VEGF165 RNA干涉诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞VEGF165基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:设计针对VEGF165基因的小干扰RNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA(small interfering RNA),采用lipofectamine2000转染人宫颈癌HeLa细胞。通过Hoechst33258染色、流式细胞术、RT-PCR检测人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡情况。在体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将VEGF siRNA直接注入瘤体,观察siRNA对肿瘤生长的影响,蛋白印迹试验检测VEGF siRNA在体内条件下对VEGF、bcl-2蛋白表达的影响。结果:所设计的两个siRNA均能有效诱导细胞凋亡产生凋亡小体,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGF165和bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达也受到有效抑制,明显减少。结论:针对人VEGF165基因体外转录合成的siRNA在体内外均可诱导HeLa细胞发生凋亡。     

VEGF（165） RNA干涉诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的：利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞VEGF165基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法：设计针对VEGF165基因的小干扰RNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA（small interfering RNA）,采用lipofectamine2000转染人宫颈癌HeLa细胞。通过Hoechst33258染色、流式细胞术、RT-PCR检测人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡情况。在体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将VEGF siRNA直接注入瘤体,观察siRNA对肿瘤生长的影响,蛋白印迹试验检测VEGF siRNA在体内条件下对VEGF、bcl-2蛋白表达的影响。结果：所设计的两个siRNA均能有效诱导细胞凋亡产生凋亡小体,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGF165和bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达也受到有效抑制,明显减少。结论：针对人VEGF165基因体外转录合成的siRNA在体内外均可诱导HeLa细胞发生凋亡。     

survivin基因RNA干涉对宫颈癌细胞凋亡和放射敏感性的影响

目的：观察survivin基因siRNA干涉对宫颈癌细胞HeLa凋亡和放射敏感性的影响。方法：通过脂质体介导将含人survivin基因siRNA的重组真核表达质粒pSilencer2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,激酶活性检测法测定半胱氨蛋白水解酶-3(caspase-3)活性变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,平板克隆形成实验、多靶单击模型拟合细胞存活曲线观察细胞放射敏感性变化。结果：G418筛选形成稳定转染阳性克隆,建立了3组稳定转染细胞系：HeLa-s2(转染重组质粒pSileneer2.1-s2)、HeLa-NC(转染阴性对照质粒pSi- lencer2.1-NC)和HeLa-U6 neo(转染空载质粒pSileneer2.1-U6 neo)。经与HeLa-NC、HeLa-U6 neo和未转染HeLa细胞比较,HeLa-s2 survivin mRNA和蛋白表达明显下降,与HeLa细胞相比,表达抑制率分别为：62.8%和60.1%；caspase-3激酶活性增强,D_(405)达1.26±0.04(P＜0.05)；细胞凋亡率为：(29.2±1.4)%,明显升高(P＜0.05)；同一剂量X线照射下,平板克隆形成率显著降低(P＜0.05)；细胞存活曲线显示：D_0、D_q值显著下降,分别为：3.15、1.21(P＜0.05),放射增敏比分别为：2.01 (D_0值比)、1.77(D_q值比)。结论：survivin基因siRNA干涉可通过阻抑HeLa细胞中survivin表达,增强caspase-3激酶活性,诱导细胞凋亡,并显著提高细胞的放射敏感性。     

VEGF165 RNA干涉诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞VEGF165基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用.方法设计针对VEGF165基因的小干扰RNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA(small interfering RNA),采用lipofectamine2000转染人宫颈癌HeLa细胞.通过Hoechst33258染色、流式细胞术、RT-PCR检测人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡情况.在体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将VEGF siRNA直接注入瘤体,观察siRNA对肿瘤生长的影响,蛋白印迹试验检测VEGF siRNA在体内条件下对VEGF、bcl-2蛋白表达的影响.结果所设计的两个siRNA均能有效诱导细胞凋亡产生凋亡小体,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGF165和bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达也受到有效抑制,明显减少.结论针对人VEGF165基因体外转录合成的siRNA在体内外均可诱导HeLa细胞发生凋亡.     

