丙戊酸钠对胰腺癌细胞株SW1990增殖和凋亡的影响及机制

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对胰腺癌细胞株SW1990增殖、凋亡的影响,探讨丙戊酸钠诱导SW1990凋亡的机制.方法 应用1、2、3、4、5 mmol/L的丙戊酸钠干预SW1990细胞,以未干预的细胞作为对照组.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;取3 mmol/L丙戊酸钠干预SW1990细胞24、48、72 h,流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测SurvivinmRNA的表达.结果 丙戊酸钠对SW1990细胞有明显的生长抑制作用,呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性,不同浓度组、不同时间组间生长抑制率差异有统计学意义(P＜0.05).3 mmol/L丙戊酸钠干预SW1990细胞不同时间的凋亡率分别为(15.79 ±2.18)％、(26.73±2.36)％、(38.74±1.83)％,与对照组早期凋亡率[(2.99±0.87)％]比较,不同时间比较差异有统计学意义(P＜0.05).未经丙戊酸钠干预的SW1990细胞高表达Survivin基因(5.152±1.835),在经3 mmol/L丙戊酸钠干预24、48、72 h后,Survivin基因的表达水平分别为3.977±1.531、2.639±1.017、1.034±0.239,随药物干预时间的延长Survivin基因的表达水平逐渐下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丙戊酸钠可抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖、诱导凋亡,其机制可能与激活线粒体内源性凋亡途径,下调Survivin基因有关.     

硼替佐米对Raji细胞、Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨硼替佐米对Raj i细胞、J ur kat细胞增殖及凋亡的影响及作用。方法:使用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Raj i及Jurkat细胞增殖的改变;使用流式细胞仪,Annexi n V和PI双染色,监测细胞凋亡。结果:硼替佐米对Jurkat细胞、Raj i细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡存在剂量依赖性和时间依赖性。结论:硼替佐米抑制Jurkat细胞、Raj i细胞的增殖,诱导其凋亡,呈剂量依赖性和时间依赖性。     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤患者的护理

应用硼替佐米治疗5例多发性骨髓瘤患者，给药前做好心理护理，给药时密切监护并观察不良反应，包括低血压、乏力、消化道反应、血小板减少、中性粒细胞减少和周围神经感觉异常，经采取相应护理措施，患者均完成药物治疗，其中1例完全缓解，4例部分缓解。均未发生与护理相关的不良反应。     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤患者的护理

应用硼替佐米治疗5例多发性骨髓瘤患者,给药前做好心理护理,给药时密切监护并观察不良反应,包括低血压、乏力、消化道反应、血小板减少、中性粒细胞减少和周围神经感觉异常,经采取相应护理措施,患者均完成药物治疗,其中1例完全缓解,4例部分缓解.均未发生与护理相关的不良反应.     

硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病的抑制作用

目的 探讨硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的抑制作用及其可能机制.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,获取骨髓细胞及脾细胞.以Balb/c小鼠为受鼠,共分为5组:空白对照组(n=17)小鼠不予任何处理;单纯照射组(n=17)小鼠仅接受7.0 Gy X射线全身照射(TBI);药物对照组(n=17)小鼠也接受TBI,并且由尾静脉注射硼替佐米;aGVHD组(n=8)小鼠TBI后注射供鼠骨髓细胞及脾细胞;实验组(n=8)小鼠TBI后输注供鼠骨髓细胞及脾细胞,并予以硼替佐米.观察各组小鼠aGVHD的发生情况、存活时间及嵌合状态,蛋白印迹法测定空白对照组、单纯照射组和药物对照组小鼠肝脏及小肠组织细胞核中核因子κB(NF-κB)p65的表达.结果 aGVHD组和实验组的临床aGVHD评分分别为7.37±0.32和5.85±0.40,实验组明显低于aGVHD组(P＜0.05).aGVHD组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Thomas GVHD病理分级Ⅲ～Ⅳ级改变.实验组受鼠肝脏、小肠及皮肤组织为Ⅰ～Ⅲ级GVHD改变,较aGVHD组有所减轻.实验组存活时间长于aGVHD组(P＜0.05).aGVHD组和实验组小鼠移植后12 d时外周血细胞中H-2Kb分子阳性细胞的百分率均＞90%.药物对照组肝脏及小肠组织细胞核内NF-κB p65表达均高于单纯照射组(P＜0.05).结论 硼替佐米可能通过在一定程度上抑制照射预处理损伤所致肝脏及小肠组织中NF-κB的激活起到减轻aGVHD的作用.

