蛋白激酶抑制剂B对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的 探讨蛋白激酶抑制剂(PKI)B低表达对卵巢癌A2780细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 用PKIB shRNA慢病毒载体和shRNA control慢病毒载体分别转染A2780细胞构建PKIB低表达A2780细胞株(PKIB shRNA)及其对照细胞株(NC),用CCK-8细胞增殖实验研究低表达PKIB对A2780细胞增殖、侵袭的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 PKIB低表达可显著加强细胞增殖,促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力(P<0.05).结论 卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力与PKIB表达相关,为卵巢癌治疗寻找新的基因靶位提供可靠理论依据.     

IL-8对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)在肝癌细胞中的表达及其对增殖、迁移、侵袭的影响并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721及正常肝细胞L02中IL-8 mRNA和蛋白表达水平。将IL-8 siRNA转染至HepG2细胞,MTT检测沉默IL-8对HepG2细胞增殖能力的影响,Transwell迁移及侵袭实验检测沉默IL-8对HepG2细胞迁移及侵袭能力的影响,采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。Western blot法检测沉默IL-8对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白表达的影响。HepG2细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002),观察其对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果相较于L02相,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721中IL-8 mRNA及蛋白表达均显著升高(P 0. 05); HepG2细胞中敲低IL-8后细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,MMP-2、MMP-9及PI3K、p-AKT表达水平均明显降低;加入LY294002可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。结论 IL-8可能通过激活PI3K/Akt信号通路进而增强肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。     

重组腺病毒载体介导HOSM基因对肝癌细胞体外增殖的抑制作用

目的:构建含人抑瘤素M(human oncostatin M,HOSM)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体AD-HOSM,观察其对人肝癌细胞株HepG2在体外生长抑制情况.方法:通过同源重组方法构建含HOSM基因的缺陷型重组腺病毒载体AD-HOSM,用报告基因AD-GFP检测腺病毒的对人肝癌细胞系的转染效率:人肝癌细胞株HepG2转染含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD-HOSM后,用RT-PCR法检测外源HOSM基因在其中的表达;台盼蓝染色、细胞计数法检测AD-HOSM对HepG2的体外增殖抑制情况.结果:成功构建了重组腺病毒载体AD-HOSM,AD-HOSM对肝癌细胞HepG2有较高的转染效率,并且转染效率与病毒的剂量呈正相关.AD-HOSM感染HepG2细胞48h,HOSM基因在转染细胞能有效的表达.体外试验示,AD-HOSM转染的细胞的增殖却受到明显的抑制.结论:重组腺病毒介导HOSM表达能有效抑制HepG2在体外的增殖,提示重组腺病毒介导的HOSM基因治疗可能成为肝癌治疗的候选方案.     

抑制HSP70—2基因表达诱导肝癌细胞G2／M期阻滞的机制研究

目的探讨HSP70—2在肝癌组织中的表达，以及抑制HSP70—2表达对肝癌细胞生长和周期影响的详细作用机制。方法免疫组织化学检测HSP70—2在45例肝癌组织和癌旁组织中的表达，Westernblot检测HSP70—2在5种肝癌细胞株中的表达。设计合成针对HSP70—2基因的特异性shRNA，构建真核表达载体HSP70-2shRNA1和HSP70—2shRNA2。转染肝癌细胞后，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期，Westernblot检测HSP70—2表达及细胞周期相关蛋白p-Cdc2（Tyr15）、Cdc25C、Cdc2和cyclinB1的表达变化。结果免疫组织化学检测显示，45例肝癌组织中有33例（73．3％）HSP70—2蛋白表达阳性，45例癌旁组织中仅4例（8．9％）表达阳性，表达差异有显著性（P〈0．05）。HSP70—2蛋白在HepG2、Bel-402、Huh-7、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞中的表达明显高于其在L02细胞中的表达。HSP70—2shRNA1和shRNA2均能有效抑制肝癌细胞HepG2和Bel-7402中HSP70-2的表达。与controlshRNA组相比，转染HSP70-2shRNA1和shRNA2组HepG2和Bel-7402细胞生长增殖速度均明显减慢，细胞周期表现为处于G1／M期的细胞比例显著增加。Westernblot检测发现，转染HSP70-2shRNA1和shRNA2后肝癌细胞中磷酸化的p-Cdc2（Tyr15）表达增加，Cdc25C、Cdc2和cyclinB1表达显著减少。结论HSPT0-2在肝癌中过表达，抑制HSP70．2表达可以显著抑制肝癌细胞的增殖，诱导细胞周期阻滞，其诱导G，／M期阻滞的机制是通过影响Cdc25C-Cdc2／cyclinB1通路来实现的。     

