宫颈鳞癌组织中核因子-κBp65和p53蛋白的表达

目的 探讨NF-κBp65和p53蛋白在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织和正常宫颈组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组织化学技术（S-P法）,分别检测38例宫颈鳞癌组织、21例CIN组织和12例正常宫颈组织中NF-κBp65和p53蛋白的表达。结果 NF-κBp65和p53蛋白在宫颈鳞癌中的阳性表达率均明显高于CIN组织和正常宫颈组织,差异均有显著性（P〈0．01,P〈0．05）。结论 NF-κBp65和p53蛋白在宫颈鳞癌的发病过程中起着重要的作用。     

慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB的表达变化

目的探讨尿毒症时主动脉局部炎症信号NF-κB表达变化。方法采用单肾切除、对侧肾动脉部分结扎法建立慢性肾衰竭模型，RT-PCR检测NF-κB p65亚基、I-κB mRNA表达水平，免疫组织化学检测p65亚基蛋白表达，凝胶迁移率法测定NF-κB活性，并用图像分析定量。结果与正常大鼠比较，慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB p65亚基mRNA表达水平显著升高（P〈0．01），而I-κB mRNA表达水平显著降低（P〈0．01），NF-κB p65亚基蛋白表达和活性也显著增加（P〈0．01），并随病程延长而进一步上升。蛋白酶体抑制剂MG-132可明显抑制慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB组分表达和活性升高。结论慢性肾衰竭大鼠主动脉NF-κB炎症信号通路存在显著活化。     

替米沙坦对脂多糖诱导3T3-L1脂肪细胞炎症通路的影响

目的 研究替米沙坦对脂多糖诱导3T1-L1脂肪细胞炎症通路的影响,探讨替米沙坦的抗炎机制.方法将3T3-L1脂肪细胞诱导至90%成熟,按随机数字表法分为6组:对照组、LPS组、LPS+替米沙坦(0.01、0.1、1和10μg/ml)组(n=18),向对照组细胞中加DMSO,LPS+替米沙坦组细胞中加入不同浓度替米沙坦,孵育2h后,LPS组和LPS+替米沙坦组再加入脂多糖(1 μg/ml),孵育1h,Western免疫印记法比较各组核蛋白NF-κBp65、总蛋白p-IκBα、IκBα、p-ERK1/2、ERK1/2、P-p38MAPK、p38 MAPK的表达水平.结果 脂多糖刺激后IκBα磷酸化蛋白表达增强(P＜0.05),细胞核内NF-κBp65蛋白表达增多(P＜0.05),MAPK通路相关蛋白ERK1/2磷酸化和p38MAPK磷酸化水平明显增强(P＜0.05),替米沙坦可抑制IκBα磷酸化和NF-κBp65核转位,p-IκBα蛋白表达和核蛋白NF-κBp65表达均降低,大剂量替米沙坦(10 μg/ml)作用时该作用明显(P＜0.05).替米沙坦干预后,p-ERK1/2和p-p38MAPK蛋白表达也受到明显抑制(P＜0.05),大剂量(10μg/ml)时作用明显(P＜0.05).结论 在3T3-L1脂肪细胞中,替米沙坦可以抑制NF-κB通路中IκBα蛋白磷酸化、NF-κBp65蛋白核转位以及MAPK通路中ERK1/2蛋白和p38MAPK蛋白的磷酸化,从而发挥抗炎作用.     

NF—κBp 65和HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨宫颈鳞癌组织中NF-κBp65、HIF-1α的蛋白表达水平及临床病理意义。方法采用免疫组织化学（PowerVision TM）二步法对56例宫颈鳞癌和25例正常宫颈组织进行NF—κBp65、HIF-1α蛋白检测。结果宫颈鳞癌组织NF—κBp65、HIF-1α的表达均高于对照组正常宫颈组织（P〈0．01）。NF—κBp65的蛋白表达与患者的病理分级及有无淋巴转移存在相关性（P〈0．05）；HIF-1α的蛋白表达与患者的临床分期及有无淋巴转移存在相关性（P〈0．05）。NF—κBp65和HIF-1α的蛋白表达呈正相关（r=0．439，P〈0．01）。结论联合检测NF—κBp65和HIF-1α蛋白表达对诊断宫颈鳞癌的意义优于单纯检测NF—κBp65或HIF-1α蛋白表达。     

