多聚酶链反应对急性白血病巨细胞病毒感染的观察

多聚酶链反应对急性白血病巨细胞病毒感染的观察石奇珍吕联煌辛碧珍郭瑞官人类巨细胞病毒（ＨｕｍａｎＣｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）是条件致病性病原体，免疫功能低下者极易感染。急性白血病（ＡＬ）患者是免疫功能低下的人群，多聚酶链反应（ＰＣＲ）是检...     

献血员中巨细胞病毒感染的PCR检测

采用快速、敏感和特异性的聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１０８名献血员进行了人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果表明，有８４例表现为ＨＣＭＶ阳性，占被检测对象的７７．８％。说明人群中ＨＣＭＶ的感染率是较高的。同时，从本文的ＨＣＭＶ的ＰＣＲ敏感性和待异性试验表明，ＰＣＲ技术可以检测样品中少到２０个拷贝的ＨＣＭＶ模板ＤＮＡ。因此，ＰＣＲ技术是可以替代或弥补目前繁琐的细胞培养技术及血清学方法而用于临床检测的。     

应用FQ-PCR和ELISA方法检测人巨细胞病毒感染的临床价值

目的 探讨检测巨细胞病毒(CMV)的方法学及在临床诊断与治疗中的应用价值 方法 对456例临床疑似HCMV感染的患者分别应用FQ-PCR、ELISA法检测其尿液、血液HCMV-DNA及血清HCMV-IgM抗体水平.结果 尿液HCMV-DNA 阳性281例,血HCMV-DNA阳性238例,HCMV-IgM抗体阳性144例;HCMV-DNA阳性者中,血清IgM抗体阳性HCMVDNA拷贝数对数均值高于阴性(P＜0.01).结论 尿液、血液HCMV-DNA定量和血清HCMV-IgM抗体联合检测有助于HCMV感染的诊断.     

应用FQ—PCR和ELISA方法检测人巨细胞病毒感染的临床价值

目的探讨检测巨细胞病毒（CMV）的方法学及在临床诊断与治疗中的应用价值方法对456例临床疑似HCMV感染的患者分别应用FQ-PCR、ELISA法检测其尿液、血液HCMV-DNA及血清HCMV-IgM抗体水平。结果尿液HCMV-DNA阳性281例,血HCMV-DNA阳性238例,HCMV-IgM抗体阳性144例 HCMV-DNA阳性者中,血清IgM抗体阳性HCMV-DNA拷贝数对数均值高于阴性（P〈0.01）。结论尿液、血液HCMV-DNA定量和血清HCMV-IgM抗体联合检测有助于HCMV感染的诊断。     

280例孕妇巨细胞病毒的检测分析

目的：了解孕妇人巨细胞病毒（HCMV）近期感染状况。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对280例孕妇和50名孕前检查的健康妇女外周血进行了HCMV—IgM检测。结果：在280例孕妇中检测出HCMV—IgM阳性标本3例,阳性率为1．07％,50例健康妇女中未检测到HCMV—IgM阳性标本。结论：在孕妇中巨细胞病毒有一定近期感染率。     

用多聚酶链反应诊断早产、死胎及先天畸形儿巨细胞病毒感染

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测７２例早产、死胎及先天性畸形儿尸解石蜡包埋标本中的巨细胞病毒ＤＮＡ，阳性率６．９４％；５例阳性者中，双胎宫内死亡２例，先天性畸形２例，脑积水１例。结果提示异常妊娠和先天畸形的发生与巨细胞病毒感染有关。文中讨论了多聚酶链反应诊断巨细胞病毒感染的价值。     

脑瘫患儿CT改变与巨细胞病毒感染关系的初步研究

用多聚酶链反应法（ＰＣＲ）检测７４例脑瘫患儿尿中巨细胞病毒ＤＮＡ（ＣＷＶ－ＤＮＡ），ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率为５４．１％，同时行ＣＴ检查，其中４７例（６３．５％）异常，在ＣＴ异常组中ＣＭＶ－ＰＣＲ阳性率为６３．８％，而ＣＴ正常组阳性率为３６．５％，两者比较差异有显著性。（Ｐ＜０．０５）。示ＣＭＶ感染可能与婴儿脑损伤有关，且在一部分患儿可引起解剖性损伤。     

