急性髓系白血病患者miRNA-181b表达特点及预后意义

目的 探讨微小RNA-181b(miR-181b)在急性髓性白血病(AML)中的表达特点及预后意义.方法 采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测158例初诊AML患者及20例健康供者骨髓单个核细胞中miR-181b的表达水平.同时采用基因组DNA-PCR结合测序方法检测158例AML患者核磷蛋白1(NPM1)基因第12号外显子突变和fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)突变(FLT3-ITD).结果 AML中miR-181b表达水平较正常对照组显著升高(Z =-2.386,P=0.017),各FAB亚型中M1、M5及M6型miR-181b表达水平较对照组明显升高(P＜0.05).miR-181b高表达与低血红蛋白、高乳酸脱氢酶及NPMI野生型有关.miR-181b高表达完全缓解率较低(x2 =7.717,P=0.005)、总生存期较短(P＜0.05).结论 miR-181b在AML某些亚型中高表达,miR-181b高表达是AML患者不利的预后因素.     

急性白血病/骨髓增生异常综合征患者DNA甲基转移酶亚型的表达

目的　探讨DNA甲基转移酶 (DNMTs)亚型与急性白血病 (AL)发病及骨髓增生异常综合征 (MDS)向AL转化的关系。方法　半定量逆转录 (RT) PCR技术测定 75例AL/MDS患者的DNMT1、3A及 3B的mRNA表达水平。结果　低危MDS组 (2 1例 )DNMT各亚型的表达升高与正常对照组平均值无统计学差异 ,但以正常对照组平均值的 80 %单侧上界为界 ,则分别为 4 7 6 %、4 7 6 %和 4 2 9% ,高于正常对照 (P <0 0 1)。高危MDS组 (13例 )分别为 5 3 8%、76 9%和 92 3%高于正常对照 (P <0 0 1) ,其中DNMT 3B表达显著高于低危MDS组 (P <0 0 1) ,而DNMT1和 3A表达与低危组差异无显著性。AL组 (41例 )DNMT1、3A及 3B分别为 92 7%、97 6 %和 10 0 %高于正常对照 (P <0 0 1) ,且三种DNMT亚型表达水平均显著高于MDS组 (P <0 0 1)。急性淋巴细胞白血病组DNMT1表达显著高于急性髓细胞白血病组 (P <0 0 1) ,而二组的DNMT3A ,3B表达无统计学差异。结论　DNMTs表达水平的增高与AL的发病及MDS向AL转化过程密切相关 ,并以DNMT3B的关系最为密切。     

CD117和CD34在急性白血病中的临床意义

目的:观察细胞表面分化抗原CD117和CD34在急性白血病中的表达及意义。方法:采用三色流式细胞术,CD45/SSC双参数散点图设门方法,对34例急性白血病患者[急性淋巴细胞白血病(ALL)9例和急性髓细胞白血病(AML)25例]骨髓白血病细胞的免疫分型及CD117和CD34的表达进行检测。结果:CD117在ALL和AML中表达率分别为0和76.0%(19/25),差异有统计学意义(P=0.000)。CD34在ALL和AML中表达率分别为77.8%(7/9)和60.0%(15/25),差异无统计学意义(P=0.815)。在AML-M3亚型中,CD34表达率为16.7%(1/6),显著低于非M3亚型73.7%(14/19)(P=0.007)。结论:CD117检测有助于ALL与AML的鉴别诊断,CD34检测有助于区分AML-M3亚型和非M3亚型。     

