MMP-2,TIMP-1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及抑制剂-1(TIMP-1)在人肝癌及癌旁组织中的表达及其与肝癌侵袭转移的关系.方法:应用免疫组织化学法研究50例肝癌及癌旁组织中MMP-2和TIMP-1的表达.结果:MMP-2在肝癌和癌旁组织表达阳性率分别为76%和72%,明显高于正常肝组织的表达(P<0.01)a TIMP-1在肝癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为58%和56%,高于正常肝组织中的表达(P<0.01).而MMP-2洋相表达率与肝细胞癌的转移、淋巴浸润、包膜形成和肿瘤分化有关(P<0.05).而TIMP-1的表达与癌组织的转移,淋巴结浸润和包膜形成有关(P<0.05).结论:MMP-2,TIMP-1在肝癌及癌旁组织中的表达明显增高,可能对于判断肝癌的浸润、转移有重要价值.     

MMP-1、TIMP-1在肝纤维化组织中的表达及其病理意义

目的 研究MMP-1和TIMP-1在肝纤维化发展的不同时期的表达情况及病理学意义,为肝纤维化的防治提供理论依据.方法 采用免疫组织化学S-P法.分别检测MMP-1和TIMP-1在57例肝纤维化发展不同时期的组织中的表达情况,应用SPSS10.0统计软件分析它们在病变不同时期的表达差异及二者之间的相关性和其意义.结果 ①MMP-1在各组间的表达无显著性差异(P＞0.05);②TIMP-1的阳性表达随肝组织炎症及纤维化程度增加而增强(P＜0.05);③MMP-1/TIMP-1比值与肝纤维化程度呈负相关.结论 MMP-1/TIMP-1系统在肝纤维化形成过程中起着重要的调控作用.     

内皮素-1对人系膜细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响

目的研究内皮素-1(ET-1)对人系膜细胞(MC)基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及其组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用体外MC培养,应用细胞ELISA法测定MC内MMP-3、TIMP-1蛋白的表达。结果ET-1促进MC内MMP-3、TIMP-1蛋白表达,但MMP-3/TIMP-1比值呈剂量及时间依赖性下降。结论ET-1可能是人系膜细胞内MMP-3/TIMP-1比值下降的原因之一,这与肾小球细胞外基质降解受抑密切相关。     

TGF-β1 对肌成纤维细胞MMP-2激活的影响

目的：观察转化生长因子β1(TGF-β1)对鼠肌成纤维细胞（C2C12细胞）分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其激活的影响,探讨其内在机制。 方法：用不同浓度的TGF-β1（0、1、5、10 μg/L）干预C2C12细胞24 h,200 pmol/L Smad3基因短干扰RNA（siRNA-Smad3）转染C2C12细胞24 h,用ELISA 方法测定MMP-2及其活性型MMP-2。结果：(1) 0、1、5、10 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞24 h,ELISA检测总MMP-2的结果（μg/L）分别为177±20、180±15、171±18、179±28,方差分析无显著差异(P>0.05);活性型MMP-2分别为23.09±4.37、14.42±2.30、9.50±1.18、4.48±0.69,比较差异显著(P<0.01)。(2) 5 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞4 h、12 h和24 h,总MMP-2 ELISA值分别为160±16(对照组)/157±17（干预组）、174±6/174±16、187±12/189±18, 不同时点干预组总MMP-2 值比较无差异,P>0.05;活性型MMP-2 值分别为：16.92±1.26(对照组) /16.53±2.56（干预组）、22.70±3.03/8.00±2.02、23.15±2.66/9.39±2.60,干预组活性型MMP-2值比较有差异,P<0.01。（3）200 pmol/L siRNA-Smad3转染C2C12细胞24 h,再用5 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞24 h, 活性型MMP-2值分别是20.80±1.53（siRNA-control,空白对照组)、9.82±2.18（siRNA-control+5 μg/L TGF-β1,内对照组）、20.09±2.27（siRNA-Smad3+5 μg/L TGF-β1,实验组）;实验组和内对照组比较差异显著（P<0.01),实验组和空白对照组比较无显著差异（P>0.05)。结论：TGF-β1并不影响C2C12细胞分泌MMP2,但显著抑制MMP-2的活化;siRNA-Smad3阻断Smad3信号转导可以消除TGF-β1对MMP-2活化的抑制作用。     

