曲古菌素A对结肠癌Lovo细胞增殖抑制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（TSA）对结肠癌Lovo细胞增殖活性的抑制作用。方法:采用不同浓度的TSA处理结肠癌Lovo细胞。MTT法检测药物作用前后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测TSA处理前后细胞周期的变化。结果:TSA在500ng/mL浓度以上才能明显抑制结肠癌Lovo细胞的增殖，抑制率由第2天至第5天显著增加（57.21%至82.76%）细胞周期检测发现20ng/mL TSA即可导致细胞G1期阻滞，但没有诱导明显的细胞凋亡;≥100ng/mL TSA可诱导明显的细胞凋亡。结论:TSA可以抑制体外结肠癌Lovo细胞的生长，可能通过细胞周期G1期阻滞及诱导细胞凋亡发挥抑癌作用。TSA可能是结肠癌治疗的潜在靶点。     

异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

前列康泰方对慢性前列腺炎前列腺组织TNF-α、IL-1βmRNA表达的影响

目的 观察慢性细菌性和非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β mRNA的表达及前列康泰方对它们的影响.方法 利用大鼠前列腺两侧叶注入预先稀释好的浓度为10(7)～10(9)个/ml大肠杆菌混悬液0.2ml来建立慢性细菌性前列腺炎病理模型;在大鼠前列腺侧叶注入25%消痔灵注射液0.2ml来建立慢性非细菌性前列腺炎病理模型.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法测定大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β mRNA表达的变化,观察前列康泰方对它们的影响.结果 与正常对照组比较,慢性细菌性和非细菌性前列腺炎模型组大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β mRNA的表达均增强;与模型组比较,前列康泰方组大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β mRNA的表达均降低.结论 前列康泰方对慢性前列腺炎前列腺组织中细胞因子及其受体有一定的调控作用,这可能是该方治疗慢性前列腺炎的作用机制之一.     

抗内毒素Fab'对严重烧伤早期炎症细胞因子的影响

目的 观察抗内毒素Fab'对严重烧伤早期肠源性内毒素血症小鼠肠道损伤的保护作用.方法 采用严重烧伤早期肠源性内毒素血症小鼠模型,分为烧伤组、治疗组及对照组,分别于6、12、24、48 h四个时相点测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-lβ、IL-10的浓度.结果 与正常对照组比较,烧伤后血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平增高,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组血清TNF-α、IL-1β、IL-10水平较烧伤组显著降低(P<0.01).病理检查结果提示治疗组较烧伤组肠黏膜损伤明显减轻.结论 抗内毒素Fab'能抑制内毒素所诱导的TNF-α、IL-1β产生,同时调节血清中的IL-10水平,减轻内毒素对机体的损害,从而起到对严重烧伤后肠源性脓毒症的防治作用.     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古菌素A对胰腺癌Panc-1细胞系TFPI-2基因甲基化水平及表达的影响

目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因甲基化水平及基因表达的影响.方法 单独或联合应用5-Aza-dC及TSA处理Panc-1细胞,应用甲基化特异性聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应及蛋白印迹实验检测药物处理前后Panc-1细胞TFPI-2基因启动子区甲基化状态、mRNA及蛋白表达情况.结果 经5-Aza-dC单独处理或5-Aza-dC及TSA联合处理Panc-1细胞后,TFPI-2基因启动子区高甲基化状态得到逆转,表现为非甲基化,原本不表达的TFPI-2基因mRNA及蛋白重新表达,两组作用效果相似.经TSA单独处理的Panc-1细胞TFPI-2基因启动子区仍为异常高甲基化状态,原本不表达的TFPI-2基因未见重新表达.结论 胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因启动子区高甲基化可能是导致该基因失活的主要原因,5-Aza-dC单独作用或与TSA联合作用均能逆转TFPI-2基因的高甲基化状态,使该基因重新表达,TSA对受抑制的TFPI-2基因重新表达作用不明显.     

