bak基因干扰在铝致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的 以铝致神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)为模型,研究用RNA干扰的方法阻抑bak基因的表达,找到其最优的序列、最适的转染浓度和转染时间,以减少铝引起的神经细胞凋亡.方法 将三对bak基因小干扰RNA(siRNA)序列用不同浓度铝染毒细胞,分别测定不同的siRNA序列、不同的转染浓度及不同的转染时间对细胞活力的影响.用荧光染色法计数转染效率,用荧光定量PCR法检测干扰效率,用免疫组织化学染色法测定阻抑Bak蛋白表达效果.最后,用选定的bak siRNA1作用于染铝后的神经瘤细胞,并检测其对细胞的凋亡率及坏死率的影响.结果 siRNA1序列为最有效的序列,最适转染浓度为10 nmol/L,最适作用时间为转染后24 h.siRNA的转染效率＞90%,最大干扰效率为57.76%,并表现了对Bak蛋白表达的明显的阻抑效应.bak siRNA1作用于染铝后的神经瘤细胞,可以明显降低细胞的凋亡率,但对细胞的坏死率的影响并不明显.结论 凋亡是铝致SH-SY5Y细胞死亡的重要途径,针对bak基因,用化学法合成siRNA并将其导入神经细胞,可以有效降低bak基因和Bak蛋白的表达,提高细胞活力和降低细胞的凋亡率,为预防及治疗铝诱导的神经细胞凋亡及神经退行性变的发生发展提供理论依据.     

程序性坏死在铝致神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y死亡中的作用

目的 探讨程序性坏死是否存在于铝诱导的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的死亡途径中.方法 培养SH-SY5Y细胞,并用4 mmol/L AlCl<,3>·6H<,2>O染毒制作铝致神经细胞死亡模型,按加入Nec-1剂量不同分别设对照组(0 μmol/L)和30、60、90 μmol/L组,检测SH-SY5Y细胞的活力、线粒体膜电位、活性氧含量及细胞的凋亡率和坏死率等.结果研究表明,加入Nec-1可以显著改善染铝后的细胞坏死样形态学改变.流式细胞仪检测结果表明,加入不同剂量的Nec-1(30、60、90μmol/L)后其细胞活力分别为0.58±0.03、0.68±0.04、1.03±0.17,与对照组(0.28±0.05)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.25、3.36、4.56,P值均<0.05).Annexin V-PI双染法测定结果显示,不同剂量Nec-1(30、60、90 μmol/L)作用后坏死率分别为10.40%±0.64%、5.43%±0.68%、6.28%±0.35%,与对照组(16.46%±0.54%)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.62、7.32、6.96,P值均<0.05),可以明显降低SH-SY5Y细胞的坏死率,但其作用后SH-SY5Y细胞凋亡率分别为7.66%±0.53%、5.68%±0.41%、4.13%±0.41%,与对照组(8.68%±0.36%)相比,差异无统计学意义(F=6.33,P=0.11).加入不同剂量Nec-1(30、60、90μmol/L)后,其线粒体膜电位分别为49.42±5.96、84.79±6.86,95.51±7.01,60、90 μmol/L剂量组与对照组(67.54±6.36)相比,差异有统计学意义(t值分别为3.21、4.01,P值均<0.05).但加入不同剂量的Nec-1(30、60、90 μmol/L)后其活性氧含量分别为52.79±2.36、54.68±1.91、59.23±2.96,对照组为54,07±3.32,各组间差异无统计学意义(F=5.26,P=0.19).结论 用程序性坏死的特异阻断剂Nec-1可以有效阻断铝致SH-SY5Y细胞的死亡通路,提示程序性坏死是导致铝神经毒性的原因之一.程序性坏死在铝致SH-SY5Y细胞的死亡中发挥了重要作用.     

氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响

目的探讨氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法用不同浓度(20、40、60 mg/L)的氟化钠(Na F)染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用透射电子显微镜观察细胞内自噬体超微结构;吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的生成;Western blotting技术检测自噬延伸相关蛋白Atg5和LC3-II与自噬降解相关蛋白P62的表达水平。结果透射电子显微镜下可观察到细胞内自噬体结构,且随NaF剂量的增加自噬体数量明显减少;吖啶橙染色可见,与对照组相比,40和60 mg/L NaF染毒组自噬囊泡数量逐渐减少,尤以60 mg/L NaF染毒组减少最为明显;Western blotting检测发现,与对照组相比,Atg5和LC3-II的表达水平呈剂量依赖性降低,而P62的表达水平呈剂量依赖性升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论氟可抑制SH-SY5Y细胞的自噬水平。     

MAPK信号通路在铝致SH-SY5Y细胞死亡中的作用

目的研究铝致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)死亡过程中MAPK信号通路的作用,探索铝致神经细胞死亡的机制。方法用4 mmol/L的Al Cl3·6H2O染毒SH-SY5Y细胞模拟铝致神经细胞死亡模型,用凋亡的特异性阻断剂z VAD-fmk(20μmol/L)抑制凋亡发生,用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1,60μmol/L)抑制程序性坏死发生,用CCK-8检测不同组间细胞活力的变化,用流式细胞术检测凋亡率及坏死率的差异,用蛋白印迹法检测MAPK信号通路蛋白磷酸化水平的改变。结果与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的细胞活力下降(P0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组和凋亡抑制组的细胞活力上升(P0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率上升(P0.05);与染铝组相比,凋亡抑制组和程序性坏死抑制组的凋亡率和坏死率下降(P0.05)。与空白对照组、溶剂对照组、z VAD-fmk对照组和Nec-1对照组相比,染铝组、凋亡抑制组和程序性坏死抑制组p38磷酸化水平升高,ERK磷酸化水平下降(P0.05);与染铝组相比,程序性坏死抑制组的p38磷酸化水平下降,ERK磷酸化水平上升(P0.05)。结论 MAPK信号通路中的p38和ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞程序性坏死,ERK信号通路参与了铝致SH-SY5Y细胞凋亡,而JNK信号通路未参与铝致SH-SYSY细胞死亡。     

锰化合物对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y脂质过氧化的作用

[目的 ]通过锰染毒神经母细胞瘤细胞 (SH SY5Y) ,观察脂质过氧化及其相关酶水平的改变 ,探讨锰对SH SY5Y的脂质过氧化及相关酶活性的影响 ,为进一步研究锰神经毒作用的机制提供科学依据。 [方法 ]采用浓度为 0 .2 5、0 .5 0、0 .75mmol/L的二价锰和三价锰 ,分别对体外培养的SH -SY5Y细胞染毒 2 4h ,测定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和过氧化氢酶 (CAT)的活性。 [结果 ]二价锰和三价锰均可引起SOD、MDA、GSH、GSH Px和CAT活性的改变 ,其中SOD、GSH、GSH Px和CAT活性与对照组比较差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,且存在剂量 效应关系。而MDA含量则较对照组升高 (P <0 .0 1) ,且随染毒浓度增高而上升。 [结论 ]一定浓度的锰化合物可使SH SY5Y细胞脂质过氧化反应增强 ,引起相关酶活性的改变。提示这种变化很可能是锰对神经细胞发挥毒作用的重要途径之一。     

不同价态锰对SH-SY5Y细胞凋亡作用的影响

[目的] 探讨不同价态锰对SH-SY5Y细胞凋亡的作用.[方法] 采用流式细胞技术和透射电镜技术,选用多巴胺能神经细胞SH-SY5Y细胞作为体外测试体系,观察Mn2+和Mn3+(0.5～2 mmol/L)对细胞凋亡的诱导作用及对多巴胺(DA)含量的影响.[结果] Mn2+与细胞作用48和72 h后,可见明显的凋亡峰;而Mn3+作用24 h后,便可出现明显的凋亡峰.电镜下可观察到细胞质空泡化,胞浆内质网扩张;Mn3+对细胞结构的破坏程度较Mn2+的大.Mn3+,Mn2+均可降低SH-SY5Y细胞的DA含量,Mn3+组降低的程度更为明显.[结论] Mn3+对SH-SY5Y细胞的毒性高于Mn2+.     

