瘦素对人脐静脉内皮细胞表达白细胞介素-8的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)表达白细胞介素-8(IL-8)的影响。方法:用不同浓度的瘦素刺激ECV-304,检测ECV-304表达IL-8的情况。结果:在相同作用时间下,随着瘦素浓度的升高,IL-8蛋白及IL-8的mRNA的表达也随之升高;在相同瘦素浓度下,随着作用时间的延长,IL-8蛋白及IL-8的mRNA的表达也随之升高。结论:瘦素可以刺激ECV-304表达IL-8,而且呈时间和剂量相关性。     

白细胞介素—35 对可溶性 C D 40 配体诱导人脐静脉血管内皮细胞活化的作用

目的:探讨白细胞介素(IL)-35对可溶性CD40配体(sCD40L)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)活化的作用及IL-35和sCD40L在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)发病过程中的作用。方法:入选43例冠心病患者,其中不稳定型心绞痛20例(UA组),急性ST段抬高型心机梗死23例(STEMI组),20例健康体检者设为对照组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血清IL-35和sCD40L水平,并分析两者的相关性。体外培养HUVEC,分为空白组、sCD40L组、IL-35+sCD40L组,ELISA法检测细胞培养上清E-选择素、可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)的水平;比色法检测HUVEC中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性;DCFH-DA荧光探针法检测HUVEC中氧自由基(ROS)活性。结果:与对照组相比,UA组和STEMI组外周血清sCD40L水平显著升高,IL-35水平显著降低(P均0.05),且两者呈负相关(r=-0.443,P0.05)。体外培养HUVEC,与sCD40L组相比,IL-35+sCD40L组培养上清中E-选择素、sICAM-1水平以及HUVEC中MDA水平、ROS活性均显著降低,HUVEC中SOD活性显著升高(P均0.05)。结论:冠心病患者外周血清IL-35水平显著降低,sCD40L水平显著升高,IL-35对sCD40L活化HUVEC有抑制作用。     

白细胞介素8与心肌梗死

心肌梗死是严重威胁人类健康的心血管系统常见疾病。心肌梗死的发病机制还未完全明确,目前认为白细胞介素8(IL-8)与心肌梗死的发生发展有重要联系。IL-8的炎性作用及血管生成作用对心肌梗死有重要影响。本文就IL-8在心肌梗死中作用的研究进展作一综述。     

吸烟者痰中白细胞介素-8和白细胞介素-10的变化及其意义

目的探讨吸烟者痰中白细胞介素-8(IL-8)和IL-10的变化及其与吸烟程度的关系。方法选择健康非吸烟者15例及吸烟者62例,按吸烟严重程度分为轻度吸烟组(1~299年支)、中度吸烟(300~599年支)、重度吸烟组(>600年支)。3%高渗盐水诱导痰液,分别采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)与酶联免疫吸附法(ELISA)检测痰细胞IL-8mRNA和IL-10mRNA表达及痰上清液中IL-8、IL-10含量。结果吸烟组痰细胞IL-8mRNA的表达和上清液中IL-8蛋白质浓度均显著高于非吸烟组(P<0.01),IL-10mRNA的表达和上清液中IL-10蛋白质浓度均显著低于非吸烟组(P<0.05)。吸烟指数与IL-8mRNA和IL-8分别呈显著正相关(r=0.562,0.634,P<0.01),与IL-10mRNA和IL-10分别呈负相关(r=-0.322,-0.367,P<0.05)。结论吸烟量越大,时间越长,痰中致炎因子增加和抑炎因子降低,对气道的损伤越大。     