肺癌MMP-9、TIMP-1表达与微血管密度的关系及意义

目的探讨肺癌组织中MMP-9和TIMP-1的表达与肺癌血管生成的关系及其意义。方法采用免疫组化SP法检测84例肺癌组织中MMP-9、TIMP-1和CD34的表达。结果肺癌组织MMP-9表达显著高于癌旁正常肺组织(P<0.01),小细胞肺癌和腺癌显著高于鳞癌(P<0.01)。肺癌MMP-9表达:有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.01),Ⅲ~Ⅳ期高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05)。肺癌组织TIMP-1表达显著高于癌旁正常肺组织(P<0.01)。肺癌MMP-9表达阳性者微血管密度高于MMP-9表达阴性者(P<0.01)。结论MMP-9促进肺癌血管生成,与肺癌侵袭转移密切相关。     

AcSDKP对大鼠心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对10%血清和血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达的调节作用。方法明胶酶谱法检测心成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性。Western blot法检测心成纤维细胞MMP-1的表达。结果10%血清和PDGF使心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性增强,也促进MMP-1的表达;AcSDKP能够进一步增加由10%血清和PDGF诱导的心成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性,并促进MMP-1的表达。结论AcSDKP上调了由PDGF介导的心成纤维细胞MMPs活性或表达,这可能与AcSDKP抗心肌纤维化的作用相关。     

小檗碱对2型糖尿病大鼠巨噬细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的： 探讨小檗碱对2型糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞（AM）和腹腔巨噬细胞（PM）基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。 方法：SD大鼠随机分成4组，正常对照组、高脂组、糖尿病组、小檗碱治疗组。治疗12周后，测定各组大鼠血清葡萄糖、胰岛素和血脂含量，并检测肺泡和腹腔巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）含量、MMP-9和TIMP-1的基因表达水平。结果：糖尿病组大鼠血糖、血胰岛素、血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）浓度明显高于对照组，AM和PM内ox-LDL浓度、MMP-9 mRNA表达明显高于对照组；而TIMP-1 mRNA的表达低于对照组。小檗碱治疗组大鼠血糖、血胰岛素、LDL、TC、TG浓度低于糖尿病组，AM、PM内MMP-9 mRNA的表达低于糖尿病组，而TIMP-1 mRNA的表达高于糖尿病组。 结论：小檗碱具有降低血糖、调节血脂、防治2型糖尿病动脉粥样硬化的作用，其机制可能与其减少ox-LDL生成，直接下调巨噬细胞中MMP-9的表达有关。     

MMP-3和TIMP-3在卵巢癌中的表达及其意义

目的探讨MMP-3和TIMP-3在卵巢癌的表达及其意义。方法本文采用光镜、透射电镜和免疫组化方法对27例卵巢癌组织中的MMP-3及TIMP-3表达进行检测。结果结果表明,临床分期为晚期的卵巢癌组织中MMP-3阳性细胞的数密度和面密度明显高于早期,而TIMP-3则低于早期。电镜下,早期淋巴细胞和树突状细胞浸润较多,癌细胞没有穿过基底膜;晚期淋巴细胞和树突状细胞浸润较少,可见癌细胞穿基底膜。结论MMP-3和TIMP-3的表达程度及MMP-3/TIMP-3的比值,可作为判断卵巢癌病程的指标。     

