4,4′-二异硫氰基芪-2,2′-二磺酸对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的作用

目的探讨氯通道阻滞剂4,4′-二异硫氰基芪-2,2′-二磺酸(DIDS)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导H9C2心肌细胞肥大的作用及其可能机制。方法应用AngⅡ1μmol/L刺激心肌H9C2细胞株,构建心肌细胞肥大模型,观察12、24、36、48和72h各项表达,另给予50、100、200μmol/L DIDS预处理H9C2细胞,细胞分组:空白组、AngⅡ组、DIDS组、AngⅡ+DIDS组;免疫荧光染色测量细胞表面积,BCA法检测蛋白含量,实时定量PCR法检测心肌肥厚基因心房钠尿肽(ANP)和肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达,二氯荧光素二乙酸检测活性氧水平。结果48h细胞表面积最大(50 166±2697)μm2和总蛋白含量最大(1.68±0.06)mg/107个,36hANP mRNA为4.08±0.38和β-MHC mRNA为2.80±0.18,表达量均最高。与空白对照组比较,AngⅡ组心肌细胞表面积、总蛋白含量、ANP、β-MHC mRNA表达量和细胞内活性氧水平明显增加(P0.05),DIDS组无显著差异(P0.05);与AngⅡ组比较,DIDS+AngⅡ组的心肌细胞表面积明显减小(P0.05)、总蛋白含量明显减少(P0.05)、ANP mRNA和β-MHC mRNA表达量明显减低(P0.05)、细胞内活性氧水平明显下降(P0.05)。结论 DIDS可以有效抑制AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞肥大,其机制可能与降低活性氧的水平有关。     

过氧化物酶体增殖物活化型受体β/δ改善心肌中炎性因子的表达

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体(PPAR)β/δ的特异性激动剂GW0742体外抑制心肌肥厚作用的可能机制。方法取体外用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导新生大鼠的心室肌细胞,建立心肌细胞肥厚模型,以GW0742作用于肥大的心肌细胞,设立正常组、AngⅡ组、AngⅡ+GW0742组,并测量心肌细胞表面积、3H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用RT-PCR半定量测定心钠素、脑钠素及炎性因子的表达变化。结果与正常组心肌细胞比较,AngⅡ组诱导的肥大心肌细胞的表面积、3H-亮氨酸掺入、心钠素、脑钠素表达显著增加(P<0.01);AngⅡ+GW0742组在终浓度为10μmol/L时可明显逆转此改变(P<0.01);同时GW0742抑制肥大心肌细胞的基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9、白细胞介素-1β的mRNA过度表达。结论GW0742抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,其机制可能为通过调控炎性因子所致。     

微小RNA-155调节钙调磷酸酶和活化T细胞核因子4表达对心肌细胞肥大的影响

目的研究微小(microRNA,miR)-155对心肌细胞肥大的影响及对钙调磷酸酶(CaN-β)和活化T细胞核因子4(NFAT-4)表达的调控作用。方法培养大鼠心肌细胞H9C2(2-1),血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大,脂质体转染法将miR-155模拟物和miR-155抑制物转染入心肌细胞。分为对照组、AngⅡ组、mimics组、inhibitors组、AngⅡ+mimics组和AngⅡ+inhibitors组。实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达。逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和CaN-βmRNA表达水平。Western blot法检测CaN-β和NFAT-4蛋白表达水平。结果与AngⅡ组比较,AngⅡ+mimics组ANP、β-MHC、心肌细胞表面积、CaN-βmRNA和蛋白表达及NFAT-4蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CaN-β可能为miR-155的作用靶点,miR-155可通过负性调控CaN-β和NFAT-4的表达,减少心肌细胞ANP和β-MHC表达,抑制心肌细胞肥大。     