同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞分泌白细胞介素8

为探讨同型半胱氨酸对内皮细胞分泌白细胞介素 8的影响 ,及叶酸和牛磺酸对同型半胱氨酸作用的影响 ,将人脐静脉内皮细胞培养于不同浓度同型半胱氨酸中 ,采用酶联免疫吸附试验测定培养基中白细胞介素 8水平。结果发现 ,培养于同型半胱氨酸 (0 .1mmol L)中 4h、6h、8h和 1 2h ,白细胞介素 8分泌水平分别是对照组的1 .85倍、1 .88倍、2 .2 2倍和 1 .5 6倍 (P <0 .0 1 ) ;在不同浓度 (0 .0 5mmol L、0 .1mmol L、0 .5mmol L和 1mmol L)同型半胱氨酸中培养 8h ,各组内皮细胞白细胞介素 8的分泌水平分别是对照组的 1 .4 3倍、2 .1 6倍、2 .5 7倍和 2 .88倍(P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,并呈剂量依赖性 ;同型半胱氨酸与叶酸 (0 .0 5mmol L)或牛磺酸 (5mmol L)共同培养细胞 ,各组内皮细胞白细胞介素 8的分泌水平无显著差异 (P >0 .0 5 )。以上结果提示 ,病理浓度的同型半胱氨酸能刺激内皮细胞分泌白细胞介素 8增加 ,这可能是同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制之一 ;叶酸和牛磺酸可能阻断同型半胱氨酸的这一作用     

核转录因子/白细胞介素-8与胃癌血管生成及预后关系研究

目的　研究核转录因子 (NF κB)及白细胞介素 (IL) 8在人胃癌组织中表达与胃癌血管形成及预后的关系。方法　免疫组化法检测 4 1例胃癌组织中核转录因子NF κB、IL 8表达和微血管密度(MVD)。结果　 4 1例胃癌中NF κB和IL 8的阳性表达率分别为 6 8.3% (2 8例 )和 2 9.3% (12例 ) ,前者与MVD显著相关 (P =0 .0 0 2 ) ,但后者与MVD表达无关。NF κB和IL 8与TNM分期显著相关 (P<0 .0 5 ) ,阳性者多为进展期胃癌 ,而且表达阴性组预后均明显优于阳性组 (P <0 .0 5 )。结论　NF κB/IL 8旁路调控可能不是胃癌组织内的主要促血管生成途径 ,NF κB和IL 8阳性表达反映胃癌的恶性程度 ,并可作为判断预后的参考指标。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞的氧化应激损伤和白细胞介素-8分泌的影响

同型半胱氨酸(Hcy)是近年来确认动脉粥样硬化的一项独立的新的危险因素.本实验模拟在高浓度Hcy的环境下,观察血管内皮细胞氧化应激毒性损伤相关指标,并了解白细胞介素-8的分泌情况,进一步探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制.     

白细胞介素-10影响哮喘患者肺泡巨噬细胞分泌白细胞介素-8的研究

目的了解白细胞介素－８（ＩＬ－８）与支气管哮喘发病的关系,探讨白细胞介素－１０（ＩＬ－１０）对哮喘转归的影响。方法对１５例哮喘患者和１５例正常人,进行支气管肺泡灌洗,从灌洗液中分离肺泡巨噬细胞培养,测定细胞培养上清液中ＩＬ－８的含量,并观测ＩＬ－１０对其分泌的影响。结果哮喘患者肺泡巨噬细胞分泌的ＩＬ－８明显高于正常（Ｐ＜００５）,经脂多糖刺激后,分泌增加。加ｈＩＬ－１０后,两组肺泡巨噬细胞分泌的ＩＬ－８均明显减少（Ｐ＜０００１）。结论哮喘发作与ＩＬ－８分泌失调有关,ＩＬ－１０可抑制其分泌,对哮喘的转归具有重要意义。     

慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰白细胞介素8水平及白细胞介素1β诱导人肺上皮细胞白细胞介素8表达的调节机制

我们比较慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者和健康者诱导痰中白细胞介素8(IL-8)表达水平的差异，并研究IL-1β诱导人肺上皮细胞IL-8表达的信号传导途径。     

荧光素酶法检测幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞白细胞介素-8转录能力

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)是人消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及胃黏膜相关淋巴组织 (ＭＡＬＴ)淋巴瘤的重要致病因子 ,对Ｈｐ免疫致病机制的探讨是当今研究的热点。Ｈｐ诱导胃上皮细胞产生趋化因子 (ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ)与胃黏膜炎症过程密切相关 ,其中以Ｃ Ｘ Ｃ类趋化因子ＩＬ 8尤为引人注目[1] 。文献中对胃上皮细胞ＩＬ 8转录水平的检测多采用分子生物学 (如Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ,ＲＴ ＰＣＲ等 )方法 ,但这些方法操作要求高、步骤复杂、耗时较长。我们应用荧光素酶活性测定检测Ｈｐ诱导的胃上皮细胞ＩＬ 8转录能力 ,旨在探讨一种敏感、快…     