地西他滨对伴有DNMT3A、TET2基因突变的老年骨髓增生异常综合征患者甲基化水平的影响

目的观察地西他滨在伴有DNA甲基转移酶(DNMT)3A基因、TET2基因突变的老年骨髓增生异常综合征(MDS)患者去甲基化治疗中的作用。方法回顾性分析2014年1月至2019年10月使用地西他滨治疗的100例老年MDS患者临床资料,将其中无基因突变的68例MDS患者纳入对照组,将伴有DNMT3A基因突变的10例MDS患者纳入DNMT3A突变组,将伴有TET2基因突变的22例MDS患者纳入TET2突变组。患者均采用地西他滨治疗,每4 w为1个疗程,治疗4个疗程。治疗4个疗程后,比较3组治疗效果、DNMT3A、TET2基因表达水平及不良反应发生率。结果3组临床疗效差异有统计学意义(P<0.05),其中TET2突变组总缓解率(ORR)高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而DNMT3A突变组与对照组、TET2突变组ORR比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗4个疗程后,DNMT3A突变组DNMT3A基因表达水平低于治疗前,但DNMT3A突变组治疗前、治疗4个疗程后DNMT3A基因表达水平均高于对照组、TET2突变组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗4个疗程后,TET2突变组TET2基因表达水平低于治疗前,但TET2突变组治疗前、治疗4个疗程后TET2基因表达水平高于对照组、DNMT3A突变组,差异有统计学意义(P<0.05)。3组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论地西他滨治疗伴有DNMT3A、TET2基因突变的老年MDS疗效显著,且较无基因突变患者更佳,药物使用后可有效抑制DNMT3A、TET2基因表达,在老年MDS患者去甲基化治疗中发挥重要作用,安全性较高。     

DNMT1与EZH2在急性髓系白血病中的表达及相关性研究

目的:探讨DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病(AML)中的表达及其相关性。方法:采用荧光定量PCR技术检测50例AML患者和30例正常供者骨髓细胞中DNMT1与EZH2mRNA的表达水平,分析DNMT1表达水平与临床特征和预后的关系及其与EZH2的相关性。结果:AML患者骨髓细胞中DNMT1mRNA的表达显著高于正常供者[(2.72±0.73)∶(0.89±0.27),P0.01];EZH2mRNA的表达水平也显著高于正常供者[(4.39±1.06)∶(1.87±0.33),P0.01];EZH2与DNMT1的表达水平呈显著正相关(r=0.51,P=0.002);DNMT1mRNA表达水平与外周血幼稚细胞比例≥60%、WBC≥50×109/L显著相关(均P0.05);DNMT1mRNA高表达组患者中位生存时间15个月(95%CI9~19个月),显著低于DNMT1mRNA低表达组患者的32个月(95%CI27~40个月)(P=0.006)。结论:DNMT1和EZH2在AML患者中均高表达,二者表达水平呈正相关,DNMT1与AML患者预后不良相关。     

西罗莫司靶向治疗DNA甲基转移酶3A突变的急性髓系白血病的研究

目的:检测DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)突变的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者原代细胞中编码哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)基因的甲基化变化及基因表达情况,并研究西罗莫司靶向治疗该类AML肿瘤细胞的效果。方法:收集有DNMT3A突变及无DNMT3A突变的AML患者原代骨髓细胞,通过重硫酸盐测序(bisulfite genomic sequence,BSP)法、实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-q PCR)法分别检测m TOR的甲基化变化和基因表达变化,借助细胞增殖检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)及凋亡试剂盒异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)检测用西罗莫司处理前后有DNMT3A突变及无DNMT3A突变的肿瘤细胞的增殖及凋亡情况。结果:DNMT3A突变的AML患者原代细胞中m TOR的甲基化降低且基因表达上调(P<0.05),西罗莫司可有效抑制DNMT3A突变的原代肿瘤细胞的增殖并引起其凋亡(P<0.05)。结论:与无DNMT3A突变的AML原代肿瘤细胞相比,西罗莫司可靶向mTOR抑制DNMT3A突变相关的AML原代肿瘤细胞的增殖,促使其凋亡,为进一步的临床用药提供了证据。     

联合定量检测急性髓系白血病患者MDR1和WT1基因表达及临床意义

目的 联合定量检测初治急性髓系白血病(AML)患者MDR1及WT1基因的表达水平,探讨MDR1与WT1的表达量在AML耐药中作用及相互关系.方法 构建实时荧光定量PCR检测WT1和MDR1基因表达水平技术,并检测63例初治AML患者WT1和MDR1基因的表达量及与临床疗效的关系.结果 63例初治AML患者MDRI基因表达(拷贝/μg RNA)的中位数为2863(413～3 410 000),WT1基因表达为52 700(7731～1 020 000).10例正常对照组MDR1和WT1基因表达水平为337(125～840)和849(635～1402).初治AML患者MDR1和WT1基因表达水平均显著高于正常对照组(P＜0.001).且MDR1与WT1基因表达水平呈相关性(P=0.004);FAB各亚型中MDR1和WT1基因表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);遗传学危险度分级的高、中、低危3组的WT1和MDR1基因表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).FLT3-ITD突变阳性组MDR1基因表达水平与突变阴性组相比差异无统计学意义(P＞0.05).FLT3-ITD突变阳性组的WT1基因表达水平显著高于阴性组(P＜0.05).AML患者中WT1和MDR1基因共同高表达组完全缓解率显著低于共同低表达组(P＜0.05).结论 AML患者MDR1和WT1基因表达水平存在相关性;联合检测AML患者MDR1和WT1基因表达量更能早期预测预后.     

