神经肽Y对小神经胶质细胞活化状态和生成IL-1β的影响

目的探讨神经肽Y(NPY)对原代小神经胶质细胞生物活性及生成IL-1β的影响。方法培养的原代大鼠皮层小胶质细胞,将细胞分为Control组、LPS组、NPY+LPS组、NPY组和BIBP3226+NPY+LPS组,每组3个样本,培养各组细胞6h。经免疫细胞化学荧光染色后,显微镜下观察小胶质细胞的形态学变化。Elisa方法检测培养液中IL-1β蛋白含量,RT-PCR方法检测小胶质细胞中IL-1βm RNA表达水平。结果孵育各组小胶质细胞6h后,LPS组培养液中IL-1β蛋白的含量及细胞中IL-1βm RNA表达水平分别为(961.00±83.50)pg/m L和5.59±0.87,显著高于Control组的96.33±24.58 pg/m L和1.05±0.12(P0.05),小胶质细胞处于活化状态;LPS+NPY组IL-1β蛋白含量和m RNA表达水平分别为(411.33±55.00)pg/m L和1.93±0.45,与LPS组相比显著降低(P0.05),小胶质细胞活化水平降低;IBP3226+NPY+LPS组IL-1β蛋白含量和m RNA表达水平分别为(886.00±97.53)pg/m L和4.51±0.71,与LPS+NPY组相比显著增高(P0.05);LPS组和IBP3226+NPY+LPS组之间无统计学意义。NPY组与对照组无统计学意义。结论 NPY通过作用于NPY Y1受体降低小神经胶质细胞的生物活性,抑制其生成IL-1β。     

Purmorphamine对BV2细胞帕金森病相关基因Nurr1表达的影响

目的探讨Purmorphamine(PM)激活小胶质细胞瘤BV2细胞中Sonic hedgehog(SHH)信号通路对帕金森病(PD)相关基因Nurr1表达的影响。方法体外培养BV2小胶质细胞并分为对照组、脂多糖(LPS)处理组、PM+LPS处理组以及PM处理组,运用荧光定量PCR(Q-PCR)检测经LPS处理后BV2细胞中SHH信号通路Smoothened(Smo)、Gli1及Nurr1基因mRNA表达情况;PM激活SHH信号通路后,Q-PCR检测Nurr1mRNA含量以及炎性反应因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达情况。结果(1)与对照组相比,LPS处理后4h和24h时Smo和Gli1mRNA表达均升高(P0.01,P0.05);(2)与对照组相比,PM处理组细胞Smo和Gli1mRNA表达升高(P0.01),LPS组Nurr1、IL-1β、TNF-αmRNA表达亦均升高(均P0.01);而PM+LPS组Nurr1、IL-1β、TNF-αmRNA表达均较LPS处理组下降(均P0.01)。结论PM激活SHH信号通路能够抑制BV2细胞中Nurr1的表达,并能发挥抑制炎性反应作用。     

沉默P2X4R基因对P2X4/NLRP3炎性小体通路介导的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨使用慢病毒(LV-P2rx4)沉默P2X4嘌呤受体(P2X4R)对活化状态小胶质细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法常规建立脂多糖(LPS)和三磷酸腺苷(ATP)双信号诱导的小胶质细胞活化模型,随机分为(1)空白对照组(常规DMEM培养液培养);(2)活化模型组(细胞种板后待密度接近80%后先给予LPS 1μg·m L-1处理6 h后弃原培养液,再加ATP 2 mmol·L-1处理3 h);(3)目的基因阴性对照组(种板1 d,先加入病毒处理12 h后弃培养液,再加入常规培养液,间隔12 h更换培养液);(4)目的基因阴性对照+活化模型组(种板1 d后,先加入病毒处理12 h后弃培养液,再加常规培养液,期间每隔12 h更换培养液,待细胞密度达80%后,予LPS 1μg·m L-1处理6 h后弃原培养液,再加ATP 2 mmol·L-1处理3 h);(5)空载病毒阴性对照组(处理方法同目的基因阴性对照组);(6)空载病毒阴性对照+活化模型组(处理方法同目的基因阴性对照+活化模型组)。各组均n=6。细胞处理后每组取3孔分别提取核糖核酸(RNA)和蛋白,应用Real time PCR和Western blot法分别检测NLRP3、TNF-α的mRNA及蛋白的相对表达。结果与活化模型组和空载病毒阴性对照+活化模型组比较,目的基因阴性对照+活化模型组TNF-αmRNA相对表达水平明显减少(P 0. 001,F=195. 4),TNF-α蛋白相对表达水平显著降低(P 0. 001,F=60. 10)。结论沉默小胶质细胞中的P2X4R基因,可下调细胞中TNF-α表达,继而可能削弱小胶质细胞的炎症反应。     