醛固酮对人脐血管内皮细胞凋亡的作用

目的探讨醛固酮(ALD)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的作用及其可能的机制。方法 HUVEC分成3大组:正常对照组、ALD处理组(10~(-7)、10~(-6)、10~(-5)mol/L ALD)及螺内酯(10~(-5)mol/L)处理组,流式细胞术检测HUVEC凋亡,免疫印迹法检测HUVEC盐皮质激素受体(MR)蛋白水平的表达。结果 (1)与对照组比较,10~(-7)～10~(-5)mol/L ALD处理后HUVEC凋亡增加。(2)10~(-7)～10~(-5)mol/L ALD诱导的HUVEC凋亡呈剂量依赖性。(3)10~(-6)、10~(-5)mol/L ALD组加入10~(-6)mol/L螺内酯处理后凋亡下降(P<0.01),即ALD诱导的HUVEC凋亡被螺内酯部分抑制。(4)ALD上调MR蛋白表达,螺内酯可部分阻断此作用。结论 ALD可能通过上调HUVEC的MR蛋白表达而诱导细胞凋亡。     

层流切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体mRNA表达的影响

目的用RT-PCR和Northern杂交技术,评价层流低切应力刺激对人脐静脉血管内皮细胞Toll样受体(TLR)表达的影响。方法将0.42 Pa切应力为低切应力组处理内皮细胞1 h,未作任何刺激的内皮细胞为对照组,从两组血管内皮细胞提取总RNA,采用RT-PCR和Northern杂交技术明确对照和切应力刺激1 h人脐静脉血管内皮细胞TLR-2和TLR-4 mRNA的表达情况。结果RT-PCR和Northern杂交均显示,层流低切应力刺激1 h后血管内皮细胞TLR-4表达增强、TLR-2几乎无变化。结论层流低切应力可引起人脐静脉内皮细胞TLR-4 mRNA表达增加,提示炎性信号受体TLR-4可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞某些效应基因的表达。     

急性时相血清淀粉样蛋白A和辛伐他汀对内皮细胞IL-6、8基因表达的影响

目的探讨急性时相血清淀粉样蛋白A（A-SAA）和辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞（HU-VECs）促炎性细胞因子白细胞介素（IL）-6和8基因表达的影响。方法用不同浓度的A-sAA（Zmg／L、10mg／L）、辛伐他汀（5μmol／L、10μmol／L）处理HUVEC8h、24h后抽提RNA，用半定量逆转录聚合酶链反应技术检测细胞因子IL-6、IL-8rnRNA的表达。结果A-SAA能显著促进HUVECIL-6、IL-8rnRNA的表达，并呈剂量和时间依赖性（P〈0．01）。辛伐他汀可降低A-SAA对HUVEC IL-6和IL-8mRNA表达的促进作用。结论A-SAA可通过促进内皮细胞IL-6、IL-8的表达和分泌，参与动脉粥样硬化（AS）的形成；辛伐他汀可减低A-SAA对内皮细胞IL-6和8的促分泌作用而发挥其抗炎、抗AS的作用。     

端粒酶催化亚单位和猿猴病毒40大T抗原致人脐静脉内皮细胞永生化

目的用端粒酶催化亚单位(hTERT)和猿猴病毒40大T抗原(SV40大T)异位表达建立永生化人脐静脉内皮细胞系。方法构建含有hTERT和SV40大TcDNA片段的逆转录病毒载体,转染人原代脐静脉内皮细胞,连续传代培养。通过细胞免疫组织化学观察、Western blot分析hTERT和SV40大T抗原表达、PCR—ELISA检测端粒酶活性、ELISA分析内皮特异性E-选择素和RT—PCR测定内皮细胞脂肪酶进行细胞形态学和功能学鉴定。结果转染的人脐静脉内皮细胞为扁平多角形,呈单层铺路石状镶嵌排列。有Ⅷ因子、SV40大T、hTERT表达、E-选择素和内皮细胞脂肪酶表达阳性。转染细胞中端粒酶活性经测定在第12代时为0．36,在第50代时为0．38,而对照的原代细胞在第1代时为1．12,第3代时仅为0．06。结论导入外源性端粒酶催化亚单位和SV40大T抗原能使人脐静脉内皮细胞永生化,保持内皮细胞性状不改变。     