重楼总皂苷对多发骨折-脂多糖两次打击模型大鼠血清细胞因子水平的影响

目的：探讨重楼总皂苷（RPTS）对多发骨折-脂多糖两次打击模型大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平的影响。方法：68只Wistar大鼠随机分成5组,除空白对照组外,其余各组按多发骨折-脂多糖两次打击模型标准制模。制模成功后1h,除空白对照组和模型对照组外各组予以不同浓度的RPTS灌胃,干预后6h采血,以ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β及IL-6浓度。结果：大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-6浓度,模型对照组与空白对照组相比较明显升高（P〈0.001）,而RPTS各干预组与模型对照组相比较却明显下降（P〈0.001）,差异均有统计学意义。结论：重楼总皂苷可以降低多发骨折-脂多糖两次打击模型大鼠血清中的TNF-α、IL-1β及IL-6水平。     

脂联素对脓毒症大鼠早、晚期炎症介质表达的影响

目的 研究脂联素(adiponectin,APN)对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的脓毒症大鼠早、晚期炎症介质表达的影响.方法 将96只健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为4组(每组24只):对照组(C组)、模型组(LPS组)、APN预处理组(APN+LPS组)及APN后处理组(LPS...     

针刺对膝骨关节炎大鼠软骨白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的：探讨针刺对骨关节炎（OA）软骨中炎性细胞因子的影响作用。方法：选用SD雌性大鼠40只,采用随机数字表,随机分为正常组、模型组、针刺组和对照组,各10只。采用单侧后肢跟腱切除法建立OA动物模型,切除左后肢跟腱,分别采用电针和扶他林乳剂对针刺组和对照组非手术侧（右后肢）进行治疗。采用免疫组化技术,观察各组关节软骨中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的特点,并比较各组间的差异。结果：模型组IL-1β和TNF-α的表达都较正常组上调（P〈0.01）;模型组、针刺组和对照组3组比较,IL-1β和TNF-α的表达差异有统计学意义,针刺组和对照组的表达均较模型组下调（P〈0.01）,两者在针刺组与对照组的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：针刺能下调OA软骨细胞IL-1β、TNF-α的表达,与扶他林乳剂作用相当,说明针刺对OA软骨具有一定的保护作用。     

L-精氨酸对体外循环后细胞因子的影响

目的　探讨 L-精氨酸 (L- arginine)对体外循环 (CPB)缺血 -再灌注损伤后全身炎症反应的抑制作用。方法　术前将 5 1例拟行心瓣膜置换术的风湿性心脏病患者随机分成两组 :L-精氨酸组 (n=2 5 ) ,术中给予 30 0 mg/kgL -精氨酸治疗 ;对照组 (n=2 6 ) ,术中给予等量的 5 %葡萄糖注射液。分别于术前、CPB后 2 h、4 h、8h、2 4 h和 4 8h采取动脉血 ,用酶联免疫吸附法分别测定血浆肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)、白细胞介素 - 1β(IL- 1β)、白细胞介素 - 10 (IL- 10 )的浓度。　结果　两组 TNF-α、IL - 1β和 IL - 10水平于 CPB后均升高 (P<0 .0 5 ) ,TNF-α和 IL - 1β于 CPB后 4 8h恢复至基础值 ;L-精氨酸组 CPB后 4 h、8h、2 4 h TNF- α和 IL- 1β升高幅度明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;IL- 10水平各时点组间比较差别无统计学意义 (P>0 .0 5 )。　结论　L-精氨酸可以降低 CPB后 TNF- α、IL- 1β的血浆水平 ,具有抑制 CPB缺血 -再灌注损伤后全身炎症反应的作用。     