鸟嘌呤核苷酸抑制因子2基因表达与肝癌细胞迁移和侵袭能力的关系

目的:探讨鸟嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:选取肝癌细胞株HCCLM3细胞,随机分为对照组、空白转染组和shRNA转染组,其中空白转染组转染空白质粒,shRNA转染组转染RhoGDI2-shRNA,采用MTT法检测各组细胞增殖,Transwell试验检测各组细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR检测各组细胞RhoGDI2 mRNA表达,Western blot检测各组细胞MMP-9、pAKT和VEGF表达。结果:shRNA转染组细胞RhoGDI2 mRNA相对表达量为(0.201±0.082),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞培养6 h、12 h和24 h时OD值分别为(0.312±0.110)、(0.562±0.107)和(0.700±0.110),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞迁移率和穿膜细胞数分别为(0.310±0.030)%和(9.28±1.11)个,明显低于对照组和空白转染组(P<0.05);shRNA转染组细胞MMP-9、pAKT和VEGF相对表达量分别为(0.762±0.100)、(0.201±0.092)和(0.501±0.101),明显低于对照组和空白转染组(P<0.05)。结论:下调RhoGDI2表达,可抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,值得进一步研究。     

HCCR-2反义真核表达载体对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响

目的构建HCCR-2反义真核表达载体,研究其对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。方法通过MTT实验、流式细胞技术、平皿克隆形成实验、Millicell迁移实验分别检测HepG2肝癌细胞经HCCR-2反义真核表达载体转染前后细胞生长速度、单个细胞形成克隆能力、迁移能力的变化。结果MTT实验表明反义转染组细胞HepG2-H增殖能力明显低于HepG2组和HepG2-P组;流式细胞生长周期实验表明,与HepG2和HepG2-P细胞相比,HepG2-H组细胞增殖指数下降,细胞阻滞于G0／G1期,HepG2-H组单个细胞形成克隆的能力与HepG2组和HepG2-P组相比显著降低;Millicell迁移实验表明,HepG2-H细胞较HepG2和HepG2-P细胞迁移明显减少。结论HCCR-2反义真核表达载体可以明冠抑制HepG2肝癌细胞增殖速度、单个细胞形成克隆能力、体外迁移能力。     

葛花解酲方对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨葛花解酲方含药血清对肝癌细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其可能的作用机制。方法 以稳定高表达、高侵袭的HepG2肝癌细胞为体外研究模型,用不同浓度的葛花解酲方含药血清进行干预。CCK8法检测含药血清对HepG2细胞增殖的抑制作用,Transwell法观察含药血清对HepG2细胞的迁移和侵袭能力的影响,Western印迹法检测HepG2细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平。结果 CCK8法检测结果显示含药血清可显著抑制HepG2细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。不同浓度的含药血清可显著抑制HepG2细胞的迁移和侵袭,显著下调肝癌细胞中N-cadherin的表达,显著上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 葛花解酲方含药血清能抑制肝癌细胞的侵袭、迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化有关。     

