挥抗肿瘤作用,并增强吉西他滨的药效.     

二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的作用及其机制.方法 培养胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1,通过MTT法检测二氢青蒿素联合吉西他宾对胰腺癌细胞生长的抑制作用;通过Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况;通过EMSA检测NF-κB与DNA结合活性的改变;通过Western blot法检测细胞中NF-κB/P65和NF-κB下游增殖、凋亡相关蛋白的表达情况.裸鼠皮下注射BxPC-3细胞建立胰腺癌裸鼠移植瘤,监测给药后肿瘤体积的变化,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 二氢青蒿素联合吉西他宾对BxPC-3和Panc-1两株细胞的增殖抑制率可达(81.1±3.9)%和(76.5±3.3)%;凋亡率可达(53.6±3.8)%和(48.3±4.3)%,与吉西他宾组[(24.8±2.9)%和(21.8±3.5)%]相比,差异有统计学意义(P<0.01).在裸鼠体内,各治疗组均可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长;联合组肿瘤的体积和增殖凋亡指数分别为(262±37)mm~3和(50±4)%,与吉西他宾组[(384±56)mm~3和(25±3)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05).EMSA和Western blot结果显示,二氢青蒿素能抑制胰腺癌细胞NF-κB与DNA结合活性,联合组较吉西他宾组NF-κB活性有显著的降低;二氢青蒿素下调BxPC-3和Pane-1细胞核P65的表达,联合组较对照组显著下调NF-κB靶基因蛋白Cyclin D1、Bcl-xL、Bel-2的表达,上调Bax的表达,降低Bel-2/Bax的比例,进一步增加Caspase-3的活化.结论 二氢青蒿素抑制吉西他宾所诱导激活的NF-κB的活性,下调NF-κB下游靶基因蛋白的表达可能是其增敏吉西他宾抗胰腺癌作用的分子机制.     

Temsirolimus improves cytotoxic efficacy of cisplatin and gemcitabine against urinary bladder cancer cell lines

ObjectivesTo analyze the cytotoxic action of temsirolimus using 3 established human bladder cancer cell lines and to assess whether temsirolimus potentiates the anticancer activity of gemcitabine and cisplatin.MethodsTemsirolimus (500, 1,000, 2,000, and 4,000 nM), in isolation, and combined with gemcitabine (100 nM) and cisplatin (2.5 µg/ml), was given to 5637, T24, and HT1376 bladder cancer cell lines. Cell proliferation, autophagy, early apoptosis, and cell cycle distribution were analyzed after a 72-hour period. The expression of mammalian target of rapamycin baseline, Akt, and their phosphorylated forms, before and after treatment with temsirolimus, was evaluated by immunoblotting.ResultsTemsirolimus slightly decreased the bladder cancer cell proliferation in all 3 cell lines. No significant differences in the expression of mammalian target of rapamycin, Akt, and their phosphorylated forms because of temsirolimus exposure were found in the 3 cell lines. As part of a combined regime along with gemcitabine, and especially with cisplatin, there was a more pronounced antiproliferative effect. This pattern of response was similar to the other parameters analyzed (increased autophagy and apoptosis). Also, in the combined regime, an enhanced cell cycle arrest in the G0/G1 phase was observed. The non–muscle invasive 5637 bladder cancer cell line was most sensitive to both combinations.ConclusionsTemsirolimus makes a moderate contribution in terms of cell proliferation, apoptosis, and autophagy. However, it does potentiate the activity of gemcitabine and particularly cisplatin. Therefore, cisplatin- or gemcitabine-based chemotherapy regimen used in combination with temsirolimus to treat bladder cancer represents a novel and valuable treatment option, which should be tested for future studies in urinary bladder xenograft models.     

培美曲塞与吉西他滨联合卡铂一线治疗晚期非小细胞肺癌的安全性和有效性临床研究

目的分析比较培美曲塞与吉西他滨联合卡铂一线治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效和不良反应,探讨方案的可行性。方法收集我院新院（2011年5月～2012年11月）收治的晚期经病理学证实的非小细胞肺癌患者37例,按治疗方案随机分为两组：A组19例,采用培美曲塞联合卡铂方案;B组18例,采用吉西他滨联合卡铂方案。化疗3周后进行疗效评价及不良反应评价。结果（1）A组ORR及DCR与B组比较差别不大,两组差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）A组PFS高于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。1年总生存率与B组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）A组副反应发生率低于B组,两组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论培美曲塞联合卡铂一线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效与吉西他滨联合卡铂的疗效相近,且耐受性较好,患者依从性明显提高,可以推广应用于临床。     

