肺组织γ-氨基丁酸A型受体在大鼠内毒素诱发急性肺损伤中的作用

目的 探讨肺组织γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)在大鼠内毒素诱发急性肺损伤中的作用.方法 成年健康雄性Wistar大鼠32只,8周龄,体重200 ～ 230 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=8)∶正常对照组(C组)、内毒素组(LPS组)、γ-氨基丁酸预先给药+内毒素组(GABA组)和GABAAR拮抗剂荷包牡丹碱预先给药+内毒素组(BIC组).LPS组、GABA组和BIC组尾静脉注射LPS 5 mg/kg,C组给予等容量生理盐水;GABA组和BIC组分别于给予LPS前30 min时腹腔注射γ-氨基丁酸50 mg/kg和荷包牡丹碱10 μmol/kg.于给予LPS后6h时,采集动脉血样,测定PaO2,然后取肺组织,测定肺湿/干重比(W/D)、GABAAR表达、IL-6、TNF-α、MDA的含量和SOD活性,光镜下观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,LPS组、GABA组和BIC组PaO2降低,LPS组和GABA组肺组织W/D、TNF-α、IL-6和MDA的含量升高,肺组织GABAAR表达上调,肺组织SOD活性降低(P＜0.05);与LPS组比较,GABA组肺组织W/D、TNF-α、IL-6和MDA的含量升高,肺组织GABAAR表达上调,肺组织SOD活性降低(P＜0.05),而BIC组上述指标差异无统计学意义,GABA组和BIC组PaO2差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肺组织GABAAR参与了大鼠内毒素诱发急性肺损伤的发展.     

P2X7受体在大鼠海马脑片和神经元突触体氧糖缺失时谷氨酸和γ-氨基丁酸释放中的作用

目的 评价P2X7受体在大鼠海马脑片和神经元突触体氧糖缺失(OGD)时谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)释放中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,体重150～200 g,制备海马脑片和神经元突触体,放入95%O2-5%CO2预充饱和人工脑脊液(aCSF)中35 ℃下孵育30 min后,取大鼠海马脑片96张,随机分为3组(n=32);取大鼠海马神经元突触体72份,随机分为3组(n=24).对照组(C组)于95%O2-5%CO2预充饱和的aCSF中孵育60 min;OGD组于95%N2-5%CO2预充饱和的乏糖aCSF中35 ℃下孵育60 min;亮蓝G组(BBG组)于预先加入P2X7受体拮抗剂亮蓝G 1 μmol/L、95%O2-5%CO2预充饱和的aCSF中孵育20 min,随后移至2 ml含亮蓝G l μmol/L、95%N2-5%CO2预充饱和的乏糖aCSF中孵育60 min.于OGD即刻、20、40、60 min(T1-4)时,分别随机取海马脑片和神经元突触体各6份,测定Glu和GABA的释放量.各时点分别取海马脑片2张,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,OGD组和BBG组T2-4时海马脑片Glu和GABA释放量增加(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组T3-4时海马脑片Glu释放量减少,T4时GABA释放量减少(P＜0.05),病理学损伤减轻.与C组比较,OGD组和BBG组T2-4时海马神经元突触体Glu和GABA的释放量增加(P＜0.05);与OGD组比较,BBG组T2-4时海马神经元突触体GABA释放量差异无统计学意义(P＞0.05),Glu释放量增加(P＜0.05).结论 P2X7受体介导了大鼠海马OGD时Glu和GABA的释放,其中胶质细胞上的P2X7起主导作用.     

依达拉奉对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的保护作用

目的 探讨依达拉奉(EDA)对氧化应激诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响及可能机制.方法 用过氧化氢氧化应激建立氧化应激肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡模型细胞.将细胞分为:过氧化氢处理组(H组)、依达拉奉-过氧化氢处理组(E组)和对照组(C组).采用脂质过氧化物(MDA)、谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测A549细胞MDA、GSH的含量,同时测定三组细胞生长的抑制率、凋亡率、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3与caspase-9 mRNA及蛋白表达.结果 与C组比较,H组细胞MDA、细胞生长抑制率、凋亡指数、caspase-3与caspase-9 mRNA相对表达及蛋白表达量明显升高;而GSH明显降低(P＜0.01).与H组比较,E组细胞MDA、细胞生长抑制率、凋亡指数、caspase-3与caspase-9 mRNA相对表达及蛋白表达量明显降低;而GSH明显增高(P＜0.05).结论 依达拉奉可通过抗氧化及抗caspase-3,caspase-9引起的凋亡以保护肺泡Ⅱ型上皮细胞对抗氧化应激.     