靶向Pokemon基因shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞生长的影响

目的:观察携带shRNA的重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制.方法:设计3对针对Pokcmon基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体,脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞.RT-PCR及Western blot检测转染前后Pokemon mRNA及蛋白质的 表达,MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖及凋亡的变化,RT-PCR检测其可能的下游因子β-catenin及H-ras的表达.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pshRNA1、2、3.转染HepG2细胞后,Pokemon基因的mRNA及蛋白质表达水平明显下调,以pshRNA2最强,抑制率分别为75.2%(RNA水平)和72.6l%(蛋白质水平).MTT显示pshRNA2可明显抑制细胞增殖;流式细胞仪测定转染后细胞凋亡增加;RT-PCR显示下游因子H-ras的表达明显降低(P＜0.05),而β-catenin的表达没有变化(P＞0.05).结论:采用RNAi技术可以特异性阻断Pokemon 基因的表达;Pokemon基因有促进肝癌细胞株增殖及抑制其凋亡的作用,该效应可能与下调其下游因子H-ras的表达有关.     

SEPT9基因在人肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的研究SEPT9基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响。方法通过westernblot法筛选SEPT9蛋白高表达肝癌细胞系,慢病毒转染沉默后检测细胞SEPT9蛋白表达量,通过EdU染色检测sh-SEPT9对肝癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验检测沉默SEPT9表达后肝癌细胞的侵袭能力和迁移能力;westernblot分析沉默SEPT9表达对肝癌细胞HIF-1α、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、Vimentin, N-cadherin、E-cadherin蛋白表达影响。结果 westernblot显示SEPT9蛋白在肝癌HepG2细胞存在高表达,慢病毒转然能够获得稳定遗传的HepG2-SEPT9-shRNA细胞系,sh-SEPT9转然后,EdU染色显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P0.05),细胞的侵袭能力和迁移能力显著降低(P0.05);HepG2细胞Ki67、PCNA、Vimentin、N-cadherin、HIF-1α、MMP-9及VEGF表达量明显降低,E-cadherin的蛋白水平明显上升(P0.05)。结论 SEPT9基因通过增强肝癌HepG2细胞的EMT机制,促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移。     

短发夹状RNA抑制RhoA基因在HepG2细胞中的表达

目的构建针对人RhoA基因的短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2 RhoA表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对RhoA mRNA编码序列两个不同靶点的核苷酸片断,并定向克隆到真核表达载体Pgenesil-2的U6启动子下,构建重组质粒phsRNA-RhoA1和pshRNA-RhoA2,不针对任何基因组序列的重组质粒pshRNA-HK作为阴性对照。脂质体法转染到HepG2细胞后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)分别检测RhoA基因表达的抑制效应。结果酶切鉴定和测序结果证实重组质粒均构建成功。转染HepG2后,pshRNA-RhoA2组RhoA基因mRNA和蛋白的表达水平均显著降低,与pshRNA-HK组和空白细胞组相比,差异有统计学意义(r=-19.28,t=-7.08,P<0.05)。而pshRNA-RhoA1组抑制效应不明显,差异无统计学意义(r=-0.16,t=-0.30,P>0.05)。结论构建的重组质粒pshRNA-RhoA2能特异有效地抑制RhoA基因在肝癌细胞HepG2中的表达,为进一步研究RhoA基因在肝癌中的作用提供了有效的分子工具。     