选择性5-羟色胺再摄取抑制剂对小胶质细胞不同活化途径的影响

目的 探讨SSRIs氟西汀和艾司西酞普兰对于小胶质细胞不同活化途径的影响.方法 新生2 dSD大鼠脑组织经洗涤、分离、消化、过筛网、离心等处理,获得原代小胶质细胞.将BV2细胞系组和原代细胞组进一步分亚组如下:空白对照组、M1型模型组、M2型模型组、氟西汀组和艾司西酞普兰组,干预24h后使用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹法测定相关炎症指标表达水平.结果 (1)M1型活化:RT-PCR示氟西汀可显著降低脂多糖联合干扰素-γ(LPS+INF-γ)诱导的BV2细胞白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor,TNF-a)和诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA表达(均P＜0.05).氟西汀和艾司西酞普兰均可显著抑制LPS+ INF-γ诱导的原代小胶质细胞IL-6(均P＜0.01)、TNF-a(P =0.018、0.029)和iNOS(均P=0.005)mRNA表达.免疫印迹法示氟西汀和艾司西酞普兰可显著抑制LPS+ INF-γ诱导的BV2细胞Iba-1 (P ＜0.01、P=0.002)、CD86(均P＜0.01)蛋白表达.氟西汀和艾司西酞普兰均可显著抑制LPS+ INF-γ诱导的原代小胶质细胞CD86表达(均P＜0.01).ELISA示氟西汀可显著抑制LPS+ INF-γ诱导的BV2细胞TNF-a(P=0.003)和IL-1 β(P=0.002)分泌.氟西汀和艾司西酞普兰可显著抑制LPS+ INF-γ诱导的原代小胶质细胞IL-1β分泌(均P＜0.01).原代小胶质细胞各组间TNF-a分泌差异无统计学意义(F=4.627,P=0.053),进一步组间比较示与模型组[(11.6±1.1)g/L]相比,艾司西酞普兰组[(20.2±1.9) g/L]TNF-a表达增高(P=0.012).(2)M2型活化:RT-PCR示氟西汀可显著提高IL-4诱导的原代小胶质细胞IL-10 mRNA表达(P=0.036).免疫印迹法示氟西汀可显著提高IL-4诱导的BV2细胞(P=0.016)和原代小胶质细胞(P＜0.01)CD206表达.ELISA示氟西汀可显著提高IL-4诱导的BV2细胞(P=0.044)和原代小胶质细胞(P＜0.01)IL-10分泌.结论 氟西汀和艾司西酞普兰可通过影响小胶质细胞活化状态而发挥免疫调节作用,这可能是SSRI类抗抑郁剂发挥抗抑郁作用机制之一.     

