苯并[a]芘暴露的小鼠原代支气管上皮细胞中miR-320对细胞周期的影响

目的检测miR-320在苯并[a]芘(B[a]P)暴露的小鼠原代支气管上皮细胞的表达水平,探讨B[a]P染毒的小鼠支气管上皮细胞中miR-320对细胞周期的影响。方法以1.00μmol/LB[a]P染毒原代培养小鼠支气管上皮细胞。以定量PCR检测染毒细胞中miR-320的表达。以FACSArray流式液相芯片分析仪检测细胞周期和细胞周期素依赖性激酶6(CDK6)的表达水平。结果 miR-320在B[a]P染毒细胞中表达上调。染毒细胞出现G1期阻滞现象,与溶剂对照组的[(62.70±1.54)%]G1期细胞比例相比,(84.28±0.36)%的细胞停留在G1期。抑制miR-320表达后G1期阻滞现象缓解。染毒细胞中的CDK6表达降低,抑制miR-320表达后,与B[a]P组相比,CDK6的表达量有(2.0±0.3)倍的升高。结论 miR-320在一定程度上通过对CDK6表达的调控影响B[a]P暴露的细胞的细胞周期。     

苯并[a]芘对人神经母细胞瘤细胞能量代谢的影响

[目的]研究苯并[a]芘(BaP)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞能量代谢的影响,进一步探讨BaP的神经毒性。[方法]不同浓度BaP染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用MTT法检测细胞活力;细胞丙二醛(MDA)测定试剂盒测定细胞内MDA含量;超氧化物歧化酶(SOD)分型测试盒测定细胞内锰(Mn)-SOD含量;Seahorse XFp细胞能量分析仪检测细胞耗氧率(OCR)及胞外酸化率(ECAR)。[结果]随着BaP染毒浓度的增大,细胞活力明显下降(P_(趋势)0.01);随着BaP染毒浓度的增大,细胞内MDA水平升高(P_(趋势)0.01),Mn-SOD水平降低(P_(趋势)0.01),1.0、10.0、100.0μmol/L BaP组细胞内MDA含量明显高于对照组,Mn-SOD含量明显低于对照组(P0.05);随着BaP染毒浓度的增大,细胞的基础有氧呼吸、ATP偶联有氧呼吸速率、有氧呼吸最大值、糖酵解水平、糖酵解最大值及糖酵解储备值均呈下降趋势(P_(趋势)0.01),各浓度组基础有氧呼吸、ATP偶联有氧呼吸速率明显低于对照组(P0.05);10.0、100.0μmol/L BaP组有氧呼吸最大值、有氧呼吸储备值、糖酵解水平、糖酵解最大值及糖酵解储备值明显低于对照组(P0.05)。不同浓度BaP处理组MTT光密度值及Mn-SOD含量与基础有氧呼吸、ATP偶联有氧呼吸速率、有氧呼吸最大值、有氧呼吸储备值、糖酵解水平、糖酵解最大值及糖酵解储备值均呈正相关(P0.05),细胞内MDA含量与各细胞生物能量参数均呈负相关(P0.05)。[结论]BaP造成SH-SY5Y细胞氧化损伤,降低线粒体呼吸功能,较高浓度时损伤有氧呼吸储备能力及糖酵解功能。     

苯并[a]芘对大鼠海马形态学的影响

目的对大鼠进行苯并[a]芘(B[a]P)急性染毒后用光镜和电镜观察其海马组织的形态学改变,从而探究B[a]P对大鼠海马神经细胞的影响。方法将50只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和实验组(n=40),其中实验组又按大鼠染毒后的处死时间分为5组(染毒后1h组、染毒后1d组、染毒后2d组、染毒后3d组、染毒后5d组),每组8只。对实验组大鼠尾静脉注射B[a]P,对照组大鼠尾静脉注射相同剂量的生理盐水。染毒结束后,分别在不同的特定时间点取下大鼠的海马组织在光镜和电镜下进行观察。结果与对照组相比,实验组大鼠B[a]P急性染毒后出现了易受惊、易兴奋、易激惹、感觉迟钝、反应低下等异常表现。各组大鼠海马组织光镜观察结果显示,实验组大鼠海马神经细胞数量及形态与对照组大鼠比较,没有明显变化。而各组大鼠海马组织电镜观察结果显示,实验组大鼠的海马神经细胞出现了胞体浓缩变性、细胞核皱缩、粗面内质网扩张、线粒体肿胀等。结论 B[a]P急性染毒对大鼠海马神经细胞具有损伤作用。     