核因子-κBp65和乙酰肝素酶在大肠癌组织中的表达及其相关性分析

目的探讨核因子-κBp65（NF-κBp65）和乙酰肝素酶（HPA）在大肠癌浸润、转移中的作用及其相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测60例大肠癌、23例大肠管状腺瘤及26例正常肠黏膜组织中NF-κBp65和HPA的表达情况。结果大肠癌、大肠管状腺瘤和正常肠黏膜组织中NF-κBp65和HPA的阳性率间差别有统计学意义（P〈0．01），且大肠癌、大肠管状腺瘤与正常肠黏膜NF-κBp65和HPA阳性率间两两比较差别均有统计学意义（P〈0．017）；不同浸润深度组，大肠癌组织NF-κBp65和HPA的阳性率间差别有统计学意义（P〈0．017）；淋巴结转移组和无淋巴结转移组癌组织NF-κBp65和HPA阳性率间差别有统计学意义（P〈0．05）。NF-κBp65和HPA在大肠癌中的表达呈正相关（r=0．49，P〈0．01）。结论NF-κBp65和HPA是大肠癌浸润、转移的重要因子，NF-κBp65可能通过上调HPA的表达来促进大肠癌的浸润、转移。     

p38 MAPK通路对电针经A2AR抑制CIA大鼠关节骨侵蚀的影响

目的：观察电针“足三里”、“三阴交”后通过腺苷A2A受体（A2AR）作用于p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路对抑制胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠关节骨侵蚀的影响,探讨电针治疗类风湿关节炎（RA）的抗炎效应和作用机制。方法：SD大鼠随机分为生理组模型组,药物组和电针组,每组8只。采用胎牛II型胶原弗氏佐剂混合液两次注射免疫复制CIA大鼠模型。电针组取大鼠双侧“足三里”、“三阴交”,每天20min,连续14d。药物组每隔7d腹腔注射甲氨蝶呤2mg/kg,连续14d。采用CT影像学检查足踝关节病理学变化;HE、番红O-固绿及TRAP染色分别观察膝关节滑膜、软骨及破骨细胞病理组织学变化;蛋白质印迹法（WB）测定膝关节滑膜组织中A2AR、p38、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（P-p38）、核转录因子κB（NF-κB）、T 细胞核因子 c1（NFATc1）蛋白表达;ELISA法测定外周血清IL-1β含量。结果：与生理组对比,模型组后足骨密度下降空间结构紊乱,膝关节软骨明显受损,滑膜细胞大量增生,软骨蛋白多糖明显丢失;阳性破骨细胞数目显著增加（P＜0.01）;膝关节滑膜组织A2AR,p38,P-p38,NF-κB,NFATc1表达均显著上调（P＜0.01）;外周血清中IL-1β的含量明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,电针组和药物组后足整体结构、膝关节滑膜及软骨破坏有明显改善;阳性破骨细胞数目减少（P＜0.01）;A2AR表达上调（P＜0.01）,p38,P-p38,NF-κB,NFATc1表达下调（P＜0.01）;血清中IL-1β的含量大量减少（P＜0.01）。与电针组比较,药物组的阳性破骨细胞平均数目减少（P＜0.05）;A2AR蛋白表达增加（P＜0.01）,NF-κB,NFATc1蛋白表达减少（P＜0.05）,总p38表达差异不明显（P＞0.05）,P-p38表达明显下调（P＜0.05）。结论：电针“足三里”、“三阴交” 可以改善CIA大鼠关节骨侵蚀损害,其作用机制可能与激活A2AR抑制破骨细胞（OC）生成的p38 MAPK通路有关,且在一定程度上与甲氨蝶呤治疗趋于相似。     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

宫颈癌组织Raf激酶抑制蛋白和NF-κB p65表达及其临床意义

目的研究宫颈癌组织中Raf激酶抑制蛋白（RKIP）和核因子xBp65（NF-κBp65）的表达,探讨二者表达之间的相关性及其与宫颈癌各临床病理因素之间的关系。方法用免疫组织化学方法检测69例宫颈癌组织、37例宫颈上皮内瘤变组织和18例正常宫颈组织的RKIP和NF-κBp65表达,并分析其与宫颈癌临床病理学特征的关系。结果宫颈癌组织中RKIP的表达低于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织,而NF-κBp65的表达高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织,差异有统计学意义（Hc=45．124、38．107,Z=4．309～5．159,P〈O．01）;RKIP和NF—κBp65在宫颈癌组织中的表达均与临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤分化程度有关（χ^2=5．150～11．917,P〈0．05）。宫颈癌组织中RKIP与NF-κBp65的表达呈显著负相关（r=-0．464,P〈O．01）。结论RKIP表达的减少或缺失与宫颈癌的发生、发展密切相关,RKIP表达的减少或缺失可能通过上调NF—κBp65的表达促进宫颈癌的侵袭和转移。     

