DEHP及其代谢产物MEHP对MLTC-1细胞凋亡和类固醇激素合成基因表达的影响

目的实验测评DEHP及其主要代谢产物MEHP暴露对MLTC-1细胞类固醇激素合成关键基因表达的影响。方法将MLTC-1分别暴露于DEHP(0,1,10,100,1 000μmol/L)和MEHP(0,1,10,100,1 000μmol/L)24 h,采用Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡,并应用荧光定量PCR法分析细胞类固醇激素合成过程中涉及关键酶的基因表达水平。结果凋亡实验结果显示DEHP(100和1 000μmol/L)和MEHP(10和1 000μmol/L)显著诱导MLTC-1细胞晚期凋亡的发生,1 000μmol/L DEHP和MEHP显著降低了MLTC-1活力。所以本研究采用了较低的染毒浓度(1,10和100μmol/L)对MLTC-1染毒24 h来评估DEHP和MEHP对MLTC-1类固醇合成通路的影响。荧光定量结果显示1μmol/L DEHP显著增加MLTC-1 CYP17A1基因表达水平,而100μmol/L DEHP显著抑制MLTC-1 CYP17A1、CYP11A1和SF-1基因表达水平。10μmol/L DEHP显著增加MLTC-1外CYP1A1基因表达水平。100μmol/L DEHP显著抑制MLTC-1黄体激素受体LHR基因表达水平。1μmol/L MEHP显著增加MLTC-1 3β-HSD基因表达水平。然而MEHP对类固醇激素合成过程中一些酶如STAR、CYP17A1、CYP11A1、重要调节因子胰岛素样激素3 INSL-3、SF-1、关键受体AR和LHR基因表达水平均无显著影响。结论 DEHP和MEHP诱导MLTC-1凋亡,DEHP和MEHP都可影响MLTC-1细胞类固醇激素合成过程中关键基因的表达,从而引起内分泌干扰。     

CHOP通路在邻苯二甲酸单丁酯和邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯联合暴露致小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)和邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]染毒致体外培养的小鼠睾丸间质细胞(TM-3)凋亡过程中CHOP通路的作用。方法将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于0(对照)、50、100、200、400、800μmol/L的MBP和(或)MEHP溶液24、36、48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于完全培养基(对照)、MBP(400μmol/L)、MEHP(400μmol/L)和MEHP(400μmol/L)+MBP(400μmol/L)溶液24 h后,电镜下观察小鼠睾丸间质细胞内质网超微结构的变化。将小鼠睾丸间质细胞分别暴露于完全培养基(对照)及200、400、800μmol/L MBP和(或)MEHP溶液24 h,流式细胞术检测细胞早期凋亡情况,免疫印迹法检测内质网应激标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和CHOP的表达水平。结果与对照组相比,各浓度MBP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着MBP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈上升趋势。随着MBP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率除100μmol/L组呈上升趋势外,其余浓度组均呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异具有统计学意义(P0.05);且随着MEHP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈上升趋势。随着MEHP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率在50μmol/L组呈上升趋势,在100μmol/L组呈先下降后上升的趋势,在400μmol/L组呈下降趋势,200μmol/L和800μmol/L组抑制率呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MBP+MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞的抑制率均较高,差异具有统计学意义(P0.05);且随着MBP+MEHP染毒浓度的升高,小鼠睾丸间质细胞的抑制率呈现上升趋势。随着MBP+MEHP染毒时间的延长,小鼠睾丸间质细胞的抑制率除200、400μmol/L组呈现逐渐上升趋势外,其余浓度组均呈先上升后下降的趋势。与对照组相比,各浓度MBP和(MEHP)染毒组TM-3细胞的早期凋亡细胞比例均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒浓度的升高,MBP、MEHP和MBP+MEHP染毒小鼠睾丸间质细胞的早期凋亡细胞比例均呈现上升趋势。在同一染毒浓度下,睾丸间质细胞早期凋亡比例依次为MBP+MEHPMBPMEHP,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各浓度MBP和(或)MEHP染毒组小鼠睾丸间质细胞内GRP78和CHOP蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒浓度的升高,MBP和(或)MEHP染毒小鼠睾丸间质细胞内GRP78和CHOP蛋白的表达水平均呈逐渐上升的趋势。结论 MBP和(或)MEHP染毒可致内质网损伤,上调GRP78蛋白和CHOP蛋白的表达,这可能是MBP和(或)MEHP引起小鼠睾丸间质细胞凋亡的重要途径。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞半胱氨酰天冬氨酸酶蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒对GC-2 spd细胞半胱氨酰天冬氨酸酶(caspase)蛋白及m RNA表达的影响。方法将体外培养的处于对数生长期的GC-2 spd细胞暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养基中培养24 h。采用Real-time PCR法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9 m RNA的表达,采用Western blotting法检测细胞caspase-3蛋白酶原(procaspase-3)、procaspase-8、procaspase-9的表达。结果与溶剂对照组比较,100μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-3 m RNA的表达水平和200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-8 m RNA的表达水平及50、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-9m RNA的表达水平均较高,差异均有统计学意义(P0.05)。与溶剂对照组比较,100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9的表达水平均呈下降趋势。结论 DEHP体外染毒可能通过启动caspase-8和caspase-9进而激活下游caspase-3级联反应,最终诱导生精细胞凋亡。     