顺铂诱导人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞的凋亡

背景与目的:近年的研究表明,诱导细胞凋亡是多种作用于核酸代谢不同环节的化疗药物抗肿瘤的重要机制。但顺铂杀灭人小细胞肺癌(SCLC)细胞的药物效应除了损伤其DNA外,诱导该类恶性肿瘤细胞凋亡是否是其杀灭细胞的重要机制尚无相应研究。基于此,本研究旨在探讨顺铂诱导人SCLC细胞系H446细胞凋亡的机制及其在SCLC化疗中的作用。方法:分别采用形态学观察、流式细胞仪分析技术和原位DNA断裂点的末端标记法,检测顺铂诱导H446细胞的凋亡作用。结果:终浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/m l的顺铂均可诱导H446细胞凋亡,且呈浓度依赖性(处理48 h时,其凋亡指数分别为1.47±0.03、8.28±0.54、11.02±1.05、12.74±1.08、27.16±1.15);终浓度为2μg/m l的顺铂在24~72 h持续诱导细胞凋亡且诱导凋亡作用逐渐增强,呈时间依赖性;终浓度为5μg/m l的顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的S期,终浓度<5μg/m l顺铂可阻滞H446细胞于细胞周期的G2期和S期。结论:诱导细胞凋亡可能是顺铂抗肿瘤作用的重要机制。     

Survivin短发夹状RNA对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响

目的:观察survivin基因短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对宫颈癌细胞系HeLa增殖和凋亡的影响。方法:通过脂质体介导的细胞转染技术将含人survivin基因shRNA的重组真核表达质粒pSilenc-er2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、Western blot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,流式细胞仪、Hoechst染色观察细胞凋亡情况。结果:G418筛选34天后出现阳性克隆,与转染阴性对照质粒(HeLa-NC)、空载质粒(HeLa-U6 neo)及未转染(HeLa)细胞比较,转染pSilencer2.1-s2质粒者survivin mRNA和蛋白表达明显下降,表达抑制率分别为:62.8%和60.1%;细胞增殖受到抑制,最高细胞生长抑制率为:(57.8±2.1)%(P<0.05);细胞周期发生显著变化,细胞被阻滞于G0/G1期,占(72.7±3.1)%(P<0.05),G2/M期明显减少,占(5.1±2.9)%(P<0.05);细胞凋亡率为:(29.2±1.4)%,明显升高(P<0.05)。结论:Survivin基因shRNA可通过下调HeLa细胞中survivin的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

加温联合顺铂对HeLa细胞的影响

加温能使肿瘤细胞对药物敏感性增加,减少某些化疗药物的剂量,且在疗效增加的同时又不增加对正常组织的毒性,提高化疗指数。本文试图采用修改的 Hamburger-Salmon 人癌干细胞检测技术——体外双层琼脂法观察加温联合顺铂对HeLa 细胞系及部分人癌新鲜标本集落形成能力的影响,为临床热化疗联合应用提供参考资料。     

hTERT基因反义核酸对顺铂诱导Raji细胞凋亡的影响

目的利用人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义寡核苷酸(ASODN)抑制Raji细胞端粒酶活性后,探讨顺铂对Raji细胞凋亡的影响.方法采用苔盼蓝拒染法观察hTERT ASODN与顺铂联合作用对Raji细胞系生长的影响;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化;琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪分析细胞凋亡.结果hTERT ASODN作用于Raji细胞24 h再加入顺铂,对细胞抑制明显增强(P＜0.05).加入顺铂作用后48 h,细胞出现典型的凋亡形态学改变,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带.凋亡细胞百分率(25.24±1.58)%,与正义寡核苷酸与顺铂联合作用组、单用顺铂作用组比较有显著性差异(P＜0.01).结论hTERT基因反义寡核苷酸能促进顺铂诱导Raji细胞凋亡.     