CpG ODN和地塞米松对哮喘气道的重塑及MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的： 探讨非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤的寡核苷酸(CpG ODN)和糖皮质激素对哮喘气道重塑和肺内MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法： 以卵蛋白致敏激发的慢性哮喘小鼠模型为对象，测定正常对照组、哮喘组、地塞米松组及CpG ODN组小鼠支气管上皮黏膜层面积(WAmuc)、平滑肌面积(WAmus)、气管内壁面积(WAi),并用支气管基底膜周径(Pbm)标准化。天狼猩红染色测定气道Ⅰ、Ⅲ型胶原的面积。免疫组化方法测定气道基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制剂TIMP-1，行免疫组化图像分析。结果： (1) CpG ODN组和地塞米松组的WAmuc/Pbm、WAmus/Pbm、WAi/Pbm显著大于对照组而显著小于哮喘组（P<0.05），而CpG ODN组和地塞米松组间则无显著差异（P>0.05）;(2) CpG ODN组和地塞米松组Ⅰ、Ⅲ型胶原面积较大于对照组而明显低于哮喘组(P<0.05)；(3) CpG ODN组和地塞米松组MMP-9、 TIMP-1表达明显高于对照组而显著小于哮喘组(P<0.05)，而CpG ODN组和地塞米松组间则无显著差异（P>0.05）。结论： 慢性哮喘小鼠气道壁明显增厚，而早期行CpG ODN和地塞米松干预则可通过抑制肺内MMP-9、TIMP-1的表达而减轻气道重塑。     

高糖与同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9表达及活性的影响

目的: 观察不同浓度糖及同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9表达量及活性的影响。方法: 取1 d龄正常SD大鼠背部皮肤分离成纤维细胞,于含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养。2-4代生长状态良好的细胞进行24 h血清剥夺(0.5%FBS)后,分为正常糖浓度组、高糖组、高糖+高同型半胱氨酸组分别培养6 h,之后用RT-PCR、Western blotting和明胶酶谱方法分别检测MMP-9 mRNA、蛋白表达量以及细胞外MMP-9活性。结果: 高糖(22 mmol/L)组MMP-9 mRNA、蛋白表达量及其活性均增高,分别为正常糖浓度组的1.15倍、1.59倍和1.34倍,P<0.05;高糖+高同型半胱氨酸(100 μmol/L)增高组更加明显,依次为正常糖浓度组的1.25倍、2.63倍和2.52倍,P<0.05。结论: 大鼠皮肤成纤维细胞在体外高糖环境下可高表达MMP-9;高同型半胱氨酸在高糖环境下可使MMP-9 表达及酶活性增高更为明显,表明高同型半胱氨酸血症也参与了对MMP-9的调节,可进一步增加高糖环境下成纤维细胞表达MMP-9。     

急性冠状动脉综合征患者血浆基质金属蛋白酶及其抑制因子的变化

目的：研究急性冠状动脉综合征患者血浆基质金属蛋白酶（MMP-9）及其抑制因子（TIMP-1）的变化。方法：采用夹心酶免疫定量分析技术，测定30例急性冠状动脉综合征患者、29例稳定型心绞痛患者和17例正常对照血浆MMP-9和TIMP-1的变化。结果：3组间年龄、性别、总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇无显著差异。急性冠脉综合征组高敏C反应蛋白(4.336±1.334) mg/L、MMP-9 (13.145±9.796) μg/L、TIMP-1 (1.363±0.605) μg/L、MMP-9/TIMP-1 (10.013±7.195) 显著高于稳定型心绞痛组[ 分别为(2.205±0.458) mg/L、(2.206±1.996) μg/L、(0.688±0.389) μg/L和(3.249±1.987) ]和正常对照组[ 分别为(1.625±0.434) mg/L、(1.663±1.271) μg/L、(0.583±0.421) μg/L和(5.169±7.416) ]，MMP-9与hs-CRP、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1呈正相关。结论：急性冠脉综合征患者存在着由炎症反应导致的以MMP-9升高为主的MMP-9/TIMP-1失衡状态，血浆MMP-9/TIMP-1有可能作为反映急性冠脉综合征患者脆性斑块的指标。     