小儿巨细胞病毒感染状况分析

目的探讨巨细胞病毒在小儿各年龄段以及在各种疾病中的感染情况。方法对650例来徐州市中心医院就诊疑似巨细胞病毒(HCMV)感染的患儿用聚合酶链反应(PCR)检测尿巨细胞病毒DNA,并有针对性地检测母乳巨细胞病毒DNA含量。结果目标人群中对巨细胞的感染情况:新生儿感染率13.2%,婴儿感染率4.9%,幼儿感染率3.1%,学龄前及学龄期儿童感染率0.9%。新生儿高胆红素血症中HCMV感染率40%,早产儿HC-MV感染率40%,支气管炎HCMV感染率17.2%,肺炎HCMV感染率17.6%,发热HCMV感染率11.3%,白血病HCMV感染率6.7%。新生儿感染者其母亲乳汁中的巨细胞阳性率为95%,婴幼儿感染者其母亲乳汁中的巨细胞感染率为92%。结论新生儿及婴幼儿较易感染巨细胞病毒,并且导致的疾病相对也较严重,特别是在新生儿高胆红素血症中巨细胞病毒的检出率较高,而且绝大多数的感染来自其母亲。     

人巨细胞病毒感染作为冠心病独立危险因子的可能性探讨

背景：目前对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染与冠心病的关系及HCMV感染可否作为冠心病的独立危险因子还存在争议。目的：进一步探讨HCMV感染与冠心病的关系及HCMV感染可否作为冠心病的独立危险因子。设计：单盲非随机的对照试验。地点、对象和方法：选择广东医学院附属医院和第二附属医院住院患者98例为冠心病组(年龄42～72岁)，广东医学院健康志愿者50例为对照组(年龄40～69岁，已经临床及实验室检查排除了心脏疾患)，采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测两组的HCMV-IgG，HCMV-IgM和HCMV-IgA抗体阳性率和标本450nm吸光度值／阴性对照450nm吸光度值(S／N值)，聚合酶链反应(PCR)检测两组的HCMV-DNA阳性率。主要观察指标：两组患者HCMV-IsG，HCMV-IgM和HCMV-IgA抗体阳性率、S／N值和HCMV-DNA阳性率比较。结果：冠心病组的HCMV-IgG，HCMV-IgM，HCMV-IgA抗体阳性率分别为91．8％，15．3％和16．3％，均明显高于对照组(P&;lt;0．01)；冠心病组的S／N值分别为3．57&;#177;1．29，1．98&;#177;0．35和1．99．4-0．31，均明显高于对照组(P&;lt;0．01)；HCMV-DNA阳性率为60．2％，明显高于对照组(P&;lt;0．01)。HCMV抗体和HCMV-DNA阳性率不受血清胆固醇、三酰甘油水平及是否伴有高血压和／或糖尿病的影响(除HCMV-IgM抗体阳性率在是否伴有高血压和／或糖尿病两组间比较P&;lt;0．05外，余均为P&;gt;0．05)。结论：HCMV感染可能与冠心病有关，HCMV感染可能可作为冠心病的独立危险因子。     

原发性巨细胞病毒感染对妊娠的影响

目的　了解巨细胞病毒(CMV)感染对妊娠的影响。方法　收集确诊为原发性CMV感染并宫内传播的孕妇50例(怀51胎)。通过羊膜穿刺术和超声检查对胎儿进行评估。在孕龄21 周后,通过羊腹腔穿刺术取羊水做病毒分离培养,聚合酶链反应(PCR)分析。通过新生儿的尿液病毒分离培养或流产胎儿的组织活检确定新生儿是否感染CMV;对18例存活的新生儿进行脑超声检查、听力评估、智力发育状况评价等研究。结果　50例孕妇中33例(66%)选择终止妊娠;11 例(21.5%)超声检查异常的胎儿与宫内胎儿CMV感染有关,其中2 例继续妊娠至足月,两者均属先天性感染,其中1例出现神经功能异常。聚合酶链反应和病毒分离培养法对50例孕妇(怀51胎)进行评价的阳性预测值分别为92.0%和93.7%。17例孕妇(怀18胎)继续妊娠至足月;4例新生儿神经功能异常,其中3例产前超声检查正常;余下14例新生儿经评估证实正常。结论　羊水CMV分离培养阳性,同时PCR阳性的对象中,约94%病例被为宫内CMV感染。产前超声检查正常的胎儿中,产后出现神经功能异常的危险性为19%(3/16)。     