Nrf 2信号通路在铅致SH-SY5Y细胞氧化应激中作用

目的 研究神经细胞内核因子E 2相关因子2(Nrf 2)信号通路是否对铅暴露所致的氧化应激产生应答及其可能机制。方法 用低、中、高剂量(5、25、125μmol/L)的醋酸铅溶液对人神经母细胞瘤SH-SY 5 Y细胞染毒,用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测染毒2 h后细胞活性氧(ROS)水平,染毒24 h后用二硫基双硝基苯甲酸(DTNB)比色法检测还原性谷胱甘肽(GSH)水平,western blot法检测蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、酪氨酸激酶2(CKⅡ)以及胞浆和胞核中Nrf 2蛋白的表达水平。结果 随着染毒剂量增加,低、中、高剂量组ROS含量依次为(559.17±54.56)、(585.50±36.41)、(621.00±29.96),与对照组(533.50±46.47)比较,中、高剂量组含量明显升高(P<0.05);GSH含量依次为(165.39±17.37)、(140.92±14.77)、(84.03±10.31),与对照组(222.10±14.91)比较,低、中、高剂量组含量均明显降低(P<0.01);与对照组比较,低、中、高剂量组胞浆Nrf 2相对灰度值为(0.38±0.09)、(0.27±0.09)、(0.25±0.11),胞浆Nrf 2表达均明显降低(P<0.05);低、中、高剂量组胞核Nrf 2相对灰度值为(1.38±0.50)、(1.55±0.49)、(2.79±1.56),仅高剂量组胞核Nrf 2蛋白表达明显增高(P<0.05)。低、中、高剂量组PKC-δ相对灰度值为(1.84±0.46)、(2.55±0.36)、(2.38±0.77),与对照组比较均明显升高(P<0.05);低、中、高剂量组CKⅡ相对灰度值为(1.28±0.32)、(1.34±0.21)、(1.52±0.42),与对照组比较仅高剂量组表达明显升高(P<0.05)。结论 铅致神经细胞氧化损伤的同时激活胞浆中Nrf 2转移入核内,进而发挥氧化应答,PKC-δ、CKⅡ在铅致Nrf 2激活过程中具有一定作用。     

Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。     

甲基苯丙胺对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的自噬流及凋亡影响

目的 观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINKl/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察线粒体自噬现...     

细胞自噬在急性淋巴细胞白血病化疗中的作用

目的以紫杉醇处理的Jurkat细胞为模型,研究细胞自噬在儿童急性淋巴细胞白血病化疗过程中的作用。方法 10μg/ml的紫杉醇处理人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞后,免疫印迹和流式细胞技术检测LC3β蛋白的表达变化,WST-1法检测PTX对Jurkat细胞的抑瘤率。结果 PTX处理Jurkat细胞0h、24h、48h后,抑瘤率分别为(4.2±1.2)%、(46.7±5.3)%、(65.9±9.4)%,组间比P均小于0.05;LC3β的平均荧光强度相对倍数分别(3.1±0.2)倍、(4.6±0.31)倍、(34.2±4.5)倍,组间比P值均小于0.05,与抑瘤率一样呈现时间依赖性增强;免疫印迹也显示PTX处理24h和48h后,LC3β的蛋白表达逐渐增强。结论细胞自噬在ALL化疗过程中活化,可导致化疗抵抗。     

CaMK-Ⅱ和PP2A在AlCl_3致SH-SY5Y细胞tau蛋白异常磷酸化中的调控作用

目的探讨钙调蛋白激酶-Ⅱ(CaMK-Ⅱ)和蛋白磷酸酶-2A(PP2A)在AlCl_3致人源性神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞tau蛋白异常磷酸化中的调控作用。方法选取SH-SY5Y细胞进行AlCl_3染毒和CaMK-Ⅱ拮抗剂KN93、PP2A激动剂鞘氨醇干预,实验分为对照组,AlCl_3低、中、高染毒组(200、400和800μmol/L Al~(3+)),KN93干预组(800μmol/L Al~(3+)+0.5μmol/L KN93)和鞘氨醇干预组(800μmol/L Al~(3+)+5 nmol/L鞘氨醇),染毒和干预48 h后,采用CCK-8法测定细胞活力,ELISA方法测定CaMK-Ⅱ、PP2A的含量,Western-Blot检测细胞总tau(tau5)及Thr-181、Thr-231、Ser-262、Ser-396磷酸化水平。结果细胞活力测定结果显示:与对照组相比,AlCl_3中、高染毒组细胞活力降低(P0.05);与AlCl_3高染毒组相比,KN93干预组和鞘氨醇干预组细胞活力增高(P0.05),且鞘氨醇干预组细胞活力与对照组相比差异无统计学意义。ELISA实验结果显示:与对照组相比,AlCl_3低、中、高染毒组CaMK-Ⅱ含量增高(P0.05),PP2A含量降低(P0.05);与AlCl_3高染毒组相比, KN93干预组和鞘氨醇干预组CaMK-Ⅱ含量降低(P0.05),PP2A含量增高(P0.05)。Western-Blot结果显示:与对照组相比,AlCl_3低、中、高染毒组tau5和Thr-181、Thr-231、Ser-396磷酸化水平增高(P0.05),AlCl_3高染毒组Ser-262磷酸化水平增高(P0.05);与AlCl_3高染毒组相比,KN93干预组和鞘氨醇干预组tau5和Thr-181、Thr-231、Ser-262、Ser-396磷酸化水平降低(P0.05),且KN93干预组Ser-262磷酸化水平,鞘氨醇干预组Thr-181、Thr-231、Ser-396磷酸化水平与对照组相比差异无统计学意义。结论 AlCl_3可引起SH-SY5Y细胞Thr-181、Thr-231、Ser262、Ser-396磷酸化水平异常增高,其机制与CaMK-Ⅱ和PP2A的变化有关;CaMK-Ⅱ主要调控Ser-262磷酸化水平,PP2A主要调控Thr-181、Thr-231、Ser-396磷酸化水平,提示AlCl_3致SH-SY5Y细胞tau蛋白异常磷酸化与PP2A密切相关。     

