双靶向超声微泡造影剂评价小鼠缺血再灌注心肌

目的 制备同时携载P选择素和ICAM-1抗体的靶向超声微泡造影剂,以评估小鼠缺血再灌注损伤心肌声学造影显像效果.方法 采用生物素-亲和素方法制备靶向微泡,于激光共聚焦显微镜下观察微泡形态,流式细胞仪检测连接效率.将24只健康昆明小鼠随机分成3组:结合双抗体选择素微泡组(MBd组)10只、结合P选择素单抗组(MBp组)10只,空白微泡组(MBc组)4只.结扎冠状动脉左前降支近左主干分支,制作心肌缺血再灌注模型,60 min后经尾静脉分别注射MBd、MBp及MBc,采集心肌对比造影图像.所有图像均采用Sonomath超声影像分析仪处理.结果 MBd组和MBp组对缺氧内皮细胞的黏附力以及对缺血再灌注区心肌显像增强程度显著高于MBc组(P均＜0.05),MBd组对缺血再灌注区心肌显像延迟时间高于MBp组(P＜0.05).结论 双靶向微泡联合超声造影是检测和评估小鼠缺血再灌注心肌的无创性手段.     

携抗P-selectin靶向超声造影剂犬体内超声分子成像

目的 制备携抗P-selectin靶向超声造影剂,探讨其评价心肌缺血再灌注损伤的超声分子成像效果。方法 采用“生物素-亲和素”桥接法制备携抗P-selectin靶向超声造影剂,建立犬心肌缺血再灌注模型,分别注入携抗P-selectin靶向超声造影剂（MBp）和空白超声造影剂（MBc）,行心肌声学造影检查,采图、存盘。应用DFY型超声图像定量分析诊断仪中的彩色编码技术对存储的图像进行脱机处理,观察MBp体内超声分子成像效果。结果 成功制备携抗P-selectin靶向超声造影剂及建立犬心肌缺血再灌注模型。彩色编码图像示MBp行心肌声学造影可见缺血再灌注区心肌显著增强;MBc于缺血再灌注区心肌造影无明显增强。结论 应用携抗P-selectin靶向超声造影剂行心肌声学造影检查能准确检测再灌注治疗后犬心肌缺血再灌注损伤。     

携Sialyl Lewis~X和抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡评价心肌缺血再灌注损伤对比研究

目的探讨携Sialyl Lewis~X靶向超声微泡结合对比超声分子成像评价心肌缺血再灌注损伤可行性并与携抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡对比分析。方法采用"亲和素-生物素"桥接法构建携Sialyl Lewis~X和抗小鼠P选择素单抗靶向超声微泡(MB_(slex)、MBp),并应用平行板流动腔技术在体外模拟的生理血流条件下评价MBp和MB_(slex)与小鼠P-选择素Fc段的靶向黏附效能。然后,20只心肌缺血再灌注(IR)小鼠随机经静脉注入MB_(slex)和MBp,分别于注入5min后行心肌对比超声心动图(MCE)检查,测量心肌缺血区和非缺血区的声强度(VI)。结果平行板流动腔实验显示:在第6分钟时,MB_(slex)与小鼠P-选择素Fc段结合数目为MBp的1.7倍。对比超声图像显示MB_(slex)组和MBp组缺血区心肌均见显著造影增强,声强度(VI)值分别为(23.52±1.08)U、(25.98±6.23)U,两者相比无显著差异(P0.05)。但无论是MBp组还是MB_(slex)组的缺血区心肌VI值均明显高于非缺血区心肌VI值[(6.53±0.95)U,(7.13±0.91)U,(P0.05)]。结论 MB_(slex)对炎症组织靶向检出能力与MBp相似,它和对比超声结合可有效评价心肌缺血再灌注损伤。     

