组织内猪囊尾蚴循环抗原量与虫体发育阶段之间的关系

为了解猪囊尾蚴在宿主体内产生的循环抗原含量与其虫体发育阶段之间的关系，本文应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，以反向间接血凝法对不同感染密度和不同发育程度的猪囊尾蚴病猪进行了特异性循环抗原的检测。结果表明：（１）发育成熟的囊尾蚴；低密度感染６头猪，１８份样品，血凝效价为１：２（＋＋）￣１：６４（＋＋＋＋），其囊尾蚴循环抗原蛋白含量为０．１５￣４．０μｇ／ｍｌ，中密度感染猪５头，１０份样品，血凝效价１：８（＋     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验…

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋行虫病猪，肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验研究

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距囊结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋毛虫病猪、肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。提示用单克隆抗体不仅能检测到猪体组织液中特异性循环抗原，而且具有较高的敏感性和特异性，建立了一种通过检测组织液来判定肉类是否感染猪囊尾蚴的免疫学方法。     

猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析

目的 对猪囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析。 方法 四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液（8万个/ml）。将6头20 d龄三元杂交乳猪均分实验组和空白对照组,实验组每猪灌胃虫卵悬液1 ml。40 d后,分别制备实验组心脏血混合血清及对照组心脏血混合血清;收集、制备实验组猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳（2-DE）分析。将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜（PVDF膜）,用实验组混合血清及对照组混合血清（均为1 ∶ 10）为一抗,羊抗猪HRP-IgG（1 ∶ 200）为二抗,进行蛋白质印迹（Western blot-ting）分析,比较两组杂交蛋白点的差异,确定猪囊尾蚴抗原抗体阳性杂交斑点,据此挖取双向电泳与之对应的蛋白点,用电喷雾离子阱型质谱仪（ESI-Trap MS）进行质谱鉴定。搜索美国国家生物技术信息中心（NCBI）网站信息进行生物信息学分析。 结果 双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量为Mr 14 400～94 000,等电点（pI）为3.0～10.0。筛选出7个特异性抗原,其中的4个分别为AF239799-1膜联蛋白（AF239799-1 annexin）、细胞支架肌动蛋白-2（cytoskeletal actin-2）、原肌球蛋白（tropomyosin）和肌动蛋白-1（actin-1）。前1个蛋白已被鉴定为猪带绦虫特异性抗原,后3个蛋白抗原与NCBI网上登录的亚洲带绦虫成虫蛋白一致,为猪囊尾蚴特异性抗原。 结论 共获得3个猪囊尾蚴特异性抗原,即细胞支架肌动蛋白-2、原肌球蛋白和肌动蛋白-1。     

猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶的表达研究

目的应用免疫组化、双向电泳（2-DE）结合蛋白质印迹（Western-blotting）技术分析猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶（GST）的表达。方法用猪带绦虫卵1 mL（8万个/mL）灌胃20d龄健康乳猪6头,于感染后40d、80d和120 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及肝脏（120 d除外）制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴GST的表达;同时制备感染后40d取自肌肉的猪囊尾蚴蛋白进行2-DE分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜（PVDF膜）,用本课题组自制的大鼠抗猪带绦虫GST血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行western-blotting分析。结果不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴均表达GST,随感染时间增加,寄生在肌肉的猪囊尾蚴GST的表达变化不大（P〉0.05）,寄生在肝脏的猪囊尾蚴GST的表达升高（P〈0.05）;双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量（Mr）为14 400-94 000,等电点（pI）为3.0-10.0。Western-blotting分析显示,实验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点。将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为6.6/25 548,与猪带绦虫GST的理论推导值接近。结论感染时间及感染部位组织学特征不同,猪囊尾蚴GST的表达略有差异。     

两种链格孢霉变应原提取方法的比较

目的比较传统方法和新方法对链格孢霉变应原浸出液蛋白质含量、组分及生物活性的影响。方法将经空气曝皿获得、中国科学院鉴定为链格孢霉的菌株于26℃恒温下培养4周，取12份5g湿重的菌苔，6份用传统方法（风干，高速粉碎机粉碎后，搅拌提取），6份采用新方法（液氮研磨＋超声破碎。再搅拌提取）提取蛋白质：然后用改良的Bradford法进行蛋白质含量测定；SDS-PAGE分析两种方法提取的蛋白质组分的差别．放射性变应原吸附（RAST）抑制试验比较两者间变应原生物活性的差异。结果传统方法和新方法提取的蛋白质含量分别为（0．205±0．019）和（0．532±0．023）g／ml，所得到变应原的50％抑制率分别为5．96和1．25μg／ml。结论两种提取方法中．新方法能够得到较高的蛋白质含量及更多的蛋白质组分，对于低丰度蛋白的获得及生物学活性即效价的提高具有十分重要的意义。     