硫化氢通过JAK2/STAT3通路抑制脂多糖诱导的小胶质细胞M1型极化

目的观察硫化氢(H_2S)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞极化的影响并探讨JAK2/STAT3信号通路是否介导其作用。方法将培养的N9小胶质细胞随机分为对照组、LPS组、硫氢化钠(NaHS)组、LPS+NaHS组、蛋白酪氨酸激酶(JAK2)/信号转导和转录激活因子(STAT3)抑制剂α-氰基-(3,4-羟基)N-苄苯乙烯胺(AG-490)组、LPS+NaHS+AG-490组共6组,每组设3个复孔。采用MTT法检测各组细胞活力,采用ELISA法检测各组胶质细胞及培养上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-4 IL-10水平,采用Western-blot检测各组细胞精氨酸酶1(Arg1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达。结果与对照组比较,LPS组细胞Arg1蛋白及IL-4和IL-10表达水平增加,而iNOS蛋白、IL-1β、IL-6、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达降低,p-JAK2/t-JAK和p-STAT3/t-STAT3比值降低(均P0.05)。与LPS组比较,LPS+NaHS组细胞Arg1蛋白及IL-4和IL-10表达水平增加,而iNOS蛋白、IL-1β、IL-6、p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达降低,p-JAK2/t-JAK2和p-STAT3/t-STAT3比值降低(均P0.05)。JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG-490可减弱NaHS的作用。结论 H_2S可抑制LPS诱导的小胶质细胞M1型极化,其机制可能是通过JAK2/STAT3信号通路实现。     

姜黄素调控TREM2-TLR4对脂多糖诱导的小胶质细胞炎症因子表达的影响

目的探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞(MG)炎症反应的抑制作用,并观察上述作用是否通过髓样细胞触发受体2(TREM2)和Toll样受体4(TLR4)分子介导。方法建立LPS诱导BV-2小胶质细胞活化神经系统炎症模型,分为:对照组、LPS组、姜黄素处理组,姜黄素处理组按姜黄素不同浓度再分为3个姜黄素低剂量亚组(1、5和10μmol·L~(-1)亚组)和2个姜黄素高剂量亚组(20和40μmol·L~(-1)亚组)。倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化,CCK-8法检测各组细胞活性,qRT-PCR法检测促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6,抗炎因子IL-4和精氨酸酶1(Arg-1); Western blot检测TREM2和TLR4蛋白表达水平。结果姜黄素低剂量亚组对小胶质细胞活性无明显影响,差异无统计学意义(P 0. 05);姜黄素高剂量亚组小胶质细胞活性显著抑制,差异有统计学意义(P 0. 05)。与LPS组比较,姜黄素处理组LPS诱导的小胶质细胞形态变化及促炎因子IL-1β和IL-6转录水平显著抑制(P 0. 05),抗炎因子IL-4和Arg-1转录水平显著增加; TLR4表达水平显著降低(P 0. 05); TREM2表达水平显著增加(P 0. 05)。结论姜黄素可调控LPS诱导的小胶质细胞炎症反应表型,可能通过TREM2-TLR4分子介导发挥作用。     

刺槐素通过自噬调控ROS/NLRP3信号通路对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的 基于自噬/ROS/NLRP3炎症小体信号通路，探讨刺槐素(Acacetin)对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤后的小胶质细胞保护作用机制。方法 培养小鼠小胶质细胞(BV2),分为正常对照组、OGD模型组和OGD+Acacetin组(10μmol)。缺氧6 h复氧24 h后采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测BV2细胞活性；乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞的死亡率；活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内ROS水平；Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1、NLRP3、caspase-1和IL-1β等蛋白的表达。结果 刺槐素能增加OGD/R损伤后小胶质细胞的存活率，减少LDH的释放，降低ROS的生成，增加LC3-Ⅱ和beclin-1蛋白的表达，进一步下调NLRP3、caspase-1和IL-1β的表达。结论 Acacetin能减轻OGD/R后小胶质细胞的损伤从而对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用，其作用机制可能与抑制ROS的产生、激活自噬、抑制NLRP3炎症小体有关。     