血管紧张素Ⅱ对培养的心肌细胞中ACE2表达的影响

目的探讨血管紧张素II（Ang II）对培养的心肌细胞血管紧张素转换酶2（ACE2）基因和其蛋白表达的影响。方法体外原代培养新生SD大鼠的心肌细胞,随机分为对照组和Ang II刺激组。测量心肌细胞的直径和表面积。用RT-PCR法检测心肌细胞中ACE2 mRNA的表达,Western blot检测心肌细胞中ACE2蛋白的表达。结果与对照组相比,用10-7mol/L的Ang II处理,可引起心肌细胞的直径和表面积增加（P<0.01）,10-7mol/L Ang II刺激组ACE2 mRNA和其蛋白的表达显著降低（P<0.01）。结论外源性给予10-7mol/L的Ang II,可直接导致心肌细胞肥大,且Ang II刺激引起的心肌细胞中ACE2 mRNA和其蛋白表达的下调,其意义在于使对心肌细胞具有保护作用的Ang（1-7）产生减少,并协同参与了心肌细胞肥大的过程。     

miR-499a-5p靶向调控CDKN1A基因在心肌细胞肥大中的作用机制研究

目的:探讨miR-499a-5p靶向细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,并将H9c2细胞随机分为正常对照(Con)组、细胞肥大模型(AngⅡ)组、转染对照(AngⅡ+miR-NC)组和转染(AngⅡ+miR-499a-5p)组。采用Image J软件测量单细胞表面积,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析各组细胞中miR-499a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测CDKN1A、cleaved Caspase-3以及心肌肥大标志蛋白心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-499a-5p和CDKN1A的靶向作用关系。结果:与Con组比较,AngⅡ组H9c2细胞表面积、凋亡率、CDKN1A、Cleaved Caspase-3、ANP、BNP和β-MHC蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而细胞活力和mi...     

丙戊酸对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大与HDAC2表达的抑制作用

目的: 观察组蛋白脱乙酰基酶抑制剂—丙戊酸（valproic acid,VPA）抑制心肌细胞肥大和组蛋白脱乙酰基酶2（histone deacetylase 2，HDAC2）的表达。方法: 常规方法培养原代心肌细胞，分为5组:对照组、肥大组、低浓度VPA组(5×10-6 mol/L)、中浓度VPA组(10-5 mol/L)和高浓度VPA组(2×10-5 mol/L)。给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞造成肥大后，给予不同浓度的VPA进行干预。AngⅡ作用24 h后,于相差显微镜下观察心肌细胞面积的变化。用RT-PCR检测HDAC2 mRNA的表达；免疫组化染色法检测HDAC2蛋白的表达。结果: 经AngⅡ刺激后，在相差显微镜下可见心肌细胞面积变大，HDAC2 mRNA的水平增高，HDAC2蛋白表达亦增加。给予不同浓度的VPA后，上述指标随着VPA浓度的增加而逐渐下降（P<0.05）。结论: AngⅡ致心肌细胞肥大的过程中伴有 HDAC2表达增加，给予HDAC抑制制后，可使心肌细胞面积减少，HDAC2表达减少，提示VPA可抑制心肌细胞的肥大，HDAC2有可能参与心肌细胞肥大的机制。     

血管紧张素1-7对培养心肌细胞血管紧张素转换酶2基因表达的影响

目的探讨血管紧张素1-7(Ang1-7)对培养心肌细胞血管紧张素转换酶2(ACE2)基因表达的影响。方法将体外原代培养的新生SD大鼠心肌细胞,随机分为对照组和Ang1-7刺激组。测量心肌细胞直径和表面积,用RT-PCR方法检测心肌细胞ACE2mRNA表达,激光共聚焦显微镜检测ACE2蛋白表达部位。结果Ang1-7对心肌细胞直径和表面积没有影响(P>0.05);Ang1-7刺激组较对照组ACE2mRNA表达显著升高(P<0.01);激光共聚焦显微镜显示,ACE2在心肌细胞膜表达。结论外源性Ang1-7对心肌细胞形态无影响,Ang1-7刺激心肌细胞ACE2mRNA表达上调,其意义在于加速血管紧张素Ⅱ降解为Ang1-7,发挥心肌保护效应。     