尿激酶联合黄芪对环孢素A大鼠慢性肾纤维化组织中核因子-κB表达的影响及意义

目的探讨尿激酶（uPA）联合黄芪（AM）对环孢素A（CsA）大鼠慢性肾纤维化组织中核因子-κB（NF-κB）表达的影响及意义。方法采用1：7服灌胃CsA（25mg·kg^-1·d^-1）制备大鼠慢性肾纤维化模型,将大鼠随机分为5组：对照组、模型组、uPA组、AM组及联合治疗组,4周末取标本。HE染色观察肾脏组织结构变化;采用试剂盒测定肾组织羟脯氨酸的含量;应用免疫荧光观察P-p65的表达及定位;采用Western印迹法检测大鼠肾组织P—065、p65、IκBα和IκBβ的蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组肾小管损伤程度加重,羟脯氨酸含量增加,肾组织中NF-κB活化显著增强,p65由细胞质转移至细胞核,P-p65表达显著上调,IκBα降解明显增加（P均〈0．05）。与模型组相比,各治疗组肾小管损伤程度减轻,羟脯氨酸含量减少,P-p65表达被显著抑制,IκBα降解减少（P均〈0．05）,且联合组的治疗效果更显著。IκBβ的蛋白表达水平各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NF-κB信号通路介导了肾脏纤维化的发生发展,uPA与AM能减轻肾脏纤维化,这可能与其能抑制NF-κB通路激活有关。     

p16INK4A、NF-κB p65在宫颈鳞癌组织中的表达及临床病理学意义

目的：探讨宫颈鳞癌组织中p16INK4A,NF-κB p65的表达及临床病理学意义。方法：采用免疫组化PV-9000法检测p16INK4A,NF-κB p65在30例宫颈鳞状细胞癌（SCC）、30例宫颈上皮内瘤病变（CIN）和30例慢性宫颈炎（对照组）中的表达。结果：在慢性宫颈炎组织、CIN和宫颈鳞癌中p16INK4A的阳性率分别为26．66％、50．00％及93．33％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。NF-κB p65的阳性率分别为23．33％、56．66％及86．66％,其表达差异有统计学意义（P〈0．01）。p16INK4A、NF-κB p65在不同临床分期,病理分级及淋巴结是否转移中的阳性表达率差异均无统计学意义（P〉0．05）。p16INK4A表达与是否绝经有关,在绝经组中表达高于未绝经组（P〈0．01）。结论：p16INK4A、NF-κB p65的表达在宫颈癌的发生、发展中起重要作用,p16INK4A和NF-κB p65有可能成为预测宫颈鳞癌发生的生物学检测指标。     

基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1 mRNA及蛋白在骨性关节炎中的表达

目的：探讨骨性关节炎（OA）中金属蛋白酶-13（MMP-13）,转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA和蛋白表达的意义.方法：采用免疫组织化学技术,对60例OA病例及20例正常对照组进行了MMP-13及TGF-β1蛋白表达的检测;通过原位杂交技术,对30例OA及10例正常对照进行了MMP-13及TGF-β1在mRNA水平表达的检测.结果：MMP-13mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度（IOD）值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达有显著正相关性（P〈0.01）;TGF-β1mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达亦有显著正相关性（P〈0.01）;MMP-13mRNA,TGF-β1mRNA及相应蛋白在OA中的表达均呈负相关（P〈0.05或P〈0.01）.结论：OA中TGF-β1高表达通过下调关节软骨与滑膜细胞中MMP-13的表达,对OA关节软骨起保护作用.     