miR-200a-3p miR-98-5p及miR-34a-5p在支气管哮喘患儿中的表达及临床意义

目的 探讨微小RNA(miR)-200a-3p、mir-98-5p、miR-34a-5p在支气管哮喘患儿中的表达及临床意义。方法 选取2019年12月—2020年12月杭州市临安区妇幼保健院接诊的支气管哮喘患儿73例为支气管哮喘组,其中缓解期患儿47例、急性期患儿26例;另同期选择70例体检健康儿童为健康组。检测两组儿童miR-200a-3p、miR-98-5p、miR-34a-5p表达进行比较,并比较不同程度病情miR-200a-3p、miR-98-5p、miR-34a-5p表达,分析其与支气管哮喘的相关性。结果 支气管哮喘组患儿血清miR-200a-3p、miR-34a-5p表达高于健康组,miR-98-5p表达低于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-200a-3p、miR-34a-5p、miR-98-5p在不同病情严重程度患儿中总体比较,差异有统计学意义(P<0.05),且随病情严重程度发展血清miR-200a-3p、miR-34a-5p表达逐渐升高,miR-98-5p表达逐渐降低。miR-200a-3p、miR-34a-5p与支气管哮喘患儿年龄、EOS百分比、FENO呈正相关,与FEV1呈负相关;miR-98-5p、miR-34a-5p与支气管哮喘患者年龄、EOS百分比、FENO呈负相关,与FEV1呈正相关。多元logistic回归分析显示,miR-200a-3p、miR-34a-5p、miR-98-5p为影响支气管哮喘发生的因素(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-200a-3p、miR-98-5p呈负相关(r=-0.595,P=0.003);miR-200a-3p、miR-34a-5p之间呈正相关(r=0.426,P=0.047);miR-98-5p、miR-34a-5p之间呈负相关(r=-0.692,P=0.001)。结论 支气管哮喘患儿血清miR-200a-3p、miR-34a-5p表达升高,且与病情严重程度呈正相关;miR-98-5p降低,与病情严重程度呈负相关。说明miR-200a-3p、miR-98-5p、miR-34a-5p表达与支气管哮喘的发生存在关联,可通过其表达变化评估患儿病情发展,对改善患者预后具有重要意义。     

自噬紊乱在锰刺激诱导SN4741细胞损伤中的作用与机制研究

目的 通过利用氯化锰刺激SN4741细胞（小鼠多巴胺能细胞）,构建体外锰暴露模型,研究自噬紊乱在锰中毒中的作用,并初步探讨机制。方法 向SN4741细胞培养基中加入400 μmol/L的氯化锰溶液,检测细胞活力通过CCK-8 (Cell Counting Kit-8,CCK-8)试剂盒,分别检测锰作用0 h~48 h的细胞活力;凋亡蛋白Caspase-3和PARP,自噬相关蛋白Atg5和LC3的蛋白表达水平采用蛋白印迹法(western blot)检测;3-MA作为实验干预组抑制自噬紊乱,之后检测上述细胞自噬蛋白水平和损伤指标,采用方差分析进行比较。结果 锰刺激48h后损伤SN4721细胞活力(t=47.42,P=0.0013),凋亡标志蛋白Caspase-3剪切增加,下游分子PARP的剪切水平升高(t=11.96,P=0.019);Atg5和LC3-Ⅱ蛋白表达在锰暴露24h有所升高,48h升高更明显(t=18.72,P=0.012);3-MA干预后降低锰对SN4741细胞损伤(t=3.92,P=0.045),且3-MA干预致Atg5水平下降,Caspase-3蛋白和PARP等标志凋亡的蛋白水平降低(t=10.21,P=0.016)。结论 锰暴露可诱导多巴胺神经元自噬功能异常,继而诱导细胞凋亡,抑制自噬能减少锰暴露引起的细胞凋亡。     