Abstract：

Objective To observe the effect of bortezomib on acute graft-versus-host disease (aGVHD) in an aGVHD model of mice and investigate the related mechanism. Methods Male C57BL/6( H-2Kb)mice were used as donors and female Balb/c (H-2Kd) mice used as recipients. Balb/c mice received total body irradiation (TBI) by 7.0 Gy X-radiation, and randomly divided into five groups. normal (group A), TBI (group B), TBI + bortezomib (group C), TBI + bone marrow cells (BMC) + spleen cells (SC) (group D) and TBI + bortezomib + BMC + SC (group E). The physical signs and the pathological damage of aGVHD, mean survival time, and chimerism were observed in recipients. The NF-κB p65 levels in nuclei of the liver and small intestine tissues of groups A,B and C were analyzed by Western blot. Results ( 1 ) The clinical aGVHD score in group D was (7.37±0. 32), significantly higher than in group E (5.85 ± 0.40) (P＜0. 05). Histopathology of the gut, liver and skin illuminated that the Ⅲ-Ⅳ degree GVHD occurred in group D. The occurrence of aGVHD in group E was later than in group D. The symptoms and the pathological damage of aGVHD in group E were milder than in group D. The average survival time in group E was significantly longer than that in group D (P＜0.05). The percentage of donor-derived cells in recipient mice was above 90% at day 12 after transplantation; (2) NF-κB p65 levels in nuclei of the liver and small intestine tissues in group B was significantly higher than in group C on the day 1,3 and 5 (P＜0. 05). Conclusion Bortezomib can inhibit the activation and expression of NF-κB,which may be the underlying mechanism for it to relieve aGVHD.     

硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导细胞杀伤作用的敏感性

目的:探讨硼替佐米是否能够增强前列腺癌细胞对NK细胞介导杀伤作用的敏感性,以及是否在不同类型的人前列腺癌细胞系中有相似的作用。方法:以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺癌细胞株DU145为模型,不同浓度(0、5、10、15、20、25nmol/L)硼替佐米处理细胞后,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,Annexin V/PI法检测细胞凋亡率。结果:15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞48、72h后,各处理组细胞的增殖率分别为(82.79±2.04)%、(73.59±2.95)%、(74.16±6.16)%和(71.24±5.30)%、(51.20±2.91)%、(38.02±2.67)%,同样处理LNCaP细胞后,各处理组细胞的增殖率分别为(77.04±7.74)%、(42.61±6.62)%、(23.85±6.04)%和(36.45±7.02)%、(14.94±5.76)%、(11.65±5.87)%。与对照组相比,硼替佐米强烈抑制两种细胞系的增殖(P0.05)。15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞24h后,DU145细胞的凋亡率分别为(14.41±1.32)%、(16.13±1.55)%、(14.48±1.42)%,而在LNCaP细胞,20、25nmol/L硼替佐米处理24h后,凋亡率为(12.77±1.28)%和(14.84±1.65)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),DU145细胞对硼替佐米诱导的凋亡作用较LNCaP细胞更加敏感。但是,在短期分析中硼替佐米不能致敏两种细胞系对NK细胞介导的杀伤作用。在长效分析中,用硼替佐米处理肿瘤细胞后,20nmol/L硼替佐米+NK组诱导的DU145细胞和LNCaP细胞凋亡率分别为(41.83±5.06)%和(30.31±3.62)%,较单独应用硼替佐米或者NK细胞更高(P0.05)。结论:硼替佐米能够应用于致敏前列腺癌细胞对NK细胞介导的杀伤作用的敏感性,提高当前前列腺癌的治疗水平。而且此治疗策略对雄激素非依赖性的前列腺癌患者更有效。     