慢性缺氧改变肺动脉内皮细胞急性缺氧时ET-1mRNA的表达

目的:检测常氧及慢性缺氧培养的猪肺动脉内皮细胞(PAEC)内皮素(ET)－1mRNA的表达及其对急性缺氧刺激的反应。方法:原位杂交技术结合图像分析。结果:常氧及慢性缺氧培养的PAEC急性缺氧后,ET－1mRNA表达均增加(P<0.05),以慢性缺氧组升高的幅度更大。结论:慢性缺氧可增强PAEC在急性缺氧时ET-1mRNA的表达。     

咪达普利拉对人心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶-2和抑制剂-2的作用及机制研究

目的：研究血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI）咪达普利活性代谢物咪达普利拉对白细胞介素－1β（interleukin -1β，IL-1β）诱导的心脏成纤维细胞基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）和基质金属蛋白酶2型抑制剂（type 2 tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP-2）表达的影响及其可能机制。方法:原代人心脏成纤维细胞从美国细胞应用所购买。用RT-PCR检测心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9和TIMP-2 mRNA水平的变化；用凝胶酶谱法分析心脏成纤维细胞中MMP-2、MMP-9的活性；用Griess方法检测培养上清一氧化氮（nitric oxide，NO）水平。结果:通过凝胶酶谱分析，RT-PCR和Griess方法发现IL-1β能显著增加MMP-2基因转录以及活性(P<0.05)，同时也显著增加了细胞培养上清中NO的产生(P<0.05)。IL-1β的这些效应可以被咪达普利拉和外源性NO合酶抑制剂L-单甲基精氨酸（NG-methyl L-Arginine，L-NMMA）所抑制(P<0.05)，而外源性NO供体亚硝基铁氰化钠(sodium nitroprusside，SNP）可以取消咪达普利拉对于NO、MMP-2的有效作用(P<0.05)。实验中发现IL-1β以及咪达普利拉对TIMP-2基因转录无明显作用(P>0.05)。结论:咪达普利拉能通过NO途径抑制IL-1β诱导的心脏成纤维细胞MMP-2的合成和活性；提示ACEI抗心肌重塑以及心力衰竭的部分作用可能是通过MMPs途径实现的。     

MMP-7、MMP-10和TIMP-4在心力衰竭心室重构中的表达

目的:应用细胞因子抗体芯片技术筛选与心力衰竭心室重构关系密切的基质蛋白酶。方法:从本院的心脏病组织库中挑选6例病理诊断明确和各方面资料比较齐全的致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭的心脏病标本(来源于心脏移植的受体),与年龄、性别和种族等因素相匹配的正常对照心脏组织(来源于心脏移植的供体)进行细胞因子抗体芯片分析,筛选在致心律失常性右室心肌病引起的心力衰竭中差异表达的基质蛋白酶,并应用酶联免疫分析和免疫组织化学的方法加以验证。结果:在所筛选的17种基质金属蛋白酶中,只有MMP-7和MMP-10在致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭中高表达,而在4种基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂中,只有TIMP-4 低表达。经酶联免疫分析和免疫组织化学的方法证实,不仅在致心律失常性右室心肌病引起心力衰竭的心肌,在缺血性心肌病和扩张性心肌病引起的心力衰竭心肌中也发现MMP-7和MMP-10 的高表达及TIMP-4的低表达。结论:心肌组织中MMP-7和MMP-10的高表达及TIMP-4的低表达在不同心肌病引起的心力衰竭心室重构分子机制中可能发挥重要的作用。     

麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达的影响,探讨其治疗哮喘的可能机制。方法:将72只健康雌性BALB/c小鼠随机分为:空白对照组,模型组,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组,阳性对照组。采用卵清蛋白致敏激发建立小鼠哮喘模型。空白对照组和模型组于激发前30 min以生理盐水灌胃;麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组分别于激发前30 min以麻杏石甘汤按5.0 g/kg、10.0 g/kg和20.0 g/kg剂量灌胃;阳性对照组于激发前30 min以地塞米松按0.005 g/kg剂量灌胃。连续给药7 d后,观察气道反应性、支气管肺泡冲洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)计数、杯状细胞百分比和胶原沉积的变化;ELISA法检测MMP-9和TIMP-1水平;Western blot法检测MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-qPCR法分析检测MMP-9和TIMP-1的mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组的气道反应性、杯状细胞百分比、胶原沉积、BALF中EOS计数及肺组织MMP-9和TIMP-1的mRNA和蛋白水平均显著升高(P 0.01);与模型组比较,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组及阳性对照组上述指标则明显降低(P 0.05或P 0.01)。结论:麻杏石甘汤可能通过降低MMP-9和TIMP-1的表达改善哮喘模型小鼠气道重塑状态。     

骨髓间充质干细胞移植对心衰大鼠心肌组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的影响

 目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对心衰大鼠心肌组织中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9和金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）的影响及机制。方法：采用异丙肾上腺素(ISO)皮下注射的方法建立大鼠的心力衰竭模型,随机分成3组,每组8只,心肌内分别注射BMSCs（BMSCs组）、BMSCs条件培养液（BMSCs-CM组）及生理盐水（NS组）。RT-PCR检测3组心肌组织MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达,Western blotting检测心肌组织MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白,胞浆和胞核内核因子κB（NF-κB）的p65和p50,以及总蛋白中NF-κB抑制物（I-κB）和磷酸化NF-κB抑制物（p-IκB）蛋白表达水平。结果：和NS组比较,BMSCs组和BMSCs-CM组MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达明显减弱（P<0.05）,TIMP-1 mRNA和蛋白表达明显增强（P<0.05）;而与BMSCs-CM组比较,BMSCs组MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达明显减弱（P<0.05）,TIMP-1 mRNA和蛋白表达明显增强（P<0.05）。胞核中p65和p50蛋白表达,NS组明显多于BMSCs组和BMSCs-CM组(P<0.05);而胞浆中p65和p50蛋白表达,NS组明显少于BMSCs组和BMSCs-CM组(P<0.05)。和BMSCs-CM组比较,BMSCs组胞核中p65和p50蛋白表达明显升高(P<0.05);而胞浆中p65和p50蛋白表达,BMSCs组明显少于BMSCs-CM组(P<0.05)。NS组心肌组织总蛋白中p-IκB/IκB最高,明显多于BMSCs组和BMSCs-CM组(P<0.05),BMSCs组最低(P<0.05)。结论：BMSCs及其在缺氧条件下的培养液均可通过改变NF-κB的抑制蛋白IκB的活性,从而改变心衰心肌细胞胞核中NF-κB含量,影响有关基因的转录,使得MMPs水平升高和TIMPs水平降低。     

Pinacidil对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉压和血浆内皮素-1的影响

目的：探讨钾通道开放剂pinacidil对低氧性肺动脉高压（HPH）及对血浆内皮素-1（ET-1）含量的影响。方法：将45只雄性Wistar大鼠分为3组：①对照组;②低氧组,每天低氧8 h,共4周;③治疗组,每天低氧前半小时腹腔注射pinacidil 3 mg/kg,共4周,4周后观察3组平均肺动脉压（mPAP）,右心室肥厚指标、血浆中ET-1的水平。结果：低氧组大鼠mPAP明显高于对照组。右心室肥厚显著,血浆中ET-1含量明显高于对照组;治疗组mPAP明显低于低氧组,右心室肥厚轻于低氧组,血浆中ET-1含量明显低于低氧组。结论：pinacidil能有效降低HPH中肺动脉压力、阻抑右心室肥厚,并影响血浆中ET-1的水平。