激肽释放酶腺相关病毒载体的构建及对脐静脉内皮细胞功能的影响

目的构建激肽释放酶(HK)腺相关病毒(AAV)载体,检测重组病毒感染脐静脉内皮细胞系(HUVEC)后HK基因和内皮功能相关基因表达的变化。方法HK基因克隆人腺相关病毒载体质粒pAAV-MCS,和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC、腺病毒辅助质粒pHe1per共转染293细胞,包装成带有HK基因的重组腺相关病毒(rAAV-HK)。以rAAV-HK感染HUVEC。RT-PCR法检测HK基因、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、凋亡蛋白酶(caspase-3)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素B_1受体以及缓激肽B_1受体、缓激肽B_2受体的mRNA转录变化。ELISA法测定HUVEC上清液和胞内HK的含量。结果成功构建了rAAV-HK。rAAV-HK感染HUVEC后,实验组胞内HKmRNA转录(0．59±0．12)比空白组(0．26±0．05)明显增加(P＜0．01)；实验组胞内HK含量(120．1±40．9)比空白组(30．8±12．8)显著升高(P＜0．01)；实验组eNOSmRNA转录(1．19±0．28)较空白组(0．66±0．11)增加(P＜0．05),实验组caspase-3mRNA转录(0．30±0．25)较空白组(0．67±0．27)减弱(P＜0．05)。VEGF、内皮素-1、内皮素B_1受体、缓激肽B_1受体、缓激肽B_2受体mRNA转录两组差异无统计学意义。结论rAAV-HK病毒感染HUVEC后能高效表达HK,并促进HUVEC胞内eNOSmRNA转录,抑制caspase-3mRNA转录,提示导入HK基因能够改善内皮功能。     

氟致体外培养人脐静脉血管内皮细胞损伤的实验观察

目的 观察不同剂量的氟对体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的影响.方法 在HUVEC培养液中加入不同剂量的氟化钠(NaF),分别为0(对照)100、400、700、1000、2000 μmol/L,每组设6个复孔,连续培养48 h,收集细胞培养液与细胞.瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,吖啶橙荧光染色测定细胞凋亡,四唑氮蓝(MT T)比色法检测细胞活性;分光光度法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性;RT-PCR法检测细胞iNOS mRNA和eNOS mRNA表达水平;双抗体夹心ELISA法检测细胞培养液中细胞黏附因子(ICAM-1)、血管黏附因子(VCAM-1)水平.结果 随染氟剂量增加,HUVEC细胞数量减少,结构改变;400～2000μmol/L NaF组SOD活性[(6.627±0.213)、(6.668±0.152)、(5.935±0.122)、(4.755±0.182)kU/L]较对照组[(7.457±0.398)kU/L]降低(P＜0.05或＜0.01),GSH-Px活性[(481.284±43.785)、(492.223±16.474)、(382.762±25.167)、(293.687±24.881)kU/L]较对照组[(585.078±47.323)kU/L]降低(P＜0.05或＜0.01),MDA水平[(0.609±0.011)、(0.646±0.016)、(0.852±0.013)、(1.188±0.045)nmol/L]较对照组[(0.512±0.027)nmol/L]升高(P＜0.05或＜0.01);iNOS活性[(3.604±0.115)、(3.615±0.075)、(3.848±0.103)、(4.275±0.079)kU/L]较对照组[(2.798±0.136)kU/L]增强(P均＜0.01),iNOS mRNA表达增强,eNOS活性[(5.539±0.079)、(5.503±0.064)、(5.226±0.142)、(4.809±0.107)kU/L]较对照组[(5.996±0.155)kU/L]减弱(P＜0.05或＜0.01),eNOSmRNA表达减弱;ICAM-1水平[(0.852±0.102)、(0.886±0.061)、(0.961±0.158)、(1.418±0.167)μg/L]较对照组[(0.687±0.046)μg/L]升高(P＜0.05或＜0.01),VCAM-1水平[(2.719±0.197)、(2.946±0.167)、(3.173±0.225)、(3.613±0.153)μg/L]较对照组[(2.375±0.067)μg/L]升高(P均＜0.01).结论 高剂量氟降低抗氧化酶活性,使一氧化氮代谢紊乱,细胞因子异常表达,以此抑制血管内皮细胞生长、结构改变并致细胞凋亡,为高氟致血管内皮损伤的重要因素.

