神经干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 研究神经干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤的可行性。方法 取孕龄为12－16天的母鼠，从胎脑中分离神经细胞，进行培养、鉴定。用出生7天的SD大鼠的新生鼠制作缺氧缺血性脑损伤的动物模型，7天后接受神经干细胞移植（移植组，n＝16只），同时设置对照组，只注射磷酸缓冲液（对照组，n=8只），8－10周后，作Y迷宫实验检测大鼠的学习能力和记忆能力。取脑组织作免疫组织化学检查。结果 从大鼠胎脑中成功培养出神经干细胞，培养条件下呈悬浮状态生长，形成神经球，绝大多数的细胞表达神经干细胞的标志物神经巢蛋白（nestin）。接爱神经干细胞移植组大鼠的学习能力、记忆能力和对照组相比，有明显提高，差异具有显著性（P＜0.05）。接受神经干细胞移植大鼠组织中可见存活的移植细胞，并和宿主脑组织融合在一起。结论 在体外培养条件下，可从胎脑组织中培养出神经干细胞，移植到缺氧缺血性脑损伤大鼠脑内后，细胞与宿主的脑组织融合在一起，动物的学习、记忆能力有改善。移植神经干细胞是治疗缺氧缺知性脑损伤的有效方法之一。     

神经干细胞移植治疗小鼠机械性脑损伤的实验研究

目的探讨神经干细胞移植后的体内存活、增殖与分化,及其对小鼠机械性脑损伤的治疗作用。方法运用牙科钻制作小鼠运动区皮质机械性损伤模型。48只清洁级昆明小鼠,雌雄不拘,体质量为18～20g,按体质量编号随机分为4组:神经干细胞移植组(损伤后原位移植经鉴定确认的原代培养的小鼠神经干细胞)、3T3移植组(损伤后原位移植3T3细胞)、单纯损伤组(损伤后不行神经干细胞移植)和空白对照组(仅施行麻醉),每组12只小鼠。于伤后第3天进行行为学检测;第10、30天行损伤区脑组织nestin及NF200免疫荧光染色,观察神经干细胞生长、分化情况。结果损伤后,获得原代培养的神经干细胞在移植早期贴附于损伤区域且向周边组织呈浸润生长;移植后期Hoechst33342及NF200染色显示损伤区附近可见分化形成的神经元。单纯损伤组小鼠出现偏瘫症状;而神经干细胞移植组小鼠植入神经干细胞后则症状减轻,运动功能明显改善,与其他各组相比差异有显著性意义(P<0.001)。结论神经干细胞移植能够改善小鼠机械性脑损伤后的神经功能状态。     

神经干细胞移植修复鼠脊髓损伤的实验研究

目的 :观察神经干细胞移植治疗对鼠脊髓损伤后神经结构修复和功能恢复的作用并探讨其作用机制。方法 :制备鼠T10 脊髓损伤模型 ,体外培养、诱导鼠神经干细胞 ,定量评价神经干细胞移植对脊髓损伤后神经结构修复和功能恢复的影响。结果 :与对照组相比 ,神经干细胞移植组明显的增强了GAP 43mRNA的表达 ,促进了脊髓ChAT阳性的运动神经元的再生、结构的修复和下肢运动功能的恢复。结论 :神经干细胞移植促进了脊髓损伤后神经结构的修复和功能的恢复 ,是急性脊髓损伤一种有效的治疗方案     

神经干细胞移植在脑损伤治疗中的应用

背景：成年鼠脑纹状体中已分离出具有分化成神经元及各种胶质细胞潜能的神经干细胞后，医学工作者试图从中寻找新思路用于脑损伤的治疗。 目的：总结神经干细胞移植对治疗脑损伤中的作用及其前景。 方法：电子检索EMbase(1980-01/2011-04)，MEDLINE(1966-01/2011-04)，中国生物医学文献数据库(CBM，1978/2011-04)和中国期刊全文数据库(CNKI)，筛查相关文章的参考文献。中文检索词“神经干细胞，脑损伤，脑卒中，脑梗死”，英文检索词“neural stem cells, brain injury, stroke, cerebral infarction”，最终纳入符合标准的文献12篇。 结果与结论：动物研究结果显示神经干细胞移植可以改善神经功能并且明显降低脑组织炎症反应，沉默NgR基因、GDNF基因修饰和联合移植BDNF可更大程度上恢复神经功能。临床试验发现神经干细胞移植能在一定程度上改善脑卒中患者的后遗症。提示神经干细胞移植在动物实验中获取明显效果，可进一步应用于临床并研究其疗效。     