不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1表达的影响

目的 评价不同机械牵张应力对大鼠肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达的影响.方法 雄性SD大鼠,周龄8～12周,体重270～320 g,放血处死后,收集支气管肺泡灌洗液,分离、培养和传代肺泡巨噬细胞.将细胞接种于6孔培养板中,细胞浓度105/ml,培养48 h后,随机分为5组(n=6),对照组(C组)不施加机械牵张应力;S1-4组分别施加5%、10%、15%和20%机械牵张应力,牵张频率30次/min,牵张时间24 h.采用RT-PCR法测定HMGB1 mRNA表达;采用Western blot方法 测定HMGB1表达.结果 肺泡巨噬细胞给予机械牵张应力后,HMGB1及其mRNA表达随机械牵张应力的增大而上调(P<0.05或0.01).结论 大鼠肺泡巨噬细胞HMGB1的表达与机械牵张应力呈强度依赖性.     

异丙酚和咪达唑仑可影响GABA_A受体所以可能对前脑缺血造成的神经元损害起保护作用

静脉全麻药物因能抑制大脑代谢、减少氧耗、减慢血流速度,降低颅内压、又能提高脑血管阻力等所以有脑保护作用。但脑缺血引起神经元逐步死亡不仅与能量代谢失常而且与功能丧失有关。当神经元细胞受损后常使中枢神经元抑制活动增强,例如γ-氨基丁酸能(GABA ergic)神经元,因为GABA_A/BZP(苯二氮(艹卓)类)受体复合体兴奋时,可引起氯离子进入神经元细胞,结果造成突触膜的超极化,从而抑制由于脑缺血引起兴奋性氨基酸的释放。近年的研究提示在中枢神经系统中GABA受体的不同亚型,其作用也不同。为此,作者通过研究异丙酚、咪达唑仑、戊巴比妥3种药物对GABA神经元系统的药理作用对前脑缺血引起损伤的脑保护作用。     

B型γ-氨基丁酸受体及其应答机制

B型γ氨基丁酸受体(GABAB 受体)是γ氨基丁酸受体(GABA受体)的一种亚型,通过G蛋白耦联调节抑制性神经递质γ氨基丁酸(GABA)的代谢。它广泛存在于中枢神经系统和外周组织,在多种生理过程中发挥着重要作用。     

机械牵张对A549细胞穿透素-3表达的影响

目的 探讨械牵张对肺泡上皮腺癌细胞A549(A549细胞)穿透素-3(PTX-3)表达的影响.方法 体外培养人A549细胞,将A549细胞接种于包被胶原基底膜的培养板上,待细胞贴壁并融合50%后,随机分为正常对照组(Ⅰ组)、假机械牵张组(Ⅱ组)、机械牵张组(Ⅲ组)、siRNA对照组(Ⅳ组)和siRNA+机械牵张组(V组).Ⅳ组仅转染PTX-3 siRNA;Ⅴ组转染PTX-3 siRNA后24 h,进行周期性机械牵张4 h.机械牵张结束后24 h时测定PTX-3 mRNA、PTX-3蛋白水平及细胞凋亡情况.结果 与Ⅰ组和Ⅱ组比较,Ⅲ组PTX-3 mRNA和PIX-3蛋白水平上调,Ⅳ组和Ⅴ组上述两指标下调(P＜0.05或0.01);与Ⅲ组比较,Ⅴ组上述两指标下调(P＜0.01).Ⅲ组和Ⅴ组细胞凋亡率高于Ⅱ组(P＜0.01);Ⅴ组细胞凋亡率低于Ⅲ组(P＜0.01).结论 机械牵张可上调A549细胞PTX-3 mRNA表达.     