高糖环境对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α表达的影响

目的：观察高糖环境下肾小球系膜细胞IL-18和IL-1β、IL-6、TNF-α表达的变化及关系。方法：实验分组：（1）正常糖组（NG组）（葡萄糖浓度5.5mmol/L）;（2）高糖组（HG组）（葡萄糖浓度25mmol/L）;（3）IL-18正常糖组（IL-18/NG组）：IL-18浓度分别为1ng/dl（IL-18/NG-1组）,10ng/dl（IL-18/NG-2组）,50ng/dl（IL-18/NG-3组）,100ng/dl（IL-18/NG-4组）＋葡萄糖浓度5.5mmol/L;荧光定量PCR检测各组IL-18和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达。结果：与NG组比较,HG组IL-18和IL-1β、IL-6、TNF-α表达增加,NG组IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平随IL-18浓度增高而增加。结论：高糖可导致炎症因子IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α表达升高;IL-1β、IL-6、TNF-α表达升高可能依赖于IL-18,且有剂量依赖性。     

Preemptive intrathecal ketamine injection produces a long-lasting decrease in neuropathic pain behaviors in a rat model.

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Ketamine is an N-Methyl-D-Aspartate (NMDA) receptor antagonist, which has been found to effectively treat somatic and neuropathic pain. This study examines the effect (on neuropathic pain) of preemptive ketamine using different routes of administration (intrathecal versus intraperitoneal). METHODS: The Institutional Animal Care and Use Committee approved the study. Thirty male Sprague-Dawley rats (250-275 g) were divided into three treatment groups [intrathecal saline/intraperitoneal saline or Control (CTL), intrathecal ketamine/intraperitoneal saline (ITK), and intrathecal saline/intraperitoneal ketamine (IPK)] prior to undergoing surgery to induce neuropathic pain by tight ligation of the left L5 and L6 spinal nerves. All drugs were given 15 minutes before nerve ligation. The ITK group received intrathecal ketamine (0.5% solution, 1 mg/kg), the IPK group received intraperitoneal ketamine (0.5% solution, 1 mg/kg), saline was given in equal volume (approximately 0.05 mL). Mechanical allodynia, cold allodynia, and ongoing pain behaviors indicative of neuropathic pain were assessed on postoperative days 1, 3, 7, and 14 using validated methods. RESULTS: Compared with the CTL group, the ITK group showed a state of decreased mechanical allodynia, cold allodynia, and ongoing pain as revealed by the von Frey hair, acetone, and cold plate testing, respectively. Further, this decrease was sustained for at least 2 weeks. The IPK group showed intermediate results between the CTL and ITK. CONCLUSIONS: Neuropathic pain behaviors were significantly reduced for at least 2 weeks after intrathecal ketamine was preemptively administered to animals undergoing surgery to induce neuropathic pain. The mechanism of action is thought to be prevention of spinal cord sensitization.     

神经病理性疼痛大鼠鞘内注射SB203580的镇痛作用

目的 观察神经病理性疼痛大鼠鞘内注射p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580的镇痛作用,探讨p38MAPK信号转导通路在慢性神经病理性疼痛中的作用。方法雄性SD大鼠,体重220～250g,建立坐骨神经结扎性损伤（CCI）疼痛模型,第一部分40只CCI大鼠,随机分为5组,对照组、SB0．1μg组、SB0．5μg组、SB2．5μg组和SB5μg组,（n=8）,CCI后7d,鞘内注射2％二甲基亚砜或不同剂量的SB203580（0．1、0．5、2．5、5μg）10μl,在给药前和给药后0．5、3、6、12、24h用von Frey丝测定大鼠术侧后爪机械缩足反射阈值（MWT）;另外36只大鼠,随机分为6组（n=6）：Sham组、CCI组、DMSO组、SB0．1、0．5、5μg组,CCI后7d鞘内注射相应剂量SB203580 10μl,给药后6h取L4.5脊髓,用免疫组织化学方法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（pCREB）的表达。结果CCI后大鼠产生了机械痛敏。鞘内注射SB203580剂量依赖性地提高了MWT。CCI后脊髓背角pCREB阳性神经元增加,鞘内注射SB0．5、5μg抑制了CCI引起的脊髓背角pCREB表达增加（P〈0．01）。结论鞘内注射SB203580能减轻CCI引起的痛敏,抑制脊髓背角CREB的磷酸化,p38MAPK信号通路参与慢性神经病理性疼痛。     

