外源性凝集素对糖蛋白和糖脂糖链结构的识别及…

对糖蛋白和糖脂糖链结构的测定已经成为临床实验室诊断疾病，尤其是肿瘤诊断的一个新的方向。外源性凝集素是分析糖链结构最常用和有效的工具。本文综述了多种常用凝集素的糖链专一性及其临床应用和方法。     

糖蛋白糖链结构分析与恶性肿瘤的诊断

糖蛋白糖链结构与疾病关系密切，恶性肿瘤患者甲胎蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、γ－谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性 腺激素、Ｔ抗原、α１抗胰蛋白酶及前列腺酸性磷酸酶等糖链结构发生改变。临床检验中常用凝集素进行糖链结构分析。本文对恶 性肿瘤糖蛋白糖链结构改变的     

糖蛋白糖链结构分析与恶性肿瘤的诊断

糖蛋白糖链结构与疾病关系密切,恶性肿瘤患者甲胎蛋白、转铁蛋白、碱性磷酸酶、γ－谷氨酰转移酶、人绒毛膜促性腺激素、Ｔ抗原、α１抗胰蛋白酶及前列腺酸性到酶等糖链结构发生改变。临床检验中常用凝集素进行糖链结构分析。本文对恶性肿瘤蛋白糖链结构改变的常见类型、检测方法、应用及展望作一综述。     

检测血清p185糖链凝集素酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

目的建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法用改良过碘酸钠氧化法制备c-erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物(A18-HRP),经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素(B io-WGA)及链霉亲和素(SA)的最适浓度(或稀释度),建立了检测p185糖链的凝集素ELISA,用所建立的方法检测血清p185糖链,免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照(P<0.01),免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照(P<0.01),乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性(P>0.05)。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86.7%,特异度为94.6%,准确度为91.9%。结论本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高,临床具有实用价值。     

检测血清p185糖链凝集素酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

目的 建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验（ELISA），并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法 用改良过碘酸钠氧化法制备c—erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物（A18-HRP），经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素（Bio—WGA）及链霉亲和素（SA）的最适浓度（或稀释度），建立了检测p185糖链的凝集素ELISA，用所建立的方法检测血清p185糖链，免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果 乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性（P〉0．05）。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86．7％，特异度为94，6％，准确度为91．9％。结论 本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高，临床具有实用价值。     

肝癌与肝硬化患者血清碱性磷酸酶肝型同工酶的比较

用麦胚凝集素亲和层析柱分离得到血清碱性磷酸酶肝同工酶，再用蔓陀罗凝集素亲和层析柱分析其糖链结构，发现该同工酶在肝癌和肝硬化患者中糖链结构不同，表现为与蔓陀罗凝集素的亲和力不同，肝癌血清含有与蔓陀罗凝集素强结合的肝型同工酶，而这在肝硬化及其它良性肝胆疾病和正常人中均未发现，肝癌血清碱性磷酸酶型同工酶的这种特征的糖链结构，有可能成为肝脏癌变的新的血清学生化标志物。     

肝癌与肝硬化患者血清碱性磷酸酶肝型同工酶的比较

用麦胚凝集素亲和层析柱分离得到血清碱性磷酸酶肝型同工酶，再用蔓陀罗凝集素亲和层析柱分析其糖链结构，发现该同工酶在肝癌和肝硬化患者中糖链结构不同，表现为与蔓陀罗凝集素的亲和力不同。肝癌血清含有与蔓陀罗凝集素强结合的肝型同工酶，而这在肝硬化及其它良性肝胆疾病和正常人中均未发现。肝癌血清碱性磷酸酶肝型同工酶的这种特征的糖链结构，有可能成为肝脏癌变的新的血清学生化标志物。     