雷公藤内酯醇单独及联合硼替佐米作用于PC3细胞的研究

目的:观察雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)单独及联合硼替佐米(bortezomib,BZM)对激素抵抗性前列腺癌PC3细胞的体外生长和凋亡的影响。方法:选用递增浓度的TPL和BZM单独及联合作用于PC3细胞,MTT法检测PC3细胞生长抑制率;流式细胞仪检测PC3细胞凋亡;RT-PCR分析血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:TPL、BZM单独对PC3细胞生长均有抑制作用且呈时间和剂量依赖性。相同浓度时,TPL单独作用强于BZM(P<0.05),两药联合可明显提高细胞生长抑制率(P<0.05);流式细胞检测发现,联合用药引起细胞凋亡也明显高于单独用药(P<0.05);TPL和BZM均能下调VEGFmRNA的表达,联合用药下调作用更加明显(P<0.05)。结论:不论是单独还是联合应用TPL和BZM均可抑制PC3细胞增殖并诱导其凋亡,两药联合作用明显强于单独用药,两者作用有协同性。     

硼替佐米治疗肾移植术后确诊多发性骨髓瘤一例并文献复习

多发性骨髓瘤（muliple myeloma,MM）是浆细胞恶性增殖性疾病.骨髓瘤细胞在骨髓内增殖并分泌单克隆免疫球蛋白或其轻链,正常多克隆浆细胞功能受到抑制,导致体内多器官功能受损,从而引起一系列临床表现.肾功能受损是MM常见的并发症,如不及时治疗,大部分将迅速进展为终末期肾病,即使行肾移植术,也将导致移植肾损伤[1-2].中山大学附属第一医院器官移植科于2012年收治肾移植术后33个月确诊MM患者1例,经硼替佐米治疗,达到部分缓解,但移植肾功能未能恢复,现报道如下。     

硼替佐米联合沙利度胺和地塞米松治疗初治多发性骨髓瘤30例

目的 观察硼替佐米联合沙利度胺和地塞米松（VTD方案）与传统长春新碱联合多柔比星和地塞米松（VAD方案）治疗初治多发性骨髓瘤的疗效和安全性。 方法 回顾性分析采用VTD和VAD方案治疗的56例初治多发性骨髓瘤患者的临床资料。VTD组患者采用VTD方案治疗，硼替佐米1.3 mg.（m2）-1，快速静脉注射，第1，4，8，11天；沙利度胺100～200 mg.d-1，每晚口服；地塞米松20～40 mg.d-1，第1～4，8，11天，静脉注射。每21 d为1个疗程。VAD组患者采用传统VAD方案化疗，即长春新碱0.5 mg.d-1，多柔比星9 mg.（m2）-1，地塞米松40 mg.d-1，第1～4天静脉滴注，每28 d为1个疗程。所有入组患者治疗2～8个疗程，平均4个疗程。比较两组的疗效及不良反应。采用国际骨髓瘤工作组（IMWG）标准判定疗效，按美国国立癌症研究院通用CTCAEv3.0标准评价不良反应。结果 VTD组总有效率为96.7%，VAD组总有效率69.2%，差异有统计学意义（P<0.01）。VTD组常见不良反应主要为中性粒细胞和血小板减少（36.7%和43.3%）、乏力（53.3%）、胃肠道反应（83.3%）、周围神经病变（33.3%）及带状疱疹病毒感染（6.7%），VAD组分别为65.4%，73.1%，80.8%，96.2%，34.6%，26.9%。差异有统计学意义（P<0.05）。结论 VTD方案治疗初治多发性骨髓瘤的疗效显著优于VAD方案，且不良反应轻微，患者易耐受，值得推广。     

南瓜蛋白对人胰腺癌SW1990细胞株的诱导凋亡作用

目的 探讨南瓜蛋白体外对人胰腺癌SW1990细胞株的诱导凋亡作用.方法 MTT法检测南瓜蛋白对SW1990细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡表现,流式细胞仪检测其凋亡率,Western blot法检测caspase-3蛋白的表达.结果 不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00及80.00 μg/ml)南瓜蛋白作用不同时间(24、48及72 h)后,南瓜蛋白对胰腺癌细胞具有生长抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P<0.05).40.00 μg/ml南瓜蛋白作用72 h后,透射电镜下可见细胞出现明显的凋亡改变,并可见凋亡小体;不同浓度(0、2.50、10.00、40.00μg/ml)南瓜蛋白作用72 h后,细胞的凋亡率分别为(0.30±0.11)%、(18.93±1.06)%、(28.00±2.07)%及(49.93±3.25)%,随着药物浓度的升高,细胞的凋亡率逐渐增加,呈浓度依赖性(P<0.05);caspase-3蛋白表达随着药物浓度的升高逐渐增强,呈浓度依赖性(P<0.05).结论 南瓜蛋白可能通过上调caspase-3蛋白的表达诱导胰腺癌细胞凋亡.     