臭氧暴露对COPD大鼠气道炎症及肺组织NF-κB表达的影响

目的研究环境因素中臭氧与慢性阻塞性肺病发病率升高之间的关系;探讨臭氧暴露对COPD个体气道炎症及肺组织NF-κBP65蛋白表达的影响。方法雄性sD大鼠30只,随机分为三组,对照组,COPD模型组,模型叠加臭氧暴露组,每组10只。每日熏吸香烟和两次气管内滴人200ug脂多糖建立大鼠COPD模型,模型加臭氧暴露组在此基础上进行1次急性臭氧暴露,暴露时间为4h。观察记录各组大鼠一般情况,HE染色检测大鼠肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液行瑞士染色,显微镜下进行炎症细胞分类计数,免疫组化检测肺组织NF-κBP65蛋白表达量。结果模型组大鼠的肺组织损伤及病理变化总分显著高于对照组大鼠（P〈O．01）,臭氧组总分显著高于模型组（P〈O．01）;模型组大鼠BAⅡ（支气管肺泡灌洗液）中炎性细胞总数高于对照组,臭氧组高于模型组;模型组大鼠肺组织NF-κB P65蛋白表达量显著高于对照组（P〈0．01）,臭氧组则显著高于模型组（P〈0．05）。结论臭氧暴露可显著加重COPD气道炎症及NF-κB在肺组织中的表达。     

MMP-13与IL-6在骨性关节炎相关性表达的研究

①目的探讨MMP-13与IL-6在骨性关节炎患者的相关性表达。②方法采用免疫组织化学技术检测60例OA患者及20例正常对照组关节软骨与滑膜MMP-13、IL-6的表达及二者在OA中表达的相关性。③结果MMP-13蛋白在OA组阳性表达的IOD值明显高于正常对照组(P<0.01),IL-6蛋白在OA组阳性表达的IOD值高于正常对照组(P<0.05);二者在OA中的表达呈正相关(r=0.827,P<0.01)。④结论MMP-13与骨关节炎发生发展有密切关系,OA关节软骨细胞与滑膜细胞中高水平的MMP-13,可能是通过IL-6等一系列炎性细胞因子激活,并上调。     

绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤细胞p38MAPK和MMP-1的影响

目的：研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤p38促分裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的影响。方法：制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清,将人角质形成细胞（HaCaT）分为4组：空白对照组（A）、UVB模型组（B）、空白血清组（C）和含药血清组（D）;将成纤维细胞（HSF）分为6组：空白对照组（Ⅰ）、UVA模型组（Ⅱ）、HaCaT培养上清液A组（Ⅲ）、HaCaT培养上清液B组（Ⅳ）、HaCaT培养上清液C组（Ⅴ）、HaCaT培养上清液D组（Ⅵ）。对HaCaT细胞B、C、D组和HSF细胞Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别用UVB和UVA照射,制备光老化细胞模型。将4组HaCaT细胞培养上清液分别加入HSF细胞的Ⅲ~Ⅵ组。采用RT-PCR和Western blotting方法检测Ⅰ~Ⅵ组细胞p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白的表达水平。结果：与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达水平显著上调（P〈0.01）;与Ⅱ组比较,Ⅳ组p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白表达均上调（P〈0.01）,而Ⅲ组变化不显著;与Ⅳ组比较,Ⅵ组p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白表达均显著下调（P〈0.01）,而Ⅴ组变化不显著。结论：光老化HaCaT细胞分泌细胞因子促进光老化HSF细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达。绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞培养上清液作用的光老化HSF细胞中MAPK信号转导通路中相关基因和蛋白的表达具有抑制作用。     

化浊祛瘀汤治疗酒精性肝病的实验研究

目的探讨化浊祛瘀汤对酒精性肝病大鼠影响的机理。方法通过乙醇梯度灌胃的方法建立酒精性肝病（ALD）大鼠模型,并使用化浊祛瘀汤给大鼠灌胃,观察化浊祛瘀汤对酒精性肝病肝损伤大鼠NF—κB表达,NF—α、CAT等水平的影响,并进行HE染色,观察肝脏组织基本病理改变。结果模型组大鼠NF—κB表达明显增强（P〈0．01）,TNF—α含量显著增加（P〈0．01）,CAT含量明显降低（P〈0．01）;化浊祛瘀汤治疗组NF—κB表达明显减弱,TNF—α含量明显降低（P〈0．01）,CAT含量明显升高（P〈0．01）;中药高剂量组与西药组比较有显著性差异（P〈0．01）。结论化浊祛瘀方药能够抑制酒精性肝病时NF—κB、TNF—α的表达,改善ALD脂质过氧化过程。     