凝集素亲和层析分析血清GGT寡糖链结构

目的用凝集素亲和层析法,探讨血清GGT在各种肝病时其寡糖链的变化,寻找出肝癌特异性GGT寡糖链结构,为进一步建立简易、特异的小柱亲和层析法分离肝癌特异性GGT奠定基础.方法以唾液酸酶水解GGT糖链末端的唾液酸,再用DSA和ConA亲和层析柱对各种肝病患者血清GGT进行洗脱,结合两种凝集素结合糖链的特性,分析其糖链结构.结果血清经唾液酸酶水解,再用两种凝集素亲和层析后,发现肝病患者GGT糖链结构均有所变化.N糖链天线数肝癌＞良性肝病＞正常人,糖链末端唾液酸量肝癌＞良性肝病＞正常人.肝癌病人出现和DSA强结合组分,该组分不被ConA结合.结论肝癌病人血清GGT可出现和DSA强结合的三天线或四天线N糖链,可利用这一特点建立检测肝癌特异性GGT的凝集素亲和小柱层析法.     

卵巢癌与正常卵巢组织中糖抗原125N-糖链结构比较分析

糖抗原（CA）125是一种卵巢癌相关抗原，由MUC16基因编码，为一大分子糖蛋白，其碳水化合物占总量的24％-28％，含有N-和O-连接糖链。是目前临床上惟一用于卵巢癌诊断的较理想的肿瘤标志，但由于CA125不仅存在卵巢癌组织，而且存在苗勒氏管起源的组织及少数非卵巢肿瘤组织中，故CA125对卵巢癌诊断的特异性不高。近年来对糖蛋白糖链结构的研究发现，在肿瘤发生过程中，糖蛋白分子在糖链结构上存在异质性，利用其异质性可提高糖蛋白分子在肿瘤鉴别诊断中的价值。本研究用序列固相凝集素亲和层析技术对上皮性卵巢癌细胞系H0-89105合成的和正常卵巢组织中的CA125N-糖链进行结构分析，同时比较这2种不同来源的CA125分子异质性，以便为提高CA125诊断及鉴别诊断卵巢癌的特异性提供基础依据。     

肝癌组织和肝癌旁组织中γ-谷氨酰转肽酶糖链结构分析

目的比较肝癌组织和肝癌旁组织中γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活力及其N-连接型糖链结构的变化.方法用荧光分光光度法测定肝癌组织和肝癌旁组织中的γ GT活力,并用固相凝集素亲和层析测定γ-GT的糖链与刀豆球蛋白(ConA)和曼陀罗凝集素(DSA)结合百分比,以研究肝癌γ-GT糖链结构的变化.结果肝癌组织中γGT活力均较肝癌旁组织明显增高.两者相比,肝癌组织中γ GT与ConA柱不结合的组分明显升高,弱结合和强结合的组分显著降低;在DSA柱上则相反,不结合的γ-GT组分显著降低,弱结合和强结合的γ-GT组分显著升高.结论肝组织癌变后,其γ-GT活力明显增高,而且伴随着γ-GT糖链结构的明显变化二天线糖链结构明显减少,三、四天线糖链结构明显增高.提示带多天线糖链结构的γ-GT可能是一种肝癌标志物.     

肝癌组织和肝癌旁组织中γ—谷氨酰转肽酶糖链结构分析

目的：比较肝癌组织和肝癌旁组织中γ－谷氨酰转肽酶（γ-GT）活力及其N－连接型糖链结构的变化。方法：用荧光分光光度法测定肝癌组织和肝癌旁组织中的γ-GT活力，并用固相凝集素亲和层析测定γ-GT的糖链与刀豆球蛋白（ConA）和曼陀罗凝集素（DSA）结合百分比，以研究肝癌γ-GT糖链结构的变化，结果：肝癌组织中γ-GT活力均较肝癌旁组织明显增高，两者相比，肝癌组织中γ-GT与ConA柱不结合的组分明显升高，弱结合和强结合的组分显著降低，在DSA柱上则相反，不结合的γ-GT组分显著降低，弱结合和弱结合的γ-GT组分显著升高，结论：肝组织癌变后，其γ-GT活力明显增高，而且伴随着γ-GT糖链结构的明显变化：二天线糖链结构明显减少，三、四天线糖链结构明显增高，提示带多天线糖链结构的γ-GT可能是一种肝癌标志物。     