骨髓来源和脑来源神经干细胞移植治疗大鼠脑损伤的实验研究

目的将骨髓来源和脑来源神经干细胞(NSCs)移植入大鼠脑损伤模型,比较两种细胞移植治疗脑外伤的效果和临床应用价值。方法分别在体外培养骨髓来源和脑来源的NSCs,待两种细胞多次传代并分别以nestin、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定,BrdU标记后,移植入已经建立好的大鼠脑损伤模型损伤部位,观察记录大鼠行为能力变化。于移植后10d和20d取鼠脑进行免疫组化分析,比较两种细胞在脑内的存活和迁移情况,及脑组织的修复情况。结果两种来源NSCs均可在移植区存活并向周围脑组织迁移,两组大鼠行为能力均有一定程度恢复,且两组之间差别无显著性意义(P＞0．05),而与对照组差别有显著性意义(P＜0．05)。结论骨髓来源NSCs与脑来源NSCs移植后有相似的存活和迁移能力,两种细胞均可帮助大鼠脑损伤后运动及感觉功能恢复。     

神经干细胞工程化的研究进展

神经干细胞具有自我更新能力和多分化潜能，随着神经干细胞分离培养技术日渐成熟和深入，许多研究者对神经干细胞进行人工改造，产生了工程化的神经干细胞，如可示踪的神经干细胞、有治疗基因的神经干细胞、把神经干细胞改造成永生化的神经干细胞。文章对神经干细胞的基本特性及近年来神经干细胞工程化的研究进展做一综述     

经枕大池神经干细胞移植治疗大鼠创伤性脑损伤的研究

目的 将神经干细胞经枕大池移植到创伤性脑损伤模型大鼠蛛网膜下腔中并观察其存活、迁移和分化,从而为神经干细胞的体内存活、迁移和分化机理研究和临床应用提供实验依据.方法 体外培养BrdU标记的胚胎神经干细胞并应用免疫荧光细胞化学染色对BrdU、神经干细胞标记物nestin的表达进行鉴定:采用Feeney自由落体撞击法制做大鼠脑损伤模型,伤后24 h将BrdU标记的胚胎神经十细胞经立体定向注射移植到蛛网膜下腔;制作大鼠脑绢织石蜡切片,应用免疫组织化学染色检测BrdU、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;伤前24h、伤后24 h及1、2周行动物运动神经功能评分.结果 免疫荧光检测显示神经球的表面细胞表达nestin及BrdU:免疫组织化学染色检测到脑内损伤灶存在BrdU阳性神经干细胞、MAP2阳性神经元和GFAP阳性胶质细胞;接受神经十细胞移植的大鼠神经运动功能评分的恢复较对照组有明显提高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 经枕大池移植到脑损伤大鼠蛛网膜下腔中的神经干细胞能存活且具有远距离迁移能力,并明显有助于脑损伤大鼠神经运动功能的恢复.     

神经干细胞移植在创伤性脑损伤再生与修复中的作用和影响因素

创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是一种十分常见的神经外科疾病,世界卫生组织研究表明,到2020年创伤性脑损伤将成为死亡和致残的主要疾病[1,2].每年大约有1 000万人遭受创伤性脑损伤,其中主要集中在15～ 24岁的年轻人和75岁以上的老年人.TBI后神经细胞受损、缺失或死亡,常使神经功能严重受损而导致偏瘫、失语、智力障碍或昏迷,甚至死亡.创伤性脑损伤预后较差与损伤后神经功能的缺失相关,神经功能的缺失与中枢神经系统(central nervous system,CNS)难以再生与修复有关.CNS已被证实并非不可再生,体外实验中枢神经可以再生,体内神经细胞的轴突不能再生的原因可能为环境因素和抑制因素的限制所致.因此影响神经组织再生和修复的因素,是当下研究的焦点[3-9].     