细胞自噬在砷暴露所致肺损伤中的作用

目的探讨细胞自噬在砷暴露所致大鼠肺损伤中的作用。方法 24只无特定病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组,砷暴露低(10μg/L)、中(100μg/L)、高(1 000μg/L)剂量组,砷暴露组通过自由饮用含Na As O2的水进行染毒,对照组自由饮用不含Na As O2的水,染毒28 d后统一处死。ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-ɑ、IL-6、IL-8、IL-10的含量。Western blot法检测肺组织中自噬相关蛋白NBR1、p62、LC3Ⅱ表达量。结果砷暴露组大鼠BALF中促炎因子TNF-a、IL6、IL8表达量显著高于对照组(P0.05),且100μg/L组的IL-6最高;砷暴露1 000μg/L组的抑炎因子IL-10含量显著低于对照组(P0.05);与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中p62、NBR1的表达量增加(P0.05),且存在剂量—反应关系;与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中LC3Ⅱ蛋白表达量显著下降(P0.05),且存在剂量—反应关系。结论砷暴露所致大鼠肺损伤中,细胞自噬被抑制时会加重大鼠肺部的炎症损伤,当Na As O2暴露浓度达到100μg/L时,会对大鼠肺组织造成明显的损伤。     

活动性肺结核外周血miR-28-3p与miR-93-5p及miR-574-5p表达及临床意义

目的探讨活动性肺结核患者外周血微小RNA-28-3p(miR-28-3p)、miR-93-5p和miR-574-5p表达水平及其临床意义。方法选取2017年11月-2019年11月于河南科技大学第一附属医院行肺结核筛查的300例患者,根据肺结核诊断情况分为活动性肺结核组136例与非活动性肺结核组164例,另选取同期医院体检的102名健康人为对照组。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测外周血miR-28-3p、miR-93-5p和miR-574-5p水平,分析活动性肺结核与非活动性肺结核患者外周血miR-28-3p、miR-93-5p和miR-574-5p表达并观察活动性肺结核治疗前后其水平变化,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-28-3p、miR-93-5p和miR-574-5p表达水平对区分活动性肺结核疾病预测价值。结果活动性肺结核组吸烟、咳嗽、咯血、肺内空洞、淋巴结肿大占比高于非活性肺结核组(P0.001),而钙化结节、支气管扩张占比低于非活动性肺结核组(P0.001);活动性肺结核组干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)、IL-12、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)与外周血miR-28-3p、miR-93-5p、miR-574-5p相对表达水平高于非活动性肺结核组与对照组(P0.05),活动性肺结核组治疗后外周血miR-28-3p、miR-93-5p、miR-574-5p相对表达水平均低于治疗前(P0.05);miR-28-3p、miR-93-5p、miR-574-5p的预测活动性肺结核疾病曲线下面积(AUC)分别为0.906、0.818、0.872(P0.05),且miR-28-3p的AUC高于miR-93-5p(P=0.002)。结论活动性肺结核患者外周血miR-28-3p、miR-93-5p、miR-574-5p表达水平升高且治疗后呈下降趋势,对区分活动性肺结核存在一定的预测价值。     

miR-425-5p在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探究miR-425-5p在宫颈癌中的表达情况。方法选择在湖北省十堰市妇幼保健院妇产科就诊的38例宫颈癌患者为观察组,同时选取38例健康人为对照组。收集患者的病变和癌旁组织以及两组的血清,QRT-PCR检测miR-425-5p在各组织和血清中的表达情况,分析miR-425-5p与宫颈癌患者临床病理特征的关系。结果宫颈癌组织中的miR-425-5p表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义;观察组患者血清miR-425-5p表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义;另外,临床Ⅱ、Ⅲ期或淋巴结转移阳性的宫颈癌患者,其病变组织和血清miRNA-425-5p表达水平显著高于临床Ⅰ期或淋巴结转移阴性患者,差异有统计学意义。结论宫颈癌患者病理组织和血清中miR-425-5p表达水平上升,与临床分期和淋巴结转移呈明显的相关性,可作为临床宫颈癌患者确诊的潜在生物学标志物之一。     