导入PTEN基因抑制胰腺癌细胞体外生长的研究

目的　研究PTEN基因转染对胰腺癌细胞体外生长的生物学效应。方法　以 pBP、pBP PTEN HA、pBP PTENG 12 9R HA质粒分别转染体外培养胰腺癌细胞株JF 30 5 ,并以未转染组为对照 ,Westernblot分析目的基因的表达 ,噻唑蓝比色法 (MTT)检测细胞活力 ,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　westernblot示pBP PTEN HA和 pBP PTENG 12 9R HA转染组有HA的表达 ,并分别有PTEN的过表达和PTENG 12 9R的表达 ;MTT示pBP PTEN HA转染组活细胞数较其他各组均低 (pBP PTEN HA组 0 .6 787± 0 .0 785 ;pBP PTENG 12 9R HA组 0 .9847± 0 .10 0 2 ;pBP组1.0 987± 0 .14 80 ;对照组 1.2 0 40± 0 .15 31,P <0 .0 5 ) ,流式细胞术则显示其凋亡率较其他各组明显增高 ( pBP PTEN HA组 11.6 8% ;pBP PTENG 12 9R HA组 4.45 % ;pBP组 3 .5 1% ;对照组 2 .2 7%。P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论　PTEN基因转染可抑制胰腺癌细胞体外生长 ,而这种抑制作用有赖其磷酸酯酶活性并与其促发肿瘤细胞凋亡有关。     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

目的 建立吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株SW1990/GZ,并探讨SW1990/GZ和胰腺癌肿瘤干细胞的相关性.方法 应用间歇浓度梯度倍增法建立吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株SW1990/GZ;倒置显微镜下观察细胞形态;MTT法计算耐药指数(RI);荧光定量PCR检测ABCB1、ABCC1及ABCG2基因的表达水平;裸鼠皮下种植瘤试验观察SW1990和SW1990/GZ的成瘤能力;流式细胞仪通过侧群细胞(SP)法和表面特异抗原标记法(CIM4+CD24+)检测肿瘤干细胞含量.结果 在形态学上,SW1990/GZ较SW1990发生明显改变;SW1990/GZ的耐药指数是亲代SW1990的77.2倍;与亲代SW1990相比,耐药株SW1990/GZ中ABCB1、ABCC1及ABCG2的表达水平明显增高(P<0.01),裸鼠皮下成瘤能力增强(P<0.01);耐药株SW1990/GZ中SP细胞比例为(11.0±1.0)%,亲代SW1990中SP细胞比例为(4.6±0.9)%,CD44+CD24+细胞在两者中的比例分别为(8.7±0.8)%和(1.1±0.4)%(P<0.01).结论 吉西他滨耐药胰腺癌细胞株SW1990/GZ能高效富集胰腺癌肿瘤干细胞,CD44与胰腺癌获得性耐药关系密切,可能为克服胰腺癌获得性耐药提供新的治疗靶点.     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

Objectives To establish a gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/ GZ,and to explore the relationship between drug-resistant cell line SW1990/GZ and pancreatic cancer stem cell. Methods Gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/GZ was obtained by treating parental cell line SW1990 in vitro with increasing dosage of gemcitabine in culture medium intermittently for 24 weeks. Stable cultures were obtained which were 77. 2-fold increased in resistance relative to parental cells. Gene expressions of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP were determined by real-time PCR. Tumorigenic potential was performed by nude mice xenograft transplant experiments. Side population analysis and CD24CD44 positive cells explore were determined by flow cytometry to examine cancer stem cell proportion. Results Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ underwent obvious morphological and functional changes. Compared with the parental cell line,SW1990/GZ cell was small and turned into round shape. SW1990/GZ had a higher gene expression level of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP than SW1990(P <0. 01). Nude mice xenograft transplant experiments showed that only 1 x 105 SW1990/GZ cells were sufficient for tumor formation, whereas an injection of 1 x 105 SW1990 cells did not initiate tumors. Flow cytometry analysis showed that SP proportion in SW1990/GZ was (11.0±1.0)%, whereas in parental SW1990 it was ( 4. 6 ± 0. 9 ) % , CD44CD24 positive cells was (8. 73±0. 81) % in SW1990/GZ, whereas (1.1±0. 4)% in SW1990. Conclusions Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ has a higher proportion of pancreatic cancer stem cells compared to its parental cell line SW1990. CD44 is mainly responsible for acquired drug resistance,which can be a potential target to overcome acquired drug resistance in pancreatic cancer.     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