神经干细胞移植治疗暂时性脑缺血的实验研究

目的:探讨神经干细胞移植治疗暂时性脑缺血的价值。方法:从孕14 d SD胎鼠海马组织中分离培养出神经干细胞,将BrdU标记的神经干细胞经立体定向移植到SD大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型(tMCAO)纹状体缺血半暗区。移植后2～12周以神经损害严重程度评分(NSS)评价各组动物神经功能状况。移植后12周,免疫荧光染色观察移植后神经干细胞的分化、迁徙和整合情况。结果:分离和纯化出大鼠胚胎神经干细胞,呈nestin阳性,并具有自我更新及多向分化潜能。移植后的神经干细胞在宿主脑内迁徙,部分分化并表达神经元特异性标记Neurofilament。移植后8周起,神经干细胞移植组大鼠NSS评分明显低于其他2组。结论:神经干细胞移植能改善缺血后大鼠的神经功能状况。     

骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤大鼠的实验研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSCs)移植治疗大鼠脑损伤后神经系统功能障碍的方法、疗效和机制.方法 制作50只脑损伤大鼠动物模型,随机分为2组每组25只.一组采用移植异体MSCs,另一组作为对照,分别于治疗前和治疗后1周、4周对2组大鼠肌力、平衡力和空间学习能力进行检测,观察2组治疗后神经功能恢复情况.结果 脑损伤可以导致大鼠肌力、平衡力和空间学习能力下降,移植组与对照组在治疗后大鼠肌力、平衡力和空间学习能力均有改善,但改善情况移植组明显好于对照组(P《0.05).结论 骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑损伤(traumatic brain injury, TBI)后神经系统功能(肌力、平衡力和空间学习能力)的恢复有显著的改善作用.     

脑皮层创伤灶注射法移植神经干细胞实验研究

目的 观察食蟹猴自体骨髓源神经干细胞移植到大脑皮层创伤灶内的存活、生长情况.方法 取骨髓分离、纯化骨髓基质细胞,培养诱导成神经干细胞,nestin染色表达阳性后再加入细胞标记物BrdU进行共培养7d待移植用.移植前将BrdU标记的神经干细胞收集、离心,制成干细胞悬液,要求活细胞＞80%.食蟹猴在采用Allen's打击法制作皮层创伤灶后,分即时移植(术后即在创伤灶注入,n=3)和延迟移植组(术后30 d在创伤灶注入,n=3),用微量注射针将干细胞悬液注入到猴脑皮质损伤灶.同时设置对照组(n=1),在动物的左侧皮层制作创伤灶并按上述方法注射含同样浓度BrdU的神经干细胞培养液0.5 mL,右侧皮层注入干细胞悬液.移植后1、3、6个月即时移植组、延迟移植组各灌杀1只食蟹猴,移植后6月灌杀对照组食蟹猴,做移植区组织切片染色检查.结果 即时移植组和延迟移植组都可观察到脑皮层创伤灶内有棕褐色的BrdU标记阳性细胞,而对照组组织切片中则未见BrdU阳性表达细胞.移植后BrdU阳性表达细胞早期呈簇状分布,随后散在分布,6个月后细胞形态多样.移植后6个月在移植区邻近的脑白质内也可观察到有BrdU阳性表达的细胞.结论 移植的骨髓源性神经干细胞在脑皮层创伤灶内有存活并可向邻近区域迁移.     