苯并[a]芘对血管内皮细胞一氧化氮合酶表达的影响

目的　探讨苯并 [a]芘 (BaP)对内皮细胞一氧化氮合酶 (NOS)表达的影响。方法　培养猪主动脉血管内皮细胞 ,分别以不同浓度的BaP (0 ,0 1× 10 -6,0 5× 10 -6,1× 10 -6,5× 10 -6,10× 10 -6mol/L)染毒2 4h ,用Westernblot法检测诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的改变。结果　基础状态下 ,主动脉血管内皮细胞iNOS有微量表达 [蛋白质条带扫描定量的光密度 (A)为 1 0 87],随BaP浓度 (0 1× 10 -6,0 5× 10 -6,1 0× 10 -6,5 0× 10 -6mol/L)的升高 ,iNOS表达量逐渐升高 (A值分别为2 0 784 ,19 4 15 ,33 714 ,5 5 2 19) ,iNOS表达水平与BaP浓度呈一定的线性剂量 -反应关系。而eNOS (A值为 7 6 2 5 )在基础状态下的表达水平高于iNOS ,随BaP浓度 (0 1× 10 -6,0 5× 10 -6mol/L)的升高eNOS表达量也逐渐升高 (A值分别为 8 5 36 ,17 2 5 3) ,在BaP浓度为 1 0× 10 -6mol/L时eNOS的表达呈高峰 (A值为4 9 2 4 2 ) ,然后随BaP浓度 (5 0× 10 -6,10 0× 10 -6mol/L)增高而快速降低 (A值分别为 33 16 3,14 4 2 4 ) ,其表达水平与BaP浓度呈“偏峰”型。结论　BaP可激活NOS ,iNOS表达水平与BaP浓度呈一定的剂量 -反应关系 ,高浓度BaP抑制eNOS的表达。     

苯并[a]芘对大鼠海马神经元形态学的影响

目的研究苯并[a]芘(B[a]P)对大鼠海马形态学和突触的影响。方法初断乳雄性Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组、溶剂对照组和3个染毒组(分别为6.25、2.5和1mg/kg体重),连续腹腔染毒13周(90d)。在染毒结束后,用电镜和光镜观察海马形态学改变。结果 HE染色对照组和B[a]P暴露各组大鼠海马神经元形态结构未见明显异常,电镜仅高剂量组偶有线粒体肿胀和核浓缩现象出现。高剂量组神经元突触PSD厚度和突触活性区长度均明显小于对照组和低剂量组(P﹤0.05),突触界面半径明显大于对照组和低剂量组(P﹤0.05)。结论低剂量B[a]P暴露对海马神经元形态和超微结构无明显影响,但B[a]P可能引起突触形态学的改变,降低突触的传递效率,因而影响学习记忆能力。     