Clinical factor associated with congenital cytomegalovirus infection in pregnant women with non-primary infection

The aim of this nested case-control study was to evaluate clinical factors associated with the occurrence of congenital cytomegalovirus (CMV) infection in pregnant women with non-primary CMV infection. In a cohort study of CMV screening for 2193 pregnant women and their newborns, seven newborns with congenital CMV infection were identified among 1287 pregnant women with non-primary CMV infection that was defined as negative IgM and positive IgG with IgG avidity index >45%. In the 1287 women with non-primary CMV infection, clinical findings and complications were compared between pregnancies with and without congenital CMV infection. Clinical factors associated with the occurrence of congenital CMV infection were evaluated. The birth weight of newborns with congenital CMV infection was less than that of newborns without congenital infection (p < 0.05). Univariate logistic regression analyses demonstrated that threatened premature delivery (OR 10.6, 95%CI 2.0–55.0; p < 0.01) and multiple pregnancy (OR 7.1, 95%CI 1.4–37.4; p < 0.05) were associated with congenital infection. Multivariable logistic regression analyses demonstrated that threatened premature delivery (OR 8.4, 95%CI 1.5–48.1; p < 0.05) was a single risk factor for congenital CMV infection in pregnant women with non-primary CMV infection. This study revealed for the first time that threatened premature delivery was associated with the occurrence of congenital CMV infection in pregnant women with non-primary CMV infection, the pathophysiology of which may be closely associated with CMV reactivation during pregnancy.     

HCMVpp65抗原和IgM抗体检测诊断儿童HCMV活动性感染的比较

目的：比较人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原(以下简称pp65)检测和血清HCMV-IgM抗体(以下简称IgM抗体)检测两种方法对儿童HCMV活动性感染的诊断实用意义。方法：采集临床疑似HCMV活动性感染儿童血标本(共251份)，分离血浆和多形核白细胞，分别用于IgM抗体检测和pp65检测。同时进行荧光定量PCR检测HCMVDNA，与pp65抗原作平行比较。结果：pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的符合率为73.3％。与HCMV DNA检测相比pp65抗原检测法的符合率、特异度和敏感度分别为85．5％，85．2％和86．2％。而且高pp65抗原血症与患者的临床症状密切相关。结论：pp65抗原血症反映该病毒活动状况，可监测HCMV活动性感染。由于儿童患者还存在原发感染的可能性，所以．联合HCMV-IgM的监测来提高临床的诊断率。     

异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染监测的临床价值

目的探讨异基因造血干细胞移植患者巨细胞病毒感染的临床价值,评价其CMV感染与CMV病的关系并观察抗病毒疗效。方法用实时荧光定量PCR方法动态监测CMV-DNA拷贝数的变化。结果异基因造血干细胞移植患者115例,其中有32例患者出现1～3次血CMV阳性,占27．83％（32／115）。32例阳性患者中4例发生CMV病,占12．5％。血CMV阳性者32例中有25例合并细菌或真菌感染,占78．13％（25／32）。血CMV阳性患者中,28．13％（9／32）出现移植后继发造血抑制,83例血CMV阴性患者中,18．07％（15／83）出现继发造血抑制,发生率的差异无统计学意义。单独应用更昔洛韦为主治疗的15例,13例CMV检测转阴,占86．67％。单独应用膦甲酸钠为主治疗的患者5例,CMV检测转阴4例。结论对异基因造血干细胞移植患者应高度关注CMV感染问题,坚持每周监测血CMV-DNA拷贝数,发现CMV血症及时给予抗病毒治疗,防止发生CMV病,是降低病死率的关键。     