Abstract：

Objective To study the effect of different concentrations of fluoride on cultured human umbilical vein vascular endothelial cells(HUVEC). Methods Different doses of sodium fluoride (NaF) were added to HUVEC culture medium, fluoride concentrations were 0(control), 100,400,700,1000,2000 μmol/L, respectively,6 re-set hole in each group. After continuous culture for 48 h, cells and culture medium were collected. Cell morphology was studied by Wright-Giemsa staining; cells apoptosis was determined by acridine orange fluorescence staining; cell activity was measured by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay; superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase(GSH-Px) activity, malonaldehyde(MDA) content, induced nitricoxide synthase(iNOS), and endothelia nitricoxide synthase(eNOS) activity in cell culture medium were determined by spectrophotometry; cell iNOS mRNA and eNOS mRNA expression were detected by RT-PCR; intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1)and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) levels were detected by double antibody sandwich ELISA method.Results With increased dose of fluoride, HUVEC cells decreased, the structure changed. In 400 - 2000 μmol/L group, the SOD activity[(6.627 ± 0.213), (6.668 ± 0.152), (5.935 ± 0.122), (4.755 ± 0.182)kU/L] was lower than those of the control group[(7.457 ± 0.398)kU/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], GSH-Px activity[(481.284 ± 43.785),(492.223 ± 16.474), (382.762 ± 25.167), (293.687 ± 24.881 )kU/L] was also lower than those of the control group [(585.078 ± 47.323)kU/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], MDA level[(0.609 ± 0.011 ), (0.646 ± 0.016), (0.852 ± 0.013),(1.188 ± 0.045)nmol/L] was higher than those of the control group[(0.512 ± 0.027)nmol/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01];iNOS activity[(3.604 ± 0.115), (3.615 ± 0.075), (3.848 ± 0.103), (4.275 ± 0.079)kU/L] also was higher than those of the control group[(2.798 ± 0. 136)kU/L, all P ＜ 0.01], iNOS mRNA expression increased, eNOS activity [(5.539 ± 0.079), (5.503 ± 0.064), (5.226 ± 0.142), (4.809 ± 0. 107)kU/L] decreased compared to those of control group[(5.996 ± 0.155)kU/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], eNOS mRNA expression decreased; ICAM-1 levels [(0.852 ± 0. 102), (0.886 ± 0.061 ), (0.961 ± 0.158), (1.418 ± 0. 167)μg/L] increased compared to those of the control group[(0.687 ± 0.046)μg/L, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01], VCAM-1 levels[(2.719 ± 0.197), (2.946 ± 0.167),(3.173 ± 0.225 ), (3.613 ± 0. 153 ) μg/L] was higher than those of the control group [(2.375 ± 0.067 ) μg/L, all P ＜0.01]. Conclusions High concentrations of fluoride reduce the activity of antioxidant enzymes, which leads to metabolic disorders of nitric oxide and abnormal cytokines expression, thereby inhibiting vascular endothelial cell growth, structural change and induced apoptosis. This is an important factor in high fluoride-induced vascular endothelial injury.     