大肠腺瘤与癌组织凝集素受体研究

应用ＡＢＣ酶标记技术观察经内镜活检与电切取材的正常大肠粘膜、大肠腺瘤与大肠癌标本中花生凝集素与双花扁豆凝集素受体。花生凝集素受体，正常大肠粘膜１０．０％阳性，大肠腺瘤２７．５％阳性，大肠癌７５．０％阳性；双花扁豆凝集素受体，正常大肠粘膜１００％阳性，大肠腺瘤８０．００％阳性，大肠癌１５．６２％阳性。分析本组结果，进一步证实大肠癌有与正常大肠粘膜不同的糖链结构，即凝集素受体。部分大肠腺瘤中亦存在与大肠癌相似的糖链结构。     

序列凝集素亲和层析分析人血清骨型ALP糖链结构

用麦胚凝集素（ＷＧＡ）、蔓陀萝凝集素（ＤＳＡ）、伴刀豆蛋白（ＣｏｎＡ）亲和层析技术分析正常小儿和良性骨病患者的血清骨型碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的糖链结构，推测出人血清骨型ＡＬＰ的糖链结构主要为：含有平分型Ｎ－乙酰胺基葡萄糖（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ－ＧｌｃＮＡｃ）的“二天线”复杂型Ｎ－糖链，且糖链外侧连有唾液酸（ＳＡ）、不含２，２，６－和２，４，２，６－分枝的“多天线”糖链，为研究良、恶性骨病血清骨型ＡＬＰ     

胆管癌胆管胆汁中糖蛋白糖链结构变化及其酶学机制

目的：研究胆管癌胆汁中糖蛋白糖链结构的变化及其酶学机制，探讨胆汁中糖蛋白成份厦其糖链结构的改变在良恶性胆道病变中的鉴别诊断价值。方法：运用各种生化技术将一组恶性胆道病变（胆管癌27例、胆囊癌9例、壶腹癌5例）和20例良性胆道病变所致梗阻性黄疸病人胆管胆汁中的蛋白分离出来，进行糖蛋白定性。采用制备好的HRP标记凝集素探针（DSA-HRP、WGAHRP、LCA-HRP、ConA-HRP）分别对良恶性胆管胆汁中的糖蛋白的糖链结构进行检测和分析。将已分离、纯化和鉴定好的GnT-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的最适受体底物与上述胆管癌、胆囊癌组织及良性胆管组织的酶液进行反应，再以HPLC测定组织中（GnT-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活力。结果：良恶性胆道病变的胆汁中糖蛋白的糖链结构存在明显差异，胆管癌胆汁中糖蛋白的糖链结构的变化主要表现为天线数和核心岩藻糖的明显增多，还可能伴有平分型GlcNAc的增多。GnT-Ⅴ、Ⅳ、Ⅲ的活力在胆管癌和胆囊癌癌组织中明显高于良性对照组，尤以GnT-Ⅴ、Ⅲ活力增高更明显。结论：胆管癌胆汁中的糖蛋白厦其糖链结构的变化可能对胆管癌的定性诊断有一定价值。胆管癌组织中糖基转移酶活力的改变是胆汁中糖蛋白糖链结构变化的酶学机制。     

亲和吸附法在甲胎蛋白异质体检测中的应用

血清甲胎蛋白(AFP)测定已被广泛应用于肝癌的诊断。人们在发现了AFP存在糖链有差别的异质体后，就利用它们与不同植物凝集素的亲和性进行分类，例如，岩藻糖苷化的AFP亲和豌豆凝集素(LCA)称LCA—AFP—V，氨基葡萄糖化的亲和刀豆素A(ConA)称ConA—AFP—V。许多报道表明测定AFP的某些糖链异质体可明显提高肝癌实验室诊断的特异性和灵敏度。但是长期以来，国内只有少数临床实验室能够测定AFP异质体，     