鞘内注射P300 siRNA对神经病理性痛大鼠的镇痛效果

目的 评价鞘内注射p300小干扰RNA(p300siRNA)对神经病理性痛大鼠的镇痛效果.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠96只,采用坐骨神经慢性压迫性损伤法(CCI)建立神经病理性痛模型,随机分为4组(n=24):假手术+生理盐水组(S组)、CCI+生理盐水组(CCI组)、CCI+转染试剂组(V组)和CCI+p300siRNA组(P组).于术后3～6 d时鞘内注射生理盐水、转染试剂或p300siRNA(siRNA 4μg溶于转染试剂)各20μl,2次/d,10μl/次,连续4 d.于术前1 d(基础状态)、术后1、3、5、7、9、11、14 d时测定机械痛阈和热痛阈;于术后3、7、14 d时取腰段脊髓,测定p300蛋白及其mRNA、乙酰化组蛋白H3(Ac-H3)的表达.结果 与基础值比较,CCI组、V组和P组术后各时点机械痛阈和热痛阈降低(P＜0.05).与S组比较,其余各组机械痛阈和热痛阈降低,p300蛋白及其mRNA和Ac-H3蛋白表达上调(P＜0.05).与CCI组比较,P组机械痛阈和热痛阈升高,p300蛋白及其mRNA和Ac-H3蛋白表达下调(P＜0.05).结论 鞘内注射p300 siRNA可减轻大鼠神经病理性痛,其机制与抑制脊髓p300和Ac-H3蛋白的表达有关.     

鞘内注射KN93对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响

目的 观察鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN93对腰背根神经节慢性压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)大鼠神经病理性疼痛的影响. 方法 SD雄性大鼠48只,按随机数字表法分为3组:假手术组(S组,11只)、CCD模型组(C组,11只)、KN93组(K组,26只).C组、K组制备CCD模型,S组仅暴露L5-6椎间隙.术后14dS组和C组鞘内注射10％溶媒二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)25μl,K组鞘内注射溶于10％DMSO的KN93 50 μg/25μl.各组在造模前1 d(t1),造模后4(t2)、7(t3)、10(t4)、14 d(t5)随机取8只大鼠检测热缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)和机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT);并于鞘内注射DMSO或KN93后2(t6)、4(t7)、10(t8)、12(t9)、24 h(t10)时进行相同的行为学检测.各组于给药前以及K组的给药后各时间点(t6～t9)随机取3只大鼠处死并取脊髓腰膨大部分,采用Western blot方法检测CaMKⅡ蛋白表达水平.结果 鞘内给药后t6～t9时点,K组PWTL [(14.7±1.6)、(18.6±1.8)、(21.2±2.5)、(15.3±2.0)s],PWMT [(12.0±1.0)、(15.4±1.4)、(17.5±1.7)、(14.9±1.6)g]比C组PWTL[(11.6±1.8)、(10.7±1.7)、(11.7±2.4)、(9.9±1.7)s],PWMT[(8.4±0.9)、(9.6±1.6)、(10.6±1.7)、(8.9±1.3)g]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).给药前及给药后t10时,K组PWTL、PWMT与C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).和t5时CaMKⅡ值(1.55±0.12)比较,给药后t6～t9时间点CaMKⅡ蛋白[(1.37±0.11),(1.15±0.12)、(0.75±0.08)、(0.86±0.12)]表达下降(P＜0.05). 结论 鞘内注射KN93可有效缓解神经病理性疼痛大鼠的疼痛反应.     

Antihyperalgesic and side effects of intrathecal clonidine and tizanidine in a rat model of neuropathic pain