邻苯二甲酸单丁酯和邻苯二甲酸单乙基己酯联合染毒对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的探讨邻苯二甲酸单丁酯(MBP)、邻苯二甲酸单乙基己酯(MEHP)联合染毒对小鼠睾丸间质细胞(TM-3)睾酮合成的影响。方法将TM-3细胞分为对照(完全培养基)组、MBP(LC50,500μmol/L)单独染毒组、MEHP(LC50,450μmol/L)单独染毒组和MBP(500μmol/L)+MEHP(450μmol/L)联合染毒组,培养24 h后,观察线粒体超微结构,检测细胞线粒体膜电位和上清液中的睾酮水平。结果 MBP、MEHP单独染毒及联合染毒均可引起线粒体结构损伤。与对照组相比,MBP、MEHP单独染毒组和MBP+MEHP联合染毒组TM-3细胞线粒体膜电位和上清液中睾酮的水平均下降,差异有统计学意义(P0.01);与MBP+MEHP联合染毒组相比,MBP、MEHP单独染毒组TM-3细胞线粒体膜电位和上清液中睾酮的水平均较低,差异有统计学意义(P0.01),MBP和MEHP联合染毒对TM-3细胞线粒体膜电位和上清液中睾酮的水平的交互作用均表现为拮抗作用。结论 MBP、MEHP联合染毒对睾酮合成水平的下降呈拮抗作用,可能与线粒体损伤机制有关。     

亚硫酸钠对HepG2细胞毒性的实验研究

目的观察食品添加剂亚硫酸钠对人肝肿瘤细胞(HepG2)的细胞毒性作用和脂肪变作用。方法向HepG2细胞悬液中分别加入终浓度为0(阴性对照)～10 mmol/L亚硫酸钠溶液染毒24、48和72 h,并设空白对照(无细胞)组和阳性对照组(含1%Tritonx-100的DMEM),每组6个复孔。采用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定法检测肝细胞膜的通透性变化,采用CCK-8法检测肝细胞的活性改变,采用油红O染色法观察肝细胞内脂肪沉积情况。结果与阴性对照组相比,仅10 mmol/L亚硫酸钠染毒24 h后HepG2细胞培养上清中LDH活力的释放率增加(P<0.05);而各剂量亚硫酸钠染毒48和72 h后HepG2细胞培养上清中LDH活力的释放率无显著变化。与阴性对照组相比,各剂量亚硫酸钠染毒24、48、72 h后(除0.039 mmol/L染毒72 h外)HepG2细胞的存活率均显著下降(P<0.05),且细胞存活率随着亚硫酸钠染毒剂量的升高而降低。染毒24、48 h后,部分亚硫酸钠染毒组HepG2细胞内出现了极少量的脂滴,而阴性对照组却未发现;染毒72 h后,10 mmol/L亚硫酸钠染毒组出现明显脂滴。结论一定剂量的亚硫酸钠染毒可增加HepG2细胞膜的通透性,对肝细胞活性有明显的抑制作用,并且可引起肝细胞内甘油三酯的蓄积。     