SK-7041对血管紧张素Ⅱ致大鼠心肌细胞肥大的干预作用

目的探讨SK-7041在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌细胞肥大过程中的抑制作用。方法常规方法培养大鼠原代心肌细胞,分为3组:对照组、肥大组、SK-7041组。利用AngⅡ刺激心肌细胞造成肥大模型,并给予SK-7041进行干预。反转录聚合酶链反应观察β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达;相差显微镜和电镜观察心肌细胞的表面积和超微结构变化;免疫组织化学法检测c-fos蛋白的表达。结果大鼠原代心肌细胞在AngⅡ作用下表面积增加,超微结构发生改变;β-MHC mRNA和c-fos蛋白表达增加(P<0.05)。给予SK-7041干预后,上述变化显著缓解(P<0.05)。结论 SK-7041可抑制AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,为临床上治疗心肌肥厚提供一条新的思路。     

心肌营养素-1在血管紧张素Ⅱ促心肌细胞肥大、损伤时的作用及意义

目的研究心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)在血管紧张素II(AngⅡ)刺激心肌细胞造成肥大、损伤时的作用及意义。方法利用AngⅡ刺激心肌细胞造成细胞肥大,光、电镜下观察细胞形态变化,免疫组化法检测CT-1蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CT-1、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达,酶联免疫法(ELISA)定量检测心肌细胞凋亡。结果经AngⅡ刺激后心肌细胞形态变大,β-MHCmRNA表达增加,心肌细胞凋亡增多;CT-1mRNA、蛋白表达均增加;苯亚甲基丙二腈的脂类衍生物(AG490)能部分抑制CT-1引起的心肌细胞肥大,并减少心肌细胞凋亡。结论CT-1参与心肌细胞肥大的过程;AG490能够抑制CT-1促心肌细胞肥大的作用,而不降低CT-1对心肌的保护作用。     

心肌营养素-1在血管紧张素Ⅱ致心肌细胞肥大中的表达

目的利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞造成肥大,观察心肌细胞肥大过程中心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)的表达情况。方法培养原代心肌细胞,给予AngⅡ刺激心肌细胞造成肥大,在不同时间取细胞进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察CT-1 mRNA表达,免疫组化法检测CT-1蛋白表达,相差显微镜下观察细胞形态变化。结果经AngⅡ刺激后在相差显微镜下可见心肌细胞面积变大。CT-1 mRNA水平随着AngⅡ刺激时间延长而有增高的趋势,CT-1蛋白表达亦增加。结论AngⅡ致心肌细胞肥大过程中伴有CT-1表达增加,CT-1有可能参与心肌细胞的肥大机制。     

阻断4-1BB/4-1BBL通路对系统性红斑狼疮T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的影响

目的 研究共刺激分子4-1BB/4-1BBL对系统性红斑狼疮(SLE)T淋巴细胞增殖与Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在SLE发病机制中的作用.方法 采用四甲基噻唑蓝(MTT)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测体外培养的30例SLE患者外周血T淋巴细胞应用抗4-1BB单抗阻断前后T淋巴细胞增殖及干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4分泌水平,以20名健康志愿者为正常对照.结果 ①SLE患者T淋巴细胞经抗CD3单抗刺激后增殖明显大于活化前(P＜0.01),而应用抗4-1BB单抗阻断后T淋巴细胞的增殖明显受抑N(p＜0.01 .②SLE患者T淋巴细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平明显高于正常对照组(P＜O.01),而且经抗CD3单抗刺激活化后,SLE患者T淋巴细胞分泌的IFN-γ和IL-4水平显著高于活化前(P＜0.01),但是应用抗4-1BB单抗阻断后培养上清中IFN-γ和IL-4水平明显下降(P＜0.05,),以IL-4水平的减少最为显著.结论 抗4-1BB单抗可显著抑制SLE T淋巴细胞的异常活化及Th1和Th2细胞因子的分泌,减轻SLE的免疫损伤.     