京尼平对脂多糖诱导小胶质细胞炎症及凋亡的作用及机制研究

目的探讨京尼平(genipin)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(BV-2)炎症及凋亡反应的作用及机制。方法采用LPS诱导BV-2小胶质细胞建立中枢神经系统炎症和凋亡反应模型。实验细胞分为4组:空白对照组、京尼平组、LPS组、LPS+京尼平组。通过ELISA、RT-PCR、Western Blot、细胞流式检测细胞的炎症及凋亡反应。结果与空白对照组比较,LPS可以诱导BV-2细胞上清培养基中IL-6、IL-1β和TNF-α释放和细胞内IL-6、IL-1β和TNF-α转录的增加;同时,LPS还可以激活凋亡蛋白Bax并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,导致细胞凋亡率的明显升高。京尼平预处理可以有效抑制小胶质细胞介导的炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)激活,并减少LPS诱导的小胶质细胞凋亡。结论 genipin干预可对LPS诱导的小胶质细胞炎症及凋亡反应起到保护作用。     

沉默信息调节因子1抑制核因子κB通路调控癫痫大鼠小胶质细胞活化的机制研究

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在癫痫中对小胶质细胞及炎症因子的影响及作用机制.方法建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠模型,免疫组化观察各组(对照组和癫痫组)大鼠脑组织内小胶质细胞活化;采用脂多糖(LPS)建立小胶质细胞活化模型,构建pcDNA-SIRT1和si-SIRT1载体,转染至大鼠小胶质细胞中.定量即时聚合酶链反应(qRT-PCR)测定大鼠海马组织及小胶质细胞中SIRT1表达,Western blot检测小胶质细胞的活化标志物Iba1和核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白(p65和IκBα)的蛋白表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测促炎因子[白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)]的表达水平.结果与Control组比较,癫痫大鼠海马组织中SIRT1 mRNA表达量显著降低(P<0.05),Iba1蛋白表达量显著增加(P<0.05),且对照组CA1、CA2区Iba1阳性细胞数分别为(180±21)、(190±18)/mm2,癫痫组CA1、CA2区Iba1阳性细胞数分别为(412±35)、(470±37)/mm2,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05).同样,与Mock组比较,LPS活化小胶质细胞中SIRT1表达水平显著降低,Iba1蛋白表达水平显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).转染pcDNA-SIRT1及si-SIRT1至LPS活化的小胶质细胞中,LPS+pcDNA-SIRT1组IL-1β[(50.0±3.3)ng/L]、IL-6[(55.0±3.2)ng/L]和TNF-α[(56.1±3.0)ng/L]表达水平显著低于LPS组和LPS+pcDNA-NC组(均P<0.05);LPS+si-SIRT1组中IL-1β[(98.2±4.3)ng/L]、IL-6[(108.1±4.5)ng/L]和TNF-α[(124.5±4.1)ng/L]表达水平显著高于LPS组和LPS+si-NC组(均P<0.05);同时LPS+pcDNA-SIRT1组NF-κB p65的表达水平显著低于LPS组和LPS+pcDNA-NC组(均P<0.05),IκBα的表达水平显著高于LPS组和LPS+pcDNA-NC组(均P<0.05);而LPS+si-SIRT1组NF-κB p65的蛋白表达水平显著高于LPS组和LPS+si-NC组(均P<0.05),IκBα的表达水平显著低于LPS组和LPS+si-NC组(均P<0.05).加入NF-κB通路激活剂Aconine后,与LPS+pcDNA-SIRT1组比较,LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine组大鼠中Iba1表达水平显著升高(P<0.05);LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine组大鼠中IL-1β[(72.2±4.3)ng/L]、IL-6[(80.1±4.0)ng/L]和TNF-α[(87.2±4.5)ng/L]表达水平显著高于LPS+pcDNA-SIRT1组的[(50.1±2.3)]ng/L、[(55.0±3.4)]ng/L和[(56.3±4.9)ng/L](均P<0.05).结论SIRT1可能通过抑制NF-κB通路活性来抑制癫痫大鼠小胶质细胞的作用.     