孕产妇四种病原体感染血清学筛查的研究

目的 探讨正常孕妇弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒(Torch)感染血清学筛查的意义，妊娠伴胚胎停止发育及产史不良与Torch感染的关系。方法 间接荧光法检测血清Torch—IgG抗体和酶免疫捕获法检测Torch—IgM抗体。303例孕妇、27例妊娠伴胚胎停育及192例产史不良妇女进行了弓形虫血清学筛查，进行风疹病毒血清学筛查的分别278，30和214例，巨细胞病毒(CMV)筛查的分别为280，31和228例，单纯疱疹病毒(HSV)筛查的分别为236，25和168例。结果 孕妇、妊娠伴胚胎停育和产史不良妇女血清弓形虫IgG／IgM抗体阳性率分别为2．3％／0．33％，0／0，1．04％／0；风疹病毒IgG／IgM抗体阳性率分别为93．2％／1．4％，96．7％／0，98．6％／0；CMV—IgG／IgM阳性率分别为88．6％／1．1％，87．1％／0，91．2％／0；HSV—IgG／IgM阳性率分别为93．2％/1.3％，88．0％／0，94．6％/0。外院Torch—IgM抗体阳性的31份孕妇血清标本仅确认1份为真正阳性。结论 孕妇弓形虫感染率低，常规筛查的价值需要探讨。妊娠前确定风疹的免疫状态对孕妇风疹筛查意义重大。孕妇CMV血清学筛查方案需要进一步研究。初筛Torch—IgM抗体阳性的血清标本应当复查和确认，以避免假阳性。未发现妊娠伴胚胎停止发育以及产史不良与Torch感染存在关联。     

Comparison of 2 highly automated nucleic acid extraction systems for quantitation of human cytomegalovirus in whole blood

The aim of the study was to evaluate analytical performances of the COBAS Ampliprep and to compare extraction from whole blood on the COBAS Ampliprep and on the MagNA Pure instruments (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) for quantifying human cytomegalovirus (HCMV) DNA with real-time polymerase chain reaction (PCR). The limit of detection using the COBAS Ampliprep was 10 copies/run (150 copies/mL, i.e., 2.20 log(10) copies/mL). Quantitation of HCMV-DNA was linear from 3.0 to 6.0 log(10) copies/mL. The intra-assay variations ranged from 11.1 % to 0.4 % and interassay variation was 11.3 %. A total of 107 samples were tested using both extraction systems. Only 3 samples gave discrepant results. Correlation between HCMV virus loads was good (r = 0.73) (P < 0.001). Mean virus load was lower (-0.49 log(10) copies/mL) with COBAS Ampliprep than with MagNA Pure extraction system. Both MagNA Pure and COBAS Ampliprep provide reliable and high-throughput platforms for real-time PCR HCMV quantitation of DNA extracted from whole blood.     

巨细胞病毒对人骨髓粒-巨噬系祖细胞生长的影响

目的探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对人骨髓粒巨噬系祖细胞集落（ＣＦＵＧＭ）是否有直接抑制作用。方法采用造血祖细胞体外培养技术,研究病毒株ＨＣＭＶＡＤ１６９对ＣＦＵＧＭ生长的影响,用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测ＣＦＵＧＭ的细胞内ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结果高浓度ＨＣＭＶＡＤ１６９（２×１０６ｐｆｕ／ｍｌ和２×１０５ｐｆｕ／ｍｌ）在体外能明显抑制ＣＦＵＧＭ的生长（Ｐ＜０．０１）,而低浓度（２×１０４ｐｆｕ／ｍｌ）ＨＣＭＶＡＤ１６９则无此作用,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ的抑制作用因其浓度的不同而有差异;经ＩＳＰＣＲ检测发现在ＣＦＵＧＭ的细胞核中存在ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结论ＣＦＵＧＭ是ＨＣＭＶＡＤ１６９的宿主细胞之一,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ生长的抑制作用与其对ＣＦＵＧＭ的直接感染有关。     