人体囊尾蚴抗原在临床试验中应用价值的探讨

目前 ,在囊虫病的临床血清学诊断试验中所用的抗原均采自猪体囊尾蚴。为探讨人体囊尾蚴抗原在临床试验中的应用价值 ,我们进行了下列试验。材料和方法1　抗原的制备　在无菌条件下 ,切除已确诊的人体皮下囊虫结节 ,置生理盐水中 ,洗涤数次。用 1ml的皮试针吸取囊液放入离心管中 ,2 0 0 0 r/min离心 2 0 m in后收集上清液 ,放入透析囊内置 4℃ ,以生理盐水透析 48h。然后测其蛋白含量(4 0 2 μg/ml) ,放 - 2 0℃ ,保存备用。2　试验血清　囊虫病病人血清 10 1份 ,均经囊虫血凝和囊虫酶标反复筛选。正常人血清 145份 ,采自济宁师专学生。3　结…     

灭囊灵对体外培养的猪囊尾蚴虫体蛋白质组分及含量的影响

目的　探讨灭囊灵杀灭猪囊尾蚴的作用机理。方法　应用PAGE和薄层扫描技术 ,观察灭囊灵对体外培养猪囊尾蚴虫体蛋白质组分及含量的影响。结果　灭囊灵组囊尾蚴蛋白经PAGE可分离出 17～ 2 5条蛋白带。经薄层扫描分析 :灭囊灵 0 6ml、1 2ml和 2 4ml三个剂量组在 70～ 75区段蛋白扫描无峰 ;0 6ml组在 10 5～ 110区段峰值最高 ,1 2ml和 2 4ml剂量组在 110～ 115区段峰值最高。峰面积积分值占 8%以上者为高峰带 ,0 6ml和 2 4ml组可见 6个高峰 ,1 2ml组可见 5个高峰。以上三项指标与原囊尾蚴和空白对照组均有明显差别。结论　灭囊灵对猪囊尾蚴虫体蛋白组分和含量均有明显影响     

猪囊尾蚴特异性抗原编码cDNA的阶段特异性表达

目的：分析猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ的阶段特异性表达机制。方法：用猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ（λｃＣ２８）及抗λｃＣ２８单表位抗体作探针，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交技术分析了λｃＣ２８编码ｃＤＮＡ在猪带绦虫各发育阶段的特异性表达。结果：猪囊尾蚴和成虫不同节片抗原蛋白具有阶段特异性，λｃＣ２８ｃＤＮＡ编码的２８ｋＤａ抗原蛋白只在囊尾蚴阶段表达，成虫幼节、成节、孕节都不表达。结论：猪囊尾蚴阶段特异性抗原的编码基因存在于囊尾蚴阶段和成虫的幼节中，但仅有囊尾蚴阶段的ｍＲＮＡ表达２８ｋＤａ抗原蛋白。     

斑点ELISA和间接血凝试验诊断囊虫病的比较

我们应用Dot-ELISA和间接血凝试验(IHA)同时检测囊虫病患者血清。 材科和方法 抗原制备 猪囊尾蚴囊液先以3000rpm离心10min,再经10000rpm离心30min,上清液即为囊液粗抗原,蛋白含量为8.49mg/ml。     