靶向心肌声学造影监测兔心肌缺血或再灌注损伤中IL-8的表达

目的探讨靶向心肌声学造影(MCE)监测兔心肌缺血或再灌注损伤(MIRI)中IL-8表达的效果。方法经兔耳缘静脉注射SonoVue及携IL-8单抗超声微泡行MCE检查,实时荧光定量PCR(QPCR)检测IL-8的表达量。结果携IL-8单抗微泡组(靶向MCE组)随着再灌注时间延长心肌缺血区声强度(VI)逐渐增高,于再灌注180min达高峰;再灌注30~180min各时段靶向MCE组心肌缺血区VI值明显高于SonoVue微泡组(普通MCE组)。相关性分析得出靶向MCE结果与QPCR结果呈正相关(P0.05)。结论靶向MCE可无创性地监测MIRI中IL-8的表达量,提高对MIRI诊断的灵敏度,以及评价心肌再灌注情况。     

超声靶向微泡破坏技术评价心肌缺血再灌注损伤的研究进展

心肌缺血再灌注损伤是指原缺血心肌恢复血供后发生更为严重的损伤,再灌注损伤减弱了再灌注给机体带来的益处。心肌缺血再灌注损伤在靶向超声分子显像技术中有多种研究,包括超声靶向破坏微泡技术对心肌缺血再灌注的评价与介导靶向治疗,其中携IL-8单克隆抗体的超声靶向微泡破坏技术可明显减轻再灌注后炎症反应引起的损伤,减轻心肌坏死程度。     

抗内皮细胞黏附分子-1靶向微泡介导hAng-1基因转染治疗兔心肌缺血的实验研究

目的 探讨应用抗心肌内皮细胞粘附分子-1（ICAM-1）靶向微泡能否提高血管生成素-1基因在缺血心肌中的转染效率.方法 体外实验检测抗ICAM-1靶向微泡与经人白细胞介素-1β刺激后的ECV304细胞结合的程度.体内实验分三组：①对照组：hAng-1基因＋超声照射;②非靶向微泡组：携hAng-1基因微泡＋超声照射;③靶向微泡组：携hAng-1基因的抗ICAM-1靶向微泡＋超声照射.制作兔急性心梗模型,分别用上述三种方法从静脉导入hAng-1基因.2周后心肌造影检测梗死心肌灌注状况聚合酶链反应（RT-PCR）检测hAng-1基因的mRNA表达以评价转染疗效.结果 携抗ICAM-1抗体的微泡在体外能大量靶向结合到产生炎性反应的ECV304细胞周边.应用靶向微泡转染2周后,左室内径减小,射血分数升高,但与非靶向微泡比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,而心肌造影显示心肌内造影剂填充量较非靶向微泡组增多,且 RT-PCR定量灰度分析hAng-1mRNA（1.04±0.08）高于非靶向微泡组（0.53±0.04）,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 微泡与抗ICAM-1抗体连接后形成靶向微泡载体,可明显提高hAng-1基因在体内的转染效率,增加心肌梗死后局部的血管新生效应.     

超声分子成像对小鼠肾脏急性微血管炎症的可视性评价

目的 应用超声分子成像技术可视性评价小鼠肾脏急性微血管炎症.方法 缺血再灌注处理制备小鼠肾急性微血管炎症模型 (IR组,6只)及肾假手术处理模型(SH组,6只),所有实验小鼠均经静脉随机(间隔30 min)弹丸注射携带抗小鼠P-选择素单抗靶向超声微泡(MBp)、同型对照抗体超声微泡(MBc)及普通脂质超声微泡(MB),10 min后行肾对比超声(CEU)检查,测量肾脏显影的声强度(VI).并采用平行板流动腔技术在微血管生理血流条件下体外评价MBp的靶向黏附效能.结果 在缺血再灌注肾,MBp呈显著的超声显影,而MBc和MB呈轻度的超声显影;3种超声微泡在假手术肾均无明显的超声显影.MBp的VI值在缺血再灌注肾较假手术肾明显增大(P<0.05),同时较MBc和MB在缺血再灌注肾的VI值也都明显增大(P<0.05);而MBc及MB在缺血再灌注肾的VI值较各自假手术肾轻度增大(P<0.05).在微血管生理血流剪切应力环境下MBp可与小鼠P-选择素Fc段(PSFc)实现有效的靶向性特异结合.结论 超声分子成像技术可对肾脏急性微血管炎症进行有效的可视性评价,该技术将可用于可视性评价微血管炎症或相关的血管内皮反应.MBp在微血管生理血流条件下具有良好的靶向黏附效能.     