6-羟基联合甲氧基-四溴联苯醚47对HepG2的细胞毒性研究

目的研究2,2’,4,4’-四溴联苯醚(2,2’,4,4’-tetrabromodiphenyl ether,BDE47)的两种代谢物6-羟基-四溴联苯醚(6-OH-BDE47)和6-甲氧基-四溴联苯醚(6-OMe-BDE47)对人肝癌细胞HepG2的细胞毒性。方法 6-OH-BDE47和6-OMe-BDE47两个化合物均分别设1个溶剂对照(0.1%的DMSO)组和0.1、0.5和2.0μmol/L3个浓度染毒组。采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测6-OH-BDE47和6-OMe-BDE47染毒6、24、48和72h后HepG2细胞的生长抑制效应,并检测24h急性染毒后细胞内活性氧(reactive oxygen,ROS)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽(GSH)含量。结果 2.0、0.5、0.1μmol/L的6-OH-BDE47染毒组分别于染毒24、48和72h时出现HepG2细胞生长抑制效应(P0.05或P0.01),有剂量-效应关系;而2.0μmol/L的6-OMe-BDE47染毒组在染毒48h后才产生细胞生长抑制效应(P0.05或P0.01),0.5、0.1μmol/L的6-OMe-BDE47染毒组没有明显的细胞抑制效应(P0.05)。24h急性染毒实验结果表明,各浓度6-OH-BDE47均能诱导HepG2细胞内ROS含量升高(P0.01),2.0μmol/L的6-OH-BDE47染毒组能诱导SOD活力升高(P0.01)、GSH含量下降(P0.05);仅2.0μmol/L的6-OMe-BDE47染毒组可诱导ROS含量升高(P0.01),未观察到6-OMe-BDE47对细胞SOD活力和GSH含量的影响(P0.05)。结论 6-OH-BDE47和6-OMe-BDE47对HepG2的细胞有不同程度的生长抑制作用和氧化应激效应,前者作用较后者强。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对小鼠精母细胞凋亡及孤核受体TR4 mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对小鼠精母细胞(GC-2 spd)凋亡及TR4 mRNA表达的影响。方法将GC-2 spd细胞分别暴露于含终浓度0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养基培养24 h。采用MTT法检测细胞活性,采用Real-time PCR方法检测细胞TR4 mRNA的相对表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与溶剂对照组比较,200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的存活率均较低,100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的凋亡率均较高,仅200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞TR4 mRNA的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着DEHP染毒剂量的升高,GC-2 spd细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势。结论 DEHP对生精细胞具有生殖毒性作用,可通过促进孤核受体TR4诱导生精细胞凋亡。     

液态甲醛对HepG_2细胞增殖影响及DNA损伤效应

为探讨液态甲醛致HepG2细胞增殖的抑制情况和DNA损伤效应,以HepG2细胞作为试验材料,甲醛染毒浓度分别为0(对照)、200、400、800、1600μmol/L。采用MTT试验检测甲醛暴露24h对HepG2细胞的抑制率,并计算半数致死浓度(IC50)。采用彗星试验检测甲醛暴露12h对HepG2细胞的DNA损伤效应。结果显示,200、400、800、1600μmol/L甲醛染毒组细胞抑制率分别为38.03%,46.01%,50.28%,73.65%,具剂量依赖性,IC50为484.59μmol/L。彗星试验结果显示,与对照组比较,200、400、800μmol/L甲醛染毒组彗星细胞率和彗星细胞尾长均较高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。随着甲醛染毒剂量的增高,彗星细胞率及彗星细胞尾长均先升高后降低,且在400μmol/L甲醛染毒组达到峰值。此外,1600μmol/L甲醛染毒组彗星细胞率和尾长与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。表明甲醛暴露对HepG2细胞的抑制具浓度依赖性。低浓度甲醛主要引起细胞DNA分子断裂,高浓度甲醛主要引起细胞DNA发生交联。     