机械通气诱导肺损伤大鼠肺组织白细胞介素-8及表面活性蛋白B表达的变化

目的研究新生大鼠呼吸机相关性肺损伤模型肺组织白细胞介素(IL)-8及表面活性蛋白B(SPB)蛋白表达的变化,探讨新生大鼠呼吸机相关性肺损伤的发病机制。方法新生SD大鼠30只,体重12~18g,采用随机数字表法均分为三组:对照组(A组)、正常潮气量机械通气组(B组)和大潮气量机械通气组(C组)。A组气管插管后保持自主呼吸;B组和C组气管插管后行机械通气,B组潮气量7ml/kg,C组潮气量25ml/kg行机械通气4h。机械通气结束,采用光学显微镜下观察肺组织病理学改变,测定肺组织湿干重比(W/D);采用ELISA检测三组肺泡灌洗液IL-8、IL-10及SPB的浓度的变化;Western blot检测肺组织匀浆IL-8、IL-10和SPB的蛋白表达。结果光镜下见A、B组肺组织病理改变不明显,C组肺组织病理学改变累计面积达50%,肺泡结构紊乱,肺间隔增宽,肺间质水肿,肺泡腔融合并有大量炎性细胞聚集。C组W/D明显高于A、B组(P0.05)。C组IL-8表达明显高于,SPB浓度明显低于A、B组(P0.01),三组肺泡灌洗液中IL-10的表达水平差异无统计学意义。C组IL-8的蛋白表达明显高于,SPB的蛋白表达明显低于A、B组(P0.01)。结论 IL-8介导的肺部过度炎症反应及SPB下调是新生大鼠肺损伤的重要机制。     

大麻素受体2在谷氨酸诱发小胶质细胞损伤中的作用

目的 评价大麻素受体2(CB2受体)在谷氨酸诱发小胶质细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将小胶质细胞随机分为4组:对照组(C组)细胞常规培养26h;小胶质细胞损伤组(Ⅰ组)细胞于含10 mmol/L谷氨酸的培养基中孵育24h;CB2受体特异性激动剂AM1241组细胞于含2 μmol/L AM1241的培养基中孵育2h,然后于含10 mmol/L谷氨酸的培养基中孵育24 h;CB2受体特异性拮抗剂AM630组细胞含2 μmol/L AM630的培养基中孵育2h,然后于含10 mmol/L谷氨酸的培养基孵育24h.测定细胞活力和LDH释放量,观察细胞形态学.结果 与C组比较,Ⅰ组、AM1241组和AM630组细胞活力降低,LDH释放量增加(P＜0.05);与Ⅰ组比较,AM1241组细胞活力升高,LDH释放量减少(P＜0.05),AM630组细胞活力和LDH释放量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 谷氨酸通过抑制CB2受体的功能诱发小胶质细胞损伤.     

乌司他丁对大鼠机械通气肺损伤时γ-氨基丁酸信号通路的影响

目的探讨乌司他丁对大鼠机械通气引起的呼吸机相关性肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)时γ-氨基丁酸(GABA)信号通路的影响。方法选取健康成年雄性Wister大鼠36只,采用随机数字表法分为三组:正常对照组(C组)、机械通气肺损伤组(VILI组)和机械通气肺损伤+乌司他丁处理组(UTI组),每组12只。VILI组与UTI组采用VT40ml/kg机械通气4h的方法制备大鼠VILI模型。机械通气前1h,UTI组腹腔注射乌司他丁1×10~5 U/kg,C组和VILI组给予等容量生理盐水。收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),检测BALF中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的浓度;取肺组织,检测湿/干重比(W/D)、肺组织IL-1β、TNF-α和ICAM-1 mRNA的表达;采用免疫组化与Western blot法检测肺组织GAD与GABAA受体的表达量,观察病理学结果并进行肺损伤评分。结果与VILI组比较,UTI组W/D(6.7±2.4vs.8.5±2.3)、肺损伤评分[(6.9±2.3)分vs.(11.8±2.7)分]明显降低(P0.05);BALF中IL-1β[(56±11)ng/L vs.(77±15)ng/L]、TNF-α[(105±29)ng/L vs.(158±37)ng/L]及ICAM-1[(205±46)ng/L vs.(293±61)ng/L]浓度明显降低(P0.05);肺组织IL-1β(1.81±0.26vs.2.58±0.34)、TNF-α(1.61±0.15vs.2.94±0.27)、ICAM-1(1.74±0.27vs.2.79±0.31)mRNA表达量明显降低(P0.05);GAD(0.44±0.08vs.0.18±0.04)和GABAA(0.30±0.09vs.0.15±0.04)受体表达量明显增加(P0.05)。结论乌司他丁可减轻大鼠机械通气引起的呼吸机相关性肺损伤,其机制可能与激活γ-氨基丁酸信号通路有关。     