靶向超声微泡造影剂对犬缺血再灌注心肌的延迟显像研究

目的用自制的靶向超声微泡造影剂,实现无创性地评价犬心肌缺血再灌注(I-R)的范围及严重程度.方法将本研究所自行研制的表面活性剂类超声造影剂--"表活显"表面,结合上磷脂酰丝氨酸(PS),制备成具有靶向性的造影剂(MB-PS),用MB-PS对犬I-R模型在实时心脏超声造影条件下进行延迟心肌显像,实验结束后,心肌经0.5%伊文思蓝(Evens)和1%氯化三苯四氮唑(TTC)染色,确定缺血及坏死心肌范围,并与延迟心脏超声造影显像结果比较其一致性.结果细胞流式术(FC)证明了PS结合在造影剂微泡的表面,延迟心肌显像表明缺血再灌注区的造影剂回声较正常区的回声明显增强,与病理染色结果基本一致.结论缺血损伤再灌注后,心肌缺血部位的造影剂回声较其余部位正常心肌的造影剂回声明显增强,正是因为 MB-PS聚集并停留在缺血-再灌注区,才使得超声可以发现微泡的回声,从而得以无创性地评价炎症发生的部位及其严重程度.     

小鼠心肌缺血再灌注模型制备及其超声分子成像研究

目的以显微外科技术建立小鼠心肌缺血-再灌注模型,用其评价携抗P-选择素单抗靶向微泡(MBp)的"心肌炎症"超声分子成像效果。方法 30只昆明小鼠随机均分为缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,IR)和假手术(sham surgery,SH)组,手术组结扎冠脉前降支15min,再灌注1h。心电图、M型超声、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)和HE染色评价模型构建情况,分别将普通微泡和MBp经静脉注射到实验小鼠体内,评价MBp的超声分子成像效果。结果结扎前降支时前壁心肌呈明显充盈缺损,心电图ST段呈弓背向上抬高。再灌注后充盈缺损消失,ST段降至正常;M型超声检查显示,IR组左室短轴缩短率(LV-%FS)明显低于假手术组(P0.05);心脏TTC染色无坏死表现,而HE染色提示缺血区心肌存在炎症改变;MBp造影显示前壁心肌呈选择性显影增强,前壁视频强度(video intensity,Ⅵ)明显高于后壁(P0.01)。增强区域与结扎前降支时的充盈缺损区域高度相关(r=0.95)。结论 MBp可以有效评价心肌缺血再灌注"炎症"损伤,小鼠心肌缺血再灌注模型适宜于超声和其它显像方法的"炎症"分子成像研究。     

心肌再血管化机制的对比实验研究

目的观察研究钬激光和True-cut活检针心肌再血管化近、远期的机制和效果。方法利用经静脉注射造影剂对犬缺血心肌模型进行心肌超声微泡造影。结果部分结扎犬的冠状动脉前降支，建立缺血模型后，缺血区超声微泡密度明显降低，分别用2种方法再血管化后，2组犬缺血区超声微泡密度较缺血时均明显增加，接近其缺血前的微泡密度；再血管化区超声微泡较其他部位提前显影。远期超声微泡检查显示心肌灌注较急性缺血时也有一定改善。结合组织学方法发现，远期心肌灌注的改善得益于隧道周围新生循环结构如心肌窦和新生血管的增加。结论钬激光和True-cut活检针隧道均可即刻使缺血心肌灌注改善，并逐渐闭塞，新生循环结构使缺血区得到有限的灌注。应用新一代经静脉注射造影剂超声心肌微泡造影结合组织学方法可作为研究心肌再血管化机制的可靠手段。     