邻苯二甲酸酯及双酚A或氯化镉对睾丸巨噬细胞分泌白细胞介素-10的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)及双酚A(BPA)或氯化镉对大鼠睾丸巨噬细胞(TM)分泌细胞因子IL-10的影响。方法原代提取大鼠TM细胞,以50μg/ml脂多糖(LPS)作为激活剂,分别设1、10、100μmol/L DEHP、BPA和1、10、50μmol/L氯化镉单独染毒组以及0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L BPA、5μmol/L DEHP+5μmol/L BPA、50μmol/L DEHP+50μmol/L BPA、0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L氯化镉、5μmol/L DEHP+5μmol/L氯化镉、50μmol/L DEHP+25μmol/L氯化镉联合染毒组。作用细胞24 h后,采用ELISA及细胞因子抗体芯片方法检测TM细胞上清液中细胞因子白细胞介素-10(IL-10)的浓度。结果与LPS组比较,1μmol/L氯化镉、10μmol/L BPA或100μmol/L DEHP单独染毒组的IL-10蛋白均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着剂量的增加抑制作用逐渐增强。无论与LPS组还是与1μmol/L BPA单独染毒组比较,0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L BPA混合染毒组的IL-10蛋白降低,差异有统计学意义(P0.05)。抗体芯片结果显示50μmol/L DEHP+50μmol/L BPA混合染毒组的荧光值是100μmol/L DEHP单独染毒组的76.9%,是100μmol/L BPA单独染毒组的115.0%。无论与LPS组还是100μmol/L DEHP单独染毒组比较,50μmol/L DEHP+25μmol/L氯化镉混合染毒组TM细胞上清液中IL-10蛋白浓度均较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DEHP及BPA或氯化镉单独作用能明显抑制TM细胞分泌IL-10蛋白。低剂量(0.5μmol/L)DEHP和BPA的联合作用为协同作用,中、高剂量(5μmol/L、50μmol/L)的联合作用为拮抗作用。而DEHP和氯化镉对IL-10蛋白的交互作用为协同作用。     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对HepG2细胞胆固醇代谢影响

目的 探讨邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对肝细胞胆固醇代谢的影响,为了解MEHP的肝脏毒性作用机制提供依据.方法 分别以不同浓度MEHP、1mmol/L油酸(OA)及完全培养基(阴性对照组)处理HepG2细胞24和48 h;用CHOD-PAP-POD法测定HepG2细胞内和培养上清中总胆固醇(TC)和游离胆固醇(F...     

纳米银对肝细胞体外增殖作用的实验研究

目的探讨纳米银及其释放的银离子对人肝癌(HepG2)细胞株及人正常肝(L02)细胞株体外增殖的影响。方法采用CCK-8法检测纳米银(20~640μg/ml)染毒24、48 h对Hep G2细胞及L02细胞两株细胞体外增殖的影响,并以纳米银释放的银离子作为平行对照,以相同银含量的硝酸银溶液及相同包被含量的聚乙烯基吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone,PVP)溶液分别作为阳性对照和阴性对照。采用LDH法测定纳米银(20~160μg/ml)染毒24、48 h对两株细胞膜渗透性的影响。结果纳米银暴露24 h后,HepG2细胞各剂量组和L02细胞160μg/ml以上剂量组细胞存活率均低于对照组;暴露48 h后,两株细胞各剂量组(除L02细胞染毒20μg/ml以外)细胞存活率均低于对照组,且均低于相同浓度暴露24 h组(P0.05或P0.01)。纳米银溶液经超速离心法获得的银离子对两株细胞存活率无明显影响,而对应剂量硝酸银溶液的细胞毒性远高于纳米银。两株细胞各剂量组细胞外液LDH活性均高于对照组,且在相同条件下,HepG2细胞外液LDH活性明显高于L02细胞,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论纳米银对HepG2和L02细胞均具有增殖抑制效应,其作用主要由纳米银单体引起,且对HepG2细胞影响更明显。     