干预磷脂酰肌醇蛋白多糖3基因转录联合抗肿瘤药物抑制肝癌细胞增殖的协同作用

目的探讨干预磷脂酰肌醇蛋白多糖(GPC)3基因转录和联合抗肿瘤药物对肝癌细胞增殖的抑制效果。方法构建4种GPC-3-shRNA质粒转染肝癌HepG2细胞,以realtime-PCR、Western Blot法观察GPC-3基因及蛋白表达水平,分析其与肝癌细胞增殖、凋亡的关系。计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果 4种转染质粒中shRNA1转染HepG2细胞效率85%,在mRNA水平的沉默效率为89.3%,GPC-3蛋白表达显著抑制(P0.01)。shRNA1干扰组72 h HepG2细胞抑制率71.1%,与阴性组比较差异有统计学意义(t=18.092,P0.001);shRNA1干扰组肝癌细胞发生生物学特性改变,迁移抑制率为89.1%,明显慢于阴性组,差异有统计学意义(t=8.326,P0.001);HepG2细胞运动抑制率为53.6%、侵袭抑制率60.1%,与阴性组比较差异均有统计学意义(t值分别为52.400、48.245,P值均0.001)。shRNA1干扰组β-catenin mRNA抑制率为46.9%,Gli1 mRNA上调率为7.4%,与对照组比较差异均有统计学意义(t值分别为30.108、-3.551,P值分别为0.001、0.009)。在24 h时,10μmol/L索拉非尼与shRNA1联合,对肝癌细胞抑制率为52.6%,100μmol/L索拉非尼与shRNA1联合,对肝癌细胞的抑制率为79.5%,与对照组比较差异有统计学意义(t值分别为23.314、50.352,P值均0.001)。索拉非尼对HepG2细胞的半数抑制浓度(IC_(50))值为(4.67±1.20)μmol/L、雷帕霉素为(7.85±2.00)nmol/L、厄洛替尼为(18.36±0.56)μmol/L,与shRNA1联合使用后HepG2细胞抑制率达95.11%。结论特异性shRNA干预GPC-3转录可抑制肝癌细胞增殖、迁移运动和侵袭能力,并诱导肝癌细胞凋亡,与抗肿瘤药物协同抑制癌细胞增殖,提示GPC-3可能是肝癌治疗有效靶点,联合靶向治疗将为肝癌提供更佳治疗策略。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3转录干预对肝癌细胞侵袭和血管新生的抑制作用

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (GPC-3)特异性短发夹RNA (shRNA)对肝癌细胞侵袭和血管新生的抑制作用与机制.方法 将GPC-3特异性shRNA转染肝癌细胞,检测GPC-3 mRNA及蛋白表达的变化;分析其对细胞增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响.样本均数两两比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 shRNA转染肝癌细胞的效率大于80％,GPC-3 shRNA1转染HepG2、MHCC-97H和Huh7肝癌细胞后,GPC-3 mRNA水平分别为2.13±1.10、4.94±0.59、3.66±0.32,与空白对照组的19.34±0.90、20.24±1.61、13.97±1.15相比,t值分别为21.786、15.473、15.004,P值均＜0.001,差异均有统计学意义,且GPC-3 shRNA1可明显诱导细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖、运动及侵袭能力.HepG2、MHCC-97H和Huh7肝癌细胞干扰组β-连环蛋白mRNA表达分别为6.82±0.21、4.01±0.52和5.47±0.90,与阴性对照组的12.52±0.30、12.03±0.98、12.45±0.26比较,t值分别为26.903、12.578和12.870,P值均＜0.001,差异均有统计学意义;Glil mRNA水平分别为9.78±1.35、10.78±1.15和10.93±0.97,与阴性对照组的6.49±0.72、6.80±0.79、10.03±0.97比较,t值分别为-3.730、-4.918和-3.083,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.GPC-3 shRNA1还可下调HepG2和MHCC-97H细胞胰岛素样生长因子Ⅱ和血管内皮生长因子表达.结论 GPC-3shRNA1可下调GPC-3 mRNA水平,通过Wnt/β-连环蛋白和Hedgehogs信号通路抑制癌细胞迁移、侵袭和血管新生,提示GPC-3为肝癌基因治疗潜在的分子靶目标.     

靶向cyclinE小干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:以cyclinE基因编码区为靶位,构建表达小干扰RNA(siRNA)的质粒载体,观察转染后对HepG2细胞的影响.方法:针对cyclinE基因序列构建表达siRNA的真核表达载体pSilencer3.1-H1hygro,利用脂质体Metafectene转染CyclinE基因高表达的肝癌细胞株HepG2.流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR和Western blot法观察转染后细胞cyclinE基因表达.结果:成功构建了表达siRNA的真核质粒载体,转染后cyclinE基因mRNA及蛋白表达水平分别下降了79%和65%.结论:靶向cyclinE基因的siRNA可有效沉默HepG2细胞高表达的cyclinE基因,从而抑制肝癌细胞的增殖并促进凋亡.     