携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管靶向效应的研究

目的 探讨携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管的靶向效应.方法 通过生物素桥接法制成携抗αvβ3-整合素单抗的靶向脂质微泡(MBa)、对照微泡携同型抗体脂质微泡(MBc);选取12只HepG2皮下移植瘤裸鼠模型(肿瘤组)和正常对照裸鼠(对照组),经尾静脉随机注射MBa、MBc和RGDfvV封闭10 min后再注射MBa(Blocking+MBa),并行对比超声检查,测量声强度(VI).分别取肿瘤组肿瘤组织和对照组正常骨骼肌组织行病理学和免疫组化检查.结果 肿瘤组中MBa的VI值(17.43±3.30)U,较MBc的VI值(5.88±1.04)U增大近3倍,差异有统计学意义(P <0.01),应用RGDfvV封闭αvβ3-整合素后MBa的VI值降至(6.14±2.25)U,与MBc及对照组的各VI值比较差异均无统计学意义.免疫组化检查显示:肿瘤组织的新生血管内皮有大量αvβ3-整合素显色,可被RGDfvV封闭;而骨骼肌中仅有少量αvβ3-整合素显色.结论 携抗αvβ3-整合素单抗的靶向微泡对肿瘤新生血管具有明显的靶向效应,有望用于肿瘤的诊断和疗效评估.     

白细胞靶向超声造影显像无创评价犬心肌缺血再灌注损伤

目的 用白细胞靶向超声造影剂无创评价犬心肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I-R）损伤的范围及严重程度。 方法 将自制“表活显”（self-made surfactant fluorocarbon-filled microbubbles，SFCMB）与磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）结合，制备成白细胞靶向超声造影剂（SFCMB-PS），在实时心脏超声造影（myocardial contrast echocardiography，MCE）条件下，用SFCMB-PS对9只犬心肌I-R模型进行延迟心肌显像。实验结束后，在心肌I-R损伤处取组织块立即进行髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性测定。 结果 延迟心肌显像可见缺血心肌部位有明显充盈缺损，而再灌注后心肌的造影剂回声明显增强。定量分析结果表明I-R损伤心肌部位声像图的灰阶强度与MPO活性有明显的相关关系（r=0．776，P〈0．05）。 结论 用白细胞靶向超声造影剂评价心肌I-R损伤有明显的临床价值。     

实时心肌造影评价肥厚型心肌病患者心内膜下及心外膜下心肌灌注

目的应用实时心肌超声造影分析肥厚型心肌病（HCM）患者心内膜下及心外膜下心肌灌注状况,及其与室壁肥厚程度的关系,以评价肥厚型心肌病患者心肌微循环障碍。方法HCM患者26例,正常对照组20例,实时心肌超声造影观察心尖四腔、两腔、左心长轴切面实时动态图像,应用时间～强度曲线分析造影图像。结果HCM患者左室肥厚节段及非肥厚心肌节段的心内膜下及心外膜下心肌的A及A×k值低于对照组（P〈0．05）,k值高于对照组（P〈0．001）。HCM患者左室肥厚节段心内膜下及心外膜下心肌的的A及A×k值低于非肥厚心肌节段（P〈0．05）,k值高于非肥厚心肌节段（P〈0．05）。HCM患者心内膜下A、及A×k值低于下心外膜下（P〈0．001）。HCM患者肥厚节段心内膜下及心外膜下心肌A×k值与肥厚节段室壁厚度均呈负相关（r=-0．785,P〈0．001;r=-0．461,P〈0．05）。结论HCM患者肥厚节段与非肥厚节段的心内膜下及心外膜下心肌均存在微循环障碍,且以心内膜下心肌微循环损伤更为显著,同时,随着室壁厚度的增加,心肌血流灌注显著减少。实时心肌超声造影是评价HCM患者心肌微循环障碍的有效方法。     