The 4-2-1 family structure in China: a survival analysis based on life tables

Concern about ensuring old-age support in 4-2-1 families—consisting of four older people (paternal and maternal grandparents), two parents, and only one child—has risen with the increase in the number of families with only one child. In this article, using life table data and probability theory, we examine survival probabilities and coexistence durations for China’s 4-2-1 family structure, as well as urban and rural differences and conduct a sensitivity analysis. We find that once the grandparents have all entered the “old-age” phase (over 60 years old), the probability that all four will survive is only 0.61. The four grandparents are likely to coexist for 16 years after the birth of their grandchild, then one will die and the remaining three will probably spend another 8 years together; finally, after another dies, the surviving two will coexist for another 5 years. There is no significant difference between urban and rural families in terms of the duration of their coexistence. As the ages at which the parents had their child rise, the durations become shorter. The pressure of old-age support in such families is not as severe as expected.     

4-1BBL重组腺病毒载体的构建及表达

目的构建4-1BBL基因重组腺病毒载体,为前列腺癌的免疫治疗奠定基础。方法以质粒pcDNA3-m4-1BBL为模板,PCR法扩增出4-1BBL cDNA,并将其插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV-m4-1BBL,经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,挑选同源重组质粒,PacⅠ酶切线性化后,转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达,RT-PCR和Western blot法检测4-1BBL表达。结果目的基因经酶切分析,测序鉴定正确,RT-PCR和Western blot证实4-1BBL表达。结论成功构建了含4-1BBL基因的腺病毒载体,该载体可用于前列腺癌的免疫治疗。     

溴氰菊酯和三氯杀虫酯现场灭蛉效果观察

用2.5％可湿性溴氰菊酯和国产三氯杀虫酯(7504)进行现场喷洒灭蛉结果表明,每平方米墙面使用溴氰菊酯37.5mg、25mg和12.5mg剂量,可使白蛉数量比对照区降低13—19倍,削平季节高峰。当年的灭蛉效果超过50％的可湿性DDT。在模拟土墙和泸纸药膜上,残效至少可达50天以上。建议以每平方米12.5mg作为灭蛉喷洒剂量推广使用;7504每平方米1g的剂量可使白蛉数量降低8.9倍,值得进一步试用,但其剂型应研究改进。连续观察证明,在当地条件下,于喷洒后第三年白蛉密度可恢复到具有流行病学意义的程度。     

共刺激分子4-1BBL在过敏性支气管哮喘患者外周血的表达及其意义

目的 4-1BBL(CD137L)为肿瘤坏死因子超家族成员,4-1BBL与其受体4-1BB结合为T细胞活化提供共刺激信号.有研究证实激动性4-1BBL抗体能降低过敏性哮喘小鼠的气道高反应性,减少气道炎症细胞浸润.但4-1BBL在过敏性哮喘患者中的作用尚不清楚.方法 我们比较了过敏性哮喘患者和健康对照组外周血单个核细胞中...     

共刺激分子4-1BBL在过敏性支气管哮喘患者外周血的表达及其意义

目的 4-1BBL(CD137L)为肿瘤坏死因子超家族成员,4-1BBL与其受体4-1BB结合为T细胞活化提供共刺激信号.有研究证实激动性4-1BBL抗体能降低过敏性哮喘小鼠的气道高反应性,减少气道炎症细胞浸润.但4-1BBL在过敏性哮喘患者中的作用尚不清楚.方法 我们比较了过敏性哮喘患者和健康对照组外周血单个核细胞中...     