PBLD通过MAPK通路抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和转移

目的分析PBLD对HepG2细胞增殖、侵袭及转移的影响,并初步探讨其发挥作用的分子机制。方法首先利用细胞转染技术构建PBLD过表达的HepG2稳转细胞株,CCK-8法检测PBLD过表达后肝癌细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测PBLD过表达后HepG2细胞侵袭、转移能力的变化,最后利用Western-blot技术筛选并验证PBLD可能的下游信号通路。结果 PBLD过表达后HepG2细胞的增殖能力被显著抑制(P0.05),同时,发生侵袭、迁移的细胞数量与空载对照细胞相比显著减低[(68±12.5)vs.(19±10.21),P0.01;(30±8.83)vs.(11±4.41),P0.01]。进一步Western-blot检测结果显示,PBLD过表达可显著抑制MAPK信号通路相关分子的表达。结论 PBLD可通过MAPK信号通路抑制Hep G2细胞的增殖、侵袭和转移。     

siRNA靶向抑制HDGF基因对人肝癌细胞株增殖和侵袭力的影响

背景：肝癌衍生生长因子（HDGF）分离自人肝癌细胞株,其功能特性与多种肿瘤的生长、侵袭、转移和预后相关。目的：观察以小干扰RNA（siRNA）靶向抑制HDGF基因对人肝癌细胞株增殖和侵袭力的影响。方法：以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测人肝癌细胞株HepG2HDGFmRNA表达。构建靶向HDGF的短发夹RNA（shRNA）慢病毒表达载体．转染HepG2细胞．建立稳定表达siRNA-HDGF的HepG2细胞株。蛋白质印迹法检测siRNA—HDGF的干扰效率。MTT实验和软琼脂集落形成实验检测细胞增殖情况,Boyden小室体外侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果：HepG2细胞中HDGFmRNA表达明显。蛋白质印迹法筛选出的干扰效率为75-3％的HepG2细胞株．生长速度较转染阴性对照载体和未转染载体的细胞显著减慢（P〈0．05）,在软琼脂上形成的集落数减少（9．64±1．62对36．41±1．68和35．50±3．27,P〈0．05）,穿过Boyden小室Matrigel基质胶的细胞数亦显著减少（51．27±6．53对153．80±10．04和154．33±10．23,P〈0．05）。结论：以siRNA靶向抑制HDGF基因能显著抑制人肝癌细胞株的增殖和侵袭力．HDGF可能成为肝癌基因治疗的重要靶标。     

Racl shRNA对卵巢癌细胞株Skov3生物学行为的影响

目的 为Racl shRNA治疗卵巢癌提供实验依据.方法 Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524以LipofectimineTM2000介导转染卵巢癌细胞株Skov3,Transwell肿瘤细胞迁移和侵袭实验检测转染细胞的迁移和侵袭能力,Western印迹分析转染细胞MMP2蛋白的表达情况.结果 转染Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524组、转染非特异shRNA载体pGPU6/GFP/NC组和未转染组迁移到滤膜底面的细胞数分别为97±21、319±75、365±92.而侵袭到滤膜底面的细胞数分别为79±22、285±63、324±84,转染Racl shRNA载体组与转染pGPU6/GFP/NC组、未转染组比较差异显著(P<0.05),转染pGPU6/GFP/NC组与未转染组相比无统计学意义(P>0.05).转染Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524组MMP2蛋白的表达量下降.结论 Racl shRNA载体pGPU6/GFP/Racl-524可有效抑制卵巢癌细胞Skov3的迁移和侵袭,该抑制作用可能是通过调控MMP2的表达而实现的.     