鱼藤酮对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

[目的]探讨环境毒素鱼藤酮对人多巴胺能神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位的影响以及线粒体ATP敏感性钾通道(MitochondrialATP-sensitivepotassiumchannel,mKATPchannel)在其中的作用。[方法]先用0、5、20、100nmol/L浓度的鱼藤酮单独处理SH-SY5Y细胞,观察鱼藤酮与线粒体膜电位下降的量效关系;然后在此4组中分别按加和不加mKATP通道抑制剂5-羟葵酸(5-Hydroxydecanoate,5-HD)0.5mmol/L和(或)激活剂二氮嗪(Diazoxide,DZX)1.0mmol/L与不同浓度鱼藤酮共同作用,观察细胞线粒体膜电位的变化。细胞线粒体膜电位的检测采用罗丹明绿色荧光负载、流式细胞仪测量荧光强度的方法。[结果]5、20和100nmol/L鱼藤酮作用24h分别导致SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降至对照组的91.76%、71.21%和49.65%,膜电位下降程度与鱼藤酮剂量相关;DZX单独作用使线粒体膜电位下降了13.45%,DZX与5和20nmol/L鱼藤酮共同作用分别下降至对照组的75.32%和66.06%,比同浓度鱼藤酮单独作用更加明显;5-HD可抵消DZX的上述作用,5-HD与5nmol/L鱼藤酮共同作用时可减轻鱼藤酮引起的细胞膜电位下降。[结论]鱼藤酮可以引起SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降;小剂量鱼藤酮(5和20nmol/L)能开放mKATP通道,该作用可被5-HD逆转;与DZX相比,小剂量鱼藤酮只能激活某一类型的mKATP通道,这是它导致线粒体膜电位下降的机制之一。大剂量鱼藤酮降低线粒体膜电位的机制中mKATP通道的作用较小。     

miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用

目的 探索miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用。方法 运用RT-PCR方法检测骨肉瘤患者组织中miR-199b-5p和DRAM的表达水平;利用生物信息学预测工具预测miR-199b-5p的靶基因;分析DRAM与miR-199b-5p的表达关系。结果 miR-199b-5p在组织中有表达,和癌旁正常组织相比,肿瘤组织中的miR-199b-5p表达水平显著升高(P < 0.05);miR-199b-5p与患者的性别、发病年龄、病变部位、肿瘤分型和分期无明显关系(P > 0.05)。研究还发现DRAM在各种组织中均有表达,而DRAM mRNA表达在两者中无明显差异,DRAM与miR-199b-5p呈负相关的表达关系。结论 本研究表明miR-199b-5p可以作为骨肉瘤一个诊断标志物,而DRAM可能是miR-199b-5p的调控靶基因。     

PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞氧化应激和8-羟基脱氧鸟苷含量的影响

目的探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞氧化应激及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的影响。方法设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/LPBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/LPCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h。用荧光染料DCFH-DA标记法和高效液相色谱-电化学技术(HPLC-ECD)分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和8-OHdG的含量。结果随着染毒剂量的增加,PBDE-47单独染毒组ROS水平有逐渐增高的趋势,但与对照组及其相应的PCB153联合组相比,ROS水平无明显差异(P>0.05)。中、高联合染毒组ROS水平与对照组相比显著增加(P<0.05),并显著高于相应的单独剂量染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后细胞内ROS水平明显下降(P<0.05),细胞内ROS水平与PBDE-47染毒剂量呈现剂量-效应关系;高剂量PBDE-47单独染毒组和中、高剂量联合染毒组8-OHdG的含量与对照组相比均有明显的增加(P<0.05),高剂量联合染毒组8-OHdG含量明显高于相应的单独染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后其细胞内8-OHdG含量明显下降(P<0.05)。细胞内ROS水平与8-OHdG含量呈正相关关系(r=0.895)。结论一定剂量的PBDE-47可致DNA氧化损伤,PCB153可增加PBDE-47对SH-SY5Y细胞DNA的氧化损伤作用,提示活性氧在PBDE-47致DNA损伤方面发挥了重要作用。