Toxicity of Sodium Sulfite to HepG2 Hepatocytes

目的 观察食品添加剂亚硫酸钠对人肝肿瘤细胞( HepG2)的细胞毒性作用和脂肪变作用.方法向HepG2细胞悬液中分别加入终浓度为0(阴性对照)～ 10 mmol/L亚硫酸钠溶液染毒24、48和72 h,并设空白对照(无细胞)组和阳性对照组(含1％Tritonx -100的DMEM),每组6个复孔.采用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定法检测肝细胞膜的通透性变化,采用CCK-8法检测肝细胞的活性改变,采用油红O染色法观察肝细胞内脂肪沉积情况.结果 与阴性对照组相比,仅10 mmol/L亚硫酸钠染毒24h后HepG2细胞培养上清中LDH活力的释放率增加(P＜0.05);而各剂量亚硫酸钠染毒48和72 h后HepG2细胞培养上清中LDH活力的释放率无显著变化.与阴性对照组相比,各剂量亚硫酸钠染毒24、48、72 h后(除0.039 mmol/L染毒72 h外)HepG2细胞的存活率均显著下降(P＜0.05),且细胞存活率随着亚硫酸钠染毒剂量的升高而降低.染毒24、48 h后,部分亚硫酸钠染毒组HepG2细胞内出现了极少量的脂滴,而阴性对照组却未发现;染毒72 h后,10 mmol/L亚硫酸钠染毒组出现明显脂滴.结论 一定剂量的亚硫酸钠染毒可增加HepG2细胞膜的通透性,对肝细胞活性有明显的抑制作用,并且可引起肝细胞内甘油三酯的蓄积.     

纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布及凋亡作用研究

目的探讨纳米银在人肝癌(Hep G2)细胞株及人正常肝(L02)细胞株内的生物分布及引起凋亡作用差异的可能机制。方法将HepG2细胞、L02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、20、40、80、160μg/ml含纳米银的细胞培养液中24、48 h。采用透射电镜(TEM)观察细胞超微结构及颗粒分布;采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位下降细胞比例和活性氧(ROS)水平的变化。结果染毒24 h时,HepG2和L02细胞的细胞膜受损,在膜周围可见黑色颗粒;染毒48 h时,在HepG2细胞的线粒体及L02细胞的溶酶体和内吞小泡中发现黑色颗粒。与对照组相比,20~160μg/ml纳米银暴露Hep G2细胞24、48 h以及40、80、160μg/ml纳米银暴露L02细胞24 h及80、160μg/ml纳米银暴露L02细胞48 h时的线粒体膜电位下降细胞比例均较高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞和L02细胞的线粒体膜电位下降细胞比例均呈上升趋势。与对照组相比,20~160μg/ml纳米银暴露HepG2细胞24、48 h的ROS水平上升明显,差异有统计学意义(P0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞ROS水平呈上升趋势;各剂量纳米银暴露L02细胞中ROS水平无明显变化。结论纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布不同对这两种细胞的凋亡造成了不同的影响。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞FasL蛋白及mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对GC-2 spd细胞FasL蛋白和mRNA表达的影响。方法将处于对数生长期的GC-2spd细胞,分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养液培养24 h。分别用q RT-PCR及Western blotting检测GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达。结果 100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平均高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平呈上升趋势。结论 DEHP可能通过增强生精细胞FasL mRNA及蛋白表达,激活Fas/FasL信号通路,最终导致生精细胞凋亡。     

饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞氧化损伤的影响

目的研究饮水含氮消毒副产物二氯乙腈(DCN)对体外培养的人肝癌HepG2细胞的氧化损伤和细胞周期的影响。方法二甲基亚砜(DMSO)溶解DCN,以DMSO处理为溶剂对照组,分别以0.8、4、20、100μmol/L DCN染毒HepG2细胞为处理组。应用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活力,相关试剂盒检测HepG2细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并通过碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期。结果 DCN引起HepG2细胞的IC50为230.53μmol/L;在染毒24 h条件下,与溶剂对照相比,100μmol/L的DCN可引起HepG2细胞内MDA含量上升(P0.05)和SOD含量下降(P0.01),各染毒组的DCN使HepG2细胞内GSH含量明显下降(P0.05);在细胞活力75%以上的染毒剂量下对细胞周期无影响。结论低剂量的DCN可诱导HepG2细胞氧化损伤,使其脂质过氧化反应增强、抗氧化作用降低,但对细胞周期无影响。     

丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响

目的探讨丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响及其调控机制。方法体外培养HepG2细胞,采用不同浓度(0.01~100μmol/L)丝氨酸处理,CCK8法、划痕实验和体外基质粘附实验检测HepG2细胞的增殖、迁移及粘附功能;采用1μmol/L丝氨酸处理,Western blot检测pERK和pAKT。结果与空白对照组细胞相比,1μmol/L丝氨酸处理组显著促进HepG2细胞的增殖,且在48 h和72 h差异具有统计学意义(P0.05)。1μmol/L丝氨酸处理组24 h的迁移促进率为6%(P0.05)。0.01和1μmol/L丝氨酸处理组对HepG2细胞粘附功能的促进率分别为15%(P0.05)和20%(P0.01)。1μmol/L丝氨酸处理组ERK和AKT活性(pERK和pAKT)明显升高。结论丝氨酸通过促进ERK和AKT磷酸化促进HepG2细胞的增殖、迁移和粘附。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对StAR基因表达的影响

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)对类固醇合成急性调节蛋白(St AR)基因表达水平和蛋白表达水平的影响。方法用不同剂量DEHP(0.05~0.80 mmol/L)对MCF-7细胞染毒24、48 h,采用荧光定量PCR检测St AR基因表达水平,观察DEHP染毒的剂量-效应关系;用单一剂量DEHP 0.80 mmol/L染毒细胞3、6、12、24、48 h,荧光定量PCR检测St AR基因表达水平,观察DEHP染毒的时间-效应关系;DEHP(0.10~0.80)mmol/L染毒24 h,western blot检测St AR蛋白表达水平的改变。结果 DEHP染毒24 h,(0.10~0.80)mmol/L剂量组St AR基因表达水平都显著高于对照组50%~130%,差异有统计学意义(P0.01);DEHP染毒48 h,(0.05~0.80)mmol/L剂量组St AR基因表达水平比对照组升高30%~185%,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。DEHP 0.8 mmol/L染毒3 h后St AR基因表达比对照组升高35%(P0.05),染毒6 h后St AR基因表达升高65%(P0.01),染毒12 h升高130%(P0.01),染毒24 h升高145%(P0.01),染毒48 h升高260%(P0.01)。Western blot结果显示,DEHP 0.10 mmol/L组St AR蛋白表达与对照组比较无明显变化,0.20 mmol/L组St AR蛋白表达比对照组明显升高35%(P0.05),0.40 mmol/L组St AR蛋白表达升高55%(P0.01),0.80 mmol/L组St AR蛋白表达升高70%(P0.01)。结论 DEHP可引起St AR基因表达和蛋白表达水平上调,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中St AR表达水平变化,从而产生生殖毒性作用。     