TLR4-P38MAPK信号通路在LPS诱导BV2细胞中的表达及意义

目的观察LPS诱导小胶质细胞后信号通路Toll样受体4(TLR4)-p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达及意义。方法体外培养BV2小胶质细胞,分为对照组、LPS诱导组(LPS刺激12h及24h)及SB203580干预组(LPS+SB203580诱导12h及24h),应用ELISA法检测各组TNF-α、IL-6水平,RT-PCR法检测各组TLR4mRNA和p38MAPK mRNA的表达变化。结果 LPS诱导组细胞分泌TNF-α、IL-6水平显著提高,诱导24h后细胞上清液含量分别为(513.67±14.05)pg/mg和(396.84±15.41)pg/mg。给予SB203580抑制剂后TLR4mRNA和p38MAPK mRNA表达明显减弱,细胞分泌TNF-α、IL-6含量表达与感染组比较也明显降低。结论 LPS刺激小胶质细胞可引起TLR4-p38MAPK信号通路的活化并释放炎性细胞因子,而SB203580则对其有明显的抑制作用,证明TLR4-p38MAPK信号通路与小胶质细胞的炎性活化密切相关。     

美满霉素对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨美满霉素(MC)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法采用相应浓度的MC或LPS(100 ng/ml)对MC组及0.1、1、10、100μmol/L MC+LPS组、LPS组、空白对照组BV-2小胶质细胞进行预处理。ELISA法检测BV-2小胶质细胞TNF-α蛋白的表达,逆转录-PCR检测细胞TNF-αmRNA表达。结果与空白对照组比较,0.1、1μmol/L MC+LPS组及LPS组的TNF-α水平显著升高(均P0.01)。10、100μmol/L MC+LPS组TNF-α水平显著低于LPS组(均P0.01)。与空白对照组比较,LPS组及10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA的表达水平显著增高(均P0.01)。10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA表达水平显著低于LPS组(P0.01)。结论 MC预处理(≥10μmol/L)可显著抑制LPS诱导的小胶质细胞TNF-α的表达。     

银杏总黄酮对脂多糖诱导的小胶质细胞炎症反应的抑制作用

目的探讨银杏总黄酮(TFG)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞(MG)炎症反应的抑制作用。方法通过LPS诱导小胶质细胞系(BV-2)小胶质细胞活化建立神经系统炎症模型,分别用不同浓度TFG(0、40、80、120和160 mg/m L)处理细胞,CCK-8方法检测各组细胞活性,选取TFG(80 mg/m L)预处理细胞,倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化。ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、抑制性卡巴蛋白(IκB-α)、核因子κB(NF-κB)/p65蛋白表达水平。结果低剂量组TFG(40和80 mg/m L)对小胶质细胞活性无明显影响,差异无统计学意义(P 0. 05);高剂量的TFG(120和160 mg/m L)显著抑制小胶质细胞活性,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与LPS组相比,TFG+LPS组显著抑制LPS诱导的小胶质细胞形态变化及细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达和释放(P 0. 05);明显降低TLR4蛋白表达水平(P 0. 05);显著增加胞质内IκB-α的表达(P 0. 05);抑制NF-κB/p65向核内转移(P 0. 05)。结论 TFG抑制LPS所诱导的小胶质细胞炎症反应效果良好,对以神经炎症为病理特征的神经退行性病变有一定治疗作用。     

L型Ca2+通道阻断剂通过抑制NLRP3炎症小体激活对MPP+诱导的小胶质细胞炎症模型发挥神经保护作用

目的 在MPP⁺诱导的帕金森(PD)细胞炎症模型中,使用L型Ca²⁺通道阻断剂伊拉地平对BV2小胶质细胞进行干预,观察其炎症反应的影响探讨L型Ca²⁺通道阻断剂伊拉地平是否可以调控NLRP3炎症小体通路。方法 使用PD造模药物MPP⁺在BV2小胶质细胞上制备PD炎症细胞模型,CCK8法分别检测不同浓度MPP⁺和伊拉地平处理后对BV2的小胶质细胞具体活性影响,选择合适的药物实验浓度。将BV2的小胶质细胞变为4组,分别为空白对照组、MPP⁺造模组、伊拉地平预处理组和MCC950预处理组(即阳性对照组),采用实时的荧光定量PCR检测BV2小胶质细胞中IL-1 β、NLRP3、CASPASE-1、GSDMD、NOX2基因mRNA表达水平;细胞免疫荧光检测BV2小胶质细胞中IL-1 β、NLRP3、CASPASE-1、GSDMD、NOX2蛋白表达水平;Western blot检测小胶质细胞IL-1 β、NLRP3、CASPASE1、GSDMD、NOX2蛋白表达水平。...     