人脂联素重组腺病毒对内皮细胞增殖和一氧化氮合酶的影响

目的探讨人脂联素重组腺病毒(Ad-apM1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和总一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和结构型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响,为动脉粥样硬化的基因治疗奠定基础。方法将Ad-apM1感染HUVEC,观察细胞形态,绘制生长曲线,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HUVEC的增殖。双抗体夹心ELISA法检测培养上清中人脂联素的表达水平,比色法检测总NOS、iNOS、eNOS活力。结果重组腺病毒感染后的HUVEC和未受感染的HUVEC形态无明显改变,体外增殖能力也无显著差异。用感染复数(MOI)为50的人脂联素基因重组腺病毒感染HUVEC,24、48、72h后取上清检测脂联素浓度分别为(125±12)ng/ml、(160±14)ng/ml、(150±8)ng/ml。感染了Ad-apM1的HUVEC总NOS和eNOS的活力显著升高,而iNOS的活力显著降低。结论我们制备的重组腺病毒能有效感染HUVEC并分泌表达人脂联素,对HUVEC的形态和增殖无明显影响,可增强HUVEC总NOS和eNOS活性,抑制iNOS活性,为Ad-apM1用于干预动脉粥样硬化奠定基础。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的探讨同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）对血管内皮细胞纤溶系统影响。方法（1）将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）分为10个实验组（0、10、50、200、500μmol／L Hcy组及叶酸和上述各Hcy点共同培养组）,培养24h后,酶联免疫吸附实验法（ELISA）测定各组细胞上清液中纤溶酶原激活剂（plasminogen activator,tPA）及纤溶酶原激活物抑制剂1（plasminogen activator inhibitor1,PAI-1）抗原含量,逆转录聚合酶链反应分析（RT-PCR）法分析各组tPA及PAI-1的mRNA表达水平。（2）急性心肌梗死（AMI）患者53例及健康对照组48例,ELISA测定空腹血浆tPA及PAI-1含量,高效液相色谱法测定血浆Hcy水平。结果（1）500μmoL／L Hcy组PAI-1抗原及mRNA表达水平均明显增高（P〈0．05）。（2）以单纯培养基为对照组,生理浓度Hcy组内皮细胞tPA抗原合成及mRNA表达明显增高（P〈0．05）,而以10μmoL／L Hcy组为对照组时,500μmoL／L Hcy组tPA抗原合成及mRNA表达水平则明显减少（P〈0．05）。（3）500μmoL／L Hcy与叶酸共同培养组和单纯Hcy组相比,可以明显提高内皮细胞tPA抗原的合成及mRNA表达,减少PAI-1抗原合成及mRNA表达（P〈0、05）。（4）AMI组Hcy、tPA及PAI-1均明显高于健康对照组（P〈0．05）。结论在体外细胞时,超生理浓度Hcy可以通过下调tPA、上调PAI-1的mRNA表达,减少内皮细胞tPA抗原的分泌及增加PAI-1抗原的合成,可能降低纤溶系统的活性。叶酸则可以减少Hcy引起内皮细胞纤溶系统的损害,起到保护作用。Hcy是AMI的一个独立危险因素。     

PEP-1-CAT融合蛋白预处理对过氧化氢诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730),研究 PEP-1肽介导人过氧化氢酶(CAT)穿透细胞的能力,并探讨 PEP-1-CAT 对过氧化氢(H_2O_2)诱导的内皮细胞氧化应激损伤是否有保护作用。方法构建原核表达质粒 pET15b-PEP-1-CAT,将其在基因工程菌中表达出 N 端带有6个组氨酸“标签”(His-tag)的重组蛋白,并通过金属镍螯合亲和层析对其进行纯化,将纯化得到的PEP-1-CAT 融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,通过 Western blot 来分析其转导能力,同时对转导人细胞内的蛋白进行酶活性检测。然后以0.5 mmol/L H_2O_2处理细胞建立内皮细胞氧化应激损伤的模型,检测不同浓度的 PEP-1-CAT 蛋白对氧化应激下细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果 PEP-1-CAT 融合蛋白能以时间、剂量依赖的方式高效转导进入细胞内。正常内皮细胞 LDH 活性和细胞存活率分别为(540.6±65.7)U/L和100%;H_2O_2处理组 LDH活性显著高[(849.3±95.1)U/L,P<0.01],细胞存活率明显低[(37.23±5.68)%,P<0.01],MDA含量亦较正常组显著高[(8.23±1.58)nmol/L 比(2.46±1.42)nmol/L,P<0.01]。用不同浓度的PEP-1-CAT 对细胞进行预保护,均可显著提高细胞存活率、降低 LDH 释放量,并提高细胞的抗氧化能力,表现为 MDA 含量较 H_2O_2处理组低(P<0.05或<0.01)。结论 PEP-1-CAT 融合蛋白能以天然活性形式高效转导入人脐静脉内皮细胞,且转导的蛋白能有效对抗氧化应激损伤。这种蛋白转导方式,为用 CAT 防治各种与氧化应激损伤有关的疾病提供了一个新的治疗途径。