苯并[a]芘暴露对06岁儿童智力发育的影响

目的通过监测重庆市主城区空气中苯并[a]芘(B[a]P)浓度,结合使用标准化修订版丹佛智力发育筛查表(DDST)筛查出的06岁儿童早期智力发育异常情况,探讨B[a]P暴露与儿童智力发育损害的效应关系。方法采用高效液相色谱法测定空气中B[a]P浓度,并根据浓度均值梯度将相应区域分为高、中、低污染区域及对照区域;分别在每个区域内选取06岁儿童为高、中、低暴露组及对照组研究对象,共计467名。采用自制的儿童一般情况调查表收集调查对象的一般资料,用DDST评估儿童的智力发育情况。结果距离污染源越远,空气中B[a]P浓度越低(F=2 014.38,P0.01)。初筛发现智力发育可疑/异常的儿童54例(11.6%)。高、中、低暴露组及对照组儿童的智力发育可疑/异常检出率分别为15.6%,12.8%,10.7%及7.0%,差异无统计学意义(χ~2=4.444,P=0.217)。Logistic回归分析结果显示:儿童智力发育的主要影响因素有空气中B[a]P的浓度、平时有无香烟烟雾暴露情况以及母亲文化程度。结论 B[a]P暴露可能会对06岁儿童的智力发育产生损害效应,这可为今后研究B[a]P对儿童神经发育的毒性作用提供依据。     

苯并[a]芘对人支气管上皮细胞CYP1A1、GSTP1和GSTM1 DNA甲基化水平和mRNA表达的影响

[目的]探讨苯并[a]芘(BaP)对人支气管上皮(16HBE)细胞中CYP1A1、GSTP1和GSTM1启动子区DNA甲基化水平和mRNA表达的影响,为BaP毒理学机制的研究提供科学基础。[方法]体外培养16HBE细胞,取对数生长期的同一批次细胞,随机分为4组,包括1个溶剂对照组和3个BaP处理组,分别用二甲基亚砜(DMSO)及1、2、5 mmol/L BaP处理24 h,于倒置显微镜下观察细胞的形态学改变。采用CCK-8试剂盒测定细胞增殖能力,甲基化特异性PCR法检测CYP1A1、GSTP1和GSTM1启动子区DNA甲基化水平,实时定量PCR技术检测CYP1A1、GSTP1和GSTM1 mRNA表达的改变。采用SPSS 22.0软件的单因素方差分析进行比较,LSD法进行多组间的两两比较。[结果]与溶剂对照组相比,1、2、5 mmol/L BaP处理组新生细胞数目明显增多,细胞增殖率增高,分别为(100.00±0.47)%、(125.22±0.72)%、(122.92±1.47)%、(128.44±5.97)%(P0.05)。3个BaP组CYP1A1启动子区甲基化水平分别为8.451±1.234、8.532±0.728、11.064±0.423,低于溶剂对照组(13.917±1.094)(P0.05)。3个BaP处理组GSTP1启动子区甲基化水平分别为4.276±0.839、3.691±0.748、2.121±0.336,也低于溶剂对照组(10.860±1.129)(P0.05)。GSTM1启动子区甲基化水平分别为34.693±6.603、48.407±7.824、49.803±2.516;其中,1 mmol/L BaP组低于溶剂对照组(40.062±7.746),2、5 mmol/L BaP组高于溶剂对照组(均P0.05)。3个BaP组CYP1A1 mRNA表达水平分别为0.009±0.001、0.009±0.001、0.017±0.003,低于溶剂对照组(1.067±0.064)(P0.05);GSTP1 mRNA和GSTM1 mRNA的表达水平分别为(0.179±0.074、0.167±0.048、0.143±0.029)和(0.547±0.181、0.518±0.141、0.297±0.044),均低于溶剂对照组(0.829±0.116、0.975±0.183)(P0.05)。[结论]BaP对16HBE的毒作用机制可能与其细胞增殖能力增强及CYP1A1和GSTP1启动子区DNA甲基化水平降低,CYP1A1、GSTP1、GSTM1 mRNA表达降低有关。     

苯并[a]芘对体外培养大鼠皮层神经元HSP70表达的影响

目的 研究苯并[a]芘(B[a]P)对体外培养大鼠皮层神经元热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 分离培养SD大鼠皮层神经元,用0、0.1、0.5 、1、5和10μmol/L浓度的B[a]P染毒24h观察剂量-效应关系;用0、0.5和5μmol/L浓度的B[a]P染毒24、48和72h观察时效关系.培养液中均添...     