砷化合物致人表皮癌A431细胞的毒性及氧化应激和砷代谢研究

目的探讨不同砷化合物致人表皮癌细胞(A431)的细胞毒性及氧化应激和砷代谢的情况。方法培养的A431细胞分别暴露于0.05～50.0μmol/L一甲基亚胂酸(MMAⅢ),0.05～200.0μmol/L三氧化二砷(As2O3,As3+),0.5～500.0μmol/L砷酸氢二纳(As5+)和二甲基胂酸钠(DMAⅤ)24 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率;检测砷化物对丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响;以流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS);以原子荧光分析方法检测细胞内外不同形态砷含量。结果在一定剂量范围的MMAⅢ(≥5.0μmol/L)、As2O(3≥200.0μmol/L)、砷酸氢二钠(0.5,≥200.0μmol/L)和二甲基胂酸钠(500.0μmol/L)能够显著降低A431的细胞生存率(P<0.05,P<0.01),而在低剂量时,四种砷化物能显著促进A431细胞增殖(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,50.0μmol/L MMAⅢ组,50.0、250.0μmol/LAs2O3组,0.5μmol/L砷酸氢二钠组MDA含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),而250.0μmol/L砷酸氢二钠和5.0～250.0μmol/L二甲基胂酸钠组MDA含量均显著降低(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,0.5、50.0μmol/L MMAⅢ组,5.0～250.0μmol/L砷酸氢二钠组和0.5～500.0μmol/L二甲基胂酸钠组的SOD活力显著升高(P<0.05,P<0.01)。细胞内活性氧含量依次为0.5μmol/L MMAⅢ>50.0μmol/L As2O3>100.0μmol/L砷酸氢二钠>100.0μmol/L二甲基胂酸钠。低剂量As2O3、砷酸氢二钠组细胞内砷甲基化率高于高剂量组,且As2O3组甲基化率高于砷酸氢二钠。结论在本实验条件下,不同砷化物在低剂量促进A431细胞增殖,高剂量抑制增殖,可能与A431细胞的氧化应激和砷代谢有关。     

氟化钠对大鼠成骨肉瘤细胞增殖活性及碱性磷酸酶活力和骨钙素mRNA表达的影响

目的探讨氟化钠(NaF)对成骨样细胞大鼠骨肉瘤(UMR-106)细胞增殖活性及主要成骨活性标志物碱性磷酸酶(ALP)活力和骨钙素(BGP)mRNA表达的影响。方法将处于对数生长期的UMR-106细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、5×10、10~2、5×10~2、1×10~3、5×10~3、1×10~4、2×10~4、4×10~4、8×10~4μmol/L NaF的DMEM培养液中孵育24、48 h,采用CCK-8检测细胞活性。将处于对数生长期的UMR-106细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、1×10~3、2×10~3、4×10~3μmol/L NaF的DMEM培养液(不含FBS)继续培养12、24、48 h,测定细胞培养液和细胞ALP的活力及细胞中BGP mRNA的表达水平。结果与对照组比较,1×10~3~8×10~4μmol/L NaF染毒24 h和5×10~8×10~4μmol/L NaF染毒48 h时大鼠UMR-106细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05)。5×10、1×10~3、5×10~3、1×10~4、2×10~4μmol/L NaF染毒48 h时大鼠UMR-106细胞的存活率均低于染毒24 h时,差异有统计学意义(P0.05)。各浓度NaF染毒组UMR-106细胞培养液和细胞中ALP活力均较对照组高,除1×10~3μmol/L NaF染毒24 h的细胞培养液和1×103μmol/L NaF染毒48 h的细胞内ALP活力外,差异有统计学意义(P0.05)。随着NaF染毒浓度的升高,UMR-106细胞培养液和细胞中ALP活力均呈上升趋势;随着NaF染毒时间的延长,细胞培养液中ALP的活力呈上升趋势,而细胞中ALP的活力呈先升高后下降的趋势。2×103、4×103μmol/L NaF染毒组UMR-106细胞的BGP mRNA表达水平均较对照组高,差异有统计学意义(P0.05)。随着NaF染毒浓度的升高,UMR-106细胞BGP mRNA的表达水平呈上升趋势;随着NaF染毒时间的延长,UMR-106细胞BGP mRNA的表达水平呈下降趋势。结论在本实验浓度下,NaF对UMR-106细胞的增殖呈抑制作用,但可促进其成骨活性标志物ALP活力及BGP mRNA的表达。