BACKGROUND: Although intrathecal clonidine produces pronounced analgesia, antinociceptive doses of intrathecal clonidine produce several side effects, including hypotension, bradycardia, and sedation. Intrathecal tizanidine, another alpha(2)-adrenergic agonist, has provided antinociception without producing pronounced hemodynamic changes in animal studies. However, it has been unclear whether antihyperalgesic doses of intrathecal clonidine and tizanidine produce hypotension and bradycardia in a neuropathic pain state. This study was designed to evaluate the antihyperalgesic effects and side effects of intrathecal clonidine and tizanidine in a rat model of neuropathic pain. METHODS: Male Sprague-Dawley rats were chronically implanted with lumbar intrathecal catheters, and the sciatic nerve was loosely ligated. After 21-28 days after surgery, the rats received intrathecal clonidine (0.3, 1.0, and 3.0 microg) and tizanidine (1.0, 2.0, and 5.0 microg), and the antihyperalgesic effects of thermal and mechanical stimuli were examined. In addition, the changes in blood pressure and heart rate, sedation level, and other side effects after intrathecal administration of drugs were recorded. RESULTS: The administration of 3.0 microg intrathecal clonidine or 5.0 microg tizanidine significantly reversed both thermal and mechanical hyperalgesia. The administration of 3.0 microg intrathecal clonidine, but not 5.0 microg tizanidine, significantly decreased mean blood pressure and heart rate and produced urinary voiding. A greater sedative effect was produced by 3.0 microg intrathecal clonidine than by 5.0 microg tizanidine. CONCLUSION: The antihyperalgesic dose of intrathecal clonidine and the antinociceptive doses produced several side effects. Intrathecal tizanidine at the dose that reversed hyperalgesia would be preferable for neuropathic pain management because of absence of hypotension and bradycardia and lower incidence of sedation.     

Perineural resiniferatoxin prevents hyperalgesia in a rat model of postoperative pain

Resiniferatoxin (RTX) is a vanilloid agonist with a unique spectrum of activities. Vanilloids bind to the transient receptor potential ion channel subtype 1, a nonselective cation ionophore important in the integration of different noxious signals. Vanilloid agonists selectively decrease sensitivity to noxious stimuli. In this study, we sought to determine whether perineural RTX prevents hyperalgesia in a model of incisional pain. In a rat model, RTX was administered percutaneously to the sciatic and saphenous nerves before the plantar incision. The withdrawal response to von Frey filaments, the struggle response to pressure on the paw, and pain scoring based on weight bearing were measured before RTX and at various intervals for 8 days after RTX. A percutaneous injection of RTX (0.0003%) to the sciatic (0.1 mL) and saphenous (0.05 mL) nerves completely prevented incisional hyperalgesia. Two hours after incision, the withdrawal threshold was 51 mN without and 456 mN with RTX (P < 0.0001). RTX also prevented the incision-induced decrease in struggle threshold and abolished the pain behavior associated with weight bearing. We conclude that RTX provides a type of neural blockade when postoperative pain is abolished and that nonpainful sensations and motor functions are preserved.     

鞘内注射人β-内啡肽基因重组腺病毒对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用

目的观察鞘内注射入β-内啡肽(β-EP)基因重组腺病毒(Ad-NEP)对慢性神经病理痛大鼠的镇痛作用。方法36只雄性SD大鼠,体重210-260 g,随机分为手术组(n=26)、假手术组(n= 5)、空白对照组(n=5),手术组分为三个亚组:Ad-NEP组(n=9)、绿色荧光蛋白基因重组腺病毒(Ad- GFP)组(n=9)、生理盐水组(n=8)。大鼠腹腔注射氯胺酮100 mg/kg和阿托品50 mg/kg麻醉后,手术组构建大鼠坐骨神经慢性捆扎(CCI)模型,假手术组进行同样手术,但不捆扎坐骨神经,空白对照组不进行手术;手术组经L5,6间隙蛛网膜下腔置入PE-10导管,7d后分别注射1×108pfu的Ad-NEP、Ad- GFP和40μl生理盐水。于手术后7 d(T0)、鞘内注射前当日(T1)、注射后1 d(T2)、1周(T3)、2周(T4)、3 周(T5)、4周(T6)、5周(T7)分别测定五组大鼠的左右足热痛阈;T3时取Ad-NEP、Ad-GFP组大鼠各1 只,取脊髓L3-6段作免疫组化检测;鞘内注射后10 d取Ad-NEP、Ad-GFP组大鼠,经腹腔内注射1 mg/kg 纳络酮,每间隔10min记录右足热痛阈(t0-9,共观察90min),并分别测定这两组T1-7时的脑脊液内β- EP浓度。结果Ad-GFP组和生理盐水组大鼠右足热痛阈明显低于假手术组和空白对照组(P< 0.01)。Ad-NEP组在T0,1,7时右足热痛阈明显低于假手术组和空白对照组(P<0.01),在T2-6时的右足热痛阈高于T0,也高于Ad-GFP组和生理盐水组(P<0.05或0.01),t1-6时右足热痛阈低于t0时(P< 0.01),与Ad-GFP组和生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ad-NEP组脊髓外膜可见明显的橙黄色浓染带,后角区可见少量橙黄色细胞,T2-7时脑脊液内β-EP浓度均高于Ad-GFP组(P< 0.01。)结论鞘内注射重组腺病毒Ad-NEP对慢性神经病理痛大鼠有明显的镇痛效果,作用时间长达4周以上。     