bcl-x_S增加鼻咽癌细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 :利用bcl xS基因降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,促进化疗药物顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,探索提高顺铂疗效的新途径。方法 :利用脂质体LipofectAmine将含有人bcl xS基因的重组真核表达质粒pcDNA3xS导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE 2Z ,G4 18筛选培养后 ,经Westernblot检测bcl xS的表达。以不含有bcl xS基因的pcDNA3质粒转染CNE 2Z作为对照细胞(CNE 2Zneo)。顺铂处理 2种细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪及荧光染色检测凋亡细胞百分比。结果 :Westernblot检测证实获得稳定表达bcl xS的细胞 (CNE 2ZxS) ,与对照细胞相比 ,其对顺铂的IC50 值明显降低 ,经相同剂量顺铂处理后 ,流式细胞仪及荧光染色检测 ,结果表明 ,其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 :bcl xS能显著增加鼻咽癌CNE 2Z细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性     

NDRG2 siRNA对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗敏感性影响的研究

目的：探讨人源N-myc下游调节基因2（N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2）小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）对宫颈癌Hela细胞的化疗增敏作用。方法：利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA借助脂质体转染宫颈癌Hela细胞。采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测NDRG2mRNA和蛋白在宫颈癌Hela细胞的表达情况。通过MTT法检测该细胞在顺铂作用下的体外存活率。结果：化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低,增强了顺铂对Hela细胞体外生存的抑制能力。转染Negative-control oligomer的Hela细胞与转染NDRG2siRNA oligomer HSS126269的Hela细胞相比,其存活情况出现明显差异,IC50值分别为（6.69±0.33）和（1.69±0.25）μg/L,差异有统计学意义,t=17.311,P=0.003。结论：抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,具有一定的临床应用前景。     

RNAi双向沉默Survivin和XIAP基因对卵巢癌细胞A2780-cp凋亡及顺铂敏感性影响的观察

目的:运用RNA干扰技术双向沉默卵巢癌耐顺铂细胞株A2780-cp的Survivin和XIAP基因后,观察细胞的凋亡及对顺铂敏感性的影响.方法:通过脂质体介导将化学合成的Survivin-siRNA 和XIAP-soiRNA,共同或单独转染到卵巢癌耐药细胞株A2780-cp中,未转染组作为阴性对照;流式细胞术(FCM)...     

抗凋亡基因survivin与宫颈癌

Survivin基因是近年来发现的一种抗凋亡基因,与人体大多数肿瘤的发生、预后有关.本文综述近年来有关survivin基因的研究进展及其与肿瘤特别是宫颈癌的关系survivin对肿瘤的诊断及治疗方面的作用.     

超声靶向微泡破裂法介导RNA干扰沉默survivin基因对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的:通过超声靶向微泡破裂(ultrasound targeted microbubble destruction ,UTMD)法介导基因转染,观察RNA干扰对宫颈癌HeLa细胞survivin基因的沉默效应和诱导细胞凋亡的作用.方法:构建靶向survivin基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,将其和微泡共同处理后加入HeLa细胞并予以超声辐照,以空白细胞、单纯质粒、单纯超声辐照、质粒+超声辐照和质粒+Lipofectamine转染作为对照;采用荧光显微镜和FCM法评估基因转染效率,同时对超声辐照参数进行优化;应用FCM法和Hoechst染色及DNA ladder分析法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测survivin mRNA水平的变化.结果:经酶切鉴定及测序分析证实重组质粒构建成功.HeLa细胞采用UTMD处理后,基因转染率显著增加(P＜0.01),并在超声强度为1.0 W/cm2、辐照3 min的条件下最为显著(P＜0.01).PT-PCR检测结果显示,质粒与微泡共同作用加超声辐照组的survivin mRNA抑制率为(83.33±2.73)%,均显著高于各对照组(P＜0.01);FCM法检测结果显示,该组细胞的凋亡率同样显著高于各对照组(P＜0.01);Hoechst染色及DNA ladder检测结果显示,只有经脂质体或UTMD转染处理后的细胞中可检测到明显的细胞凋亡形态及凋亡梯带,其余各组均未检测到明显凋亡.结论:UTMD可有效增强表达质粒的转染效率,是一种新的、有应用前景的非病毒基因转移体系.UTMD介导RNA干扰沉默survivin基因可诱导明显的细胞凋亡,为肿瘤基因治疗及研究提供了新的方法.     