核因子-κB对糖尿病大鼠肾组织P-选择素表达的影响

目的研究糖尿病大鼠肾组织核因子-κB（NF-κB）和P-选择素（P-selectin）的表达,以及NF-κB抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯（PDTC）对其表达的影响。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为三组：正常对照组（NC组）、糖尿病组（DM组）、吡咯烷二硫基甲酸酯干预组（DP组）,每组10只。喂养8周末检测血糖、糖化血红蛋白、肾重指数及尿白蛋白排泄率。采用免疫组织化学染色技术检测肾组织P—selectin及NF-κB表达。结果8周末,DM组大鼠肾组织中NF-κB和P—selectin表达明显高于NC组（P〈0．01）,DP组的表达显著低于DM组,高于NC组（P〈0．01）;P—selectin表达与NF-κB呈正相关（r=0．954,P〈0．01）。结论NF-κB及P—selectin表达在糖尿病大鼠肾组织中明显增加,抑制NF-κB表达可减少P—selectin的表达。     

骨关节炎软骨细胞中骨桥蛋白的表达调控研究

目的检测骨关节炎（0A）患者骨桥蛋白（0PN）的表达,探讨Wnt／β-catenin信号通路对OPN的表达调控作用。方法分离OA患者（骨关节炎组12例）的软骨细胞,并取非OA患者软骨细胞作为正常对照（8例）,荧光定量PCR检测OPN基因的表达;基因转染双链siRNA干扰β-catenin基因的表达;Western blot实验检测β-catenin和OPN蛋白的表达改变。结果骨关节炎组和正常对照组软骨细胞OPN的mRNA表达量分别为（0．642±0．155）和（0．226±0．077）,两组比较差异有统计学意义（t=6．74,P〈0．01）。特异性靶向双链siRNA可以下调伊catenin的表达,Western blot检测显示下调β-catenin蛋白的表达后软骨细胞OPN蛋白的表达也出现了相应的下调。结论骨关节炎患者中存在骨桥蛋白的表达上调,骨桥蛋白的上调受到Wnt/β-catcnin通路的调控。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑NF-κB免疫反应性影响及行为学观测

目的观察和探讨灵芝孢子粉对戊四氮(PTZ)致痫大鼠脑核转录因子-κB(NF-κB)免疫反应性的影响并进行行为学观测。方法用亚惊厥剂量的PTZ复制大鼠慢性癫痫模型,用药组以灵芝孢子粉灌胃,记录癫痫发作的潜伏期及持续时间,采用免疫组织化学法检测脑NF-κB/P65的蛋白表达。结果大鼠海马和皮质区每高倍视野(×400)下NF-κB/65蛋白表达模型组明显高于对照组(P<0.01);在造模第17、21、25天时用药组较模型组癫痫发作的潜伏期有所延长(P<0.05或P<0.01),海马和皮质区NF-κB/P65蛋白表达用药组低于模型组(P<0.01或P<0.05)。结论NF-κB可能参与了PTZ致痫的发生发展过程,灵芝孢子粉能明显抑制NF-κB蛋白表达,抑制免疫炎症反应,降低神经系统兴奋性,对神经细胞具有保护作用。     

NF-κB、COX-2在子宫腺肌病中的表达及意义

目的 探讨核因子κB（NF-κB）、环氧化酶-2（COX-2）在子宫腺肌病中的表达及意义.方法 应用免疫组化法检测NF-κB、COX-2在正常子宫内膜（对照组）、子宫腺肌病在位子宫内膜（在位内膜组）、异位子宫内膜（异位内膜组）中的表达.结果 NF-κB在子宫腺肌病异位内膜组和在位内膜组的表达均明显高于对照组（P＜0.05）,异位内膜组的表达明显高于在位内膜组（P＜0.05）;COX-2在子宫腺肌病异位内膜组和在位内膜组的表达均明显高于对照组（P＜0.05）,异位内膜组的表达明显高于在位内膜组（P＜0.05）.NF-κB、COX-2在子宫腺肌病异位内膜中的表达呈正相关（r=0.786,P＜0.05）.结论 NF-κB、COX-2在子宫腺肌病的发生发展过程中可能发挥重要作用.