模拟抗原表位基因测定及合成多肽的血吸虫病诊断价值的研究

目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎氨基酸序列选择2个噬菌体的展示肽段进行人工多肽合成.以合成的多肽为抗原,建立血吸虫病诊断方法,检测急、慢性血吸虫病人血清,观察方法的敏感性及特异性;同时检测治疗前及治愈后的血吸虫病人血清,观察该合成抗原的血吸虫病疗效考核价值.结果测定了14个噬菌体展示外源肽的基因序列,序列分析表明,其中有6个噬茵体的外源肽基因序列完全相同,其余8个噬菌体展示肽的基因序列不相同.分析演绎氨基酸序列,发现1个噬菌体展示肽中的3个连续的氨基酸(GVK)残基与血吸虫23 kDa分子氨基酸残基相同.合成多肽抗原检测急、慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为92.3%和91.1%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为7.5%,检测健康人血清,特异性为95.5%.检测治愈后0.5年的同一病人血清,阴转率为55.3%,治愈后1年的病人血清中IgG抗体的阴转率为63.2%.结论 9个具有血吸虫病诊断价值的噬菌体展示表位的基因序列被确定,并证明了合成多肽抗原有较好的血吸虫病诊断及疗效考核价值.     

内镜下Oddi括约肌测压的临床意义

为观察胆石症、胆囊切除术后等胆系疾病及功能性消化不良（ＦＤ）、糖尿病胃轻瘫（ＤＧＰ）等非胆系疾病Ｏｄｄｉ括约肌（ＳＯ）功能变化，通过内镜采用灌注式高分辨多道胃肠功能测定仪，对１５例胆系疾病患者、１３例非胆系疾病患者进行Ｏｄｄｉ括约肌测压。结果显示，胆系疾病组的胆总管压力、ＳＯ基础压及蠕动波振幅明显高于非胆系疾病组（６．８６±０．６３ｋＰａ与１．２７±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；７．３１±０．９５ｋＰａ与１．８７±０．１６ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３２．００±１．２ｋＰａ与２４．１４±１．５ｋＰａ，Ｐ＜０．０５）；同时，非胆系疾病组的十二指肠压、ＳＯ蠕动频率及间期较胆系疾病组明显降低、减慢及延长（１．４２±０．２６ｋＰａ与０．３０±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３．６±１．２次／分与２．２±０．４次／分，Ｐ＜０．０５；７．４±１．２秒与１１．０±１．８秒，Ｐ＜０．０５）。结果显示，无论是胆系疾病还是ＦＤ及ＤＧＰ等非胆系疾病均有ＳＯ功能紊乱，但表现形式相反，对指导临床诊断与治疗有一定价值。     

钉螺3种酶的酶谱分析

本研究用淀粉凝胶同工酶电泳法比较了安徽及云南两省的钉螺的酸性磷酸酶（ＡｃＰ，ＥＣ３．１．３．２）、过氧化物酶（Ｐｏ，ＥＣ１．１１．１．７）及酯酶（Ｅｓｔ，ＥＣ３．１．１．１）的电泳带型。ＡｃＰ及Ｐｏ的同工酶中ＡｃＰ１、ＡｃＰ２及Ｐｏ１、Ｐｏ２由单态位点编码。Ｅｓｔ的同工酶由４个位点编码，其中Ｅｓｔ３在安徽的钉螺中为１条电泳快带，相对迁移率（Ｒｆ）为０．３６２±０．０２７；在云南的钉螺中为１条电泳慢带，Ｒｆ为０．３４０±０．０３６。     

骨代谢指标测定在骨质疏松诊治中的应用价值

目的 比较妇女绝经前后骨代谢指标的变化，研究各指标在骨质疏松症治疗后的变化率，对各指标在骨质疏松症诊治中的应用作出初步评价。方法 48例绝经前妇女、48例绝经后妇女测定10项骨代谢指标．45例绝经后骨质疏松症患者．治疗前、治疗6个月后分别测定10项骨代谢指标，观察其变化率。12名绝经后妇女，每两个月测定10项骨代谢指标。共观察一年。结果 绝经后妇女骨代谢指标明显升高，绝经后骨质疏松症患者经抗吸收治疗后．大部分骨代谢指标明显降低，血清骨形成指标比尿骨吸收指标长期个体内的变异要小。结论 绝经后骨质疏松症患者骨转换加快，部分血清骨代谢指标优于尿骨代谢指标，尤以血清骨形成指标N—mid骨钙素和血清骨吸收指标CTX为优。     

EVOLUTION OF FITNESS, V. RATE OF EVOLUTION OF IRRADIATED POPULATIONS OF Drosophila

Measurable evolution occurs in laboratory populations of Drosophila under strong natural selection. The rate of adaptation to the experimental environment is significantly greater in populations with genetic variability increased by radiation than in the control, nonirradiated populations.