siRNA抑制survivin基因周期的影响表达对HeLa细胞

目的设计靶向survivin基因的干涉片段,构建真核表达载体pSUPER／survivin并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨siRNA抑制survivin表达对联合1射线宫颈癌HeLa细胞周期的影响。方法化学合成干涉引物,退火获得survivin基因的干涉片段,连入pSUPER载体并测序。将测序正确的pSUPER／survivin载体转染HeLa细胞株,RT—PCR法和流式细胞术检测HeLa细胞中survivin基因的表达,流式细胞术检测转染联合＇射线照射后各组细胞的细胞周期数据。结果本实验成功的构建了pSUPER／survivin载体。转染pSUPER／survivin的HeLa细胞其survivin基因表达水平明显低于未转染的HeLa细胞及转染空载体pSUPER的HeLa细胞。1射线照射后,转染pSUPER／survivin的HeLa细胞发生了S期细胞比例下降,及G2／M期阻滞。结论成功的构建了pSUPER／survivin载体,siRNA干涉survivin可以作为提高放射敏感性的潜在分子靶点,通过减少S期细胞比例,促进肿瘤细胞凋亡,通过增加G2／M期阻滞增加放射线的杀伤。     

survivin基因的RNA干涉抑制人乳腺癌SKBr-3细胞体外增殖的作用

目的:研究RNA干涉(RNAinterference,RNAi)抑制survivin基因表达后对人乳腺癌SKBr3细胞体外增殖能力的影响。方法:通过RTPCR和间接免疫荧光检测转染survivin靶向的小干涉RNA表达载体pSUPERS1后SKBr3细胞中survivin基因的表达;集落形成实验、MTT比色法检测细胞体外增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期。结果:转染pSUPERS1后,SKBr3细胞中survivin的mRNA和蛋白表达水平明显降低;克隆形成率(38±16.70)%比对照组(90.3±4.04)%显著降低;细胞增殖减慢,主要阻滞于G1期(74.03±8.91)%。结论:RNA干涉沉寂survivin基因表达后明显抑制了人乳腺癌SKBr3细胞的体外增殖能力。     

染料木黄酮和顺铂对耐药卵巢癌细胞SKOV-3中survivin表达的影响

目的：观察不同浓度的染料木黄酮和顺铂对耐药卵巢癌细胞系SKOV-3中survivin表达的影响。方法：采用RT-PCR和免疫细胞化学方法，检测不同浓度顺铂和染料木黄酮作用于SKOV-3细胞后survivin mRNA及蛋白表达的变化。结果：与对照组相比，顺铂组survivin mRNA及蛋白表达增强，染料木黄酮组及联合用药组survivin mRNA及蛋白表达减弱（P〈0．05）。结论：染料木黄酮能够降低SKOV-3细胞中survivin mRNA及蛋白的表达，并抑制顺铂诱导的survivin过高表达。这一作用可能是其增加SKOV-3细胞对顺铂敏感性的重要机制之一。     

survivin与细胞凋亡在肺癌中的研究进展

生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员之一,在肺癌中高表达,具有抑制凋亡功能.细胞凋亡与肺癌的发生发展及预后密切相关.survivin及细胞凋亡与肺癌的关系可能为肺癌的研究治疗提供新思路.

Abstract：

Survivin is one of inhibitors of apoptosis protein family members. It is highly expressed in lung cancer. Survivin can inhibit apoptosis. Apoptosis is closely related with development and prognosis in lung cancer. Survivin and apoptosis might become breakthrough point in treatment of lung cancer.     

靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影向

目的观察靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofec-tamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺诱导MCF-7细胞凋亡的作用.结果靶向survivin的siRNA和三苯氧胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡;当联合应用靶向survivin的siRNA和三苯氧胺时,上述作用得到显著加强(P＜0.05).结论利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著增强MCF-7细胞对三苯氧胺的敏感性,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的内分泌治疗中具有重要的潜在价值.