MDR1在急性髓系白血病中的表达及其与预后的关系

目的检测初诊未治急性髓系白血病（AML）患者化疗前后骨髓单个核细胞多药耐药基因1（MDR1）的表达水平,探讨MDR1的表达对AML预后的评价作用。方法采用直接免疫荧光标记单抗流式细胞仪检测40例AML患者化疗前后血清及对照组血清MDR1的表达。结果实验组通透性糖蛋白（P．gP）阳性者的完全缓解（CR）率及CR持续时间均低于P—gp阴性者（P均〈0．01）;与对照组比较,实验组治疗前及治疗后未缓解患者P-gP均升高,治疗后未缓解者高于治疗前（P均〈0．01）;在各型白血病中,M3的P—gP表达最低,与其他亚型比较有统计学差异（P〈0．05）。性别、年龄、骨髓中白血病细胞比例对P-gP水平没有明显影响。结论P-gP可作为AML的独立预后因素。     

急性髓细胞白血病伴核仁磷酸蛋白突变1例病例报告并文献复习

正急性髓系细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一种造血祖细胞自主增殖和分化受阻的异质性疾病。AML伴核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM1)突变在2008年世界卫生组织(WHO)分类中被确认为AML伴重现性遗传学异常的一类独立亚型~([1]),本例患者为AML伴NPM1突变,但因患者骨髓原始细胞胞浆中存在大量嗜天青颗粒,极易误诊为其他类型白血病,故报告其诊疗体会。     

DNA甲基化转移酶在急性A型主动脉夹层发病机制中的作用

目的探讨DNA甲基化转移酶(DNMTs)与急性A型主动脉夹层(Acute aortic dissection,AAD)发生发展之间的关系。方法收集5例急性A型AAD患者病变血管组织和4例无主动脉疾病的器官捐献者的升主动脉血管组织,采用Western Blot方法检测DNMTs(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L)的蛋白在患者和正常对照血管组织中的表达情况。结果与健康对照组相比,整体上DNA甲基化转移酶蛋白在A型AAD患者病变血管组织中表达下降,DNMT1蛋白在A型AAD患者病变血管组织中表达较正常对照下降约50%(P=0.023),DNMT3B蛋白在A型AAD患者病变血管组织中表达下降约50%(P=0.009);DNMT3A和DNMT3L蛋白在A型AAD患者病变血管组织中表达下降趋势,尽管无统计学意义(P=0.414,P=0.16)。结论 DNA甲基化转移酶在急性A型AAD患者病变血管组织中表达水平较正常对照呈下降趋势,DNA甲基化是否参与A型AAD病变的发生发展尚需进一步研究。     

老年急性髓系白血病基因突变及临床意义

目的:探讨老年急性髓系白血病(AML)患者基因突变情况及其临床意义。方法:采用二代测序方法检测69例初诊老年AML患者基因突变情况,包括TET2,DNMT3A,NPM1,CEBPα,EZH2,JAK2,U2AF1,RUNX1,NRAS,TP53,IDH2,C-KIT,SRSF2,SF3B1,ASXL1,FLT3,ETV6,PHF6,CBL,SETBP1,ZRSR2,收集患者临床资料,分析突变发生率及临床意义,针对49例接受DCAG治疗患者分析疗效及预后。结果:老年AML患者基因突变频率高,突变率为94.2%(65/69),NPM1,SRSF2,SF3B1在4种白血病分型间分布存在差异(均P0.05)。C-KIT突变易出现在染色体核型低中危组(P0.001),TP53突变与高危核型有关(P=0.003)。TP53突变,ETV6突变,合并症数目,染色体核型及DCAG首次诱导完全缓解均为影响预后的因素,其中TP53突变,首次诱导完全缓解及合并症数目为独立危险因素(P0.05)。结论:老年AML患者基因突变及细胞遗传学异常对临床诊疗工作具有重要意义。     