异丙酚预先给药对抑郁大鼠电休克后海马Glu和GABA水平的影响

目的 探讨异丙酚预先给药对抑郁大鼠电休克后海马Glu和GABA水平的影响.方法 雄性SD大鼠30只,2～3月龄,体重200～250 g,随机分为5组(n=6):正常对照组(C组)、抑郁组(D组)、异丙酚组(P组)、电休克组(E组)、异丙酚+电休克组(PE组).采用孤养加慢性不可预见性应激法建立抑郁模型,建模后C组和D组腹腔注射生理盐水3 ml,P组腹腔注射异丙酚100 mg/kg,3组均不行电刺激;E组和PE组分别腹腔注射生理盐水3 ml或异丙酚100 mg/kg后行电休克治疗(频率50 Hz、电流50 mA、持续时间20 ms).各组处理隔日1次.共6次.于建模前1天(基础状态),建模后第1天(T1)及处理后第2天(T2)采用Open-field法行行为学评分.于T1.2时采用Morris水迷宫检测学习记忆功能,测定后处死,采用高效液相色谱法分析海马谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)含量,计算Gln/GABA比值.结果 与C组比较,其余4组行为学评分降低,学习记忆功能降低,D组和P组Glu含量升高,GABA含量降低,Glu/GABA比值升高,E组Glu含量降低,GABA含量升高,Glu/GABA比值降低(P<0.05);与D组和P组比较,E组行为学评分升高,学习记忆功能降低,Glu含量降低,GABA含量升高,Glu/GABA比值降低(P<0.05),PE组行为学评分升高,Glu含量降低,GABA含量升高,Glu/GABA比值降低(P<0.05),学习记忆功能差异无统计学意义(P>0.05);与E组比较,PE组学习记忆功能增强,Glu含量升高,GABA含量降低,Glu/GABA比值升高(P<0.05).结论 异丙酚预先给药改善电休克治疗后学习记忆功能的机制可能与异丙酚调节Glu和GABA功能状态的平衡有关.     

异丙酚预先给药对缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚预先给经对缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响.方法 体外分离、培养SD胎鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞,接种于96孔培养板,细胞浓度为1×106/L,每孔180μl,随机分为3组(n=72),正常对照组(C组)常氧培养,缺氧组(H组)和异丙酚-缺氧组(P-H组)缺氧(5%O2)培养,P-H组于缺氧前1 h加入异丙酚(终浓度为5μmol/L).分别于缺氧3、12、24或48 h时测定细胞凋亡率、缺氧诱导因子-1α(HIF-lα)mRNA、Bnip3L mRNA、HIF-lα蛋白和Bnip3L蛋白的表达水平.结果 与C组比较,H组细胞凋亡率升高,HIF-lα mRNA、Bnip3L mRNA及其蛋白表达水平上调(P＜0.05).异丙酚预先给药可抑制缺氧诱导的上述改变(P＜0.05).结论 异丙酚预先给药可抑制缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,其机制与抑制HIF-1的激活,从而下调Bnip3L蛋白表达有关.     