Objectives To establish a gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/ GZ,and to explore the relationship between drug-resistant cell line SW1990/GZ and pancreatic cancer stem cell. Methods Gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/GZ was obtained by treating parental cell line SW1990 in vitro with increasing dosage of gemcitabine in culture medium intermittently for 24 weeks. Stable cultures were obtained which were 77. 2-fold increased in resistance relative to parental cells. Gene expressions of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP were determined by real-time PCR. Tumorigenic potential was performed by nude mice xenograft transplant experiments. Side population analysis and CD24CD44 positive cells explore were determined by flow cytometry to examine cancer stem cell proportion. Results Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ underwent obvious morphological and functional changes. Compared with the parental cell line,SW1990/GZ cell was small and turned into round shape. SW1990/GZ had a higher gene expression level of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP than SW1990(P <0. 01). Nude mice xenograft transplant experiments showed that only 1 x 105 SW1990/GZ cells were sufficient for tumor formation, whereas an injection of 1 x 105 SW1990 cells did not initiate tumors. Flow cytometry analysis showed that SP proportion in SW1990/GZ was (11.0±1.0)%, whereas in parental SW1990 it was ( 4. 6 ± 0. 9 ) % , CD44CD24 positive cells was (8. 73±0. 81) % in SW1990/GZ, whereas (1.1±0. 4)% in SW1990. Conclusions Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ has a higher proportion of pancreatic cancer stem cells compared to its parental cell line SW1990. CD44 is mainly responsible for acquired drug resistance,which can be a potential target to overcome acquired drug resistance in pancreatic cancer.     

小干扰RNA特异性沉默c-myc基因对人胰腺癌SW1990细胞生物学影响

目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默c-myc基因的表达对人胰腺癌细胞株SW1990细胞生物学影响.方法 用siRNA沉默胰腺癌SW1990细胞中c-myc基因,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot技术检测c-myc mRNA及蛋白的表达量;噻唑蓝(MTT)法检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞增殖的影响;膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测沉默c-myc基因细胞凋亡水平;Transwell细胞迁移实验检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞迁移能力的影响.结果 靶向c-myc的特异性siRNA可以高效抑制人胰腺癌SW1990细胞c-myc基因表达,在mRNA水平(0.263±0.048)较转染对照质粒组(0.970±0.012)明显降低,c-myc蛋白质表达量及细胞增值率均较转染对照质粒组明显降低;转染后48 h c-myc siRNA组细胞凋亡率为(19.90±2.09)％,明显高于siRNA阴性对照组(4.93±0.25)％和空白对照组(4.40±0.34)％;Transwell实验结果示细胞穿膜数c-myc siRNA组[(34.3±1.2)个]较siRNA-NC组[(68.3±5.8)个]和空白组[(72.3±1.2)个]均明显降低.结论 c-myc siRNA能够显著抑制c-myc基因在人胰腺癌SW1990细胞中的表达,降低细胞的增殖和迁移能力,促进细胞的凋亡.     

生长激素对胰腺癌细胞株增殖活性的调控

目的探讨生长激素对胰腺癌细胞株Bxpc-3增殖活性的影响。方法MTT法检测生长激素对胰腺癌细胞株Bxpc-3增殖活性,Tunel法标记凋亡阳性细胞、免疫组化法标记增殖细胞,激光共聚焦显微镜计数免疫荧光双标Tunel阳性细胞和增殖细胞。结果10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L浓度的生长激素在第2天明显的抑制胰腺癌细胞生长,伴随作用时间的延长这种抑制作用逐渐减轻,且出现了加速胰腺癌细胞生长的作用,第4天、第5天胰腺癌细胞的生长同正常对照组相比有显著差异(P<0.01)。结论本实验研究从细胞学的角度证实生长激素在开始阶段具有抑制胰腺癌细胞生长的作用,但是这种作用伴随时间的延长逐渐消失,且出现加速了肿瘤细胞的生长的现象,为临床肿瘤病人应用生长激素提供了一定的理论依据。     