急性髓细胞白血病患者NGF及p75NTR测定的临床意义

目的探讨急性髓细胞白血病（AML）患者神经生长因子（NGF）及其低亲和性NGF受体（p75NTR）表达及临床意义。方法运用ELISA测定24例AML患者血清NGF水平,流式细胞术测定骨髓白血病细胞群p75NTR的表达水平;同时选择15例健康者作为对照组。结果①AML患者血清NGF水平与对照组比较明显升高（P〈0.05）,骨髓白血病细胞群表面p75NTR表达水平较对照组明显降低（P〈0.05）。②AML完全缓解（CR）者化疗前p75NTR较未缓解（NR）者明显高表达（P〈0.05）,NGF变化不明显（P〉0.05）。NR者化疗后NGF和p75NTR表达水平与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0.05）,且p75NTR较CR者明显低表达（P〈0.05）。③AML患者NGF以及p75NTR高表达和低表达3年总体生存率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 AML患者血清NGF高水平以及骨髓白血病细胞群p75NTR低表达可能参与AML发生发展,且可能是判断近期疗效的有效指标。     

正常核型急性髓系白血病NPM1和FLT3-ITD基因突变的研究

目的:探讨正常核型急性髓系白血病(AML)患者中NPM1基因与FLT3基因内部串联重复(ITD)突变的发生率,并了解其临床特征。方法:收集40例正常核型AML患者初诊时骨髓单个核细胞,采用基因组DNA-PCR方法分别扩增其NPM1和FLT3基因,直接测序法分析NPM1第12外显子突变,琼脂糖电泳分析FLT3-ITD突变。结果:40例正常核型AML患者中共检出NPM1突变15例(37.5%),FLT3-ITD突变8例(20%),4例(10%)同时存在NPM1和FLT3-ITD基因2种突变。单纯NPM1或FLT3-ITD突变的AML患者初诊时表现为高白细胞数、高骨髓原始细胞比例(P0.05)。结论:NPM1和FLT3-ITD突变是正常核型AML患者常见的分子学异常,且与初诊时高外周血白细胞数、高骨髓原始细胞比例相关。     

乙酰肝素酶在白血病细胞中的表达

目的:观察乙酰肝素酶(HPA)在不同类型白血病细胞中的表达。方法:研究组为白血病患者53例,对照组为缺铁性贫血患者20例。采用Western blotting方法检测骨髓单个核细胞HPA蛋白表达,比较研究组与对照组、研究组内急性髓系白血病与急性淋巴细胞白血病、初发急性白血病与慢性白血病HPA蛋白表达差异。结果:研究组患者骨髓中单个核细胞HPA蛋白表达与对照组比较均显著升高(均P0.05)。研究组内比较,急性髓系白血病HPA蛋白表达显著高于急性淋巴细胞白血病(P0.05);初发急性白血病骨髓中单个核细胞HPA蛋白表达显著高于慢性白血病组(P0.05)。结论:白血病细胞HPA蛋白高表达;不同类型白血病表达水平不同,急性白血病,尤其是急性髓系白血病表达更加明显。     

正常核型急性髓系白血病NPM1和FLT3-ITD基因突变的研究

目的:探讨正常核型急性髓系白血病(AML)患者中NPM1基因与FLT3基因内部串联重复(ITD)突变的发生率,并了解其临床特征。方法:收集40例正常核型AML患者初诊时骨髓单个核细胞,采用基因组DNA-PCR方法分别扩增其NPM1和FLT3基因,直接测序法分析NPM1第12外显子突变,琼脂糖电泳分析FLT3-ITD突变。结果:40例正常核型AML患者中共检出NPM1突变15例(37.5%),FLT3-ITD突变8例(20%),4例(10%)同时存在NPM1和FLT3-ITD基因2种突变。单纯NPM1或FLT3-ITD突变的AML患者初诊时表现为高白细胞数、高骨髓原始细胞比例(P0.05)。结论:NPM1和FLT3-ITD突变是正常核型AML患者常见的分子学异常,且与初诊时高外周血白细胞数、高骨髓原始细胞比例相关。     

Notch信号通路相关基因在儿童急性髓系白血病中的表达及意义

目的 探讨Notch信号通路中相关基因在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达及意义.方法 采用实时定量RT-PCR法检测20例初诊AML患儿(AML组)和20例完全缓解患儿(对照组)骨髓中Notchl、Notch2、Jagged1、Jagged2、Deha4的表达水平.结果 AML组和对照组骨髓中受体Notch1的表达水平分别为9 651.2±821.5和327.1±135.7,配体Jagged2的表达水平分别为5 291.2±102.3和143.7±25.3,配体Deha4的表达水平分别为16 749.3±382.7和803.5±183.2,两组比较均有统计学意义(P均＜0.01);两组受体Notch2、配体Jagged1的表达比较均无统计学意义(P均＞0.05).结论 儿童AML的发病与Notch信号通路中相关基因的突变或异常表达有关.     