甲胎蛋白异质体的临床意义

近年研究表明,不同病变的组织细胞在合成分泌甲胎蛋白(AFP)的过程中,由于细胞特性以及所处的生理与病理状态不同,各种N糖链加工酶的活力也各不相同,导致合成的AFP糖链结构具有不均一性,这些不同糖链结构的AFP称AFP异质体[1]。植物凝集素是没有酶活力的蛋白质或糖蛋白,能识别一定顺序的糖链并与之专一结合,利用各种疾病AFP糖链结构的不同,可用植物凝集素来分离AFP异质体,用扁豆凝集素(LCA)分离的AFP异质体有结合型AFP(AFP-RL)和非结合型AFP(AFP-NL)2种。许多研究表明AFP-RL对鉴别肝细胞肝癌(HCC)与良性肝病具重要意义[2…     

血清异常IgA测定诊断IgA肾病的新方法

目的将糖生物学理论与免疫技术相结合,建立一种血清学检测诊断IgA肾病(IgAN)的新方法,以解决只能依靠肾活检穿刺术诊断IgAN问题.方法应用特异性识别糖链末端的凝集素,并结合抗人IgA特异抗体的酶联免疫吸附法(ELISA),检测血清中糖链异常的IgA的水平.结果采用该方法,对各组血清405nm吸光值测定结果表明正常对照组测定值0.22±0.10(n=156),IgAN确诊病人组0.68±0.17(n=22),两者差异有显著意义(P<0.001);IgAN疑诊病人组的测定值0.38±0.15(n=19),高于正常对照组.22份确诊的IgAN病人血清中,与病理诊断的阳性符合率为81.8%(19/22),而假阳性率仅为1.9%(3/156).结论血清中糖链异常IgA分子的凝集素亲和-ELISA检测方法,具有灵敏度高、特异性好的优点,对于IgAN的诊断具有一定的临床应用价值.     

凝集素亲和电泳-免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体

甲胎蛋白(AFP)是一个公认的肝细胞癌(HCC)标记物.然而,部分慢性肝炎、肝硬化等良性肝病亦可合成少量AFP.由于糖基化过程的差异,不同疾病状况下肝细胞分泌的AFP 在糖链结构上并不相同.为了鉴别AFP是产生于恶性肝癌细胞还是良性肝病细胞,人们已建立多种 AFP糖链变异体测定方法.新近的报告表明, AFP糖链变异体测定还有助于HCC复发转移的监测和预后的判断[1,2].我们在已建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法[3]的基础上,又建立了操作更简便、敏感度更高的凝集素亲和电泳-免疫印迹法,并初步用于良恶性肝病的AFP糖链变异体检测.     

应用江苏菜豆红细胞凝集素亲和柱检测肝癌特异γ-谷氨酰移肽酶

由于肝脏γ-谷氨酰移肽酶(GGT)糖链的改变与恶性转化有关。我们利用神经氨酸酶(NMD)消化的人血清GGT 糖链与江苏菜豆红细胞植物血球凝集素(E-PHA)的亲和性差异,区别原发性肝癌和良性肝病。     

肝癌γ-谷氨酰转肽酶糖链的凝集素亲和分析

目的：研究肝癌γ－谷近酰转肽酶（γ－GT）糖链结构的变化以寻找新的肝癌标志物。方法：将肝癌组织和癌旁正常肝组织中γ－GT抽提液、肝癌患者血清和正常人血清，分别用ConA和DSA两种固相凝集素柱进行亲和层析，有荧光分光光度法测定各收集管的γ－GT活力并计算不同结合组分的百分比。结果：肝癌组织与癌旁正常肝组织相比，其γ－GT中与ConA柱不结合的组分明显升高，弱结合和强结合的组分显著降低；在DSA柱上则相反，不结合的γ－GT组分显著降低，弱结合和强结合的γ－GT组分显著升高。血清γ－GT分析结果与此相似。结论：肝组织癌变后，其γ－GT的糖链结构发生了明显变化：2天线糖链结构明显减少，3、4天线糖链结构明显增高。提示带多天线糖链结构的γ－GT可能是一种肝癌标志物。