有自杀企图史的抑郁症住院患者临床特征 研究

目的 探讨沉默信息调节因子 1（SIRT1）在癫痫中对小胶质细胞及炎症因子的影响及作 用机制。方法 建立氯化锂 - 匹罗卡品致痫大鼠模型,免疫组化观察各组（对照组和癫痫组）大鼠脑组 织内小胶质细胞活化;采用脂多糖（LPS）建立小胶质细胞活化模型,构建 pcDNA-SIRT1 和 si-SIRT1 载 体,转染至大鼠小胶质细胞中。定量即时聚合酶链反应（qRT-PCR）测定大鼠海马组织及小胶质细胞中 SIRT1 表达,Western blot 检测小胶质细胞的活化标志物 Iba1 和核因子 -κB（NF-κB）通路相关蛋白（p65 和 IκBα）的蛋白表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测促炎因子［白细胞介素 1β（IL-1β）、白细 胞介素 6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）］的表达水平。结果 与 Control 组比较,癫痫大鼠海马组织中 SIRT1 mRNA 表达量显著降低（P＜ 0.05）,Iba1 蛋白表达量显著增加（P＜ 0.05）,且对照组 CA1、CA2 区 Iba1 阳性细胞数分别为（180±21）、（190±18）/mm2 ,癫痫组 CA1、CA2 区 Iba1 阳性细胞数分别为（412±35）、 （470±37）/mm2 ,两组比较差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）。同样,与 Mock 组比较,LPS 活化小胶质细 胞中 SIRT1 表达水平显著降低, Iba1 蛋白表达水平显著增加,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）。转染 pcDNA-SIRT1及si-SIRT1至LPS活化的小胶质细胞中, LPS+pcDNA-SIRT1组IL-1β［（50.0±3.3）ng/L］、IL-6 ［（55.0±3.2）ng/L］和TNF-α［（56.1±3.0）ng/L］表达水平显著低于LPS组和LPS+pcDNA-NC组（均P＜ 0.05）; LPS+si-SIRT1 组中 IL-1β［（98.2±4.3）ng/L］、IL-6［（108.1±4.5）ng/L］ 和 TNF-α［（124.5±4.1）ng/L］表达 水平显著高于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均P＜ 0.05）;同时 LPS+pcDNA-SIRT1 组 NF-κB p65 的表达水平 显著低于 LPS 组和 LPS+pcDNA-NC 组（均P＜ 0.05）,IκBα 的表达水平显著高于 LPS 组和 LPS+pcDNANC 组（均P＜ 0.05）;而 LPS+si-SIRT1 组 NF-κB p65 的蛋白表达水平显著高于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均 P＜ 0.05）,IκBα 的表达水平显著低于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均P＜ 0.05）。加入 NF-κB 通路激活剂 Aconine 后,与 LPS+pcDNA-SIRT1 组比较,LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine 组大鼠中Iba1表达水平显著升高 （P＜0.05）;LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine组大鼠中IL-1β［（72.2±4.3）ng/L］、IL-6［（80.1±4.0）ng/L］和TNF-α ［（87.2±4.5）ng/L］表 达 水 平 显 著 高 于 LPS+pcDNA-SIRT1 组 的［（50.1±2.3）］ng/L、［（55.0±3.4）］ng/L 和 ［（56.3±4.9）ng/L］（均P＜ 0.05）。结论 SIRT1 可能通过抑制 NF-κB 通路活性来抑制癫痫大鼠小胶质 细胞的作用。     