下肢缺血＂晚时间窗＂的血管细胞黏附分子-1超声分子成像

目的 探讨应用携带血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）分子探针的超声分子成像,评价下肢缺血＂晚时间窗＂炎症反应的可行性.方法 12只实验小鼠结扎一侧下肢股动脉制备缺血模型,另一侧股动脉为对照.术后第3天随机先后（间隔30 min）经尾静脉注入携抗小鼠VCAM-1单抗的靶向微泡（MBV）和携同型抗体的对照微泡（MBC）,并于8 min后行对比超声检查,测量双侧下肢的显影强度（VI）;最后进行双下肢病理学检查.结果 对比超声图像显示：缺血下肢MBV组可见明显的超声显影,VI值高达（18.4±2.9）U;而在缺血下肢MBC组仅见轻度的超声显影,VI值为（6.9±1.2）U,两微泡组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.两组微泡在非缺血下肢的VI值未见明显差异（P〉0.05）.但无论MBV还是MBC微泡,其在缺血下肢的VI值均明显高于非缺血下肢相应的VI值.免疫组化显示：缺血下肢血管有大量的VCAM-1表达,而非缺血下肢未见VCAM-1表达.结论 应用VCAM-1分子探针的超声分子成像可有效评价下肢缺血＂晚时间窗＂的炎症反应.     

应用心肌超声造影首灌注成像时间参数定量评价心肌血流灌注的实验研究

目的 探讨首灌注血流通过冠状动脉时间(Tc)和心肌半灌注时间(Tm)评价缺血心肌血流灌注的价值.方法 18只健康杂种犬开胸后建立左前降支急性心肌梗死模型,180 min后经股静脉持续匀速推注造影剂(C3F8),应用实时三平面心肌超声造影(RT-TP-MCE)同步观察心肌内微气泡"从无到有再到稳定状态"的充填全过程(首灌注),然后行实时单平面心肌超声造影(RT-SP-MCE)观察心肌内微气泡被Flash破坏后再充填到稳定状态的过程(再灌注),两种方法均用单指数函数Y=A×(1-e-βt)+B来拟合时间-强度曲线.单平面法测量A值(平台期峰值强度)和β值(曲线斜率)来定量分析心肌血流量(A×β);RT-TP-MCE将左室心腔开始显影的时间标化为0点,测量Tc(即左室心肌开始显影的时间)、Tm(即心肌显影达50%平台期的时间).实验结束后处死犬,取出心脏行伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑双重染色.结果 以染色结果为标准,将心肌节段分为正常组、缺血组和梗死组,分析正常组和缺血组.RT-TP-MCE正常组和缺血组Tc分别为(10.1±1.3)s和(20.4±7.1)s(P＜0.01),Tm分别为(17.1±2.2)s和(39.7±8.8)s(P＜0.01);缺血组心肌Tc、Tm与实时RT-SP-MCE测得的心肌血流量(A×β)均呈明显负性相关(r1=-0.876,P＜0.O1;r2=-0.894,P＜0.01).结论 RT_TP-MCE首灌注成像能同步定量评价心肌血流灌注;心肌缺血时,血流量越少,Tc和Tm越长.     

心肌声学造影检测缺血心肌干细胞移植后微血管新生效应

目的探讨骨髓干细胞移植于缺血心肌后,应用心肌声学造影技术检测其微血管新生效应的价值。方法18只兔随机分3组:细胞移植组(n=8,心梗后移植)、心肌梗死组(n=6,心梗后不治疗)、对照组(n=4,无心梗不治疗)。经静脉注射声学造影剂,检测各组动物心肌梗死区移植前后造影剂充盈状况、造影剂峰值强度。取心肌组织测定新生毛细血管密度。结果移植4周后,移植组缺血心肌内可见少量造影剂回声,心梗组未见造影剂回声,对照组造影剂充盈良好。造影剂峰值强度在各组间差异显著(P<0.01)。心肌内造影剂的声强度与病理检测的毛细血管密度存在正相关关系(r=0.77)。结论心肌声学造影技术能有效检测干细胞移植后的微血管新生效应,可作为临床上评价和随访细胞移植疗效的方法。