4-1BB单克隆抗体对免疫性肝损伤治疗及CD4+CD25+T淋巴细胞影响研究

目的 探讨4-1BB单克隆抗体(4-1BBmAb)对免疫性肝损伤治疗及对CD4+CD25+T淋巴细胞影响.方法 建立小鼠刀豆蛋白A(ConA)肝损伤模型,检测4-1BB表达,ConA注射后2 h给予4-1BBmAb(100μg/只),观察肝功能及病理学变化,流式细胞仪检测CD4+CD25+T淋巴细胞.结果 丙氨酸转氨酶(ALT)模型组(139±22)U/L,对照组(32±12)U/L,天冬氨酸转氨酶(AST)分别(130±16)U/L及(29±11)U/L,两组差异有统计学意义(P<0.01);模型组4-1BB表达(8.1±2.6)比对照组(5.3±2.6)升高(P<0.01).4-1BBmAb治疗后ALT(98±14)U/L,AST(89±11)U/L降低(P<0.01).模型组CD4+CD25+T淋巴细胞(2.9±0.8)低于对照组(3.6±1.2)(P<0.05),4-1BBmAb组(8.3±3.0)高于生理盐水组(3.0±0.8)(P<0.01).结论 4-1BBmAb对免疫性肝损伤有治疗作用,影响CD4+CD25+T淋巴细胞达到治疗肝损伤目的 .     

宫颈癌患者血清CA125和CA72-4水平及其临床意义

目的探讨治疗前不同的CA125和CA72-4值对判断宫颈癌的临床分期、病情及预后估测的价值.方法利用放射免疫分析方法检测125例宫颈癌患者治疗前血清CA125,CA72-4值.结果Ⅳ期宫颈癌患者CA125和CA72-4值明显高于I,II期.治疗前血清CA125>35u/mL 预测宫颈癌的灵敏性、特异性分别为:35.2%,94%,治疗前血清CA72-4>3.8ng/mL 预测宫颈癌的灵敏性、特异性分别为:28.8%,92%.结论 CA125>35u/mL 结合CA72-4>3.8ng/mL可明显提高诊断的灵敏性(46.4%)及特异性(94%),并对判断宫颈癌的临床分期、病情和预后估测有一定的价值.     

乙型肝炎肝硬化患者血清内毒素、IL-4、IL-18水平的研究

研究肝硬化患者病程中血清内毒素(LPS)和IL-4、IL-18水平变化。采用鲎三肽基质染色法和ELISA法分别检测35例肝硬化患者活动期和缓解期上述三项指标，并设健康人40例为对照组。结果为：肝硬化患者两期LPS、IL-4、IL-18水平均明显高于正常对照组(未检出LPS)，缓解期较活动期显著降低。三指标均呈正相关。结论：LPS、IL-4、IL-18在HBV所致肝硬化发病中可能有重要作用。     

糖链抗原联合检测对肺癌合并胸腔积液的诊断价值

目的 联合检测胸腔积液中糖链抗原CA72-4、CA242、CEA的水平,探讨其对肺癌合并胸腔积液的诊断价值.方法 采用酶联免疫吸附试验法对39例肺癌合并胸腔积液患者和35例良性疾病合并胸腔积液患者的胸腔积液进行CA72-4、CA242、CEA 3项联合检测.根据ROC曲线选择肿瘤标志物的界值,以敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及准确率比较其在不同类型胸腔积液中的表达情况.结果 肺癌患者胸腔积液中3项肿瘤标志物的平均水平明显高于良性疾病患者(P<0.05).CA72-4、CA242、CEA的ROC曲线下面积分别为0.703、0.727、0.804.CA72-4对肺癌性胸腔积液诊断的敏感性和特异性分别为64.1%、71.4 0A.CA242对肺癌性胸腔积液诊断的敏感性和特异性分别为59.0%、80.0%.各项肿瘤标志物联合检测时,CA72-4+CEA和CA72-4+CA242+CEA对肺癌合并胸腔积液诊断的敏感性和特异性相同,分别为89.7%、94.3%.均高于其他联合.结论 检测胸腔积液中糖链抗原CA72-4、CA242、CEA的水平对肺癌合并胸腔积液的诊断有一定价值;多项肿瘤标志物联合检测时,敏感性和特异性均较单项检测时高;最佳联合检测为CA72-4+CEA.