Notch通路对缺氧诱导N9小胶质细胞释放炎症因子的调节作用

目的 应用γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号通路活化,探讨Notch信号通路在缺氧诱导小胶质细胞释放炎症因子中的作用. 方法 将体外培养的N9小胶质细胞分4组:常氧组、缺氧组、常氧+ DAPT组和缺氧+DAPT组.常氧+DAPT组与缺氧+DAPT加入10 μmol/LDAPT处理12h,常氧组和缺氧组加入等量溶剂,缺氧组、缺氧+10 μmol/L DAPT组同时进行缺氧处理12 h (3％O2).提取各组细胞mRNA及蛋白,实时定量PCR检测各组细胞白介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA水平,Western blotting检测Notch信号通路中Notch1胞内段(N1ICD)、Hes1、Hey1蛋白水平,并运用ELISA法检测各组细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌水平. 结果 DAPT对炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白分泌具有抑制作用,并随着浓度的增加,抑制作用增大.分组处理12h后,缺氧组炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白分泌水平较常氧组明显升高,Notch通路信号分子N1ICD、Hes1、Hey1水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与缺氧组比较,缺氧+DAPT组炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白分泌水平降低,Notch通路信号分子N1ICD、Hes1、Hey1水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);常氧+DAPT组与常氧组比较,上述指标差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 Notch信号通路参与调控缺氧诱导的小胶质细胞炎症介质的释放.     

布美他尼对LPS诱导的小胶质细胞活化及炎性分泌的影响

目的观察钠-钾-氯共转运体(Na+-K+-2Cl-cotransporter 1,NKCC1)的特异性抑制剂布美他尼(Bumetanide)对LPS(脂多糖)诱导的小胶质细胞活化及炎性因子分泌的影响。方法差速贴壁法培养大鼠原代小胶质细胞,纯化的小胶质细胞分为对照组,LPS组(1.0μg/ml)和布美他尼干预组(NKCC1抑制剂,10μM),在干预1、3、6和12 h固定细胞爬片,免疫荧光双标显示小胶质细胞活化形态;各时间点收取上层培养基,用ELISA法测定各组培养基中TNF-α和IL-1β的水平。结果 LPS干预后小胶质细胞活化,体积增大,布美他尼干预后小胶质细胞活化受到抑制。小胶质细胞分泌的TNF-α和IL-1β在LPS干预1 h时开始明显增加,TNF-α的分泌在6 h达到最高峰;IL-1β的分泌在3 h时达到最高峰(P0.05)。布美他尼干预后与LPS组比较,TNF-α和IL-1β分泌明显减少,其中在3、6、12 h时TNF-α分泌显著降低(P0.05),而IL-1β的分泌在1、3、6、12 h时明显降低(P0.05)。结论布美他尼可减少LPS诱导的小胶质细胞活化及炎性因子分泌增加,提示NKCC1通路在小胶质细胞活化及炎性因子分泌中发挥了重要作用。     

芹黄素抑制小胶质细胞活化作用研究

目的探讨芹黄素对小胶质细胞活化的抑制作用。方法原代培养SD大鼠小胶质细胞,实验随机分为空白对照组、脂多糖组(LPS组)、LPS+芹黄素(10μM)组、LPS+芹黄素(20μM)组、LPS+芹黄素(50μM)组。MTT法检测芹黄素对小胶质细胞活性的影响;ELISA法检测IL-1、IL-10等炎症相关因子以及BDNF、PDNF等神经营养因子的表达;RTPCR、western blot检测炎症相关基因i NOS转录以及表达水平。结果 MTT检测结果表明,芹黄素对小胶质细胞活性无明显抑制。LPS刺激后,芹黄素预处理组IL-1等炎症因子表达水平明显低于单独LPS组(P0.05);而芹黄素预处理组IL-10的表达则高于单独LPS组(P0.01);与此同时,BDNF、PDNF等神经营养因子的分泌也有相同趋势(P0.05)。芹黄素预处理组i NOS表达和转录水平也低于单独LPS组(P0.05)。结论芹黄素可抑制活化状态小胶质细胞炎症因子以及炎症相关蛋白的表达,并可同时促进与神经元分化成熟相关神经营养因子的分泌。     