套式聚合酶链反应检测巨细胞病毒的初步研究

目的建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）。方法在ＨＣＭＶ直接早期蛋白ＥｃｏＲＩＪＤＮＡ片段内，自行设计两对引物，建立套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶＤＮＡ，同时结合病毒分离检测临床标本。结果２３例新生儿肝炎综合征患儿中，１０例病毒分离及套式ＰＣＲ均阳性；１例病毒分离阴性，但套式ＰＣＲ阳性。对５８例妊娠早期孕妇血标本进行检测，套式ＰＣＲ阳性率为９％，病毒分离阳性率则为７％。结论套式ＰＣＲ加限制性酶切分析是一种临床检测ＨＣＭＶ的快速有效手段，值得临床推广。     

Rapid detection of codon 460 mutations in the UL97 gene of ganciclovir-resistant cytomegalovirus clinical isolates by real-time PCR using molecular beacons

A rapid real-time polymerase chain reaction (PCR) assay using molecular beacons has been developed for the simultaneous detection of wild-type and mutant strains of cytomegaloviruses (CMV) with respect to codon 460 of the UL97 gene has been developed. The molecular beacons were designed to complement the wild-type codon 460 or the mutant sequence arising from a single base-pair difference (point mutation). Discrimination between wild-type and mutant templates was demonstrated as the beacons did not generate fluorescence with their respective mismatch targets but only with those that they were designed to perfectly anneal with. Samples that harbor mixed populations of CMV could also be readily recognized. Applied to a small number of clinical samples, the retrospective screening by this assay are in general concordance with that obtained by PCR-RFLP. Using molecular beacons strategy, codon 460 mutation was detected in ten out o the total number of 40 samples, whereas the latter method identified nine samples as containing the mutation. The discrepant result arose from the genotyping of one clinical sample as mixed (containing both wild-type and mutant CMV strains) by molecular beacons but as wild-type by PCR-RFLP, suggesting that this real-time strategy is possibly more sensitive for mutation analysis.     

实时荧光定量PCR技术在肾移植术后巨细胞病毒性肺炎诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR检测巨细胞病毒在肾移植术后肺部感染诊断中的应用价值。方法应用实时荧光定量PCR检测2002年1月至2006年1月在本院行肾移植术后肺部感染患者39例,健康自愿者50人的血清CMV DNA载量,应用SPSS10 0软件对检测结果进行统计学分析。结果肺部感染患者组39份样本中,19份可以检测到数值(阳性率为49%),其病毒拷贝数值介于1.05×103~4.26×105之间,平均为2.23×104;对照组中仅一份检测到数值(阳性率为2%),且CMV DNA小于104,其余49份均低于检测下限,实时荧光定量PCR检测CMV结果对病情发展有预测价值。结论实时荧光定量PCR技术为肾移植术后巨细胞病毒性肺炎的早期诊断提供了有效的试验手段,从而大大提高了肾移植术后巨细胞病毒性肺炎的治愈率。     

人巨细胞病毒IE抗原快速免疫荧光检测法在先天性人巨细胞病毒感染筛查中的应用

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)IE抗原快速免疫荧光检测法在先天性HCMV感染筛查中的应用价值。 方法收集2017年1至12月安徽省妇幼保健院产科352例新生儿唾液标本和足底干血片标本。使用病毒分离培养和HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法检测新生儿唾液标本;使用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测足底干血片标本HCMV-DNA。以病毒分离培养的结果作为标准,比较HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法和足底干血片标本荧光定量PCR法在检测先天性HCMV感染中的检验效能。 结果352例唾液标本共分离5例阳性标本,阳性率为1.42%;而荧光定量PCR检测足底干血片标本仅4例阳性,阳性率为1.14%;HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法检测的结果与病毒分离完全一致。足底干血片荧光定量PCR检测的敏感度为80%,特异度为100%;HCMV IE抗原快速免疫荧光检测的敏感度为100%,特异度为100%。HCMV IE抗原快速免疫荧光检测的敏感度高于足底干血片荧光定量PCR检测,但差异无统计学意义(Z＝0.94,P＝0.350)。 结论HCMV IE抗原快速免疫荧光检测可能是更准确的先天性HCMV感染早期诊断方法。