异氟醚对肺泡Ⅱ型上皮细胞Na~ -K~ -ATP酶活性的影响

目的　通过原代培养的正常及受 (H2 O2 )损伤的肺泡Ⅱ型上皮细胞 ,探讨异氟醚 (Iso)对肺泡Ⅱ型上皮细胞Na K ATP酶活性的影响。方法　肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、培养 2 4h后 ,分为六组 :对照组 (不加任何药物 ) ,0 2 8mmol/LIso组 ,2 8mmol/LIso组 ,75 μmol/LH2 O2 组 ,75 μmol/LH2 O2 0 2 8mmol/LIso组和 75 μmol/LH2 O2 2 8mmol/LIso组 ,继续培养 3h。分别测定肺泡Ⅱ型上皮细胞Na K ATP酶活性以及培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)活性和丙二醛 (MDA)含量。结果　Iso降低正常肺泡Ⅱ型上皮细胞Na K ATP酶活性并加重H2 O2 引起的肺泡Ⅱ型上皮细胞Na K ATP酶活性的降低 ;Iso对正常培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞培养液中LDH活性和MDA含量无明显影响 ,但 2 8mmol/LIso可使受H2 O2 损伤的肺泡Ⅱ型上皮细胞培养液中LDH活性和MDA含量增加。结论　Iso可以降低肺泡Ⅱ型上皮细胞Na K ATP酶活性 ,尤其是在过氧化环境中可加重肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤     

等轴牵张应变对骨间充质干细胞成软骨分化早期的影响

目的 :观察平面诱导培养条件下,等轴周期性牵张应变刺激对小鼠BMSCs成软骨分化早期的影响,探讨等轴周期性牵张应变刺激在软骨分化过程中早期的作用机制。方法:选取4周龄KM小鼠16只,雌雄不限,平均体重19.5 g(17~21 g),提取骨髓间充质干细胞,体外培养至第3代,种植于Bio Flex细胞培养板,根据实验设计分6组:空白组,普通培养液培养8 d,不给予等轴周期性牵张应变刺激;对照组,成软骨诱导分化培养液培养8 d,不给予等轴周期性牵张应变刺激;实验组,实验组又分4组,均使用成软骨诱导分化培养液培养8 d,期间分别给与1、3、5、7 d等轴周期性牵张应变刺激。于培养第8天收集各组细胞,采用RT-PCR分析SOX9、Col-Ⅱ及ROCK1 m RNA的相对表达量,采用CCK-8法对各组细胞行增殖率检测,使用糖胺聚糖Elisa试剂盒检测上清液糖胺聚糖含量,行番红O及阿利新蓝染色观察细胞外基质(ECM)变化,正态计量资料采用均数±标准偏差表示,对照组与空白组比较采用配对样本t检验,实验组与对照组比较采用单因素方差分析。结果:(1)培养8 d后,对比对照组,实验组中随加载时间延长,SOX9、Col-Ⅱm RNA相对表达量呈逐渐增高趋势(P0.05),而ROCK1 m RNA相对表达量呈下降趋势(P0.05);对比空白组,实验组及对照组的ROCK1 m RNA相对表达量均增加(P0.05)。(2)随加载时间延长,实验组出现先降后升趋势,但是对比空白组及对照组均增高,对照组较空白组明显下降。(3)通过对最后1次换掉的培养基做糖胺聚糖浓度的Elisa检测,实验组内糖胺多糖的分泌量逐渐增加,加载7 d组含量变化较其他组差异有统计学意义(P0.05);与空白组比较,实验组及对照组糖胺多糖的分泌量明显增加(P0.05)。(4)番红O及阿尔新兰染色显示,实验组有成软骨分化趋势,形状随时间加载均逐渐变长,均较对照组明显;实验组内PCM、Col-Ⅱ、GAG含量随力学刺激天数增加逐渐增多均较对照组明显。结论:平面诱导培养条件下,在BMSCs成软骨分化早期,等轴周期性牵张应变刺激可以促进骨髓间充质干细胞增殖以及向软骨细胞分化,等轴周期性牵张应变刺激可能是通过抑制Rho/ROCK1信号通路来促进成软骨分化。     