香烟中苯并[a]芘的测定分析

国务院颁发《关于宣传吸烟有害与控制吸烟的通知》后,吸烟对人体健康的危害已逐渐引起人们的重视。为了解香烟中的有害物质及对人体的危害,我们对长春市出售的香     

苯并[a]芘与铅对小鼠学习记忆能力影响协同效应

目的 探讨苯并[a]芘(BaP)与铅对小鼠学习记忆能力影响之间的协同效应。方法 将80只昆明小鼠随机分为10组:空白对照组,溶剂对照组(等量花生油),低、高铅组(5.4、54.0 mg/L),低、高BaP组(0.5、5.0 mg/kg),低铅+低BaP组,低铅+高BaP组,高铅+低BaP组,高铅+高BaP组;采用Morris水迷宫评定小鼠空间学习记忆能力,单细胞凝胶电泳检测海马神经元DNA损伤。结果 与对照组比较,低、高铅组,低、高BaP组,低铅+低BaP组,低铅+高BaP组,高铅+低BaP组,高铅+高BaP组小鼠逃避潜伏期[分别为(25.66±2.93)、(28.43±3.24),(23.56±2.69)、(33.54±3.82),(28.52±3.25),(43.57±4.97),(40.26±4.59),(54.54±6.22)s]明显延长,而跨越平台次数及目标象限花费时间明显减少,差异均有统计学意义(P<0.001);与对照组比较,低、高铅组,低、高BaP组,低铅+低BaP组,低铅+高BaP组,高铅+低BaP组,高铅+高BaP组小鼠尾部DNA百分比(分别为0.09%、0.15%,0.12%、0.21%,0.17%,0.31%,0.31%,0.51%)明显增加(F=9.823、5.226,P<0.05)。结论 苯并[a]芘与铅联合对小鼠空间学习记忆损伤具有协同效应,其机制可能与氧化应激损伤有关。     

人CYP1A1同工酶对苯并[a]芘和苯并[a]芘-7,8-二氢二醇的代谢差别

苯并 [ａ]芘 (Ｂ[ａ]Ｐ)首先经细胞色素Ｐ 45 0 (ＣＹＰ)氧化为 7,8 环氧化物 ,后者经环氧化物水解酶 (ＥＨ)转化生成Ｂ[ａ]Ｐ 7,8 二氢二醇 (7,8 ｄｉｏｌ) ;7,8 ｄｉｏｌ通过ＣＹＰ1Ａ1氧化为终致癌物Ｂ [ａ]Ｐ 7,8 二氢 9,1 0 环氧化物(ＤＥ2 )。本研究以Ｂ[ａ]Ｐ和 7,8 ｄｉｏｌ为底物 ,探讨野生型ＣＹＰ1Ａ1 1及其同工酶ＣＹＰ1Ａ1 2、ＣＹＰ1Ａ1 4代谢活化Ｂ[ａ]Ｐ的能力。建立杆状病毒属 Ｓｆ9昆虫细胞系统 ,将 3种同工酶的ｃＤＮＡ与载体ｐＢｌｕｅＢａｃ4.5连接 ,重组到杆状病毒基因组内 ,并通过共同感染法使系统同时表达高水…     

乙醇和乙醛对人乳腺上皮细胞中苯并[a]芘-DNA加合物形成的影响

流行病学调查发现酒精摄入与乳腺癌危险之间呈正相关关系 ,为证实此相关关系的生物学基础 ,本实验探讨了乙醇和乙醛对人乳腺上皮细胞中苯并 [ａ]芘 ＤＮＡ加合物形成的影响。培养足够量的人乳腺上皮细胞系 (ＭＣＦ 1 0Ｆ细胞 ) ,使其贴壁 48ｈ后 ,分别加入含乙醇和乙醛的新鲜培养液 ,使乙醇终浓度为 0、5、1 5、2 5ｍｍｏｌ Ｌ ,每日更换培养液 ;使乙醛终浓度为 0、0 5、2 5、5 0 μｍｏｌ Ｌ ,每 1 2ｈ更换培养液。本研究所用乙醇和乙醛的浓度可代表中等量酒精摄入者血液中乙醇和乙醛的浓度。 6ｄ后 ,除去原培养液 ,加入不含乙醇和乙醛…     