Smac/DIABLO诱导胰腺癌细胞凋亡并增加对TRAIL及吉西他滨化疗的敏感性

目的 探讨外源性Smac/DIABLO对人胰腺癌SW1990细胞生物学特性和对TRAIL及吉西他滨化疗敏感性的影响. 方法 利用脂质体2000介导Smac/DIABLO基因转染胰腺癌SW1990细胞获得细胞SW1990/Smac,转染空载体为对照组(SW1990/neo);在不同浓度和时间下以肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和吉西他滨处理2组细胞株并分为TRAIL组、吉西他滨组和联合组.MTT法检测细胞株的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及凋亡细胞形态,Western blot检测凋亡相关蛋白Smac/DIABLO、抑制凋亡蛋白XIAP、细胞色素C及细胞凋亡因子caspase-3的表达.结果 转染Smac/DIABLO的细胞生长明显落后于转染空载体的细胞.TRAIL浓度为200、500、1000、2500 ng/ml时,作用24 h对SW1990/neo和SW1990/Smac细胞的抑制率分别为11.11％、46.03％、67.08％、76.19％及22.11％、42.67％、56.63％、67.6％ (P ＜0.05).吉西他滨浓度分别为10、20、40、60μmol/L作用24 h对SW1990/neo和SW1990/Smac的抑制率分别为15.2％、34.6％、55.16％、76.4％和22.65％、36.85％、55.11％、79.99％ (P＜0.05).以TRAIL(500 ng/ml)、吉西他滨(20 μmol/L)及TRAIL(500 ng/ml)+吉西他滨(20 μmol/L)作用24 h后,SW1990/neo和SW1990/Smac细胞的凋亡率分别为5.64％、15.30％、27.27％和20.37％、23.27％、67.30％ (P ＜0.05).SW1990/Smac细胞在TRAIL及吉西他滨作用后,细胞内促凋亡蛋白Smac/DIABLO、细胞色素C及caspase-3活化片段表达均显著升高,而抑制凋亡蛋白XIAP表达显著降低(P＜0.05).结论 Smac/DIABLO可诱导SW1990细胞的凋亡、抑制细胞增殖,并增强胰腺癌细胞对TRAIL及吉西他滨的化疗敏感性,其机制可能与Smac/DIABLO、细胞色素C、XIAP及caspase-3的活性有关.     

人膀胱癌裸鼠移植瘤模型的建立及其血管生成的观察

目的:观察人膀胱癌裸鼠移植瘤模型的病理形态特征和血管生成情况,并为今后的研究奠定基础。方法:常规培养T24细胞,通过皮下接种建立人膀胱癌裸鼠移植肿瘤模型,并于肿瘤生长至直径0.2~0.3cm、0.5~0.8cm、1.0~1.5cm时切除肿瘤,利用HE染色观察肿瘤病理形态,利用免疫组织化学技术标记CD31阳性细胞进行微血管计数。结果:动物接种后7~10天可见肿瘤生长,4周时肿瘤直径可达1cm以上,此后肿瘤生长速度下降。切片HE染色可见肿瘤形态与人体肿瘤存在一定差异;较大肿瘤表面可见明显的血管增生及中心坏死液化。直径0.2~0.3cm肿瘤微血管密度(Microvessel density,MVD)小于较大体积肿瘤(P<0.01)。结论:动物模型肿瘤与人体肿瘤之间尚存在一定差异,有待深入研究,使其能更好地模拟人体肿瘤。本研究结果为后续研究奠定了实验基础。     

吉西他滨白蛋白纳米粒对胰腺癌细胞株体外抑制效应的实验研究

目的：通过体外实验,探讨406nnq吉西他滨白蛋白纳米颗粒（406nm—GEM—NP）对人胰腺癌细胞株CFPAC—1体外增殖的抑制效应。方法：以人胰腺癌细胞株CFPAC-1为研究对象,分为4个给药组：406nm—GEM—NP组、单纯GEM组、空白纳米颗粒组和无药对照组,采用MTT法（四甲摹偶氮唑蓝）观察不同药物浓度对肿瘤细胞生长的抑制作用;并同时观察给药后48h和72h肿瘤细胞的增殖抑制率。结果：MTT试验检测提示406nm—GEM—NP和GEM均具有显著的细胞抑制作用,且406nm—GEM．NP的细胞抑制率在50μg／mLGEM浓度时,超过了单纯GEM（P〈0．05）。且有明显的时间依赖性．提示有显著的药物缓释作用;空白纳米颗粒对细胞抑制轻微,且不具有时间和浓度依赖性。结论：406nm—GEM-NP对人胰腺癌细胞株CFPAC—1具有显著的体外细胞增殖抑制作用。