大鼠胚胎神经干细胞移植治疗脑出血的实验研究

目的 研究大鼠胚胎神经干细胞移植治疗脑出血的可行性。方法 从孕龄16天的大鼠胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞并诱导其分化，通过免疫组化学技术研究其特性。制作大鼠脑出血模型，3天后将未分化的神经干细胞注入血肿同侧或对侧的尾状核内，记录损伤和移植后的大鼠运动功能。不同时间杀死大鼠，研究移植后的干细胞在体内分化和迁徙的情况。结果 实验中分离、培养的神经干细胞体外能够被诱导分化成神经元、光突胶质细胞和星形胶质细胞，血肿同侧移植干细胞的大鼠运动功能的改善显著好于血肿对侧移植干细胞组及未移植干细胞的对照组。免疫组化方法证实移植后的干细胞在体内可分化成神经元和胶质细胞，并向损伤区域迁徙。结论 大鼠胚胎神经干细胞体内、体外均具有多向分化潜能，其分化成各种类型神经细胞的比例与所处的外界环境有关，在脑内靠近损伤部位移植胚胎神经干细胞后能够有效改善脑出血动物的运动功能。     

神经干细胞移植治疗大鼠创伤性脑外伤的实验研究

目的 将神经干细胞(NSCs)移植于大鼠创伤性脑损伤部位,观察NSCs对创伤性脑损伤的治疗作用.方法 首先进行NSCs的体外培养,同时采用5-2-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记,脑外伤模型采用自由落体撞击大鼠左侧大脑皮质运动感觉区来制作,脑外伤后24h内移植NSCs,分别于脑外伤前、脑外伤后1、2、3周时行神经运动行为学评分(NMFE)和免疫组织化学染色检测BrdU、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷酯(GalC)蛋白表达和TUNEL原位杂交染色,经计算机图像分析系统处理.结果 大鼠自由落体撞击伤后,右下肢神经运动功能障碍明显.神经运动行为学评分在第1周时,实验组与对照组无明显差异,而在第2、3周时,实验组的评分明显低于对照组,有统计学意义(P＜0.05).第2、3周时实验组NSE、GFAP和GalC染色阳性细胞数要多于对照组,nestin染色在第1周时表达最高,而后逐渐下降.BrdU阳性细胞在损伤灶中心区最多,在损伤灶的远隔部位也有少许发现,而TUNEL染色则对照组明显比NSCs组高,有统计学意义(P＜0.05).结论 脑外伤移植NSCs可以在损伤区存活、增殖及分化,并在损伤的远隔部位有少许NSCs迁移、分化.NSCs移植有利于大鼠脑自由落体撞击伤后期的功能恢复.     

脑损伤的干细胞移植治疗研究进展

外伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是世界性的多发性疾病,也是死亡率和致残率最高的疾病之一.TBI后生存患者常残留有运动、认知及社会交流障碍,导致患者、家属及社会受到破坏性影响~([1]).     

不同种类组织工程化细胞移植修复关节软骨的损伤

背景：单纯药物治疗不能有效促进关节软骨缺损的愈合;自体软骨来源有限,软骨移植手术也相应受到限制。 目的：分析关节软骨损伤类型及局部微环境的改变,总结近年来国内外组织工程种子细胞移植研究相关进展以及细胞移植修复关节软骨损伤治疗进展。 方法：以Tissue engineering,cell transplantation,articular cartilage defects为检索词,检索Pubmed数据库(1993-01/2008-12);以组织工程,细胞移植,关节软骨损伤为检索词,检索CNKI数据库(2000-01/2008-12)。文献检索语种限制为英文和中文。纳入与关节软骨损伤以及分类密切相关性研究,组织工程种子细胞移植技术相关性应用研究。排除重复性研究。以种子细胞的存活和迁移,以及移植后关节功能的恢复和不良反应为评价指标。 结果与结论：计算机初检得到201篇文献,根据纳入排除标准,对组织工程细胞移植修复关节软骨损伤的研究进行分析。临床上,创伤性或骨关节炎造成的关节软骨损伤较为常见,关节软骨自身修复能力差,一旦损伤将很难修复。组织工程细胞移植技术的出现为成功治愈关节软骨损伤带来了新的希望。在动物模型和临床研究中,细胞移植治疗关节软骨损伤已经取得良好的修复效果,但这一技术仍有改进的余地。目前的研究集中在如何从技术上改善组织工程3要素,即细胞,生物支架材料和生物活性因子。自体软骨再生仍然是关节软骨缺损修复的理论支柱,但进一步的研究需要优化其再生效果以及维持更加稳定的软骨细胞表型等等。组织工程细胞移植修复关节软骨损伤疗效较好,随着目前组织工程研究的深入,细胞移植修复技术有望成为临床上治疗关节软骨损伤的新方法。     