鞘内预注射L-NAME对神经性疼痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽表达的影响

目的 观察鞘内预注射NG-硝基-L-精氨酸-甲基酯(L-NAME)对结扎坐骨神经所致神经性疼痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法 选择鞘内置管后无神经损伤症状的SD雌性大鼠96只,随机分为4组,每组24只。A组:假手术组;B组:坐骨神经结扎组;C组:假手术前15 min鞘内注射L-NAME 10 μl(250 μg);D组:坐骨神经结扎前15 min鞘内注射L-NAME 10 μl(250 μg)。各组分别在术后第1、4、7和14天随机处死6只大鼠。采用免疫组织化学方法观察各组大鼠结扎侧脊髓背角CGRP的表达。结果 与A组比较,B组、D组大鼠结扎侧脊髓背角CGRP表达在术后第4、7和14天明显升高(P<0.05),C组差异无显著性。与C组比较,D组大鼠结扎侧脊髓背角CGRP表达在术后第4、7和14天明显升高(P<0.05)。而D组大鼠结扎侧脊髓背角内的CGRP表达与B组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论 鞘内预注射L-NAME不能抑制周围神经损伤所诱导的脊髓背角CGRP表达,提示一氧化氮介导神经性疼痛的作用不是通过促进CGRP释放实现的。     

鞘内注射反义蛋白激酶Cγ寡核苷酸对慢性神经痛大鼠的镇痛作用

目的 探讨鞘内注射反义、正义PKCγ寡核苷酸(PKCγ-ASODN、PKCγ-SODN)对慢性神经痛大鼠的镇痛作用及其机制。方法 24只雌性SD大鼠建立慢性坐骨神经痛(CCI)模型,鞘内置管后随机分为4组:CCI 无菌生理盐水鞘内注射组(C组);CCI PKCγ-SODN 20μg鞘内注射组(S组);CCI PKCγ-ASODN 5μg鞘内注射组(A1组);CCI PKCγ-ASODN 20μg鞘内注射组(A2组),每组6只。除C组外,其余三组均于鞘内注入相应剂量的PKC7γ-SODN或-ASODN,每日1次,连续6 d,采用VonFrev hairs检测术侧机械缩爪阈值变化,Western blot法检测脊髓PKCγ、PKCα蛋白质表达。结果 与结扎术前比较,机械缩爪阈值S组注药后2、4、6 d降低,A1组注药后2 d天降低(P<0.01),A2组注药后4 d升高(P<0.05或0.01);与C组比较,A1组注药后4、6d及A2组注药后2、4、6 d升高(P<0.01);与A1组比较,A2组注药后2、4 d升高(P<0.01)。与C组比较,A1、A2组PKCγ蛋白质表达丰度降低(P<0.01),而S组PKCγ蛋白质及S、A1、A2组PKCα蛋白质表达丰度差异无统计学意义(P>0.05)。结论　鞘内注射PKCγ-ASODN可抑制慢性神经痛大鼠的痛觉过敏,该作用与PKCγ蛋白质活性降低,表达量下调有关。