2000年第21卷《国外医学》麻醉学与复苏分册主题词索引

(主题词/副主题词 页)(按汉语拼音字母顺序排列,按《医学主题词注释字顺表》标引主题词)A阿片丫一氨基丁酸受体B布比卡因/药效学超声心动描记术/诊断应用C成人呼吸窘迫综合征刺激器,神经D导管低温,围手术期多巴胺,小剂量多器官功能衰竭F肺减容术肺泡Ⅱ型上皮细胞肺炎,吸人性G肝素高渗液/治疗应用冠状动脉循环光谱分析/监测H寒战环磷酸腺苷喉罩 158177,179 2619649,129,193 47 45225 28326270368 87 3670,72 94 201331 19 51 J机械通气肌松弛剂/副作用基因甲状腺激素钾离子通道教育,医学/教育K可乐定/治疗应用L离子通道流式细胞仪 .氯胺…     

异丙酚对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞过氧亚硝基阴离子生成的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞过氧亚硝基阴离子(ONOO-)生成的影响.方法 培养至活细胞计数大于95%的人脐静脉内皮细胞,随机分为7组(n=5),对照组(C组)不给予任何处理;LOS0.1组、LPS1组和LPS10组分别加入内毒素(LPS)至终浓度为0.1、1和10 μg/ml,于37℃5%CO2培养箱中孵育6 h;P4+LPS10组和P40+LPS10组预先加入异丙酚至终浓度为4、40μg/ml,I40+LPS10组预先加入脂质溶剂Introlipid至终浓度为40 μg/ml,于37℃ 5%CO2培养箱中孵育30 min,再分别加入LPS至终浓度为10μg/ml,于培养箱中继续孵育6 h.孵育6 h时,测定细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)释放率;采用免疫组化法和Western blot法测定硝基酪氨酸蛋白(NT)表达.结果 与C组比较,其余各组细胞活力降低,内皮细胞NT表达上调,LPS1组、LPS10组、I40+LPS10组、P4+LPS10组和P40+LPS10组LDH释放率升高(P<0.01);与LPS0.1组比较,LPS1组细胞活力、LDH释放率和内皮细胞NT表达差异无统计学意义(P>0.05),LPS10组细胞活力降低,LDH释放率升高,内皮细胞NT表达上调(P<0.01);与LPS10组比较,I40+LPS10组细胞活力、LDH释放率和内皮细胞NT表达差异无统计学意义(P>0.05),P4+LPS10组和P40+LPS10组细胞活力升高,LDH释放率降低,内皮细胞NT表达下调(P<0.01).结论 异丙酚可通过抑制ONOO'-的生成,减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤.     

Nod样受体蛋白3炎性体抑制剂格列苯脲对机械通气致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探究Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein-3,NLRP3)炎性体抑制剂格列苯脲对机械通气导致的小鼠急性肺损伤是否具有保护作用. 方法 28只7～9周的清洁级ICR雄性小鼠,按完全随机分组法分为4组:对照组(CON组,6只)、格列苯脲组(GLY组,6只)、机械通气组(VEN组,8只)和格列苯脲+机械通气组(GLY+VEN组,8只).VEN组和GLY+VEN组机械通气4h后与CON组及GLY组麻醉插管后4h测定肺泡灌洗液中蛋白含量及炎性细胞数量,测量肺组织湿/干重比(wet/dry,W/D),观察肺组织病理学改变,ELISA法检测肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α的含量. 结果 VEN组肺泡灌洗液中蛋白浓度和细胞数量[(0.534±0.104) g/L和(3.4±0.7)×105/ml]比CON组[(0.167±0.021) g/L和(1.9±0.5) ×105/ml]升高(P＜0.01);GLY+VEN组肺泡灌洗液中蛋白浓度和细胞数量[(0.425±0.083) g/L和(2.4±0.6) ×105/ml]比VEN组下降(P＜0.05).VEN组肺组织W/D(5.1±0.5)与CON组(4.4±0.4)比较,差异有统计学意义(P＜0.01),GLY +VEN组肺组织W/D(4.7±0.4)与VEN组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).VEN组和GLY+VEN组肺组织中IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达与CON组比较,明显升高(P＜0.05),GLY+VEN组IL-1β和IL-6表达与VEN组比较,表达明显降低(P＜0.05).结论 机械通气前给予格列苯脲可有效减少小鼠肺组织炎症细胞聚集,减轻肺水肿,机制可能与其抑制炎性体的激活有关.     