苯并[a]芘对大鼠学习记忆及海马神经元影响

目的探讨苯并[a]芘(BaP)对大鼠学习记忆及海马神经元的影响。方法将50只SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、BaP低(2.5 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高(10 mg/kg)剂量组,腹腔注射染毒,每天1次,持续30d;用Morris水迷宫测试学习记忆,电镜观察海马神经元超微结构。结果空白对照组、溶剂对照组和BaP低、中、高剂量组穿越平台次数分别为(12.03±2.43)、(11.35±2.68)、(9.75±1.78)、(7.63±1.67)、(4.38±1.46)次,在平台象限停留时间分别为(46.34±11.56)、(48.12±13.22)、(32.35±7.68)、(26.13±5.34)、(16.14±3.15)s,差异均有统计学意义(P<0.05);随染毒剂量的增加,BaP低、中、高剂量组大鼠的平均逃避潜伏期和第1次寻找平台的潜伏期均延长,平均有效策略百分比、穿越平台的次数均减少,在平台象限停留时间均缩短,差异均有统计学意义(P<0.05);电镜观察结果显示,BaP低剂量组海马神经元胞体浓缩变性,核膜皱缩变形;中剂量组出现线粒体肿胀;高剂量组出现高尔基扩张。结论 BaP亚慢性染毒...     

苯并（a）芘作用下人支气管上皮细胞蛋白表达谱的改变

[目的]观察苯并（a）芘（BaP）作用下人支气管上皮细胞（16HBE）蛋白表达谱的改变。[方法]以0、1、2、4、8、16、32、64um01／L的BaP染毒细胞24h,应用双向凝胶电泳和ImageMaster软件分析BaP处理后细胞内蛋白质表达谱的改变,基质辅助激光解吸附电离-飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption／ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF）结合数据库检索鉴定差异表达蛋白质斑点。[结果]各浓度染毒组与对照组相比,成功鉴定了17个差异表达蛋白质斑点,其中表达上调的有9种,下调的有8种。这些蛋白质包括细胞骨架蛋白、与能量代谢有关的蛋白、与DNA损伤修复有关的蛋白、肿瘤标志物、伴侣蛋白、与信号转导有关的蛋白和与氧化应激有关的蛋白。[结论]BaP作用于16HBE后导致与细胞损伤、DNA修复、应激、细胞恶性转化等有关的蛋白质表达发生改变。     

苯并[a]芘对小鼠肺细胞的DNA损伤

苯并[a]芘(benzo[a]pyrene，BaP)是一种广泛存在于环境中的多环芳烃类(PAHs)化合物，是目前公认的人类致癌物。动物实验证明苯并[a]眈可诱发肝癌、肺癌。流行病学调查也表明，接触较高浓度苯并[a]芘的钢铁厂炼焦车间工人肺癌患病率明显增高。IMP可诱发人肺癌细胞系p53蛋白异常高表达．DNA序列发生G→T突变；p21癌蛋白高表达，K-ran基因mRNA水平增高．并出现G→T突变，二者可能协同参与BaP致癌过程。     