葡萄糖神经酰胺合成酶基因在人胰腺癌细胞SW1990及其耐药亚株中的表达和意义

目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase,GCS）基因在人胰腺癌细胞SW1990及其耐药亚株中的表达和意义。方法体外培养人胰腺癌细胞SW1990和其耐药亚株SW1990／FU、SW1990／ADM、SW1990／GEM,以细胞活性测定（CCK-8法）检测耐药亚株的耐药指数,相对定量荧光实时PCR（RT—PCR）法检测GCS mRNA的表达,免疫印迹法检测GCS蛋白表达水平。结果与亲本株相比,SW1990／FU、SW1990／ADM、SW1990／GEM的耐药指数分别为339．7、11．9、56．6。RT—PCR和免疫印迹检测结果显示亲本株和耐药亚株均有GCS mRNA和蛋白的表达,GCS mRNA在3株耐药亚株中的表达均比亲本株有增高趋势,且SW1990／ADM、SW1990／GEM的GCS蛋白表达水平较亲本株升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GCS基因在人胰腺癌细胞株SW1990和其3株耐药亚株中表达阳性,GCS蛋白在SW1990／ADM、SW1990／GEM中呈高表达,表明GCS可能参与胰腺癌耐药株细胞对ADM、GEM的耐药。     

重组腺病毒介导的人内皮抑素基因在SW1990细胞中的表达

目的应用AdEasy载体系统构建含人内皮抑素（hEndostatin）的重组腺病毒载体，观察感染后hEndostatin在SWI1990中的表达和生物学活性。方法将hEndostatin克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183，获得腺病毒重组质粒，腺病毒重组质粒转染293细胞进行包装，获取hEndostatin重组腺病毒。同法构建重组腺病毒Ad-LaeZ，转染SW1990细胞，确定重组腺病毒的最适感染复数（MOI），hEndostatin重组腺病毒以最适MOI转染SW1990细胞，观察转染后1～7d hEndostatin的表达及生物学活性。结果成功构建了hEndostatin重组腺病毒，该腺病毒可高效介导hEndostatin在SW1990细胞中的表达，MOI=100为最适感染复数；转染后1～7d，上清中hEndostatin蛋白的浓度分别为（1．6±0．3）、（8．5±0．6）、（54．3±4．4）、（256．9±25．8）、（596．6±38．7）、（321．7±21．2）、（132．6±7．6）μg/L；表达产物具有生物学活性，显著抑制血管内皮细胞的增殖、迁移（P〈0．01）。结论重组腺病毒可介导hEndostatin基因在SW1990细胞中的有效表达。     

胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药机制的研究

目的探讨胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的可能机制。方法以体外诱导建立的人胰腺癌耐药株SW1990/Fu为模型,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学(ICC)方法测定耐药相关基因在SW1990/Fu产生获得性耐药前后的变化;罗丹明外排实验检测SW1990/Fu细胞膜上的P-gp泵功能。结果RT-PCR结果显示多药耐药基因1(MDR)和肺耐药相关蛋白基因(LRP)在SW1990/Fu中的表达率分别为0.97±0.23和0.95±0.34,而在SW1990中的表达率仅分别为0.67±0.19和0.53±0.16,两者差异有统计学意义(P<0.05);多药耐药相关基因(MRP)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)在2株细胞中的表达水平无明显变化。ICC与RT-PCR的结果一致。在罗丹明浓度为0.5mg/L时,只检测到(11.4±2.5)%的SW1990/Fu细胞内有荧光染科积蓄,在亲本细胞中罗丹明阳性细胞为(57.9±5.4)%,而在P-gp阴性的HL60细胞中,(99.5±3.3)%的细胞内存在罗丹明的积聚。当罗丹明浓度增加时,其在SW1990/Fu细胞内的积聚也明显增加。结论耐药基因MDR1和LRP表达增强可能是胰腺癌耐药细胞株SW1990/Fu产生获得性耐药的主要机制。