组织工程化肌腱移植的进展

背景：肌腱移植是重建损伤肌腱功能的主要手段,目用于肌腱移植的材料有自体肌腱、同异体肌腱、异种异体肌腱、人工肌腱、组织工程化肌腱等,但均有各自的缺点。 目的：就近年肌腱缺损的自体和异体移植治疗进展进行总结,为组织工程修复肌腱损伤的研究提供理论基础。 方法：由第一作者于2010-03应用计算机检索PubMed数据库、万方数据库和维普数据库相关文献。英文资料的检索时间为2000/2010-03;中文资料的检索时间为2002-01/2010-03。英文检索词为“tendon tissue engineering, tendon allograft, transplantation”;中文检索词为“肌腱,损伤修复,移植,自体,异体,组织工程”。 纳入标准：①肌腱损伤修复的发展史。②自体或异体肌腱移植治疗肌腱损伤的研究。③动物实验及临床应用。阅读标题和摘要进行筛选,共纳入30篇用于文章分析。 结果与结论：随着组织工程研究的发展,利用细胞生物学、分子生物学及生物材料学技术构建组织工程复合物已成为是肌腱移植材料的研究热点。但异体肌腱移植后的排斥反应、粘连及转归情况等,尚需动物实验及临床研究做进一步观察和验证。     

神经干细胞移植在脊髓损伤修复中的作用

近年来神经干细胞的发现及其相关研究,为脊髓损伤的治疗提供了一种新的策略.目前多通过应用单纯的神经干细胞移植、携带外源性基因的神经干细胞移植以及联合生物材料的神经干细胞移植等方法来治疗实验性脊髓损伤,取得了可喜的成绩.这些移植方式各有优缺点,为治疗和修复脊髓损伤开拓了思路,带来了希望.     

神经干细胞NgR基因沉默立体定向移植治疗大鼠脑损伤

背景：神经干细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能,一定条件下可以分化成神经系统的各种细胞,因此在神经损伤修复方面有着良好的应用前景。而RNA干扰避免了永久基因沉默的弊病,最有希望与神经干细胞移植相结合治疗颅脑损伤。 目的：检测是否可以通过沉默NgR基因的方法提高神经干细胞立体定向移植对重型颅脑损伤大鼠的治疗效果。 方法：60只雄性Wistar大鼠制成重型液压颅脑损伤模型后随机区组法分为3组,每组20只。实验组：造模24 h后向损伤的大鼠脑组织内注射NgR基因沉默的神经干细胞悬液6 μL;对照组：同法注射等量的神经干细胞悬液;空白组：同法注射等量的不含干细胞的培养液。伤后24 h,3 d,1,2周行动物神经学缺损评分。2周后处死行免疫组织化学和苏木精-伊红染色。 结果与结论：转染小分子干扰RNA后,与对照组相比,实验组NgR基因蛋白表达量明显降低,移植后1周和2周,接受神经干细胞移植的大鼠神经学缺损评分明显低于对照组(P < 0.05);且其脑组织切片中的神经元数量较对照组明显增多(P < 0.01)。伤后2周苏木精-伊红染色空白组可见损伤处脑组织断裂,为瘢痕连接,有明显空洞形成;对照组在移植部位出现典型的神经细胞样形态学改变;实验组出现典型的神经细胞样形态学改变且空洞消失。免疫组织化学染色观察空白组BrdU标记的阳性细胞为(37.92±16.02)个/高倍视野,对照组为(89.68±15.34)个/高倍视野,实验组为(102.67±13.52)个/高倍视野,各组间两两比较,差异均有显著性意义(P < 0.01)。提示神经干细胞NgR基因沉默后立体定向移植治疗大鼠脑损伤可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经学功能。