苯并[a]芘慢性染毒对大鼠学习记忆能力的影响

目的探究苯并[a]芘(B[a]P)慢性染毒对SD大鼠学习记忆能力的影响。方法将60只SD大鼠随机分为溶剂对照组及B[a]P染毒组(B[a]P低剂量染毒组、中剂量染毒组和高剂量染毒组),对溶剂对照组大鼠腹腔注射植物油,对染毒组大鼠腹腔注射不同剂量B[a]P,连续注射10周。染毒结束后,采用Morris水迷宫实验对大鼠学习记忆能力进行测试。结果 B[a]P染毒组多数大鼠在研究期间均有异常行为表现。定向导航实验中,各组大鼠的平均逃避潜伏期随着实验天数的增加而缩短,且在同一天内,各组大鼠的平均逃避潜伏期比较,差异均有统计学意义(P0.01)。其中,溶剂对照组大鼠的平均逃避潜伏期明显短于B[a]P染毒组大鼠,且在实验的前4天,随着染毒剂量的增加,大鼠的平均逃避潜伏期越长,差异均有统计学意义(P0.05)。在空间探索实验中,各组大鼠第1次找到原平台位置所用时间、穿越原平台位置次数及在原平台象限的停留时间比较,差异均有统计学意义(P0.01)。其中,溶剂对照组大鼠第1次找到原平台位置所用时间短于B[a]P染毒组大鼠,穿越原平台位置次数多于B[a]P染毒组大鼠,在原平台象限的停留时间长于B[a]P染毒组大鼠,且随着染毒剂量的增加,大鼠第1次找到原平台位置所用时间越长,穿越原平台位置次数越少,在原平台象限的停留时间越短,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 B[a]P慢性染毒对大鼠的学习记忆能力有损害作用,且大鼠的学习记忆能力随B[a]P染毒剂量增加呈逐渐降低趋势,表明B[a]P对大鼠学习记忆能力的损害存在一定的剂量效应关系。     

苯并[a]芘亚急性染毒对雄性Wistar大鼠心血管的影响

目的探讨苯并[a]芘(B[a]P)腹腔注射亚急性染毒对雄性Wistar大鼠心血管的影响。方法将10~11周SPF级雄性Wistar大鼠40只按体重随机分为空白对照组,溶剂对照组,低、中、高剂量染毒组(B[a]P浓度分别为1.0、2.5和6.25 mg/kg),每组8只。溶剂对照组给予1.0 mL/kg的橄榄油,空白对照组不做任何处理,连续28天。染毒结束后用Prospect 3.0小动物超声成像仪和BL-410生物机能实验系统观察其左心室结构功能和血流动力学改变。HE染色观察大鼠胸主动脉和左心室病理变化。结果染毒后各组大鼠射血分数(ejection fraction, EF)、左室短轴缩短率(fractinanal shortening, FS)和左室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure, LVEDP)总体差异有统计学意义(H=11.497,P=0.022;H=11.422,P=0.022;H=10.104,P=0.039),中剂量组EF及FS低于溶剂组(调整后P<0.05),高剂量组大鼠LVEDP高于溶剂组(调整后P<0.05)。中、高剂量组胸主动脉HE染色显示血管内膜部分缺失,部分内皮细胞脱落,内膜下胶原暴露,中膜层间隙较大;中、高剂量组左室横纹模糊不清,肌纤维减少断裂或消失,心肌间隙增宽,偶见炎症细胞或有心肌间隙渗血现象。结论苯并[a]芘可致雄性Wistar大鼠心血管功能和内皮发生损伤。     

苯并[a]芘对小鼠睾丸支持细胞缝隙连接蛋白表达及细胞增殖的影响

[目的]探讨苯并[a]芘(BaP)在不引起小鼠睾丸支持细胞凋亡的情况下,对缝隙连接蛋白43(CX43)表达及细胞增殖的作用. [方法]取小鼠睾丸支持细胞系——TM4细胞,以二甲基亚砜为对照,0.5、10.0 μmol/L浓度的BaP同时染毒培养的TM4细胞,并于染毒的4h、72h后收集细胞,检测细胞的活力、增殖、凋亡情况,以及CX43的mRNA和蛋白的表达量. [结果]与对照组相比:BaP染毒4h时,两个染毒组细胞存活率、增殖、凋亡和CX43蛋白表达没有明显变化(P＞0.05),而CX43 mRNA的表达升高(P＜0.05);72h时,两个染毒组细胞凋亡无明显变化,而细胞存活率和增殖均下降(P＜0.05),CX43 mRNA和蛋白表达出现上升(P＜0.05). [结论]0.5、10.0 μmol/L浓度的BaP染毒小鼠睾丸支持细胞,可抑制细胞增殖,引起CX43 mRNA和蛋白表达升高.