CGS21680对脂多糖诱导的小胶质细胞炎症细胞模型白细胞介素-1β表达的影响

目的探讨CGS21680对脂多糖(LPS)诱导的小鼠大脑皮质小胶质细胞炎症细胞模型白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法采用新生小鼠大脑皮质小胶质细胞原代培养技术,将培养的小胶质细胞随机分组,设为对照组(加入单纯的DMEM/F12完全培养基)、LPS组(制作小胶质细胞炎症细胞模型)、CGS21680组(小胶质细胞炎症细胞模型基础上叠加CGS21680处理),CGS21680组再按CGS21680不同浓度分为0.1、1和10μmol·L~(-1)CGS21680亚组。ELISA检测各组24 h后IL-1β含量。结果 CGS21680组较LPS组小胶质细胞IL-1β表达量显著下降。结论 CGS21680可明显抑制LPS诱导的小鼠大脑皮质小胶质细胞的炎症反应。     

β-arrestin 2对多巴胺能神经元的保护作用及机制研究

目的探讨β-arrestin 2对多巴胺能神经元的保护作用及机制。方法分离并培养原代小鼠中脑小胶质细胞,脂多糖(LPS)处理后采用实时定量PCR检测炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α的转录水平,ELISA检测上述因子的表达水平;将原代小鼠中脑小胶质细胞和多巴胺能神经元Transwell共培养(细胞数2∶1),LPS处理后TUNEL法检测多巴胺能神经元凋亡,酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学法检测多巴胺能神经元。结果原代小胶质细胞经LPS处理后IL-6、IL-1β和TNF-α的转录水平及表达水平均较对照组显著升高,而β-arrestin 2高表达能抑制这种炎症反应;β-arrestin 2高表达能显著抑制LPS处理所致的多巴胺能神经元凋亡,抑制多巴胺能神经元数目的减少。结论β-arrestin 2可能通过抑制小胶质细胞炎性细胞因子的产生,从而对多巴胺能神经元发挥神经保护作用。     

CX3CL1-CX3CR1对颅内感染大鼠■性发作敏感性及脑损伤的影响

目的观察干预CX3CL1-CX3CR1对颅内感染模型大鼠■性发作的敏感性及脑组织损伤的影响。方法脂多糖(LPS)诱导制作颅内感染模型大鼠,氯化锂(LiCl)-毛果芸香碱(Pilo)致■LPS感染模型大鼠。①对LiCl-Pilo致■敏感性及脑损伤的影响:随机分为4组,侧脑室注射LPS(LPS组)、侧脑室注射0.9%氯化钠(NaCl)溶液(对照组)、0.9%NaCl溶液致■(NaCl+Pilo组)和LPS致■(LPS+Pilo组)。用ELISA和Western blot分别检测各组海马组织IL-1β和TNF-α水平以及CX3CL1和CX3CR1水平;免疫组化方法检测神经元及小胶质细胞;采用行为学和电生理评估致■大鼠的癫■持续状态潜伏期及发作强度。②感染大鼠分别予以CX3CL1和CX3CR1处理,观察其对LiCl-Pilo诱导癫■发作及脑组织的影响:随机分为NaCl+LPS组、CX3CL1+LPS组和抗CX3CR1抗体+LPS组,LiCl-Pilo诱导癫■持续状态,采用行为学及电生理评估癫■持续状态潜伏期及发作强度,免疫组化检测LPS对皮质区及海马CA1区的神经元和小胶质细胞的影响。结果①与对照组比较,LPS组海马CX3CL1、CX3CR1、IL-1β和TNF-α水平显著增加(均P0.001),LiCl-Pilo致■反应明显增强(P0.001),神经元丢失明显(P0.001);②与NaCl+LPS组比较,CX3CL1+LPS组大鼠的■性发作敏感性无明显改变,但脑损伤加重(均P0.001),抗CX3CR1抗体+LPS组的大鼠■性发作敏感性降低,脑损伤较小。结论抗CX3CR1抗体可降低LPS感染模型大鼠对LiCl-Pilo致■敏感性和发作程度,并可抑制小胶质细胞的激活和减少神经元的丢失。