下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究

目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。     

microRNA-384靶向HDAC9调控肝癌细胞增殖迁移侵袭和凋亡的机制研究

[目的]:研究microRNA-384(miR-384)、人组蛋白去乙酰化酶(HDAC9)对肝癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其作用机制。[方法]运用qRT-PCR检测正常肝上皮细胞THLE3和肝癌细胞HEP3B、BEL-7402、HUH7中HDAC9、miR-384的mRNA的表达;将PC DNA组(转染PC DNA)、PC DNA-HDAC9组(转染PC DNA-HDAC9)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-384组(转染anti-miR-384)、si-NC组(转染si-NC)、si-HDAC9组(转染si-HDAC9)、PC DNA-HDAC9+miR-NC组(共转染PC DNA-HDAC9和miR-NC)、PC DNA-HDAC9+miR-384组(共转染PC DNA-HDAC9和miR-384),用脂质体法转染至HUH7;Western blot检测细胞中HDAC9的蛋白表达;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性。[结果]与THLE3细胞比较,肝癌细胞HEP3B、BEL-7402、HUH7中HDAC9的mRNA和蛋白均显著上调,miR-384的mRNA显著下调(P0.05);过表达HDAC9可明显促进HUH7的增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,敲减HDAC9具有相反的结果;HDAC9是miR-384的靶标,且受miR-384的负向调控。过表达miR-384可逆转HDAC9对肝癌细胞的作用。[结论]miR-384抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡,其机制与靶向负调控HDAC9相关,将可为肝癌的治疗提供新的治疗靶点。     

Rac1 shRNA对卵巢癌细胞株Skov3生物学行为的影响

目的为Rac1 shRNA治疗卵巢癌提供实验依据。方法 Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524以L ipofectim ineTM2000介导转染卵巢癌细胞株Skov3,Transwell肿瘤细胞迁移和侵袭实验检测转染细胞的迁移和侵袭能力,W estern印迹分析转染细胞MMP2蛋白的表达情况。结果转染Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524组、转染非特异shRNA载体pGPU6/GFP/NC组和未转染组迁移到滤膜底面的细胞数分别为97±21、319±75、365±92,而侵袭到滤膜底面的细胞数分别为79±22、285±63、324±84,转染Rac1 shRNA载体组与转染pGPU6/GFP/NC组、未转染组比较差异显著(P<0.05),转染pGPU6/GFP/NC组与未转染组相比无统计学意义(P>0.05)。转染Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524组MMP2蛋白的表达量下降。结论 Rac1 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-524可有效抑制卵巢癌细胞Skov3的迁移和侵袭,该抑制作用可能是通过调控MMP2的表达而实现的。     

反义局部粘着斑激酶脱氧寡核苷酸对肝癌细胞侵袭性生长的抑制作用

目的 观察反义局部粘着斑激酶脱氧寡核苷酸(FAK ODN)转染对肝癌细胞侵袭性生长的影响,并探讨其作用机制。 方法 以LipofecTAMINE介导的反义FAK ODN转染Bel 7402肝癌细胞株,测定Bel 7402肝癌细胞株体外生长曲线、细胞活力,测定不同时间点该细胞体外黏附能力变化,以Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力,同时行FAK表达与细胞DNA含量的双参数流式细胞仪检测及细胞凋亡的流式细胞仪检测。 结果 p125FAK表达在反义转染组(6.49％±0.10％)显著低于正义转染组(14.33％±1.88％)与对照组(16.68％±1.62％),F=7.66,P<0.01;反义FAK ODN转染显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的生长,其细胞活力显著下降,肿瘤细胞抑制率在30％-60％之间;细胞体外黏附能力受到显著抑制,黏附抑制率在25％-55％间;细胞的体外侵袭能力显著下降,侵袭抑制率在15％-25％之间;细胞凋亡显著增加;细胞周期分析显示S期细胞比率显著降低,细胞生长主要阻滞在G2/M期。 结论 FAK在Bel 7402肝癌细胞的黏附与迁移运动中发挥重要作用,其表达阻断显著抑制肝癌细胞的体外黏附与侵袭活性。FAK表达阻断显著抑制肝癌细胞的体外增殖,促进细胞凋亡。