急性髓系白血病骨髓单个核细胞CD11a的表达及临床意义

目的:探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的α链CD11a在急性髓系白血病(AML)的表达情况及临床意义。方法:采用免疫酶标ABC法检测25例初治AML患者和8例血液系统非恶性肿瘤患者为对照的骨髓单个核细胞CD11a的表达,并追踪观察AML患者的疗效。结果:CD11a在AML患者骨髓单个核细胞的表达率(37.02±13.30)%,明显低于对照组(87.13±5.38)%(P<0.05)。化疗后未缓解组AML患者发病时骨髓单个核细胞CD11a的表达率(47.09±10.55)较完全缓解组(29.11±9.36)%高(P<0.05)。结论:CD11a在AML患者骨髓单个核细胞表达异常,可能与白血病细胞逃脱机体免疫监控及从造血微环境释出有关。检测AML患者骨髓单个核细胞CD11a的表达水平对AML的预后判断有一定意义。     

复发/难治AML患者sorcin基因表达及意义

目的研究复发／难治急性髓细胞白血病（AML）患者骨髓可溶性耐药相关钙结合蛋白（sorcin）基因表达及意义。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测65例AML患者（观察组）,27例非白血病患者和健康人（对照组）sorcin基因表达水平。结果观察组sorcin基因表达水平高于对照组（P〈0．001）,其中复发／难治者高于初诊者和完全缓解（CR）者;AML各亚型sorcin基因过度表达存在差异,以M,阳性表达率最高;观察组临床耐药者sorcin基因表达显著高于非临床耐药者（P〈0．001）,且CR率显著低于非临床耐药者（P〈0．001）。结论sorcin基因过度表达与AML患者临床耐药密切相关,是影响预后的重要因素;sorcin可作为检测AML临床耐药和判断预后的指标之一。     

血液肿瘤患者FLT3/ITD基因突变的检测及临床意义

目的检测血液肿瘤患者FLT3/ITD基因突变,探讨其突变的临床意义。方法2001—2005年对南方医科大学南方医院血液科332例血液肿瘤患者,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测FLT3/ITD基因突变。结果FLT3/ITD基因突变阳性率分别为急性髓性白血病(AML)22.3%(23/103)、慢性髓性白血病急变期(CML-BC)6.5%(2/31)、骨髓增生异常综合征(MDS)5.6%(2/36)和急性淋巴细胞白血病(ALL)2.6%(2/76)。而慢性髓性白血病慢性期(CML-CP)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤(MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)均未发现FLT3/ITD基因突变。FLT3/ITD基因突变阳性AML患者外周血WBC计数及骨髓白血病细胞比例显著高于FLT3/ITD基因突变阴性AML患者(P<0.05),FLT3/ITD基因突变阳性AML患者完全缓解后18个月内累计复发率(63.6%)显著高于FLT3/ITD基因突变阴性AML组(27.7%)(P<0.05)。结论FLT3/ITD基因突变检测对血液肿瘤预后有一定意义;FLT3/ITD基因突变AML患者预后差。     

MSI2和Numb在白血病中的表达及分析

目的:探讨MSI2、Numb在白血病中的表达及其临床意义。方法:随机收集初诊的急性白血病及慢性髓系白血病慢性期患者骨髓标本,同时收集血液系统非恶性肿瘤性疾病及正常人的骨髓标本作为对照组;应用荧光定量PCR的方法检测各组标本中MSI2、Numb的表达量。结果:①所测标本中AML和ALL患者MSI2表达量明显高于CML及对照组,ALL与后两者差异有统计学意义,AML与后两者差异无统计学意义。②在AML和ALL中Numb的表达量均低于CML慢性期和正常对照,差异无统计学意义。③急性白血病中Numb与MSI2表达量无明显相关性。④急性白血病中MSI2高表达与骨髓流式检测幼稚细胞比例呈正相关。结论:MSI2在急性白血病中高表达,且在ALL中明显高表达。急性白血病中MSI2的表达量与肿瘤负荷相关。