异丙酚对内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Toll样受体4表达水平的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达水平的影响.方法 SPF级雄性Wistar大鼠,体重180～250 g,8～9周龄,原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,经鉴定后随机分为5组,每组18孔,对照组(C组):不给予任何药物,继续培养3 h;LPS组:加入LPS,终浓度1μg/ml,孵育3 h;异丙酚组(P1～3组):同时加入LPS(终浓度1μg/nd)和终浓度分别为25、50、100 μmol/L的异丙酚,孵育3 h.孵育结束后测定肺泡Ⅱ型上皮细胞TLR4 mRNA、TLR4蛋白表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放量.结果 与C组比较,LPS组和P1组TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P<0.05),P2组和P3组差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P2组和P3组TLB4 mRNA和其蛋白表达下调,TNF-α释放量降低(P<0.05或0.01),P,组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);P2组与P3组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TLR4 mRNA及其蛋白表达上调,且呈浓度依赖性,这可能是其抑制肺局部炎性反应的机制.     

抑制核纤层蛋白A/C表达对牵张刺激下成骨细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察小干扰RNA技术(siRNA)抑制核纤层蛋白A/C(lamin A/C)表达对牵张刺激下小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖及凋亡的影响.方法 化学合成3条针对lamin A/C靶点的siRNA序列,脂质体转染MC3T3-E1细胞,实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测lamin A/C mRNA和蛋白变化.细胞转染72 h后行牵张刺激6 h,Hoechst 33258检测DNA含量来反映细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果 筛选出的siRNA-2显著抑制lamin A/C mRNA和蛋白产物表达(P＜0.01).未转染细胞经牵张刺激,DNA合成随时间推移而增加;细胞G0/G1期比例为65.19%;S期为22.57%,细胞凋亡率为11.49%;转染细胞经牵张刺激后,DNA合成较未转染细胞显著性减少(P＜0.01);G0/G1期比例提高至85.82%;S期降低至11.37%,凋亡率达19.32%(P＜0.01).结论 抑制lamin A/C表达会导致牵张刺激诱导的促增殖作用减弱,细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞的凋亡.     

机械激活离子通道压力蛋白与细胞骨架的相关性研究

目的探讨周期性机械牵张应力作用下,人软骨细胞中新型机械激活离子通道压力蛋白(Piezo1)与细胞骨架的关系。 方法体外培养骨关节炎病人软骨细胞,然后利用多通道细胞牵张应力加载系统处理细胞,根据预实验结果分成无牵张应力组(空白组),2 h牵张应力组,12 h牵张应力组,24 h牵张应力组,48 h牵张应力组和相应的抑制剂浓度为0.275 mmol/L的蜘蛛毒液肽(GsMTx4)组以及浓度为0.573 mmol/L细胞松弛素D组。免疫组化鉴定软骨细胞,荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测不同力学条件刺激下各组细胞的Piezo1的表达量。以及细胞松弛素D作用下Piezo1的表达量。免疫荧光定位人软骨细胞Piezo1蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察各组细胞的细胞骨架以及Piezo1蛋白共染相关性。RT-q PCR结果比较采用单因素方差分析,两两组间比较采用q检验。 结果RT-q PCR检测结果显示,2 h牵张应力组比空白组Piezo1的表达量有所增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。12 h牵张应力组比空白组相比有统计学意义(F＝9.785,P<0.05)。24 h牵张应力组表达量最多,48 h牵张应力组表达量有所降低。经GsMTx4处理后的各组Piezo1的表达量均出现明显降低(F＝13.907,P<0.001)。在牵张应力作用下,2 h牵张应力组至24 h牵张应力组细胞骨架呈渐进性增粗、浓集现象,但是48 h牵张应力组软骨细胞却出现了细胞骨架的松散与降解。相应的RT-qPCR结果显示Piezo1 mRNA表达量与细胞骨架的浓集与松散情况具有相同的趋势。GsMTx4处理后的各加力组表达均下降。 结论机械敏感性离子通道Piezo1的开放和关闭是与细胞骨架微丝F-actin肌动蛋白密切相关,由细胞骨架F-actin形变激活Piezo1蛋白通道,并与力学加载呈时间依赖性。